ndice de prcticas

Prctica No. 1 Biometra hemtica (serie blanca) ---------------------------------------------------------------------------- pg. 3 - Preparacin del frotis para las tinciones --------------------------------------------------------- pg. 3 - Mtodo con la tincin de Giemsa ------------------------------------------------------------------ pg. 8 - Mtodo con la tincin de Wright ---------------------------------------------------------------- pg. 13 Prctica No. 2 Examen general de orina (EGO) ---------------------------------------------------------------------------- pg. 19 Prctica No. 3 Mtodos coproparasitoscpicos ----------------------------------------------------------------------------- pg. 34 - Mtodo directo --------------------------------------------------------------------------------------- pg.34 - Mtodo de amiba en fresco ------------------------------------------------------------------------ pg. 38 - Mtodo de Faust ------------------------------------------------------------------------------------ pg. 41 - Mtodo de Ritchie ---------------------------------------------------------------------------------- pg. 45 - Mtodo de copas ------------------------------------------------------------------------------------ pg. 51 - Mtodo de Kato ------------------------------------------------------------------------------------- pg. 55 - Mtodo de Willis ------------------------------------------------------------------------------------ pg. 58 - Mtodo de Stoll-------------------------------------------------------------------------------------- pg. 61 - Mtodo de Conatn --------------------------------------------------------------------------------- pg. 64 Prctica No. 4 Exmenes inmunolgicos ------------------------------------------------------------------------------------- pg. 70 ndice de investigaciones ------------------------------------------------------------------------------------- pg. 84

Prctica No. 3 Biometra hemtica (serie blanca)

Introduccin
La serie blanca es prcticamente la determinacin del nmero de los diferentes tipos de leucocitos que hay dentro de la sangre, entre los cuales podemos diferenciar 6 tipos que son: - Neutrfilos segmentados - Neutrfilos banda - Eosinfilos - Basfilos - Linfocitos - Monocitos

Objetivo
El objetivo de esta prctica es que el alumno aprenda a diferenciar los diferentes tipos de leucocitos y tambin a realizar una correcta tincin con los mtodos de Wright y Giemsa.

Preparacin del frotis para las tinciones

Un frotis sanguneo es un barrido de una gota de sangre sobre un porta. Es necesario realizar un frotis correctamente, ya que de ello depende el que el anlisis de resultados correctos.

Material
Portas Dos vasos de precipitado Un tripi con tela de asbesto Una varilla de vidrio Unas pinzas para tubo de ensayo Un mechero de bunsen Una pipeta Pasteur con chupete Un trapo que no suelte pelusa

Reactivos
Alcohol de 90

Biolgico
Una muestra sangunea anticoagulada con EDTA

Metodologa
1. Lavar muy bien los portas con agua y jabn.

2. Una vez limpios los colocamos dentro de un vaso de precipitado que contenga agua hirviendo durante 5 minutos.

3. Posteriormente los con ayuda de la varilla y las pinzas sacamos los portas y los trasladamos a otro vaso de precipitado que contenga alcohol y los dejamos durante 2 minutos.

4. Luego sacamos los portas del alcohol y los secamos con un trapo que no suelte pelusa.

5. Tomamos un porta y le colocamos una gota de sangre, con ayuda de la pipeta Pasteur, cerca de un extremo.

6. Despus agarramos otro porta, llamado porta extensor, formando un ngulo de 45 un poco al frente de la gota de sangre.

7. Deslizamos el porta extensor hacia atrs hasta que alcance la gota y sta se extienda.

8. Antes de que la gota alcance el extremo del porta, lo deslizamos hacia adelante con un movimiento firme, uniforme y a una velocidad media.

9. Finalmente dejamos secar el frotis y listo, ya esta preparado para ser teido con los mtodos de tincin que mencionaremos ms adelante.

Mtodo con tincin de Giemsa

Este mtodo es muy tardado y se debe de realizar con tiempos adecuados y reactivos no tan viejos porque se corre el riesgo de que nuestro frotis se queme.

Material
Un microscopio compuesto Una cuba hidrulica Una pipeta de 1, 5 y 10 mililitros Un tubo de ensayo grande Una pipeta Pasteur con chupete

Reactivos
Aceite de inmersin Azul de metileno para Giemsa Buffer o tampn pH 7.2 Metanol

Biolgico
Un frotis sanguneo

Metodologa
1. Colocamos el frotis en el puente de la cuba hidrulica y lo cubrimos con metanol durante 3 minutos.

2. Dejamos secar el frotis al aire.

3. Ahora diluimos en un tubo de ensayo grande 0.2ml de azul de metileno para Giemsa con 2ml de tampn pH 7.2 y lo mezclamos suavemente.

4. Con la pipeta Pasteur cubrimos el frotis con la solucin y dejamos actuar durante 35 minutos.

5. Posteriormente escurrimos, lavamos con agua de grifo primero y despus con tampn pH 7.2 hasta eliminar los restos de colorante.

6. Dejamos escurrir y secamos en posicin vertical.

7. Una vez seco nuestro frotis le colocamos una gota de aceite de inmersin y lo observamos en el microscopio a 100X.

8. Contamos en forma de zigzag los leucocitos hasta llegar a cien.

9. Anotamos nuestros resultados.

C.B.T.I.s NO. 44
Laboratorio de anlisis clnicos Luc Montaigner
Nombre del paciente: Raimundo Benavides Guzmn Fecha: 4/Septiembre/2009 Edad: 56 aos Sexo: Masculino

Cuenta diferencial (Giemsa)

N. Segmentado N. Banda Eosinfilos Basfilos Linfocitos Monocitos Porcentaje del paciente % % % % % % Valores normales 40 79 % 0 11 % 07% 03% 12 46 % 1 13 %

Mtodo con tincin de Wright

Este mtodo a diferencia del de Giemsa es ms rpido y fcil de hacer, proporcionndonos los mismos resultados, todo es cuestin de gustos.

Material
Un microscopio compuesto Una cuba hidrulica Una pipeta de 1, 5 y 10 mililitros Un tubo de ensayo grande Una pipeta Pasteur con chupete

Reactivos
Aceite de inmersin Azul de metileno para Wright Buffer o tampn pH 7.2

Biolgico
Un frotis sanguneo

Metodologa
1. Ponemos el frotis en el puente de la cuba hidrulica y le agregamos 1ml de azul de metileno para Wright durante 1 minuto.

2. Luego lavamos con tampn pH 7.2, dejamos escurrir y secar en posicin vertical.

3. En un tubo de ensayo grande diluimos 0.5ml de azul de metileno para Wright junto con 0.5ml de tampn pH 7.2.

4. Con la pipeta Pasteur vertemos la solucin sobre el frotis seco y dejamos teir durante 4 minutos.

5. Posteriormente lavamos con agua de grifo primero y despus con tampn pH 7.2.

6. Lo dejamos escurrir y secar en posicin vertical.

7. Una vez seco el frotis le colocamos una gota de aceite de inmersin y observamos en el microscopio a 100X.

8. Procedemos a contar los leucocitos en forma de zigzag hasta llegar a cien.

9. Anotamos nuestros resultados.

C.B.T.I.s NO. 44
Laboratorio de anlisis clnicos Luc Montaigner
Nombre del paciente: Raimundo Benavides Guzmn Fecha: 4/Septiembre/2009 Edad: 56 aos Sexo: Masculino

Cuenta diferencial (Wright)

N. Segmentado N. Banda Eosinfilos Basfilos Linfocitos Monocitos Porcentaje del paciente % % % % % % Valores normales 40 79 % 0 11 % 07% 03% 12 46 % 1 13 %

Conclusin
He llegado a la conclusin en esta prctica de que cuanto mayor tiempo se deje el frotis en el colorante o en el metanol, los leucocitos se van a ir comprimiendo y tambin se nos quemar el frotis provocando que la tincin se vea muy oscura y no podamos identificar bien los ncleos.

Comentarios
Es una prctica que me ha encantado siempre, es una de mis favoritas no me aburro nunca de llevarla a cabo. Algo que no he logrado hacer con stos dos tipos de tinciones es dejar a los leucocitos en un tamao grande como lo hice con la tincin rpida que llevamos a cabo en tercer semestre.

___________________________ Jovani Uriel Reyes Moreno

Prctica No. 4 Examen general de orina (EGO)

Introduccin
El anlisis de orina realizado en el laboratorio clnico, puede proporcionar una informacin amplia, variada y til del rin de un individuo y de las enfermedades sistmicas que pueden afectar este rgano. Por medio de este anlisis, es posible elucidar tanto desrdenes estructurales como desrdenes funcionales del rin y del tracto urinario inferior, sus causas, y su pronstico. La realizacin cuidadosa del examen de orina, por parte del laboratorio, ayuda al diagnstico diferencial de numerosas enfermedades del sistema urinario. Usualmente, los datos de laboratorio obtenidos por medio de este anlisis, se logran sin dolor, dao o tensin para el paciente. Esta es la razn por la cual, la realizacin e interpretacin correcta del anlisis de orina, por parte del laboratorio permanecer siempre como una herramienta esencial ms no definitiva de la prctica clnica. En la actualidad, se practican tres tipos de exmenes de orina: anlisis de orina por tira hmeda, empleado generalmente por los mdicos en sus consultorios y por los pacientes en sus casas; tamizaje de anlisis hmedo de la orina, comnmente llamado anlisis bsico o rutinario de orina; y citodiagnstico de la orina, que es una evaluacin citolgica especializada del sedimento urinario que correlaciona con los anlisis realizados por medio de la tira reactiva.

Objetivo
Esta prctica tiene como objetivo el que nosotros sepamos hacer un buen examen general de orina, identificar muy bien los sedimentos, interpretar correctamente la tira reactiva y realizar a la perfeccin el examen fsico.

Material
Un microscopio compuesto Un uro densmetro Portas y cubres Una pipeta Pasteur Una probeta de 250ml Un cronmetro Un tubo de ensayo Una centrifugadora

Reactivos

Cintas o tiras reactivas para EGO (Examen General de Orina) Un gotero con H2O (agua)

Biolgico
Una muestra de orina

Metodologa
1. Comenzamos con el anlisis fsico, detectando el olor de la orina, si la orina huele normal se dice que tiene un olor caracterstico, pero en ocasiones puede oler dulce, amoniacal, etc.

2. Posteriormente de seala el color de la orina y su aspecto observndola, puede tener un color amarillo, amarillo mbar, rojo, transparente y en cuanto a su aspecto puede ser sin sedimento o con sedimento.

3. Se coloca la muestra en una probeta para medir su volumen.

4. En la probetita del uro densmetro colocamos 25ml de orina.

5. Tomamos el uro densmetro con los dedos pulgar y medio para introducirlo dentro de la probetita y lo giramos un poco.

6. Observamos lateralmente, a nivel, la densidad que marca el uro densmetro.

7. Anotamos los resultados del examen fsico realizado.

Examen fsico Olor Color Aspecto Volumen Densidad Caracterstico Amarillo Semiturbio con sedimento 46ml. 1,015

8. Ahora continuamos con el examen qumico, lo primero que hay que hacer es introducir en un tubo de ensayo la orina hasta que se llene casi todo, dejaremos como 1cm sin llenar.

9. Procedemos a introducir en el tubo con orina una tira reactiva durante 3 o 2 segundos a modo de que se empapen todos los cuadritos en ella de orina.

10. En el bote de las cintas reactivas vamos viendo el valor de cada uno de los cuadritos esperando a que hagan reaccin durante cierto tiempo como se muestra en la tabla. Pruebas Glucosa Bilirrubina Cetona (cido acetoactico) Gravedad especfica (densidad) Sangre pH Protenas Urobilingeno Nitritos Leucocitos Tiempos de lectura 30 segundos 30 segundos 40 segundos 45 segundos 60 segundos 60 segundos 60 segundos 60 segundos 60 segundos 2 minutos

11. Anotamos los resultados del examen qumico que realizamos.

Glucosa Bilirrubina Cetona Densidad Sangre pH Protenas

Examen qumico Negativo Negativo Negativo 1,015 Negativo 6.0 Negativo

Urobilingeno Nitritos Leucocitos

Normal (3.2 mol/L) Negativo Bajo (70 caCELULAS/L)

12. Una vez terminados los exmenes anteriores continuamos con el examen microscpico de sedimento colocando en dos tubos de ensayo la misma cantidad de orina.

13. Colocamos los dos tubos con orina en lados opuestos de la centrifugadora y ponemos a centrifugas durante 5 minutos a 3500 rpm (revoluciones por minuto).

14. Una vez que se termin de centrifugar nuestra muestra observaremos que ha quedado sedimento en la base del tubo.

15. Con la pipeta Pasteur colocamos una gota del sedimento en un porta, le ponemos una gota de agua y le colocamos un cubre.

16. En otro porta colocamos otra gota de sedimento, una gota de azul de metileno y colocamos el cubre.

17. Analizamos el primer porta sin teir en el microscopio a 40X y contamos cuantos sedimentos hay por campo.

18. Anotamos los tipos de sedimentos por campo de la preparacin en fresco.

Preparacin en fresco Clulas epiteliales Leucocitos 3 15 por campo 2 3 por campo

19. Lo mismo se hace en el segundo porta teido con azul de metileno, observamos a 40X los tipos sedimentos por campo.

20. Anotamos los tipos de sedimento por campo de la preparacin en azul de metileno. Preparacin en azul

Clulas epiteliales Leucocitos

3 15 por campo 1 4 por campo

21. Por ltimo unimos todos nuestros resultados en uno slo elaborando un reporte de nuestros anlisis como se muestra a continuacin.

C.B.T.I.s NO. 44
Laboratorio de anlisis clnicos Luc Montaigner
Nombre del paciente: Claudia Fecha: 11/Septiembre/2009 Edad: 25 aos Sexo: Femenino

Examen general de orina (EGO)

Examen fsico Olor Color Aspecto Volumen Densidad Examen qumico Glucosa Bilirrubina Cetona Densidad Sangre pH Protenas Urobilingeno Nitritos Leucocitos Negativo Negativo Negativo 1,015 Negativo 6.0 Negativo Normal (3.2 mol/L) Negativo Bajo (70 caCELULAS/L) Examen microscpico (sedimento) Caracterstico Amarillo Semiturbio con sedimento 46 ml. 1,015

Preparacin en fresco Clulas epiteliales Leucocitos Preparacin en azul de metileno Clulas epiteliales Leucocitos

3 15 por campo 2 3 por campo 3 15 por campo 1 4 por campo

Conclusiones
He llegado a la conclusin de que si no dejas reaccionar bien a la cinta reactiva en los tiempos indicados, esta va a mostrar resultados errneos, tambin es importante no contaminar a la cinta reactiva con alguna otra sustancia, ya que tambin se puede interpretar mal el resultado. Aunque es una prctica muy sencilla, no por eso debemos de darle menor importancia, ya que si nos confiamos demasiado la vamos a hacer mal.

Comentarios
Esta prctica me result fcil llevarla a cabo a diferencia de las dems que hemos hecho, pero no por eso significa que no me haya agradado, al contrario, se me hizo interesante, en especial cuando hice el examen de sedimento.

___________________________ Jovani Uriel Reyes Moreno

Prctica No. 3 Mtodos coproparasitoscpicos

Introduccin
Cuando un paciente sufre de alguna parasitosis, es decir, que se ha infestado con parsitos debido a una inoculacin de los mismos por sus diferentes vectores tales como comida o agua contaminadas, animales, etc. es conveniente realizar un coproparasitoscpico el cual se va a encargar de analizar el copro del paciente con el fin de encontrar huevecillos dentro de ste, cabe mencionar tambin que no todos los parsitos se van a encontrar slo en las heces fecales, hay otros que se encuentran en la sangre, pero eso es otro rollo. Lo que tratamos de buscar en un coproparasitoscpico principalmente son huevos de helmintos, quistes o larvas con el fin de llegar a un diagnstico y tratar dicha parasitosis si es que existe.

Objetivo
El objetivo de esta prctica es que el alumno aprenda a realizar anlisis de copro con cualquiera de los mtodos que describiremos a continuacin y as poder identificar ms fcilmente a los parsitos encontrados.

Mtodo directo
Este examen es uno de los ms sencillos y frecuentemente utilizados en los laboratorios, la ventaja de este mtodo es que se observa el copro tal y como est sin ningn colorante, por lo que si se encuentran parsitos vivos podremos observar an su movimiento.

Material
Un microscopio compuesto Un tubo de ensayo Una pipeta Pasteur con chupete Portas y cubres Palillos de dientes

Reactivos
Solucin fisiolgica al 0.9%

Yodo lugol

Biolgico
Una muestra de copro

Metodologa
1. Se coloca una pequea porcin de copro (aprox. 1gr) en un tubo de ensayo con solucin salina (aprox. 3ml) y se agita un poco.

2. Dejamos sedimentar la muestra y procedemos a tomar una porcin del sedimento (el que est hasta el fondo) con ayuda de la pipeta Pasteur.

3. Depositamos una gota en un porta, le colocamos un cubre y observamos a 40X para encontrar algn parsito o sus huevos.

4. En otro porta procedemos a colocar un poco de copro con un palillo.

5. Luego le agregamos una gota de yodo lugol y mezclamos con ayuda del palillo.

6. Despus le colocamos un cubre y observamos a 40X para encontrar algn parsito o sus huevos.

Mtodo de amiba en fresco

Este examen es til cuando sospechamos de una posible amibiasis en el paciente, ya que con este mtodo podemos hacer que dicho parsito se reproduzca un poco para poder verlo mejor.

Material
Un microscopio compuesto Un asa bacteriolgica Un tubo de ensayo Un mechero bunsen Un vaso de precipitado Unas pinzas para tubo de ensayo Una pipeta de 5ml Una balanza granataria Un termmetro Portas y cubres

Reactivos
Solucin salina

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. En un tubo de ensayo colocamos 5ml de solucin salina con ayuda de la pipeta.

2. Posteriormente agregamos 2gr de materia fecal y mezclamos bien.

3. Tomamos el tubo con las pinzas y lo colocamos dentro del vaso de precipitado, el cual contiene agua a 37C, para incubar.

4. Una vez que ya se incub la muestra, tomamos con nuestra asa el sobrenadante (el que est en la superficie del tubo) y lo ponemos en un porta.

5. Colocamos un cubre y observamos a 40X.

Mtodo de Faust
Este es un mtodo basado en el principio de la flotabilidad, que dice que una masa con menor peso especfico tendera a flotar en otra masa de mayor peso especfico. El sulfato de zinc en solucin con peso especfico de 1.180 ese mayor que algunas formas de parsitos, lo que les permite flotar, adems de que esta sustancia no los deforma.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Un tubo de ensayo Un vaso de precipitado Un embudo Una varilla de vidrio Una centrifugadora Una balanza granataria Gasas

Reactivos
Sulfato de zinc Yodo lugol Solucin salina

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. Colocamos 2gr de materia fecal en un vaso de precipitado junto con 5ml de solucin salina y lo mezclamos con ayuda de la varilla de vidrio.

2. Luego pasamos nuestra disolucin a travs de una gasa colocada en un embudo y se recolecta directamente en un tubo de ensayo.

3. Se centrifuga la muestra durante 1min a 2000rpm.

4. Decantamos el sobrenadante y volvemos a suspender el sedimento con otros 5ml de solucin salina para posteriormente volver a centrifugar. Esto se repite 3 veces.

5. Ahora en vez de solucin salina vamos a agregar 5ml de sulfato de zinc.

6. Se centrifuga la muestra durante 1min a 2000rpm y luego tomamos la pelcula que queda en la superficie con un asa bacteriolgica.

7. Depositamos la muestra en un porta y le agregamos una gota yodo lugol.

8. Colocamos un cubre y observamos en el microscopio a 40X.

Mtodo de Ritchie
Este mtodo tiene la ventaja de concentrar los quistes, huevos y larvas, este es un mtodo de sedimentacin, el cual resulta ms sucio que el de flotacin.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Un vaso de precipitado Una varilla de vidrio Un embudo y gasas Una centrifugadora Una pipeta Pasteur Un tubo de ensayo

Reactivos
Solucin salina ter etlico Solucin de formaldehido al 10%

Yodo lugol

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. En el vaso de precipitado colocamos 2gr de materia fecal junto con 5ml de solucin salina y lo homogenizamos con ayuda de la varilla de vidrio.

2. Luego pasamos nuestra suspensin a travs de una gasa colocada dentro de nuestro embudo para filtrarla y recogerla en un tubo de ensayo.

3. Centrifugamos durante 1min a 2000rpm.

4. Decantamos es sobrenadante y volvemos a suspender el sedimento en otros 5ml de solucin salina; centrifugamos y repetimos el mismo procedimiento varias veces hasta que el sobrenadante sea claro.

5. Al ltimo sedimento se le aade 5ml de solucin de formaldehido, lo mezclamos y dejamos reposar durante 10min.

6. Despus de los 10min reposando, agregamos 2.5ml de ter etlico, tapamos el tubo y agitamos durante 30seg.

7. Luego centrifugamos durante 2min a 1500rpm.

8. Cuando terminamos de centrifugar observaremos 4 capas; ter en la superficie, luego un tapn de restos fecales, ms abajo estar el formaldehido y en el fondo del tubo habr sedimento.

9. Introducimos la pipeta Pasteur a travs de las tres primeras capas hasta llegar al sedimento y ya en ste se extrae una gota del mismo la cual se colocar en un porta.

10. Aadimos una gota de yodo lugol, homogenizamos, colocamos un cubre y observamos en el microscopio a 40X.

Mtodo de copas
Este mtodo es ideal para detectar huevos de helmintos que generalmente no flotan con las tcnicas usuales que utilizan soluciones ms densas para tal objeto.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Tubo de ensayo Pipeta Pasteur con chupete Embudo y gasas Un vaso de precipitado Varilla de vidrio

Reactivos
Solucin de detergente al 5% Solucin de verde de malaquita al 1%

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. Tomamos ms o menos 2 o 3gr de materia fecal y la depositamos en un vaso de precipitado para homogeneizarla con 100ml de agua de la llave con ayuda del agitador de vidrio.

2. Una vez echa nuestra disolucin la hacemos pasar a travs de una gasa que estar puesta dentro del embudo para recoger el filtrado directamente en un tubo de ensayo.

3. Posteriormente agregamos 2.5ml de colorante verde de malaquita, agitamos y aadimos 2.5ml de solucin en detergente, volvemos a agitar perfectamente.

4. Por ltimo completamos el volumen del tubo de ensayo con agua corriente y dejamos reposar durante 15min.

5. Decantamos el sobrenadante, agregamos ms agua mezclando de nuevo y dejamos reposar otros 15min.

6. Decantamos nuevamente el sobrenadante y con una pipeta Pasteur tomamos el sedimento y colocamos una gota en un porta.

7. Ponemos sobre ste un cubre y observamos nuestra preparacin a 40X.

Mtodo de Kato
ste mtodo resulta til en la identificacin de huevos de helmintos, es un frotis grueso que en vez de utilizar un cubre ocupar papel celofn teido con verde de malaquita.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Palillos Papel celofn no resistente a la humedad

Reactivos
Solucin de verde de malaquita al glicerol

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. Tomamos 50mg de materia fecal con un palillo y lo depositamos en un porta.

2. Una vez que tenemos la muestra sobre el porta procedemos a cubrirla con un cuadro de papel celofn previamente mojado con la solucin verde de malaquita al glicerol.

3. Invertimos la preparacin sobre una hoja de papel filtro en una superficie lisa y presionamos hasta que la extensin cubra un rea de aproximadamente 25mm2.

4. Volteamos nuestra preparacin, retiramos el papel filtro y la dejamos reposar durante 1 hora a temperatura ambiente o durante 30min a 37C.

5. Una vez que haya pasado la hora de espera observamos la preparacin a 40X para tratar de encontrar huevos de helmintos.

Mtodo de Willis
ste se basa en un principio de flotacin simple, utilizando una solucin de una densidad entre 1200 y 1250 en la cual los quistes y larvas flotan.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Un vaso de precipitado Un tubo de ensayo Una varilla de vidrio

Reactivos
Salmoera Yodo lugol

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. Primero preparamos la salmoera, sta la elaboraremos llenando el vaso de precipitado con agua hasta la mitad, iremos agregando poco a poco cloruro de sodio hasta que ste no se pueda disolver ms en el agua. Prcticamente la salmoera es una dilucin saturada de cloruro de sodio en agua.

2. Luego de haber preparado la salmoera vamos a agregar una pequea porcin de heces fecales dentro de un tubo de ensayo, aproximadamente 2gr y le agregamos un poco de salmoera para homogeneizar.

3. Una vez diluido el copro agregamos salmoera hasta el borde del tubo, le colocamos un cubre un la boca del recipiente de tal manera que est en contacto con la solucin y dejamos reposar durante 15min.

4. Despus de esos 15min procedemos a colocarle una gota de yodo lugol a un porta.

5. Tomamos el cubre que dejamos puesto sobre el tubo de ensayo y lo ponemos sobre nuestro porta que contiene la gota de yodo lugol y observamos en el microscopio a 40X.

Mtodo de Stoll
Este mtodo se basa en los principios de saponificacin, homogeneizacin y aclaracin. El hidrxido de sodio .1N al ponerse en contacto con las grasas de la materia fecal se saponifica, es decir, se espesa y se hace como el jabn, esto hace que los huevos de parsitos sean menos pegajosos, desinfecta y desodoriza la muestra.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Canicas Una probeta de plstico Una pipeta Pasteur

Reactivos
Hidrxido de sodio .1 normal

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. Colocamos 56ml de hidrxido de sodio .1 normal en la probeta.

2. Aadimos copro poco a poco hasta que suba a la marca de 60ml.

3. Agregamos 20 canicas dentro de la probeta, la tapamos y agitamos vigorosamente de arriba hacia abajo hasta homogeneizar.

4. Una vez que terminamos de agitar se comenzarn a precipitar los huevos y residuos, con la pipeta Pasteur tomamos solucin inmediatamente del centro de la disolucin y colocamos una gota en un porta.

5. Colocamos un cubre y contamos los huevos a 40X.

Mtodo de Conatn
En este mtodo se va a utilizar el sedimento del mtodo de Ritchie, slo que a este lo vamos a teir para poder observar mejor a los parsitos.

Material
Un microscopio compuesto Portas y cubres Un vaso de precipitado Un tubo de ensayo Unas pinzas para tubo de ensayo Un mechero bunsen Un tripi con tela de asbesto Una centrifugadora Una pipeta Pasteur Un termmetro

Reactivos
Metanol Calbolfusina cido sulfrico al 10% Verde brillante al 1% Hidrxido de sodio .2 normal Aceite de inmersin

Biolgico
Materia fecal

Metodologa
1. Al sedimento obtenido del mtodo de Ritchie le vamos a aforar a 1ml con agua destilada y agregamos 3ml de hidrxido de sodio .2 normal y agitamos.

2. Luego con las pinzas tomamos nuestro tubo y lo metemos dentro de nuestro vaso de precipitado con agua a 37C para incubarlo durante 30min.

3. Una vez incubado lo metemos dentro de la centrifugadora y lo centrifugamos durante 1min a 2000rpm.

4. Lavamos dos veces con solucin salina y centrifugamos durante 1min a 2000rpm.

5. Una vez hecho esto realizamos un frotis con una gota de sedimento y teimos con la tcnica de Kink You, que a continuacin se explica.

6. Fijamos nuestro frotis con metanol y lo pasamos ligeramente por la flama del mechero.

7. Lo teimos con calbolfusina durante 3min y luego lo decoloramos con cido sulfrico al 10%.

8. Lo contrastamos con verde brillante al 1% durante 30 segundos, lo lavamos y lo dejamos secar.

9. Una vez seco nuestro frotis le colocamos una gota de aceite de inmersin y lo observamos en el microscopio a 100X.

Reporte del coproparasitoscpico

C.B.T.I.s NO. 44
Laboratorio de anlisis clnicos Luc Montaigner
Nombre del paciente: Alexis Eduardo Reyes Moreno Fecha: 18/Septiembre/2009 Edad: 13 aos Sexo: Masculino

Examen coproparasitoscpico
Mtodos cuantitativos 5600 huevos de anquilostoma (h/ml/h) 320 huevos de anquilostoma por gr. de heces Mtodos cualitativos Directo Willis Amiba en fresco Faust Copas Ritchie Conatn Huevecillos de anquilostoma Negativo Negativo Negativo Huevecillos de anquilostoma Huevecillos de anquilostoma Huevecillos de anquilostoma

Kato Stoll

Conclusiones
En esta prctica he llegado a la conclusin de que la uncinaria es uno de los parsitos que se encuentran con ms frecuencia en mis anlisis. En cuanto a la ejecucin de los mtodos mi conclusin fue que los parsitos se vern mejor si se realiza la tcnica correcta.

Comentarios
Estuvo muy bonita esta prctica, de hecho ya he hecho ms anlisis de este tipo y me he dado cuenta de que se encuentran uncinarias con frecuencia.

___________________________ Jovani Uriel Reyes Moreno

Prctica No. 4 Exmenes inmunolgicos

Introduccin
En las reacciones febriles se detectan anticuerpos en el suero del paciente contra: Salmonella, Brucella y Rickettsia. Con el trmino SALMONELOSIS se engloban cuadros clnicos distintos como la "Fiebre tifoidea" y las "Salmonelosis no tifoideas". El nivel normal de aglutininas vara en diferentes poblaciones y circunstancias, tambin puede aumentar en cualquier periodo febril, por lo que el diagnstico de Salmonelosis se debe basar en la historia clnica, en cultivos de heces y en cultivos de sangre. La BRUCELOSIS tambin llamada "Fiebre de malta" o "Fiebre ondulante" se manifiesta inicialmente por fiebre, cefalea, dolor vertebral e inflamacin en los ganglios y se diagnostica generalmente con la deteccin de anticuerpos especficos contra Brucella. Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el antgeno empleado para la determinacin de anticuerpos es el de proteus OX-19. Las RICKETTSIOSIS (tifus) engloban una amplia gama de padecimientos transmitidos por vectores como piojos, pulgas o garrapatas, y cuyo cuadro clnico se caracteriza por fiebre elevada, exantema y vasculitis. La prueba de aglutinacin con proteus OX-19 solo tiene utilidad como prueba de tamisaje por ser inespecfica.

Objetivo
Que el alumno aprenda a realizar correctamente las reacciones febriles.

Material
Palillos y portas Una placa para pruebas febriles Tubos de ensayo Una pipeta Pasteur con chupete y pipetas automticas de 100L y 1000L con puntillas Una centrifugadora

Reactivos
Antgenos para pruebas febriles Antgenos para prueba de tipo sanguneo y Rh Alcohol de 96

Biolgico
Una muestra sangunea sin anticoagulante (tubo rojo) Una muestra sangunea con anticoagulante EDTA (tubo lila)

Metodologa
1. Colocamos nuestra muestra sangunea sin anticoagulante (tubo rojo) en la centrifugadora y centrifugamos durante 5min a 3500rpm para obtener el suero.

2. En lo que se centrifuga nuestra muestra tomamos nuestra placa de pruebas febriles, la limpiamos con una torunda con alcohol y observaremos que tiene unos crculos dibujados esparcidos en seis columnas y seis filas, la primer columna comenzando de izquierda a derecha corresponde a los crculos del Tfico O, luego le sigue el Tfico H, Paratfico A, Paratfico B, Brucella y por ltimo encontraremos la columna de crculos de Proteus, dentro de esos crculos llevaremos a cabo las reacciones de aglutinacin, cada fila se ocupar para hacer diluciones de concentracin diferente, nicamente ocuparemos slo 3 filas, la primer fila comenzando de arriba hacia abajo la ocuparemos para hacer diluciones 1:80, la segunda para hacer diluciones 1:160 y la tercera para diluciones 1:320.

3. Una vez que se termin de centrifugar la muestra de sangre procedemos a hacer diluciones 1:80 en la primer fila de nuestra placa con el antgeno correspondiente a cada columna, es decir, en la dilucin del tipo 1:80 vamos a agregar dentro de cada crculo de la primer fila 20L del plasma obtenido junto con una gota del antgeno correspondiente a cada columna.

4. Ahora mezclamos cada dilucin con un palillo diferente hasta homogeneizar perfectamente.

5. Tomamos nuestra placa por los extremos derecho e izquierdo y la movemos de tal manera que las diluciones que se encuentran dentro de cada crculo vayan girando para mezclarse bien, cuidando de que no salgan de los crculos marcados. Este movimiento lo mantenemos constante durante 5min.

6. Una vez que pasaron los 5min observaremos muy cautelosamente si alguna dilucin aglutina, si no aglutina alguna disolucin se dice que esa reaccin fue negativa, pero si alguna aglutina procederemos a hacer una dilucin 1:160 en la segunda fila slo de los crculos que aglutinaron, en la cual ahora en vez de colocar 20L de suero, procederemos a poner 10L con una gota de antgeno correspondiente. Si en el caso anterior algn circulo sigue aglutinando nos pasaremos a la tercera fila para continuar con una dilucin 1:320 de dicho o dichos crculos, en la cual ahora colocaremos 5L de suero junto con una gota del antgeno correspondiente.

7. Ahora tomaremos una placa pequea de plstico, la limpiamos con una torunda con alcohol y observaremos que sta tiene tres columnas y dos filas, en esta placa se puede utilizar cualquier crculo.

8. Colocamos 50L de suero dentro de un crculo de la placa y le agregamos una gota del antgeno antiPCR.

9. Mezclamos con un palillo hasta homogeneizar la disolucin.

10. Luego tomamos la placa por los extremos derecho e izquierdo y la meneamos de forma similar al paso 5 igualmente durante 5min.

11. Observamos cautelosamente si hubo alguna aglutinacin.

12. Para el Factor Reumatoide, VDRL y anti-estreptolisina O seguimos los mismos pasos del 8 al 11, slo que en vez de agregarle una gota de anti-PCR le vamos a colocar el antgeno especfico para cada prueba.

13. Ahora procederemos a sacar el tipo sanguneo y factor Rh, ste se va a realizar de dos formas: en tubo y en placa, comenzaremos con el del tubo. Colocaremos 1ml de sangre con anticoagulante EDTA (la del tubo lila) en un tubo de ensayo.

14. Posteriormente le agregamos 3ml de solucin salina para despus centrifugarlo durante 1min a 2000rpm.

15. Cuando se haya terminado de centrifugar lo decantamos y volvemos a agregar otros 3ml de solucin salina para posteriormente volver a centrifugar durante 1min a 2000rpm y decantar nuevamente, a esto se le conoce como lavado de hemates.

16. En tres tubos colocamos una gota de nuestro lavado de hemates con ayuda de la pipeta Pasteur.

17. Ahora colocaremos dos gotas de anti-A en un tubo, dos de anti-B en otro y dos de anti-D en el tercer tubo.

18. Los mezclamos suavemente y centrifugamos los tres tubos durante 1min a 2000rpm.

19. Posteriormente observamos cuales tubos aglutinan y cuales no para determinar el tipo sanguneo y factor Rh.

20. Ahora haremos el tipo y Rh en placa. Tomamos un porta y le agregamos tres gotas de sangre con anticoagulante EDTA (la del tubo lila) separadas a lo largo del porta.

21. A la primera le agregamos una gota de anti-A, a la segunda una gota de anti-B y a la tercera una gota de anti-D.

22. Mezclamos cada una con un palillo diferente.

23. Observamos cuales gotas aglutinan y cuales no para determinar el tipo sanguneo y factor Rh

Reporte de los exmenes inmunolgicos

C.B.T.I.s NO. 44
Laboratorio de anlisis clnicos Luc Montaigner
Nombre del paciente: Moiss Guzmn Mora Fecha: 2/Septiembre/2009 Edad: 46 aos Sexo: Masculino

Exmenes inmunolgicos
Reacciones febriles Tfico O Tfico H Paratfico A Paratfico B Brucella Proteus Pruebas inmunolgicas Protena C reactiva Factor reumatoide VDRL Anti-estreptolisina O Tubo Placa Tipo sanguneo y factor Rh Grupo: A Grupo: A Prueba de coombs Positivo (+) Negativo Negativo Negativo Negativo Factor Rh: Positivo (+) Factor Rh: Positivo (+) 1:320 Negativo Negativo Negativo Negativo 1:160

Conclusiones
He llegado a la conclusin de que no se deben de menear muy fuerte las placas porque se salen del crculo y luego se combinan con los dems, lo cual nos conlleva a un desperdicio de reactivos.

Comentarios
Estuvo muy padre la prctica, es un poco tardada pero a pesar de todo es divertida y fcil, es lo que ms me encanta.

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Jovani Uriel Reyes Moreno

ndice de investigaciones
Investigacin No. 1 Examen general de orina (EGO) ---------------------------------------------------------------------------- pg. 85 - Qu es el examen general de orina? ------------------------------------------------------------- pg. 85 - La glucosa y sus resultados en el EGO ---------------------------------------------------------- pg. 85 - La bilirrubina y sus resultados en el EGO ----------------------------------------------------- pg. 85 - Las cetonas y sus resultados en el EGO -------------------------------------------------------- pg. 85 - La densidad y sus resultados en el EGO -------------------------------------------------------- pg. 86 - La sangre y sus resultados en el EGO ----------------------------------------------------------- pg. 86 - El pH y sus resultados en el EGO --------------------------------------------------------------- pg. 87 - Las protenas y sus resultados en el EGO ------------------------------------------------------ pg. 87 - El urobilingeno y sus resultados en el EGO -------------------------------------------------- pg. 88 - Los nitritos y sus resultados en el EGO -------------------------------------------------------- pg. 88 - Los leucocitos y sus resultados en el EGO ------------------------------------------------------ pg. 88

Examen general de orina (EGO) Qu es el examen general de orina?

Un examen general de orina es un estudio que se le hace a la orina de un paciente con el fin de ayudar al mdico a diagnosticar alguna infeccin o enfermedad o simplemente como un anlisis de control del paciente. Este tipo de estudio es el ms comn en los laboratorios y se podra decir que son de rutina.

Parmetros de la tira reactiva

Las tiras reactivas de orina consisten en unas pequeas cintas de plstico rgido, de unos pocos centmetros de longitud y alrededor de medio centmetro de anchura, a las que van pegados unos reactivos, que son diferentes dependiendo de lo que se quiera analizar. Los reactivos son unos pequeos cuadraditos de un material poroso, de colores suaves. Segn las tiras, puede haber diferente nmero de ellos a lo largo de la misma, en el caso de la tira reactiva que utilizamos en el laboratorio del C.B.T.is cuenta con 10 parmetros que son: Glucosa, Bilirrubina, Cetonas, Densidad, Sangre, pH, Protenas, Urobilingeno, Nitritos y Leucocitos.

La glucosa y sus resultados en el EGO

La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Los niveles de glucosa superiores a lo normal pueden ser un signo de: - Diabetes mellitus - Secrecin anormal de glucosa de los riones en la orina (glucosuria renal)

La bilirrubina y sus resultados en el EGO

La bilirrubina es un pigmento biliar de color amarillo rojizo que resulta del metabolismo de la hemoglobina. Dicho metabolismo inicia con la descomposicin de los glbulos rojos y luego es transportada por la albmina en la sangre hasta el hgado. La bilirrubina es poco soluble en agua. Es sensible a la luz y se descompone en presencia de sta. El incremento en los niveles de bilirrubina en la orina puede deberse a: - Estenosis biliar - Cirrosis - Clculos en el tracto biliar - Hepatitis con una obstruccin biliar asociada - Trauma quirrgico que afecta el tracto biliar - Tumores del hgado o de la vescula biliar

Las cetonas y sus resultados en el EGO

Las cetonas (cido betahidroxibutrico, cido acetoactico y acetona) son los productos finales del metabolismo rpido o excesivo de los cidos grasos. Un examen positivo puede indicar: - Anomalas metablicas, incluyendo una diabetes no controlada o enfermedad de almacenamiento del glucgeno. - Condiciones nutricionales anormales, incluyendo inanicin, ayunos, anorexia, dietas altas en protenas o bajas en carbohidratos. - Vmito frecuente durante un perodo prolongado, incluyendo hiperemesis gravdica (una forma severa de nuseas del embarazo). - Trastornos de aumento del metabolismo, incluyendo hipertiroidismo, fiebre, enfermedad grave o aguda, quemaduras, embarazo, lactancia (alimentar a un beb) o afeccin posquirrgica.

La densidad y sus resultados en el EGO

La gravedad especfica de la orina es un examen de laboratorio que mide la concentracin de partculas en la orina. El aumento en la gravedad especfica de la orina puede deberse a: - Deshidratacin - Diarrea - Sudoracin excesiva - Glucosuria - Insuficiencia cardaca (relacionada con la disminucin del flujo sanguneo a los riones) - Estenosis de la arteria renal - Sndrome de secrecin inadecuada de hormona antidiurtica (SIADH) - Vmitos - Restriccin hdrica La disminucin en la gravedad especfica de la orina puede deberse a: - Consumo excesivo de lquidos - Diabetes inspida central - Diabetes inspida nefrgena - Insuficiencia renal (es decir, prdida de la capacidad para reabsorber agua) - Pielonefritis

La sangre y sus resultados en el EGO

La sangre es un tejido lquido que recorre el organismo transportando clulas, y todos los elementos necesarios para realizar sus funciones vitales y todo un conjunto de funciones muy complejas y muy importantes para la vida. La cantidad de sangre de una persona est en relacin con su edad, peso, sexo y altura, una persona adulta se puede considerar que tiene entre 4,5 y 6 litros de sangre. Todos los rganos del cuerpo humano funcionan gracias a la sangre que circula por arterias, venas y capilares.

Existen muchas causas potenciales para la presencia de sangre en la orina. Con frecuencia, la orina sanguinolenta deriva de un problema en los riones o alguna otra parte de las vas urinarias. Entre las causas de los riones y las vas urinarias estn: - Cncer de la vejiga o de los riones - Fractura de la pelvis - Clculos renales o clculos en la vejiga - Enfermedad renal inmediatamente despus de una faringitis estreptoccica ( glomerulenefritis posestreptoccica), una causa clsica de sangre en la orina de los nios - Insuficiencia renal - Infeccin en la vejiga, los riones o la uretra - Inflamacin de la vejiga, la uretra o el rin ( glomerulonefritis) - Lesin al rin - Poliquistosis renal - Procedimiento reciente en las vas urinarias, como cateterismo, circuncisin, ciruga o biopsia del rin

El pH y sus resultados en el EGO

El pH es una medida de la acidez o de la alcalinidad de una sustancia. Los cidos y las bases tienen una caracterstica que nos deja poder medirlos, es la concentracin de los iones de hidrgeno. Los cidos fuertes tienen altas concentraciones de iones de hidrgeno y los cidos dbiles tienen concentraciones bajas. Un pH alto en la orina puede deberse a: - Succin gstrica - Insuficiencia renal - Acidosis tubular renal - Infeccin urinaria - Vmito Un pH bajo en la orina puede deberse a: - Enfermedad pulmonar obstructiva crnica (por ejemplo, enfisema) - Cetoacidosis diabtica - Diarrea - Inanicin

Las protenas y sus resultados en el EGO

Las protenas son los materiales que desempean un mayor nmero de funciones en las clulas de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.) y, por otro, desempean funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de materiales txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario.

Los resultados anormales pueden deberse a: - Amiloidosis - Pielonefritis bacteriana - Tumor en la vejiga - Insuficiencia cardaca congestiva - Nefropata diabtica - Glomerulonefritis - Sndrome de Goodpasture - Intoxicacin por metales pesados - Lupus eritematoso - Hipertensin maligna - Mieloma mltiple - Sndrome nefrtico - Terapia con frmacos nefrotxicos - Poliquistosis renal - Preeclampsia

El urobilingeno y sus resultados en el EGO

El urobilingeno es un producto de la conjugacin de la bilirrubina por las bacterias intestinales en el tubo digestivo, que se absorbe hacia la circulacin portal y es re-excretado por el hgado.

Los nitritos y sus resultados en el EGO

Las bacterias son los agentes ms frecuentes en las infecciones de las vas urinarias. La Echerichia coli, causante de la mayora de estas infecciones, y otros grmenes patgenos de la orina, reducen los nitratos de la orina a nitritos durante su crecimiento. La prueba de los nitritos se basa en la capacidad de algunos microorganismos para reducir los nitratos a nitritos. - La presencia de nitritos en orina puede indicar la presencia de hongos.

Los leucocitos y sus resultados en el EGO

Los leucocitos o glbulos blancos son clulas que estn principalmente en la sangre y circulan por ella con la funcin de combatir las infecciones o cuerpos extraos; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo. Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano. - La presencia de leucocitos en la orina representa alguna infeccin urinaria.