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MTODOS DIAGNSTICOS PARA LA MASTITIS

Raynell Gonzlez-Gonzlez Eli Rubio-Fuenmayor

La mastitis bovina es una reaccin inflamatoria de la glndula mamaria responsable de alteraciones fsicas y qumicas en la leche. Esta ocurre como consecuencia de la respuesta de los tejidos a la presencia de agentes infecciosos y sus toxinas, lesiones traumticas o sustancias irritantes que han logrado colonizar el tejido secretor (Caldern & Rodrguez, 2008); como resultado se estimula la respuesta inmune de la vaca y los glbulos blancos se trasladan hacia la ubre para combatir la infeccin. Esto resulta entre otras cosas en un aumento en el recuento de clulas somticas (Garca, 2004). Desde una visin externa, la mastitis bovina debe entenderse como un proceso multifactorial donde se conjugan factores propios del animal, agente causal, factores ambientales y de manejo, en los cuales se incluye el ordeo, el cual juega un papel determinante en la presencia de la enfermedad (Faras et al., 2005). Esta infeccin es la enfermedad de mayor prevalencia en el ganado lechero y responsable de grandes prdidas econmicas para los productores a nivel mundial (Valero-Leal et al., 2010), derivadas de la reduccin en la produccin de leche, descarte de la leche, costos de los reemplazos, costo de servicios veterinarios y tratamientos, labor extra y depreciacin en los animales, entre otros (Scaramelli & Gonzlez, 2005).

FORMAS Y TIPOS DE MASTITIS


Desde el punto de vista de su signologa, la mastitis se divide en dos tipos: clnica y subclnica. En la mastitis clnica, el cuarto afectado se inflama, hay dolor, edema, presencia de cogulos, grumos y cambios en la coloracin de la leche (amarilla o rojiza por la presencia de pus o de sangre); en casos severos se observa aumento de temperatura (fiebre, toxemia o shock) y de otros signos vitales, decaimiento y depresin, prdida del apetito y baja en la produccin (Caldern & Rodrguez, 2008). La deteccin de mastitis clnica es relativamente fcil mediante la evaluacin rutinaria del animal y de la ubre (Gronlund et al., 2005). La intensidad o gravedad de los casos se define mediante la presencia de diversas formas clnicas, las cuales dependiendo de la afectacin o no del estado general de la vaca (fie-

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50 / Raynell Gonzlez-Gonzlez y Eli Rubio-Fuenmayor bre, toxemia) y de la evolucin del cuadro, se clasifican en: mastitis clnicas, subagudas, agudas, hiperagudas y crnicas. Mastitis clnica sub-aguda. Esta forma de inflamacin es levemente clnica y los sntomas son alteraciones menores en la leche, como grumos, flculos u aspecto acuoso. El cuarto afectado puede presentar leve inflamacin y sensibilidad al tacto, adems de un poco o nada de calor localizado y enrojecimiento. Puede haber reduccin de la produccin de leche, pero no hay signos sistmicos de la enfermedad (Philpot, 2001; Sharma et al., 2010). Mastitis clnica aguda. Esta mastitis se caracteriza por un ataque repentino con enrojecimiento, inflamacin y endurecimiento del cuarto afectado, el cual adems es sensible al tacto. La leche tiene un aspecto anormal (purulento, seroso acuoso o sanguinolento) y la produccin disminuye marcada y de forma repentina. Los signos clnicos generales que pueden presentarse son: aumento de la temperatura rectal, prdida del apetito, menor actividad, disminucin de la funcin ruminal, pulso acelerado, deshidratacin, debilidad, temblores, diarrea y depresin (Sharma et al., 2010). Mastitis clnica hper-aguda. Esta forma muy poco frecuente de inflamacin mamaria se caracteriza por acontecer muy rpidamente. Los sntomas son los mismos que los descriptos para la Mastitis Clnica Aguda, pero su expresin es mucho ms severa. Se presentan adems signos como: shock, fibrosis en la ubre, infeccin sistmica, prdida de coordinacin muscular, extremidades fras y reduccin del reflejo pupilar, entre otros (Saran & Chaffer, 2000; Sharma et al., 2010). Mastitis clnica crnica. A menudo est acompaada de endurecimiento de la glndula y de la cisterna, tambin puede estar presente un edema tisular, pero lo ms caracterstico es la continua o intermitente apariencia de leche acuosa, hojuelas, grumos y/o cogulos (Erskine, 2001). El diagnstico del tipo subclnico suele ser ms problemtico, ya que la vaca, ubre y la leche parecen normales a la inspeccin, pero, por lo general, esta ltima contiene un elevado nmero de clulas somticas (RCS) (Sharma et al., 2010). La mastitis subclnica es el tipo ms frecuente e importante de esta enfermedad por las implicaciones econmicas que conlleva. Para su identificacin siempre debe recurrirse a pruebas diagnsticas especiales (Erskine, 2001). En Venezuela, los estudios sealan una alta prevalencia de mastitis subclnica que afecta a ms del 25% de los cuartos y del 50% de los animales, mientras que la ocurrencia de casos clnicos generalmente es menor al 3% (Scaramelli & Gonzlez, 2005). Esta alta prevalencia del tipo sub-clnico es atribuido principalmente a la falta de programas de deteccin y control en las fincas, as como tambin, a deficientes condiciones higinico-sanitarias del ordeo (Valero-Leal et al., 2010). Aunque las prdidas econmicas debido a la mastitis se producen, tanto en los animales que presentan la enfermedad clnica como la sub-clnica, en el caso de la mastitis sub-clnica, las prdidas econmicas son ms importantes debido a que la reduccin en la produccin de la leche tiende a persistir por un largo perodo y el nmero de animales afectados por unidad de produccin es mayor (Valero-Leal et al., 2010).

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Para un control exitoso de la mastitis en un rebao lechero, el diagnstico temprano es de vital importancia ya que los cambios en el tejido mamario ocurren mucho antes que se manifieste signologa clnica en la ubre y en el animal afectado. Por lo tanto, este trabajo tiene por objetivo establecer las medidas apropiadas de diagnstico de la mastitis bovina.

DIAGNSTICO DE LA MASTITIS CASOS DE MASTITIS CLNICA


En los casos de mastitis clnica, independientemente de sus cuatro formas de presentacin, los signos clnicos sern siempre insuficientes para realizar una correlacin entre un agente infeccioso bacteriano especfico y alguna caracterstica clnica presente. Por esa razn, toda evaluacin de una vaca que se sospecha con mastitis clnica debe comenzar con la valoracin de las caractersticas de la leche, la ubre y los signos clnicos del animal (Erskine, 2001). Varias pruebas rpidas han sido ensayadas en el tiempo, con el objeto de lograr diferenciar las caractersticas de tincin Gram del organismo causante del problema clnico, lo cual a su vez, permitira una seleccin ms adecuada del antibitico y el inicio de un tratamiento ms eficaz. Sin embargo, la confiabilidad de ellos no es todava suficiente para recomendarlos ampliamente (Radostits et al., 2000). Pruebas fsicas Slo son tiles cuando la mastitis ya est avanzada y no detectan mastitis subclnica. Dentro de stas se encuentran la prueba de la escudilla de ordeo, prueba del pao negro y la taza probadora o prueba de fondo negro (Prez et al., 2005). De ellas slo la prueba de fondo negro ha demostrado versatilidad y eficiencia; en esta prueba se examinan los primeros chorros de leche de cada ordeo sobre un recipiente con fondo oscuro. Los cogulos, escamas, hilos, materia fibrosa, secreciones acuosas o cambios de color indican que la leche no es normal (Erskine, 2001).

CASOS DE MASTITIS SUBCLNICA


Pruebas al pie de la vaca en el momento del ordeo El RCS, directo o indirecto, es la forma de medicin ms ampliamente utilizada para supervisar el estado inflamatorio de las glndulas mamarias y puede ser realizada en la leche de los cuartos individuales, vacas individuales, la finca completa o un grupo de fincas (Philpot, 2001; Bedolla, 2004). Prueba de California para mastitis (CMT) La Prueba de California para Mastitis (CMT, por sus siglas en ingls) ha sido empleada durante dcadas y sigue siendo la prueba ms utilizada a nivel de campo para el diagnstico de mastitis en el ganado bovino lechero (Radostits, 2000; Erskine, 2001; Medina & Montaldo, 2003; Bedolla, 2004). Es una prueba sencilla, muy til para detectar mastitis subclnica al permitir valorar groseramente el RCS de la leche. No proporciona un resultado numrico, sino ms bien una indicacin del re-

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52 / Raynell Gonzlez-Gonzlez y Eli Rubio-Fuenmayor cuento, elevado o bajo (Bedolla, 2004). La prueba consiste en el agregado de un detergente a la leche, el alquilauril sulfonato de sodio, que causa la liberacin del ADN de las clulas presentes y este se convierte, en combinacin con agentes proteicos, en una gelatina (Saran & Chaffer, 2000; Medina & Montaldo, 2003). El CMT posee una sensibilidad del 97 y una especificidad del 93%. Sus ventajas principales son: sencillez, bajo costo y multi utilidad de la tcnica, al poderse utilizar tanto en una muestra de cuartos, como en una muestra global del tanque. En una muestra de tanque, los resultados de grado 2 y 3, indican un alto porcentaje de vacas infectadas (Bez, 2002). A pesar de sus ventajas, la tcnica presenta como inconvenientes que los resultados pueden ser interpretados de forma variable, entre los individuos que realicen la prueba, por lo que resulta necesario uniformizar el criterio de casos positivos y su categorizacin en grados. Pueden presentarse falsos positivos en leche de animales con menos de diez das de paridos o en vacas prximas a secarse (Bez, 2002). Para mayores detalles sobre la interpretacin de esta prueba remitimos a los lectores al captulo que dentro de esta misma publicacin, trata el tema a profundidad. Pruebas de conductividad elctrica La conductividad elctrica de la leche cambia de acuerdo a la presencia de iones de sodio y cloro, por tanto, una leche con mastitis presenta una conductividad elctrica superior a la que presenta la leche normal; ello se explica por el hecho que el dao ocasionado en los tejidos de la ubre conlleva a un incremento de estos elementos en leche, los cuales ocurren muy temprano, casi al momento de la colonizacin del tejido mamario por las bacterias, por lo que en teora su uso rutinario mostrara un excelente sistema para la deteccin de mastitis sub-clnica en fase inicial (Biggadike et al., 2002). El principal problema de esta tecnologa est asociado a su baja sensibilidad y especificidad y a las variantes entre rebaos. Sin embargo, recientes avances van a permitir mejorar los valores de prediccin y establecer valores umbrales diagnsticos. Varios tipos de lectores manuales estn disponibles en el mercado. De cualquier manera, debe entenderse que la conductividad es un mtodo de tamiz, y que un resultado positivo en un animal especfico, es solo una indicacin para realizar una evaluacin exhaustiva de la ubre y de la vaca en cuestin, a la vez que no suele ser una indicacin para iniciar tratamiento alguno (Biggadike et al., 2002). Contaje bacteriano Se han diseado diversos equipos para la determinacin automatizada de la calidad higinica de la leche cruda mediante el recuento del nmero total de bacterias individuales en una muestra (Prez et al., 2005). Estos se usan fundamentalmente para el anlisis de cultivos bacteriolgicos en los laboratorios centrales, por lo que se considera una herramienta muy til para monitorizar el nivel higinico del producto en la explotacin ganadera. Gracias a este tipo de mtodo rpido y fiable, los productores pueden monitorizar la calidad de la leche y determinar si est contaminada o si su nivel de calidad es pobre. Una leche cruda de calidad se conserva durante ms tiempo y da un mayor rendimiento econmico.

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Los resultados si bien no estn directamente relacionados a mastitis, permiten como otros mtodos, una visualizacin rpida y veraz de la calidad higinica de la leche. Los resultados se obtienen en cuestin de minutos, lo que permite tomar cualquier accin necesaria para mejorar la calidad higinica del producto. Una versin del equipo puede adaptarse de sistemas de produccin a gran escala (Medina & Montaldo, 2003), aunque en lneas generales constituye una prueba de laboratorio que requiere gran inversin inicial. Pruebas en el laboratorio Recuento de clulas somticas en muestras de tanque El RCS proveniente de una muestra global del tanque de enfriamiento de la leche es un resultado que la industria lechera a nivel mundial, informa a sus proveedores en forma mensual o bimensual. Valores superiores a 500 mil clulas/mL es indicio de infeccin en el rebao. Sin embargo, en Venezuela se ha establecido un umbral de un milln de clulas somticas/mL para definir leches mastticas (Faras et al., 2005). Las limitantes de este tipo de mtodo se derivan de las dificultades propias de su interpretacin, ya que un alto contaje pudiese significar la presencia de mastitis en un reducido nmero de vacas o, por el contrario, la elevacin general de los recuentos en muchas vacas. Por lo tanto, es imprescindible recordar que la muestra global es un conglomerado que se ve afectado por mltiples factores, entre ellos el tipo de agente bacteriano presente, etapa de la lactancia, edad de los animales y condiciones ambientales reinantes (Sharma et al., 2010). No todas estas fluctuaciones pueden considerarse fisiolgicas y requieren mayores evaluaciones. La prueba de Wisconsin para Mastitis (WMT) fue diseada para el uso en el laboratorio y se utiliza para estimar el contenido de clulas somticas de muestras de leche fresca mezclada o leche de tanques de enfriamiento, as como para muestreo de vacas individuales. Se utiliza una solucin similar a la que se emplea con la prueba de CMT, pero en contraste con esta ltima, los resultados se miden cuantitativamente dependiendo de la viscosidad (Bedolla, 2004). Recuento individual de clulas somticas (RICS) El factor ms importante que afecta el recuento de clulas somticas, es sin lugar a dudas la presencia de infeccin en la ubre o el rebao (Sharma et al., 2010). Varios estudios han determinado que el lmite mximo de clulas/mL presentes en la leche proveniente de vacas sanas no supera las 214 mil, con un promedio aritmtico de 106 mil clulas/mL, por lo que se considera prudente establecer un valor de corte de 250 mil. Este contaje se elevar de forma variable dependiendo de agente bacteriano presente, pudiendo llegar a ms de 600 mil en casos de infeccin por Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus o estreptococos ambientales. Sin embargo, como se ha sealado, muchas variables pueden afectar el RICS por lo que un valor umbral debe ser establecido de forma individual para cada rebao. Este tipo de recuento tiene la ventaja sobre el CMT de ser cuantitativo. Cultivo bacteriolgico de la leche El cultivo bacteriolgico de leche del tanque, un cuarto individual o una vaca, grupos o categoras de ellas, aade una dimensin adicional a la evaluacin de salud

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54 / Raynell Gonzlez-Gonzlez y Eli Rubio-Fuenmayor de la ubre y a los programas de control de la mastitis, especialmente cuando esa informacin se combina con RICS o datos clnicos de mastitis. Esta informacin no slo proporciona una instantnea en el tiempo de la situacin de salud de la ubre o de un rebao, sino que adems constituye un medio muy efectivo para la identificacin de tendencias de la infeccin, identificar los factores de riesgo y para supervisar el rendimiento del rebao y la evaluacin de los programas. Cultivos bacteriolgicos de rutina deben ser un objetivo permanente de cualquier programa de control de mastitis. Las estrategias de muestreo para cualquier programa en curso requieren del Mdico Veterinario, as como de la gerencia del hato. Es particularmente importante que los trabajadores estn al tanto de los procedimientos estndares para la identificacin de las vacas a muestrear, as como de los procedimientos apropiados de muestreo (Chacn-Villalobos et al., 2006). Leche globales de tanques El cultivo bacteriolgico de muestras de la leche del tanque de enfriamiento es un medio simple, de bajo costo para determinar la presencia de patgenos que causan mastitis en un hato. Este mtodo de cultivo tiene sus limitaciones, siendo adecuado para la identificacin de los patgenos que causan mastitis contagiosa y para vigilar la presencia de patgenos a travs del tiempo (Castillo et al., 2009). De ninguna manera, la presencia de un patgeno especfico en la placa indica la prevalencia de la infeccin en el rebao, ya que este resultado puede estar sealando patgenos que no provienen de la ubre, sino que identifica microorganismos contaminantes de los pezones de las vacas de ordeo o del equipo u originados del medio ambiente. Por esa razn, estos resultados son tiles para evaluar la calidad de la leche, el ordeo, los procedimientos generales de manejo y el nivel general de higiene en la recogida de la leche y el almacenamiento en la finca (Boscn, 2011). El intervalo de muestreo debe estar basado en la dinmica del hato, pudindose realizar el monitoreo de rebaos abiertos cada quince das o mensualmente. En casos de seleccin para la compra de animales, se recomienda de manera habitual, realizar tres muestreos de la leche del tanque durante un perodo de una semana; de esa forma se mejora la probabilidad de la deteccin de un patgeno especfico (Bez, 2002). Muestras de leche individuales de vacas Cultivos bacteriolgicos de muestras individuales de leche de los animales constituyen otro mtodo de diagnstico para la mastitis. Sin embargo, solo proporcionan una indicacin del posible patgeno involucrado, ya que la posibilidad de un resultado falso positivo es posible debido a la contaminacin de la muestra, como ya se explic. La sensibilidad y especificidad es del 70% para un solo cultivo, pero se incrementa a 80 90% cuando pueden valorarse varias muestras del mismo animal. Es necesario recordar que resultados negativos al cultivo bacteriano pueden ser obtenidos en el 18-38% de los casos de muestras clnicas debido al control de la infeccin derivado de los mecanismos de defensa natural (Smith et al., 1985). La interpretacin de los resultados del cultivo es ms significativa cuando se combinan con los resultados de RICS. En tales casos, el RICS debe ser utilizado para seleccionar las vacas y los cuartos a muestrear en los animales en mayor ries-

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go de infeccin, lo cual asegura un valor predictivo relativamente bueno para los resultados del cultivo. En ausencia de datos del RICS, los resultados del CMT deben ser utilizados en consecuencia, considerando que todo cuarto de ubre y/o vaca con resultados de 2 3 cruces al CMT es candidato al muestreo para cultivo. Deteccin de enzimas La N-acetyl-b-D-glucosaminidasa (NAGasa) y lactato deshidrogenasa (LDH) son enzimas cuya presencia en leche se asocia a un alto RCS. La prueba de deteccin de NAGasa puede realizarse de manera fcil y automatizada en el laboratorio, lo que permite el manejo de un nmero importante de muestras. Esta prueba, al igual que la determinacin de los niveles de LDH son excelentes predictores de infeccin, con una validez similar al RCS. La medicin de protenas de la fase aguda (APPs) tiene la ventaja de ser liberadas por el hgado en fase ms temprana del dao tisular. En el caso de los vacunos, la severidad de los signos clnicos de mastitis puede ser correlacionado con las concentraciones de varias APPs, incluyendo haptoglobina, suero amiloide A y alfa-1glicoproteina tanto en suero sanguneo como en la leche (Eckersall et al., 2001). Deteccin de anticuerpos Los inmunoensayos enzimticos (ELISA) representan una tcnica inmunolgica utilizada para el diagnstico de diversas enfermedades infecciosas que posee una capacidad operativa diagnstica excelente. Una prueba de este tipo ha sido desarrollada recientemente para la deteccin de Staphylococcus aureus, uno de los ms importantes grmenes productores de mastitis bovina. Si bien, los kits ya estn disponibles, an queda por superar el problema de accesibilidad econmica y las desventajas tecnolgicas debido a la necesidad de mantener personal especializado y muchos pasos operativos (Faras et al., 2005). Representacin de los resultados Varios investigadores han desarrollado ndices matemticos o grficos para tratar de visualizar mejor la situacin de mastitis de las fincas lecheras. Estas representaciones se derivan de los resultados aislados o combinados de diversas pruebas, particularmente de los RCS, RICS, CMT, WMT, resultados de cultivos bacteriolgicos y contajes de bacterias presentes en leche. Todo ello, a pesar que, sin duda alguna, el registro ordenado de los resultados de las pruebas de monitoreo individual y colectivo proporciona informacin muy til para el control de la mastitis y en el manejo adecuado de las fincas (Bedolla, 2004; Prez et al., 2005); sin embargo, ninguno de estos ndices han sido probados en condiciones de explotacin doble propsito, por lo que no sern descritos en este trabajo.

PROGRAMA DIAGNSTICO A SEGUIR


En conjugacin a los elementos diagnsticos disponibles y planteados en esta revisin, los autores proponen el siguiente algoritmo diagnstico a seguir para las fincas doble propsito con ordeo a mano: Prueba de fondo negro. Aplicada en cada ordeo, justo con los primeros chorros del despunte de las vacas, tras el retiro del becerro y de la aplicacin de los

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56 / Raynell Gonzlez-Gonzlez y Eli Rubio-Fuenmayor estmulos necesarios para la bajada de la leche. Responsables: personal del ordeo. Objetivo: detectar animales con mastitis clnicas en fase inicial. Repetir diariamente, dos veces al da. Prueba de RCS y CMT Global. Comenzar las primeras indagaciones apoyado en resultados globales del WMT o del CMT. Responsables: Encargado de vaquera y Mdico Veterinario. Objetivo: Establecer el estado general de la finca frente a la mastitis subclnica. Repetir cada 15 das o mnimo mensual. Prueba de CMT. Se recomienda la realizacin de dos pruebas con separacin de 30 das. Responsables: Encargado de vaquera y Mdico Veterinario. Objetivo: identificar cuartos y vacas con reacciones de alto riesgo (2 y 3 cruces) sostenidas. Repetir solo en caso que el WMT/CMT global as lo determinen. Muestreo de leche para cultivos bacteriolgicos y antibiogramas. Seleccionar un 5 a 10% de los cuartos con alto riesgo (2 y 3 cruces) al CMT. Adicione las muestras provenientes de los casos de mastitis clnicas de los ltimos 8 das. Responsables: Mdico Veterinario y gerencia de la finca. Objetivo: Identificar y caracterizar el tipo de grmenes contagiosos predominantes y conocer la susceptibilidad a los distintos antibiticos. Repetir solo en caso necesario, segn lo antes descrito.

CONCLUSIONES
Se propone el establecimiento de un programa diagnstico para la ganadera bovina doble propsito basado en la vigilancia peridica mediante pruebas de fondo negro, CMT y cultivos bacteriolgicos. El fondo negro debe realizarse diariamente, en cada ordeo. Pruebas de WMT o CMT deben monitorear cada quince das, la presencia de clulas somticas en leche del tanque. La aplicacin del CMT en las vacas individuales se establece como alternativa, tras alteraciones o alarmas en las pruebas globales. Dos pruebas de CMT, con separacin de 30 das sern necesarias para identificar cuartos y vacas con resultados de alto riesgo mantenidos. Un pequeo porcentaje de estos, permitir a travs de los cultivos bacteriolgicos identificar el tipo de mastitis presente y tomar, en consecuencia, las medidas de control pertinentes.

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