0702_Principios de Microscopa

Tamao celular
Las clulas son las unidades bsicas de los seres vivos. La mayora de ellas son de pequeo tamao por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualizacin. Por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 m), o sea la menor distancia vista o resuelta por el ojo humano es de dos lneas separadas 1mm de distancia; si hay dos lneas a 200 m de distancia, veremos una sola lnea. Los microscopios se utilizan para mejorar la resolucin. La invencin del microscopio en el siglo XVII posibilit la serie de descubrimientos posteriores de las mismas. En 1665 Robert Hooke utilizando un microscopio ptico simple, examin un corte de corteza, encontr que esta estaba compuesta por una masa de diminutas cmaras, que llam clulas, en realidad slo vio las paredes celulares, ya que este tejido est muerto a la madurez y las clulas ya no tienen contenido. Mas tarde, Hoock y algunos de sus contemporneos observaron clulas vivas.

Existen dos tipos bsicos de microscopios: PTICOS y ELECTRNICOS.

Microscopio ptico (MO)

http://centros.edu.xunta.es/iesasardineira/moodle/mod/resource/view.php?id=404 inicio#inicio El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen 1

real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes. El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazn con un soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especimenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el espcimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz a travs de la muestra. Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 m, unas mil veces la del ojo humano.

http://centros.edu.xunta.es/iesasardineira/moodle/mod/resource/view.php?id=404 inicio#inicio Existen distintas variantes de observacin en MO:

Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera

Clula de Pisum, coloracin: safranina-fast-green

Traqueidas del leo de Pinus Coloracin: safranina

Microscopa de campo brillante: el material se observa sin coloracin. La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente coloreados. El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal. Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para espcimenes delgados, o clulas aisladas. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina

Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imgenes combinadas aparecen como si la clula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseado para observar relieves de especimenes muy difciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espcimen es muy grueso para usar contraste de fases
Clulas epiteliales 200x

Microscopa de fluorescencia: una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida como rayas luminosos: esto se conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante.

.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/20x_fluor.tif http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/image
Clulas epiteliales , triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes), actina (rojo). 200x (izq.) y 1000x (der.).

Microscopa confocal. -oOo-

Ms informacin en:
Microscopa confocal y de fluorescencia http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/ Pgina de la casa Leica, sobre fundamentos de este microscopio y modelos http://www.leica-microsystems.com/llt_index.html Curiosas microfotografas con microscopa de barrido y posibilidad de manejar virtualmente uno de estos microscopios http://www.denniskunkel.com/ Completa coleccin de tcnicas de tincin, con sus correspondientes protocolos http://www.nottingham.ac.uk/pathology/default.html Pgina de introduccin al funcionamiento del microscopio confocal, preparacin de muestras y procesado de las imgenes http://www.cs.ubc.ca/spider/ladic/intro.html Manual de tcnicas de preparacin de muestras y tincin http://bris.ac.uk/pathandmicro/cpl/lablinks.html Fundamentos de la microscopa de resonancia magntica y completa galera de imgenes animadas http://wwwcivm.mc.duke.edu/civmGallery/L1Gallery.html Una de las mejores pginas sobre microscopa, con amplios textos sobre los diversos tipos de microscopios y su funcionamiento. Numerosos tutoriales en java sobre el manejo de distintos microscopios. Se puede descargar un completo manual sobre microscopa en formato Acrobat. http://micro.magnet.fsu.edu/primer/index.html Descripcin y funcionamiento del microscopio electrnico de barrido y galera de imgenes http://www.mos.org/sln/sem/ Fundamentos del microscopio electrnico de barrido, descripcin del funcionamiento con numerosos esquemas. Galera de imgenes http://www.mse.iastate.edu/microscopy/home.html Completo tratado sobre microscopa electrnica: fundamentos, microscopios, preparacin de muestras y procesado digital de las imgenes http://emoutreach.sdsc.edu/web-course/toc.html Fundamentos tericos de microscopa ptica, fluorescencia y confocal http://www.btrip.mednet.ucla.edu/bri/homepage.htm Descripcin y fundamento de los microscopios electrnicos de tr ansmisin y barrido http://www.unl.edu/CMRAcfem/em.htm Completo tutorial de digitalizacin de imgenes, donde se explican los trminos bsicos http://www.library.cornell.edu/preservation/tutorial-spanish/contents.html