Rev Cubana Farm 2000;34(2):87-92

Artculos Originales
Empresa Farmacutica 8 de marzo

GEL DE HIDRXIDO DE ALUMINIO: ANLISIS COMPARATIVO DE MTODOS DE SEPARACIN SLIDO-LQUIDO QUE SE UTILIZAN EN SU PRODUCCIN
Jess Garca Valds1 y Martha Gmez Carril1

RESUMEN
Se analiz de forma comparativa diferentes variantes de separacin slido-lquido para la obtencin del gel de hidrxido de aluminio como sedimentacin, filtracin al vaco (por lotes y continua), filtracin a presin y centrifugacin. Se presentan las ventajas y desventajas de cada variante incluyendo un anlisis tcnico-econmico de stas. Se concluye que el uso de un filtro rotatorio al vaco satisface los requerimientos establecidos. Descriptores DeCS: HIDROXIDO DE ALUMINIO/qumica; INDUSTRIA FARMACEUTICA; COMPOSICION DE MEDICAMENTOS/mtodos.

El gel de hidrxido de aluminio es el anticido no sistmico ms utilizado en el mundo en la terapia gastroduodenal. Su administracin puede ser en preparaciones lquidas orales as como formas slidas.1 Para la preparacin de las formas lquidas se recomienda el uso del gel de hidrxido de aluminio compresado; sin embargo, en Cuba por limitaciones econmicas, el gel de hidrxido de aluminio que se ha

importado para estos fines es el gel seco, que ha ocasionado innumerables problemas en la elaboracin de las suspensiones. Esta situacin ha llevado a nuestra Industria Farmacutica a desarrollar una tecnologa de obtencin para el gel de hidrxido de aluminio compresado, a partir de sulfato de aluminio produccin nacional (Electroqumica de Sagua) y de carbonato de sodio importado.

Investigador Titular.

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La reaccin que tiene lugar se representa por la ecuacin siguiente:

Al2(SO4)3 + 3Na2CO3 + 3H2O 2Al(OH)3 + 3Na2SO4 + 3CO2

En la reaccin anterior se observa que como subproducto de ella se obtienen cantidades significativas de sulfato de sodio que es necesario eliminar para obtener un producto que cumpla con los requerimientos de la Farmacopea de los EE.UU. Por lo antes expuesto hay que introducir en el proceso tecnolgico una operacin de separacin slido-lquido para eliminar las aguas madre con posterior lavado del slido. En nuestro trabajo se evalan las variantes de separacin siguientes: sedimentacin, filtracin al vaco por lote, filtracin al vaco continuo, filtracin a presin, centrifugacin-filtracin y la centrifugacin-sedimentacin.

MTODOS
La reaccin de obtencin del gel de hidrxido de aluminio se efectu segn la tecnologa desarrollada por los autores del presente trabajo (fig.). Las caractersticas de la suspensin utilizada se resumen a continuacin: Contenido de xido de aluminio: 4 % Contenido de sulfato de sodio: 1316 % Densidad: 1,183 + 0,005 Densidad del slido suspendido: 1,241,25 Densidad del lquido madres: 1,13 1,14 Slido volumtrico: 52,6 % Teniendo en cuenta la necesidad anual de gel de hidrxido de aluminio y el tiempo que se dedicara en la instalacin propuesta para la obtencin de este producto, se pudo calcular que el sistema de separacin slido-lquido deba tener capacidad para separar y lavar 20 000 L diarios de reaccin.

Los mtodos de separacin slido-lquido utilizados siguen los principios descritos en la literatura especializada.2-5 Estos mtodos se describen brevemente a continuacin: Sedimentacin. Se basa en el asentamiento de un slido en dispersin en un medio lquido durante un tiempo determinado. El lquido se decanta y el sedimento se mezcla nuevamente con una cantidad adicional de lquido. La operacin se repite hasta que el contenido del soluto a eliminar, soluble en el lquido, se encuentre dentro de los lmites establecidos. Para la eliminacin del sulfato de sodio presente en la reaccin de obtencin del gel de hidrxido de aluminio, el volumen de cada lote de reaccin se llev al doble con agua potable y se dej sedimentar durante 16 h; posteriormente se elimin por decantacin el sobrenadante hasta alcanzar el volumen inicial de reaccin. Esta operacin se repiti hasta alcanzar el contenido permisible de sulfato en la suspensin. Filtracin. La filtracin es la separacin de partculas suspendidas en un lquido haciendo pasar dicha suspensin a travs de un tabique permeable denominado medio filtrante, el cual es atravesado por el lquido, quedando retenidas las partculas sobre el medio filtrante. Para lograr el paso del lquido se emplea un diferencial de presin entre ambas caras del medio filtrante. La torta formada se puede lavar mediante el empleo de lquido de lavado. Filtracin al vaco por lotes. En este caso para la eliminacin del sulfato de sodio presente en la reaccin de obtencin del gel de hidrxido de aluminio, se filtr la mezcla de reaccin con un nivel de presin reducida constante, realizndose el lavado en estas mismas condiciones y pasando agua continuamente a travs del slido retenido en el filtro al vaco de porcelana, con un dimetro de 30 cm.

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S u lf a to de a l u m in io

A gu a d e si o n iz a d a

C a rb o n a to de p o t as io

A g ua d e si o n iz a d a

D iso l u c i n

D iso l u c i n

F il tra c i n por p la c a c e l ul o sa R e a c c i n

F il tra c i n por p la c a c e l ul o sa

S e p a ra c i n

G el h id r x id o a l u m in o si n la v a r

LM (S O 4 N a 2) A g ua s L avados

L avado

G el h id r x id o a l u m in io
FIG. Diagrama de flujo para la obtencin del gel de hidrxido de aluminio.

Filtracin al vaco continuo. El tipo ms comn de filtro al vaco continuo es el filtro rotatorio, el cual consiste en un tambor horizontal que gira a una velocidad determinada; el tambor se cubre de un medio filtrante adecuado el que se sumerge parcialmente en el lquido para formar una

capa de slidos sobre ste con la aplicacin de vaco. La capa de slido se lava continuamente mientras gira el tambor, la cual se desprende posteriormente con la aplicacin de aire y la ayuda de una cuchilla adecuada, recogindose en un recipiente colector.

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Esta variante fue ensayada en un filtro rotatorio al vaco piloto, Larox VF 05 de 0,5 m2 de superficie filtrante de la firma Larox. Filtracin a presin. Esta variante fue ensayada en un filtro a presin Labox de la firma Larox, de 25 cm2 de superficie. Centrifugacin. Consiste en separar sustancias slidas suspendidas en lquidos, para lo cual se aprovecha la fuerza centrfuga que se produce en todo cuerpo que gira. Esta fuerza opera sobre los componentes de una mezcla y los arroja con gran fuerza en direccin opuesta al centro de revolucin. Como la fuerza centrfuga ser mayor en la sustancia ms densa, sta se dirige al fondo de la centrfuga. Para estudiar esta variante de separacin y lavado, la suspensin de reaccin se introdujo en una centrfuga de filtracin con cesto de 12 cm de dimetro y 4 cm de alto, empleando un telo apropiado y operndola a 450 G. Centrifugacin con rotor de sedimentacin. En esta variante se utiliz una centrfuga de discos y boquillas de la firma Westfalia modelo SKOG-205, con alimentacin de la suspensin que se someti a un factor centrfugo de 5 000 G descargndose el lquido clarificado libre de espuma. Los slidos concentrados se descargaron continuamente a travs de las boquillas. Estos slidos se resuspendieron en agua y se procedi a su separacin con el empleo de la centrfuga. El proceso de resuspensin y centrifugacin se repiti hasta alcanzar el contenido mximo de sulfato en la suspensin.

El tiempo total requerido por lote fue de 200 h. Se obtuvo una suspensin con una concentracin aproximada de 4 % de Al2O3. Filtracin al vaco por lotes. Las variables ptimas de operacin determinadas fueron las siguientes: Dosificacin de la reaccin: 40 L/m2 de tejido filtrante. Diferencia de presin: 590 mmHg (manomtrico). Lavado: se requieren 4 L de agua cruda y 0,5 L de agua desionizada por cada litro de reaccin. Tiempo de descarga total: 30 min. Se obtuvo un gel compresado con una concentracin aproximada del 9 % de Al 2 O3. Filtracin al vaco continuo. Se determin que para las cantidades de suspensin a procesar anualmente, en esta variante se requera: un filtro rotatorio Larox modelo VF 18/9 de 9 m 2, con 2 colectores, uno para el lquido madre y otro para las aguas de lavado, y 4 lneas de lavado con 6 boquillas cada una. Los parmetros de operacin seran: Velocidad de rotacin:1 rpm Tejido filtrante: 71-2510 Capacidad de filtracin: 4-5 L de reaccin/m2/min. Lavado: Se requieren 5 L de agua cruda y 5 L de agua desionizada por cada litro de reaccin. Se obtuvo un gel compresado con una concentracin aproximada del 8 % de Al2O3. Filtracin a presin. Durante la ejecucin de los ensayos se pudo comprobar que este mtodo no era adecuado para el gel de hidrxido de aluminio, pues la capa de slido que se forma

RESULTADOS
Sedimentacin. Se comprob que al emplear esta variante se requera realizar el proceso de lavado 8 veces con agua potable y finalmente 2 veces con agua desionizada.

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sobre el tejido se cuartea, producindose canalizaciones que imposibilitan su lavado. Por ende esta variante fue rechazada. Centrifugacin por filtracin. Para esta variante se determinaron las variables que resultaban crticas en la operacin, y se establecieron los parmetros de operacin siguientes: Dosificacin: 45 L de reaccin/m2 Medio filtrante: tejido 2074 Tiempo de trabajo para cada carga de la centrfuga: 1 h Centrifugaciones por da: 12-14 Lavado (litro/litro de reaccin): 7 L de agua cruda ms 2 L de agua desionizada Se obtuvo un gel compresado con una concentracin aproximada del 8 % de Al2O3.

Centrfuga de sedimentacin. En este caso se estableci que se requeran 4 centrfugas HD-30 de la firma Westfalia, conectadas en serie para lograr una buena separacin y lavado del gel de hidrxido de aluminio, lo cual se comprob al recibir una oferta de esta firma especializada. Se comprob que para el lavado se requieren 3 L de agua desionizada por cada litro de reaccin. Se obtuvo un gel compresado con una concentracin aproximada del 6 % de Al2O3. En la tabla 1 se resumen los requerimientos para las diferentes variantes de separacin y lavado estudiadas. La tabla 2 muestra los gastos monetarios en que se incurriran para realizar 1 d de operacin (20 000 L de reaccin).

TABLA 1. Requerimientos para la operacin de separacin y lavado rea ocupada Cantidad m2 12 31 1 10 4 216 216 42 32 42 Agua cruda m3 160 80 100 140 Agua desionizada m3 Electricidad kWh 40 10 100 40 60 240 560 443 2 800 440

Variante

Equipo requerido

Personal 1 operador A 1 operador B 10 operadores A 3 operadores B 5 operadores B 1 operador A 1 auxiliar

Sedimentacin Tanque 40 m3 Filtracin al vaco Filtro de 2 m2 rea por lotes filtrante Filtro Filtracin al rotatorio vaco continua de 9 m2 Centrfuga Centrifugacin- dimetro -filtracin 1 500 mm Separador Centrifugacin- a boquilla -sedimentacin HD-30

TABLA 2. Gastos monetarios para 1 d de operacin Variante Sedimentacin Filtracin al vaco por lotes Filtracin al vaco continua Centrifugacin-filtracin Centrifugacin-sedimentacin Depreciacin 144,18 67,01 149,29 263,37 162,96 Agua 36,00 60,00 13,00 34,00 20,00 Electricidad 20,38 37,61 33,96 237,72 37,36 Mano de obra 17,92 29,29 97,60 97,60 17,92 Total $ 218,48 $ 275,85 $ 211,91 $ 632,69 $ 238,24

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DISCUSIN
Del anlisis de los resultados expuestos en la tabla 2 se pone de manifiesto que la variante ms econmica para cumplir los requerimientos productivos es el uso de la filtracin al vaco continuo, pues presenta el menor gasto diario ($211,91). La variante

ms costosa sera el uso de la centrfuga de filtracin ($ 632,69). Se concluye que el uso del filtro rotatorio al vaco es el procedimiento ms adecuado para la separacin y lavado del gel de hidrxido de aluminio, por ser sta la variante ms conveniente tanto desde el punto de vista tcnico como econmico.

SUMMARY
Different variants of solid-liquid separation for the obtention of aluminum hydroxide, such as sedimentation, vacuum filtration (by lots and continual), pressure filtration and centrifugation were comparatively analyzed. The advantages and disadvantages of each variant, including a technical and economic analysis, were presented. It was concluded that the use of a vacuum rotary filter meets the established requirements. Subject headigns: ALUMINUM HYDROXIDE/chemistry; DRUG INDUSTRY; DRUG COMPOUNDING/methods.

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

1 . Martin WE. Farmacia prctica de Remington XII. 2 ed. en espaol, La Habana: Edicin Revolucionaria, Instituto Cubano del Libro 1972;t1.762.3. 2 . McCabe WL, Smith JC. Unit operations of engineering. New York: MacGraw-Hill; 1966:324-53. 3 . Perry R, Green D, ed. Perrys chemical engineers handbook 6 ed. New York: McGraw Hill; 1984:57-87. 4 . Rantala P. Cake washing in solid/liquid separation. Proc. Vth World Filtration Congress, Societ Francaise de Filtration, Nice, France, June 1990;1:74-9. 5 . Dream RF. Centrifugation and its application in the biotechnology industry. Pharm Eng 1992; 12(Nov-Dec): 44-52.

Recibido: 8 de diciembre de 1999. Aprobado:14 de enero del 2000. Ing. Jesus Garca Valds. Avenida 313 No. 16408 esquina 164 A, Reparto Lutgardita, municipio Rancho Bayeros, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):93-9

Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos

VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA LA DETERMINACIN DE 3 VITAMINAS HIDROSOLUBLES EN UN SUPLEMENTO VITAMNICO
Iverlis Daz Polanco1 y Ofelia Farias Surez2

RESUMEN
Se presentan los resultados obtenidos en la validacin de un mtodo analtico por cromatografa lquida de alta resolucin, para la determinacin de tiamina mononitrato, piridoxina clorhidrato y nicotinamida en el suplemento nutricional neovitamin II, el cual se dise para separar las vitaminas entre s, con la utilizacin de una columna RP-18 de 25 cm y un detector UV-Visible. Dicho mtodo se emple para el control de la calidad y la estabilidad de este producto. El mtodo fue validado siguiendo una metodologa de trabajo elaborada previamente en un Protocolo de Validacin, donde se analizaron diferentes parmetros como son: linealidad, exactitud, precisin, selectividad, lmites de deteccin y cuantificacin, adecuacin del sistema y estabilidad de las soluciones. Se obtuvieron resultados satisfactorios y se comprob de esta forma la validez del mtodo analtico. Descriptores DeCS: SUPLEMENTOS DIETETICOS/anlisis; TIAMINA/anlisis; PIRIDOXINA/anlisis; NIACINAMIDA/anlisis; CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS; CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION/mtodos.

El neovitamin II es un suplemento multivitamnico esencial como requerimiento nutricional para un crecimiento normal del organismo humano, es administrado fundamentalmente a embarazadas, ancianos y pacientes que presenten estados hipovitamnicos. Est constituido
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por tiamina mononitrato (3,85 mg), nicotinamida (22 mg), piridoxina clorhidrato (2,5 mg), riboflavina (1,84 mg), cido flico (0,325 mg), vitamina A palmitato (32,5 mg) y cianocobalamina (0,072 mg). Una de las grandes dificultades en el desarrollo de tcnicas analticas para

Investigadora Aspirante. Investigadora Agregada.

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complejos vitamnicos es contar con mtodos especficos, principalmente si los mtodos a utilizar se emplearan en estudios de estabilidad. Aparecen por primera vez reportadas en la Farmacopea de los Estados Unidos Edicin 23, tcnicas oficiales para suplementos nutricionales, de manera que se determinan las vitaminas por cromatografa lquida de alta resolucin, simultneamente con el resto de las vitaminas hidrosolubles.2 El objetivo del presente trabajo es demostrar la validez del mtodo analtico desarrollado en el Departamento de Productos Naturales del Centro de Investigaciones y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) para la determinacin de las vitaminas hidrosolubles: tiamina mononitrato, piridoxina clorhidrato y nicotinamida presentes en el neovitamin II. Para ello se seleccionaron una serie de parmetros a determinar, como son: linealidad, exactitud, precisin, selectividad, lmites de deteccin y cuantificacin, adecuacin del sistema y estabilidad de las soluciones.

mononitrato, se transfiri cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL, se aadi 70 mL de agua, se agit hasta completar disolucin y se llev a volumen con el mismo solvente (solucin T). Estndar de piridoxina clorhidrato: se pes con exactitud 25,0 mg de piridoxina clohidrato, se transfiri cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL, se aadi 70 mL de agua, se agit hasta completar disolucin y se llev a volumen con el mismo solvente (solucin P). Estndar de nicotinamida: se pes con exactitud 220,0 mg de nicotinamida, se transfiri cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL, se aadi 70 mL de agua, se agit hasta completar disolucin y se llev a volumen con el mismo solvente (solucin N). Solucin E: se tomaron alcuotas de 5,0 mL de cada una de las soluciones T, P y N, se trasvasaron cuantitativamente a un matraz aforado de 25 mL y se llev a volumen con agua.

MTODOS
Todas las determinaciones se realizaron en un cromatgrafo lquido de alta resolucin equipado con una columna de fase reversa LiChrosorb RP-18, de 25 cm de longitud, un detector UV-Vis a una longitud de onda de 280 nm, un flujo de alrededor de 1 mL/min y un loop de 20 L. Entre los reactivos y soluciones utilizados se encuentran agua purificada, buffer de hidrgeno fosfato de potasio 0,03 mol/L y pH 2,7 la fase mvil buffer- metanol (99-1) y las soluciones de referencia de cada vitamina: Estndar de tiamina mononitrato: se pes con exactitud 38,5 mg de tiamina

Mtodos analticos para la determinacin de los parmetros a estudiar Los parmetros a estudiar se seleccionaron en funcin de las caractersticas y de los objetivos del mtodo analtico utilizado y el rango de concentraciones en que se encuentra cada vitamina en la formulacin. La metodologa aplicada al anlisis de cada parmetro fue descrita por Mestony 5 (Analytical Methods Validation,1991), Loftus Bernard T 3 y Castro CM.4 Linealidad. Se analiz sobre soluciones de referencia a las concentraciones de 50, 80, 100, 120 y 150 % de la cantidad declarada para cada vitamina. El anlisis se realiz por duplicado. De las soluciones de referencia de cada vitamina

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se tomaron alcuotas, se transfirieron cuantitativamente a un matraz aforado y se llev a volumen con agua. Las reas obtenidas para cada concentracin se procesaron segn el mtodo estadstico MICROSTA; se determin el coeficiente de correlacin y se aplicaron las pruebas de linealidad y proporcionalidad. Exactitud. Se prepararon 5 muestras por duplicado a las concentraciones de 50, 80, 100, 120 y 150 % de la cantidad declarada para cada vitamina. Para la preparacin de las muestras se pes con exactitud alrededor de 127,0 mg de polvo de placebo equivalente a una tableta, se transfiri cuantitativamente a un matraz aforado de 50 mL, se aadi 20 mL de agua, se agit durante 10 min y se adicionaron alcuotas de las soluciones T, P y N hasta obtener las concentraciones en estudio. Se llev a volumen con el mismo solvente y se filtr por papel de filtracin lenta, desechando los primeros mililitros del filtrado. Se determin la recuperacin media o el porcentaje de recobro y la desviacin estndar relativa (DER) entre las concentraciones obtenidas para concentracin terica estudiada. Precisin. Este parmetro se determin mediante los ensayos de repetibilidad y reproducibilidad. Para el ensayo de repetibilidad se seleccion un lote industrial, con el cual se procedi de la forma siguiente: se prepararon 6 muestras a una concentracin del 100 % de la cantidad declarada para cada vitamina y se analiz ese da por el mismo analista. En ensayo de reproducibilidad se analiz con el mismo lote utilizado para la repetibilidad y se prepararon 3 muestras a la concentracin del 100 % de la cantidad declarada para cada vitamina, las que se analizaron en 2 d diferentes.

Preparacin de las muestras. Se trituraron no menos de 20 tabletas y se pes con exactitud el equivalente a la masa promedio, se transfiri cuantitativamente a un matraz aforado de 50 mL, se aadi 30 mL de agua, se agit durante 10 min, se llev a volumen con el mismo solvente y se filtr por papel de filtracin lenta, desechando los primeros mililitros del filtrado. En ambos ensayos se determin la DER entre las concentraciones obtenidas en los 2 d de anlisis. Selectividad. El estudio de este parmetro se demostr mediante 3 muestras placebos, realizando comparaciones entre las soluciones de referencia antes y despus de sometidas a un proceso de degradacin. Para esto las soluciones de referencia se analizaron recin preparadas y posteriormente se almacenaron en frascos de cristal mbar a 70 C durante 6 d; al finalizar este tiempo se analizaron nuevamente por triplicado. Las muestras se prepararon como se indica en el parmetro de exactitud sin la adicin de las alcuotas de las soluciones de referencia. Lmites de deteccin y cuantificacin. Se realiz posteriormente a la determinacin del parmetro linealidad, donde se aplic una calibracin lineal del tipo y = bx + a. Se utiliz para determinar dichos parmetros la medicin de 3 soluciones de referencia de las vitaminas en estudio, tomando como patrn la concentracin del 50 % y 2 concentraciones por debajo de sta, 20 y 35 %. El anlisis se realiz por triplicado para cada concentracin. Los resultados obtenidos se evaluaron estadsticamente calculando la media y la DER de las concentraciones; adems se calcul la recta de regresin tomando como Y la respuesta y como X las concentraciones. Se defini la ecuacin y se determin la respuesta a concentracin cero por extrapolacin al origen de la recta

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calculada. El valor de Y ser Ybl. Se determin la desviacin estndar de las respuestas a concentracin cero por extrapolacin al origen de la recta calculada, tomando como Y la DER de las respuestas y como X las concentraciones. El valor de Y ser Sbl. Se calcularon los lmites de deteccin y cuantificacin mediante las frmulas siguientes: Cld = Ybl + 3Sbl b 1 n

donde: t 2 y t1: tiempos de retencin W2 y W1: ancho de las porciones extrapoladas Cv = S/X (100) donde: S: desviacin estndar absoluta X: media Estabilidad de las soluciones. Debido a que las vitaminas se degradan con gran facilidad, se determin este parmetro. Para ello se midieron 3 soluciones de referencia de cada vitamina a las 3, 6 y 9 h de su preparacin, almacenadas en matraces aforados protegidos de la luz. En el anlisis de cada parmetro se calcul la concentracin de las vitaminas, expresada en porcentaje, segn la frmula siguiente: C (%) = Cm/Ct (100) donde: Cm: valor promedio de la concentracin de tiamina mononitrato, nicotinamida y piridoxina clorhidrato, segn corresponda en microgramos por mililitro. Ct: valor promedio de la concentracin terica de tiamina mononitrato, nicotinamida y piridoxina clorhidrato, segn corresponda en microgramos por mililitro.

Clc =

Ybl + 10Sbl 1 b n

donde: Cld: lmite de deteccin (g/mL) Clc: lmite de cuantificacin (g/mL) b: valor de la pendiente de la recta de calibracin n: nmero de muestras Adecuacin del sistema. Este parmetro se analiz con 6 muestras de un lote industrial a la concentracin del 100 % de la cantidad declarada para cada vitamina. La preparacin de las muestras y las soluciones de referencia se realiz como se indica en el parmetro de exactitud. En los cromatogramas obtenidos se determin el factor de cola (T), la resolucin (R) y la precisin de la inyeccin (Cv). Los clculos se realizaron con las frmulas siguientes: T = W.05/2f donde: W . 05: ancho del pico al 5 % de la altura f: distancia de la orilla principal al pico mximo R = 2t2 t1 / W2 + W 1

R E S U LTA D O S
Como resultado del anlisis de la linealidad del mtodo analtico se obtuvieron valores de coeficiente de correlacin r menor o igual a 0,99, intercepto de la recta de regresin a cero y DER menor o igual al 5 %. Los resultados del anlisis del parmetro de exactitud se muestran en la tabla 1.

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TABLA1. Exactitud del mtodo cromatogrfico Concentraciones % 50 80 100 120 150 Tiamina mononitrato % rec. DER 99,0 98,6 98,0 98,5 99,2 0,5 0,5 0,8 0,7 0,9 Piridoxina clorhidrato % rec. DER 99,0 99,3 98,9 98,9 99,0 0,7 1,0 1,3 1,4 1,1 Nicotinamida % rec. DER 99,0 98,9 98,0 98,5 98,6 1,9 1,6 1,2 1,3 1,6

El anlisis de los ensayos de repetibilidad y reproducibilidad se presentan en las tablas 2 y 3 con valores de DER menores que los criterios de aceptacin establecidos (menor o igual que 2,0 % y menor e igual que 3,0 %, respectivamente).
TABLA 2. Precisin del mtodo cromatogrfico. Repetibilidad Vitaminas Tiamina mononitrato (70,0 g/mL) Piridoxina clorhidrato (45,0 g/mL) Nicotinamida (440,0 g/mL) X (%) 98,7 95,7 92,0 DER (%) 1,00 0,80 0,75

En el estudio del parmetro de selectividad se observ que las vitaminas en solucin disminuyen su concentracin cuando son sometidas a un proceso de degradacin trmica. En el caso de la tiamina mononitrato se parte de una concentracin inicial de 103,6 % y se obtiene una concentracin final de 86,0; la piridoxina clohidrato vara su concentracin desde 101,0 hasta 90,5 % y la nicotinamida de 104,0 a 103,0 %. Adems los excipientes de la formulacin no absorben a la misma longitud de onda de los principios activos. Los lmites de deteccin y cuantificacin obtenidos fueron los siguientes: tiamina mononitrato: Cld = 0,0055 g/mL y Clc = 0,0475 g/mL piridoxina clohidrato : Cld = 0,059 g/mL y Clc = 0,1436 g/mL nicotinamida: Cld = 0,926 g/mL y Clc= 2,97 g/mL La tabla 4 detalla los valores obtenidos en cuanto a factores de cola, resolucin y precisin de la inyeccin.

TABLA 3. Precisin del mtodo cromatogrfico. Reproducibilidad Concentraciones (X, %) Das 1er. d 2do. d 93,6 1,13 94,3 1,0 93,0 2,0 92,0 93,0 95,0

Vitaminas Tiamina mononitrato DER Piridoxina clorhidrato DER Nicotinamida DER

TABLA 4. Adecuacin del sistema Vitaminas Tiamina mononitrato Piridoxina clorhidrato Nicotinamida Factor de cola (T) 1,00 1,12 0,95 Precisin de la inyeccin (Cv) 0,24 0,20 0,04 Resolucin (R) Tiamina-nicotinamida 1,97 Nicotinamida-piridoxina 1,64

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Todas las vitaminas se mantienen estables en solucin hasta las 9 h despus de su preparacin, excepto la tiamina mononitrato que ya a las 6 h se encuentra en menos del 90 %.

DISCUSIN
Como resultado del anlisis de la linealidad del mtodo, dicho parmetro cumpli con los criterios de aceptacin establecidos, y hubo una relacin lineal entre las concentraciones de las vitaminas estudiadas y las reas obtenidas para cada una. Como se observa en la tabla 1, se obtuvieron valores de desviacin estndar relativa y porcentaje de recobro (% rec) dentro de los lmites establecidos en el protocolo de validacin (DER menor o igual que 2,0 % y % rec = 97,0 - 103,0 %, y hubo una relacin lineal entre los valores de referencia, por lo que se considera que el mtodo es exacto. En el parmetro de repetibilidad, 6 determinaciones de cada vitamina fueron necesarias para asegurarse que el mtodo es preciso, con valores de desviacin estndar relativa menores que 2,0 %. Segn los resultados obtenidos en la reproducibilidad se puede concluir que el mtodo es reproducible cambiando el da de anlisis, ya que en ambos das se obtuvieron valores de coeficientes de variabilidad menores que 2,0 %. El mtodo cromatogrfico es selectivo y diferencia los principios activos de sus

productos de degradacin, adems los excipientes de la formulacin no interfieren en la determinacin de las vitaminas. El mtodo analtico cumple con el parmetro de lmites de deteccin y cuantificacin, ya que permite detectar y cuantificar concentraciones muy bajas de las 3 vitaminas presentes en el neovitamin II. El sistema cromatogrfico empleado es adecuado para la determinacin de dichas vitaminas hidrosolubles en el neovitamin II, pues las variables analizadas en el parmetro de adecuabilidad cumplieron con los lmites establecidos (T = 0,85-1,15; R>1,5 y Cv menor o igual que 2,0 %), o sea, se obtienen picos finos, bien definidos y con buena resolucin entre ellos. Protegiendo de la luz las soluciones de cada vitamina se logra una adecuada estabilidad de stas, ya que conservan las caractersticas fsico-qumicas y sus concentraciones iniciales no varan considerablemente. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, la tcnica analtica propuesta para el control de la calidad y estudio de estabilidad del neovitamin II, es vlida para obtener resultados satisfactorios en las 3 vitaminas estudiadas; as se demuestra en los parmetros de linealidad, precisin exactitud, lmites de deteccin, cuantificacin y especificidad. Como mtodo cromatogrfico es adecuado y las soluciones son estables de forma que garantizan su integridad durante un largo perodo.

SUMMARY
The results obtained in the validation of an anlytical method by high resolution liquid chromatography for the determination of thiamine mononitrate, pyridoxine hydrochloride and nicotinamide in the Neovitamin dietary supplement are presented. It was designed to separate vitamins among themselves, using a RP-18 column of 25 cm and a UV Visible detector. This method was used for controlling the quality and stability of the product. This method was validated

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according to a working methodology that was previously prepared in a Validation Protocol where paramaters such as lineality, accuracy, precision, selectivity, limits of detection and quantitation, system adequacy and the solution stability were analyzed. The results were satisfactory and the validity of the analytical method was proved. Subject headings: DIETARY SUPPLEMENTS/analysis; THIAMINE/analysis; STABILITY; CHROMATOGRAPHY, HIGH PRESSURE LIQUID/methods.

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

1 . Drug Information for the Health Care Professional USP DI 15 ed. United States Pharmacopeial Convention, Inc. Rockville: Mack Printing; 1995:2802. 2 . United States Pharmacopeia USP 23. United States Pharmacopeial Convention, Inc. Rockville: Mack Printing; 1995:2143-6,2162-8. 3 . Pasteelnick LA: Analtycal Methods Validation. En: Loftus Bernard T, Nash RA, eds Pharmaceutical process validation. New York, Basel: Marcel Dekker; INC,1984:251-66. 4 . Castro CM, Gascn FS, Pujol FM, Sans RM, Pla VL. Validacin de mtodos analticos. Asociacin espaola de Farmacuticos de la Industria (AFEI), Madrid. Comisin de Normas, Buena Fabricacin y Control de la Calidad, 1989:8,38,43-44,57,61.

Recibido: 4 de diciembre de 1999. Aprobado: 21 de enero del 2000. Lic. Iverlis Daz Polanco. Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos. Calle 19 de mayo No.13 esquina a Amzaga, municipio Plaza de la Revolucin, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):100-7

Instituto de Farmacia y Alimentos Universidad de La Habana

ESTABILIDAD DE LOS SUPOSITORIOS DE QUITINA

Yania Surez Prez,1 Ofelia Bilbao Revoredo,2 Hilda Mara Gonzlez San Miguel, 2 Olga M. Nieto Acosta 2 y ngel L. Azoy Carralero3

RESUMEN
Los supositorios de quitina constituyen una nueva opcin en la teraputica anorrectal, cuya estabilidad debe ser evaluada. Se analiz el comportamiento de 3 lotes de supositorios elaborados a escala piloto, almacenados en tiras de aluminio termosellable, a 3 temperaturas diferentes, por un perodo de 2 a. Se realizaron comprobaciones peridicas de las propiedades organolpticas, de los parmetros peso y tiempo de liquefaccin, as como del contenido de quitina, con la combinacin de una tcnica gravimtrica y la espectroscopia infrarroja (IR). Se investig la estabilidad desde el punto de vista microbiolgico mediante conteo diferencial. Los resultados fueron satisfactorios para cada parmetro evaluado, ya que se encontraron dentro de los lmites, aun transcurridos 2 a de elaborado el producto, para cada una de las temperaturas de almacenamiento ensayadas. Descriptores DeCS: QUITINA /anlisis; SUPOSITORIOS; ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS; ALMACENAJE DE MEDICAMENTOS.

En los ltimos aos se ha incrementado notablemente el estudio de los biomateriales, destacndose la utilizacin de sustancias polimricas naturales y sintticas en diversas ramas de la ciencia y la tcnica. La quitina es un polmero natural de potente efecto como agente acelerador de la cicatrizacin,1 para el cual se reportan

resultados satisfactorios en el tratamiento de diversas afecciones con prdida de la cobertura cutnea.2-4 En el presente trabajo se trata por primera vez la introduccin de la quitina cubana en la forma farmacutica supositorio, destinada al tratamiento de afecciones anorrectales; por lo que hemos

1 2 3

Master en Tecnologa y Control de Medicamentos. Doctor en Ciencias Farmacuticas. Licenciado en Matemticas.

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dirigido nuestra investigacin hacia la comprobacin de la posible interaccin quitina-excipiente. En la actualidad, las exigencias a una nueva forma farmacutica incluyen los estudios de estabilidad como requisito indispensable para el registro y venta de medicamentos.5 Los supositorios deben ser qumica, fsica y microbiolgicamente estables al menos durante 2 aos a temperatura de refrigeracin, segn recomienda la mayora de los autores.6,7 La quitina en forma de polvo resulta extremadamente estable. Los estudios realizados por hidrlisis cida del polmero reportados en la literatura, proponen un tiempo de vencimiento superior a los 5 a, y plantean como productos de la hidrlisis total: quitosana, N acetilglucosamina, D glucosamina y cido actico (Nieto OM. Quitina. Su estudio y utilizacin como frmaco acelerador de la cicatrizacin. Tesis presentada en opcin al ttulo de Doctor en Ciencias Farmacuticas. Facultad de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana.1993).Considerando las propiedades fsico-qumicas de la quitina, especialmente su limitada solubilidad y reactividad, 8 se dificulta su anlisis cuantitativo. Los mtodos reportados en la bibliografa carecen de valor desde el punto de vista prctico para el control qumico de este frmaco y su seguimiento, una vez introducido en una forma dosificada por constituir tcnicas indirectas basadas en la estimacin de alguno de los productos de hidrlisis.9-11 La gravimetra directa ha sido propuesta como una adecuada opcin para realizar el control de calidad del ungento de quitina al 5 % (Bilbao O. Evaluacin de quitina en preparaciones farmacuticas. Tesis presentada en opcin al ttulo de Doctor en Ciencias Farmacuticas. Facultad de Farmacia y Alimentos. Universidad de

La Habana. 1993). Sin embargo, esta tcnica carece de la especificidad y sensibilidad exigida para su aplicacin en estudios de estabilidad, por lo cual se complementa con la espectroscopia IR, segn la metodologa propuesta para el estudio de estabilidad de los supositorios de quitina 200 mg (Surez Y. Supositorios de quitina, nueva opcin en la teraputica rectal. Tesis presentada en opcin al ttulo de Master en Tecnologa y Control de Medicamentos. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana.1996).

MTODOS
Equipos Balanza analtica Mettler ER-60A. Bao termostatado MLW. Estufa MLW. Espectrofotmetro IR analtico ATI Mattson Modelo Genesis Series FTIR.

Reactivos Quitina materia prima de calidad farmacutica suministrada por la Empresa Mario Muoz, lote: 940518. Etanol 96 % pa. Hidrxido de potasio pa. Bromuro de potasio, calidad espectroscpica. Condiciones del estudio de estabilidad Se almacenaron supositorios de 3 lotes (5001, 5002, 5003) elaborados a escala piloto a temperatura ambiente, en local climatizado (20-25 C) y en refrigeracin (8-15 C), envasados en tiras de aluminio termosellable por 7 supositorios. El estudio se realiz durante 2 aos, a partir de la elaboracin. Se evaluaron peridicamente, a

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los 6, 12 y 24 meses, adems a tiempo cero (slo para ambiente climatizado), los parmetros siguientes: olor, color, condicin de la superficie, textura y forma. Estabilidad tecnolgica Peso: se pesaron individualmente 10 supositorios en balanza analtica y se determin la media (X) y la desviacin estndar (DE). Tiempo de liquefaccin: se realiz el ensayo por triplicado en el equipo Erweka acoplado al bao termostatado que se ajust a 37 0,5 C. Se determin X y DE. Estabilidad qumica Determinacin del contenido de quitina por gravimetra directa: se aplic la misma tcnica gravimtrica directa utilizada para el control de calidad (Surez Y. Op.cit). Se separ mecnicamente la quitina del excipiente previamente saponificado, a continuacin se lav el residuo slido con solucin hidroalcohlica y se sec hasta obtener peso constante a 105 0,5 C en la estufa. El contenido del frmaco se estim por diferencia de peso. Expectroscopia IR: se determin el espectro IR al residuo slido seco que se obtuvo por gravimetra, se dispers ste en fase slida de bromuro de potasio. Estos espectros se compararon a lo largo del estudio entre s. Estabilidad microbiolgica Conteo microbiolgico y diferencial: se procedi segn la NC-26:121 de 198512

para medicamentos no estriles, que estableci no ms de 100 microorganismos por gramo de supositorio y ausencia total de microorganismos patgenos. Los anlisis se realizaron a los supositorios de los 3 lotes almacenados a temperatura ambiente, en el Departamento de Microbiologa del Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos. Procesamiento estadstico Se utiliz el paquete estadstico Statistica para la evaluacin del comportamiento de las variables peso, tiempo de liquefaccin y contenido de quitina; considerando sus interacciones con el lote, la temperatura de almacenamiento y el tiempo, respectivamente. Para las variables continuas: peso y contenido de quitina se aplic anlisis confirmatorio para detectar diferencias estadsticas de p < < 0,05 mediante pruebas de normalidad y homogeneidad de varianzas. Para el tiempo de liquefaccin que result ser una variable discreta, se seleccionaron las pruebas de Kruskal-Wallis para el factor temperatura y la prueba de Friedman para el efecto del tiempo de almacenamiento.

RESULTADOS
La tabla 1 muestra los valores promedio obtenidos en la evaluacin del peso, tiempo de liquefaccin y contenido de principio activo cuantificado por gravimetra para cada lote y temperatura de almacenamiento estudiada (tabla 1).

102

TABLA 1. Valores promedio de la evaluacin del peso, del tiempo de liquefaccin y del contenido del principio activo para supositorios de quitina de los 3 lotes Lote 5002 Tiempo de liquefaccin (min) Lote 5003 Tiempo de liquefaccin (min) Lote 5004 Tiempo de liquefaccin (min)

Tiempo (mes)

Peso (g)

Quitina (%)

Peso (g)

Quitina (%)

Peso (g)

Quitina (%)

Ambiente climatizado 0 6 12 24 2,11 2,08 2,08 2,10 10,0 10,0 10,0 13,0 96,76 96,29 96,20 96,53 2,05 2,06 2,06 2,05 10,6 10,6 11,0 13,3 96,69 96,17 96,10 95,29 2,06 2,07 2,07 2,06 10,6 11,0 11,0 13,0 94,46 94,26 94,20 95,62

Temperatura ambiente 6 12 24 2,06 2,10 2,10 10,0 10,0 11,06 96,29 96,05 96,32 2,06 2,06 2,06 10,6 11,0 11,6 96,40 96,32 96,45 2,06 2,06 2,06 9,3 9,6 11,3 94,40 94,36 96,18

Temperatura de refrigeracin 6 12 24 2,11 2,10 2,10 11,0 11,3 14,0 96,33 96,30 96,63 2,06 2,06 2,06 11,6 11,6 13,3 96,58 96,20 96,36 2,07 2,06 2,06 11,0 11,0 13,3 95,15 95,25 96,44

Para el peso de los supositorios se detectaron por la prueba de Duncan diferencias significativas (p < 0,05) entre los 3 lotes. Sin embargo, el peso dentro de cada lote manifest el mismo comportamiento en el tiempo y tampoco vari apreciablemente con la temperatura de almacenamiento, por lo que este parmetro result estable en las diferentes condiciones ensayadas durante los 24 meses de estudio. El tiempo de liquefaccin mostr para cada temperatura un comportamiento similar entre lotes, manifestando cierta tendencia al aumento. El anlisis de varianza realizado por las pruebas Kruskal-Wallis, dio que las diferencias para este parmetro entre las temperaturas de almacenamiento fueron significativas. De igual forma, las diferencias resultaron estadsticamente significativas para las prueba Friedman con respecto al factor tiempo de almacenamiento (fig. 1).

F (2 ,3 6 ) = 6 6 ,6 4 ; p < ,0 0 0 0 13 T ie m p o d e l iq u e fa c c i n 1 2 ,5 12 11 ,5 11 1 0 ,5 10 6 12 M e se s 24

FIG.1. Efecto del tiempo de almacenamiento en el tiempo de liquefaccin.

Sin embargo, segn estos resultados el producto puede permanecer 24 meses en cualquiera de las temperaturas analizadas para su almacenamiento, independientemente del efecto causado sobre el tiempo de liquefaccin. Se deben establecer 2 a como lmite para el vencimiento, en aras de ofrecer un mayor margen de seguridad con respecto a la liquefaccin, aunque otros autores refieren 30 min como lmite.

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En relacin con el contenido de quitina, mediante el anlisis confirmatorio de los datos, se comprob que el nico factor del diseo que provoc diferencias significativas (p < 0,05) fue el lote, al conocer por la prueba de Duncan que las diferencias fueron del lote 5004 con respecto al resto (fig. 2). Adems se verific que no existieron diferencias significativas para cada lote en el tiempo (fig. 3).
F (2 ,2 4 ) = 8 ,1 8 ; p < ,0 0 2 0 99 Va ri a bl e : p o r c i e n to d e q u i tin a 98 97 96 95 94 93 92 1 2 L o te 3

F (2 ,4 8 ) = 1 ,5 3 ; p < ,2 2 7 3 99 98 P o r c ie n t o de q u iti n a 97 96 95 94 93 92 6 12 M e se s 24

FIG.3. Efecto del tiempo de almacenamiento en el contenido de quitina.

FIG.2. Efecto del lote en el contenido de quitina.

Estos resultados fueron corroborados con el anlisis cualitativo por espectrofotometra IR de los residuos procesados por gravimetra. Los espectros de los 3 lotes almacenados a temperatura ambiente transcurridos 2 a desde el momento de su produccin, coincidieron plenamente en cuanto a localizacin e intensidad de las bandas caractersticas de los grupos funcionales (fig. 4).

L o te 5 00 2 % t r a n s m i t t a n c e 4 00 0

L o te 5 00 3

L o te 5 00 4

3 500

2 00 0 2 500 W a ln e n um b e rs

1 50 0

1 000

FIG.4. Espectros IR de los lotes 5002, 5003 y 5004 almacenados a temperatura ambiente 24 meses.

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TABLA 2. Evaluacin microbiolgica de los 3 lotes almacenados a temperatura ambiente Ensayo Bacterias Enterobacterias Tiempo (mes) 6 12 24 6 12 24 6 12 24 6 12 24 6 12 24 Lote 5002 30 x g 30 x g 30 x g Lote 5003 30 x g 30 x g 80 x g Lote 5004 30 x g 30 x g 30 x g

< 10 x g < 10 x g < 10 x g Bacilo GP Bacilo GP Bacilo GP Cumple Cumple Cumple

< 10 x g < 10 x g < 10 x g Bacilo GP Bacilo GP Bacilo GP Cumple Cumple Cumple

< 10 x g < 10 x g < 10 x g Bacilo GP Bacilo GP Bacilo GP Cumple Cumple Cumple

Hongos Microorganismo aislado Resultados

En la tabla 2 se presenta el conteo microbiolgico aplicado a los 3 lotes almacenados a temperatura ambiente, llevados a cabo a los 6, 12 y 24 meses. Se demostr que tambin desde el punto de vista microbiolgico el producto fue estable (tabla 2).

DISCUSIN
Los supositorios de quitina 200 mg fueron estables desde el punto de vista fisico-mecnico. No se percibieron olores desagradables, cambios de coloracin ni prdida de la consistencia, incluso en aquellos supositorios almacenados a temperatura ambiente. No se manifestaron en ningn caso marcadas diferencias para los resultados entre lotes respecto al peso, lo cual fue indicativo de adecuada reproducibilidad durante el proceso de produccin. El retardo observado en general para el tiempo de liquefaccin fue mayor a medida que disminuy la temperatura. Para los supositorios colocados a temperatura ambiente, al cabo del los 2 a, el tiempo de

liquefaccin oscil entre 11 y 12 min, valores inferiores al lmite estipulado para las bases oleaginosas de 15 min. A medida que disminuy la temperatura, se produjo una tendencia al endurecimiento de los supositorios, y result mayor el tiempo requerido para que ocurriera la liquefaccin de stos. La temperatura de refrigeracin caus un endurecimiento tal, que al pasar 2 a los tiempos promedio se encontraron entre 13,5 y 14 min, valores muy prximos a los 15 min planteados como lmite por algunos autores. Los supositorios almacenados en ambiente climatizado, presentaron tiempos de liquefaccin intermedio, como era de esperar. La menor cantidad de frmaco en el lote 5004 pudo ser atribuida a la pesada durante la elaboracin. Esta disminucin no afecta significativamente la calidad del producto, pues no afect el peso ni la liquefaccin, de modo que careci de inters. De manera que el contenido de quitina oscil ligeramente dentro del rango correcto de dosificacin. Es bien conocido que la gravimetra carece de la especificidad requerida para su aplicacin en estudios de estabilidad, pero al determinar los espectros IR a los residuos

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insolubles, pudimos descartar la posibilidad de degradacin qumica por comparacin de los resultados de cada muestreo en el tiempo. La estabilidad de la quitina en el tiempo independientemente de la temperatura de almacenamiento, constituy un resultado valioso y a la vez esperado, teniendo en cuenta los estudios de estabilidad realizados por Nieto en 1993 al polvo de quitina y la escasa posibilidad de interaccin qumica quitina-excipiente. Con la combinacin de la gravimetra directa con la espectroscopia IR, garantizamos que los valores obtenidos en la cuantificacin fueron debidos

nicamente al frmaco inalterado presente en los supositorios. La estabilidad qumica de esta nueva formulacin tambin qued confirmada. A pesar de las diferencias observadas para el contenido de principio activo entre lotes, todos los resultados se encontraron dentro del rango aceptable de 90 a 110 %. Las tiras de aluminio termosellable que fueron utilizadas como envase, ofrecieron adecuada proteccin al supositorio. Los almacenados a temperatura ambiente cumplieron las exigencias para medicamentos no estriles. Por tal motivo pudiera considerarse adecuada esta temperatura para la conservacin de este nuevo producto.

SUMMARY
Chitin suppositories are a new option in anorectal threapeutics, whose stability should be evaluated. The behaviour of 3 lots of suppositories made at a pilot scale and stored at 3 different temperatures by a period of 2 years was analyzed. Periodical checkings of the organoleptic properties, of the weight and liquefaction time parameters, as well as of the content of chitin were carried out by combining a gravimetric technique and infrared spectroscopy . The stability was investigated from the microbiological point of view by a differential count. The results were statisfactory for each evaluated parameter, since they were still within the limits for each of the assayed storage temperatures 2 years later. Subject headings: CHITIN/analysis; SUPPOSITORIES; DRUG STABILITY; DRUG STORAGE.

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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Recibido: 21 de enero del 2000. Aprobado: 24 de febrero del 2000. M. Yania Surez Prez. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Ave 23 No. 21425 entre 214 y 222, La Coronela, municipio La Lisa, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):108-12

Empresa de Productos Biolgicos Carlos J. Finlay

INMOVILIZACIN COVALENTE DE GLUCOSA OXIDASA Y PEROXIDASA

Yuria Bilbao Abraham,1 Lilliam Valds Diez2 y Yasmn T. Blanco Lpez3

RESUMEN
Las enzimas por su funcin cataltica tienen amplia aplicacin en infinidad de procesos tecnolgicos y en los ltimos 15 a han marcado avances significativos en la industria. Dentro de la Industria Farmacutica y Biolgica, la dedicada a los medios diagnsticos ha recibido tambin el impacto de la introduccin de este tipo de productos, soportando en la actualidad tecnologas tan importantes como el inmunoensayo enzimtico, el diagnstico en qumica clnica y la qumica seca, donde las tcnicas de inmovilizacin alcanzan un desarrollo cada vez mayor por el incremento de la estabilidad que se logra con estos sistemas. Se presentan ensayos de inmovilizacin covalente de las enzimas glucosa oxidasa y peroxidasa sobre papel de filtro Whatman No. 2. Fueron ensayadas 2 variantes: la inmovilizacin covalente de un polmero soluble de las enzimas y la inmovilizacin covalente de una solucin de las enzimas libres. Los reultados del proceso se evaluaron frente a soluciones de referencia de glucosa en concentraciones entre 2,0 y 55,0 mmol/L. Las mejores respuestas se encontraron con el ms bajo porcentaje de inmovilizacin en el caso del enlazamiento del polmero, y para la solucin de las enzimas libres correspondi al ms alto grado de inmovilizacin logrado. Descriptores DeCS: ENZIMAS INMOVILIZADAS/ metabolismo; GLUCOSA OXIDASA/ metabolismo; PEROXIDASAS/ metabolismo.

En los ltimos aos, el campo de los medios diagnsticos se ha visto cada vez ms impactado por los avances biotecnolgicos; crendose diversos sistemas en los que intervienen las enzimas como analitos o reactivos.

Cuando estas enzimas tienen la funcin de reactivos, pueden aparecer en numerosas formas y se emplean procesos tecnolgicos diversos en la preparacin de stas. En la bioqumica clnica, las enzimas inmovilizadas han alcanzado un desarrollo

1 2 3

Ingeniera Qumica. Investigadora Agregada. Master en Ciencias en Bioqumica de las Protenas. Investigadora Titular. Licenciada en Bioqumica. Centro Nacional de Ensayos Clnicos.

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considerable por el incremento de la estabilidad que se logra con estos sistemas y se han aplicado en diversos mtodos de diagnstico, como los biosensores1 y la inmunocromatografa. En qumica seca ya aparecen introducidas las tiras reactivas para la cuantificacin de importantes parmetros en la consulta del mdico y su extensin al autocontrol de los propios pacientes. La determinacin de los niveles de glucosa tanto en sangre como en orina, resulta de gran inters para el diagnstico, control y seguimiento de los pacientes diabticos. La introduccin de las tiras reactivas para este diagnstico ha tenido un gran impacto por los beneficios que se logran en el manejo de esta afeccin. Se encuentran numerosas tecnologas para la elaboracin de este diagnosticador; las enzimas GOD y POD aparecen inmovilizadas por absorcin o polimerizadas, y se emplean diversos cromgenos y agentes estabilizantes. Estos sistemas han sido desarrollados para realizar determinaciones tanto cualitativas como cuantitativas en sangre y en orina. 2,3 Aparecen tambin diversas metodologas para la inmovilizacin de la GOD, como las que emplean albmina bovina y glutaraldehdo en el entrecruzamiento de la enzima con el soporte4,5 y las que la enzima es enlazada covalentemente a membranas de diferentes naturalezas.6 Nuestra labor ha estado encaminada a lograr la inmovilizacin covalente de las enzimas glucosa oxidasa y peroxidasa sobre papel de celulosa, con el objetivo de obtener una tecnologa que permita su aplicacin en la produccin de diagnosticadores.

filtro Whatman No. 2 previamente activado con peryodato de sodio. Se ensayaron concentraciones de 0,05; 0,10; 0,15 y 0,20 mol/L del agente activador (NaIO4). El proceso se realiz durante 1 h en la oscuridad y con agitacin. Se emplearon 10 mL de las soluciones activadoras para un rea de papel de 7 7 cm. Se realizaron 6 lavados con agua destilada al soporte, en los que se emplearon igual volumen que el de la solucin activadora. Se evalu la concentracin de peryodato de sodio en la solucin activadora residual y en el agua de los lavados. El grado de oxidacin del papel se calcul segn la expresin siguiente: GO = (mg NaIO 4 inicial-mg NaIO 4 residual + lavados) /rea de soporte La concentracin de peryodato de sodio se determin con yoduro de potasio en presencia de bicarbonato de sodio.7 Se realizaron 2 ensayos de inmovilizacin: la inmovilizacin covalente de un polmero soluble de glucosa oxidasa y peroxidasa obtenido con la utilizacin de glutaraldehdo como agente bifuncional y albmina bovina como protena protectora,3 y la inmovilizacin covalente de las enzimas libres en buffer borato 0,10 mol/L y albmina al 1 %. En los 2 ensayos la inmovilizacin se realiz durante 16 h a 4 C, con agitacin y 10 mL de la solucin de inmovilizacin. Se aadi una cantidad de borohidruro de sodio igual a los milgramos totales de protenas empleados en cada proceso y se colocaron en bao de hielo durante 30 min. Por ltimo se realizaron 3 lavados con 10 mL de buffer citrato 0,4 mol/L, pH 5,6 a cada soporte. Se determin la concentracin de protenas en las soluciones de inmo-

MTODOS
La inmovilizacin de las enzimas por enlace covalente se realiz sobre papel de

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vilizacin iniciales, las soluciones residuales y el agua de los lavados mediante la lectura de absorbancia a 280 nm; se utiliz como coeficiente de extincin la unidad, por tratarse de una mezcla de protenas. El grado de inmovilizacin en cada soporte se calcul segn las expresiones siguientes: mg protenas = mg protena inicial mg protena (residual + lavados) inmovilizadas % Inmovilizacin = (mg protena inmovilizada / mg protena inicial) 100. Los soportes se secaron a 40 C durante 1 h y fueron embebidos en una solucin indicadora con o-tolidina para poder evaluar la eficiencia del proceso frente a soluciones de referencia de glucosa de 2,7; 5,87; 16,85 y 55 mmol/L. Se emple un espectrofotmetro Pye Unicam 8740 y los valores de pH fueron
TABLA 1. Inmovilizacin covalente del polmero de GOD y POD Experimento 1 Porcentaje de GO inmovilizacin 2,4 2,6 2,7 4,9 24,1 34,6 41,0 36,1

medidos en un analizador de iones Corning modelo 255. Se utiliz la GOD de Aspergillus niger de actividad especfica mayor que 90 U/mg y POD de rbano picante producida por la firma BDH de RZ = 3 y actividad especfica mayor que 80 U/mg. Todos los ensayos se realizaron por triplicado.

R E S U LTA D O S
La tabla 1 presenta los valores del grado de oxidacin logrado para cada concentracin de peryodato de sodio utilizada y el correspondiente porcentaje de inmovilizacin en el enlazamiento covalente del polmero de GOD y POD. En la tabla 2 se muestra similar informacin para la inmovilizacin de las enzimas libres. En los 2 casos se relaciona tambin la respuesta obtenida frente a soluciones de referencia de glucosa.

Conc. NaIO4 0,05 mmol/L 0,10 mmol/L 0,15 mmol/L 0,20 mmol/L

Experimento 2 Porcentaje de GO inmovilizacin 2,7 2,3 2,8 5,2 24,1 36,9 39,1 38,8

Experimento 3 Porcentaje de GO inmovilizacin 2,2 2,1 3,0 5,0 26,4 33,0 38,5 35,0

Respuesta Muy buena Buena Mala Mala

Respuesta obtenida: Muy buena: cambio cromtico inmediato y diferenciable al minuto de reaccin. Buena: el cambio cromtico comienza a los 15 s, diferenciable al minuto de reaccin. Dbil intensidad del cambio. Mala: respuesta muy lenta y no uniforme. TABLA 2. Inmovilizacin covalente de las enzimas libres Experimento 1 Porcentaje de GO inmovilizacin 2,4 2,6 2,7 4,9 33,7 34,1 36,9 39,8 Experimento 2 Porcentaje de GO inmovilizacin 2,7 2,3 2,8 5,2 40,3 37,4 38,7 41,0 Experimento 3 Porcentaje de GO inmovilizacin 2,2 2,1 3,0 5,0 31,0 36,3 33,5 43,2

Conc. NaIO4 0,05 mmol/L 0,10 mmol/L 0,15 mmol/L 0,20 mmol/L

Respuesta Mala Mala Regular Muy buena

Respuesta obtenida: Muy buena: cambio cromtico inmediato. Al minuto de reaccin se diferencian las concentraciones. Regular: cambio cromtico a partir de los 30 s para las concentraciones 2,70; 5,87 y 16,85 mmol/L, e inmediato para 55,0 mmol/L. Buena diferenciacin de concentraciones a los 2 min de reaccin. Mala: el cambio cromtico comienza a los 40 s, respuesta lenta.

110

DISCUSIN
Uno de los aspectos importantes para lograr una inmovilizacin covalente exitosa es la activacin del soporte; en nuestro caso la oxidacin de los grupos hidroxilo del papel se logr con peryodato de sodio. En el enlazamiento del polmero, para las 3 primeras concentraciones de peryodato de sodio (0,05; 0,10 y 0,15 mol/L), los grados de oxidacin obtenidos fueron similares: 2,4; 2,3 y 2,8 mg/cm2, pero los porcentajes de inmovilizacin aumentaron proporcionalmente a la concentracin del agente activador (25; 34,8 y 39,5 %). Al activar el papel con peryodato de sodio 0,20 mol/L se obtuvo un grado de oxidacin significativamente mayor (5,0 mg/cm2) y el porcentaje de inmovilizacin fue de 26,6. La disminucin de ste se debe a la aparicin de un impedimento estrico provocado por la presencia de mayor cantidad de polmero en el soporte, en correspondencia con el mayor nmero de grupos activados para el enlace del polmero a la matriz. La mejor respuesta se logr con el porcentaje de inmovilizacin ms bajo; el cambio cromtico comenz inmediatamente, intensificndose al transcurrir el tiempo y al minuto de reaccin se obtuvo un cambio perfectamente diferenciable entre las diferentes concentraciones de glucosa. En la medida que aument el porcentaje de inmovilizacin, la reaccin transcurri ms lentamente, la aparicin del cambio de color se retard y con 39,5 % de inmovilizacin se obtuvo solamente un cambio muy ligero con la solucin de 55 mmol/L de glucosa. La respuesta obtenida se corresponde con los resultados del grado de oxidacin y del porcentaje de inmovilizacin, ya que

en la medida que stos aumentan, un mayor nmero de grupos en las enzimas estn comprometidos en el enlace, lo que limita la actividad de stas. Con respecto a la inmovilizacin de las enzimas libres sucedi exactamente lo contrario. La mejor respuesta se obtuvo en el papel activado con la solucin de peryodato de sodio 0,20 mol/L, con el 41,3 % de inmovilizacin. En esta experiencia las enzimas fueron disueltas en el buffer sin existir una inmovilizacin previa, por lo que menos grupos estn comprometidos en el enlace, lo que hizo la reaccin ms rpida y el cambio cromtico mucho ms claro para las diferentes concentraciones de glucosa. En los soportes activados con 0,05 y 0,10 mol/L de peryodato de sodio, la velocidad de cambio fue lenta, no se observ una coloracin uniforme en toda el rea de prueba y no fue posible diferenciar concentraciones de glucosa. Al aumentar el grado de oxidacin del papel los porcentajes de inmovilizacin fueron mayores, aument tambin la velocidad de la reaccin y la intensidad de la coloracin para las diferentes concentraciones de glucosa. En el papel activado con peryodato de sodio 0,20 mol/L (41,3 % de inmovilizacin) se observ el cambio cromtico inmediatamente y la intensidad de color permiti una clara diferenciacin de las concentraciones de glucosa ensayadas. Lgico resulta que la mejor respuesta corresponda al mayor grado de oxidacin, pues es precisamente donde existen mayor cantidad de grupos disponibles para el enlace enzima soporte. En todos los casos, los porcentajes de inmovilizacin obtenidos fueron bajos, lo cual es caracterstico de la inmovilizacin covalente.

111

SUMMARY
Due to their catalytic function, enzimes have a wide application in a considerable number of technological processes and during the last l5 years there have been significant advances in industry. Within the Pharmaceutical and Biological Industry, that one devoted to diagnostic tools have also received the impact of the introduction of this type of products, supporting at present technologies as important as the enzime immunoassay, the diagnosis in clinical chemistry and dry chemistry, where the immobilization techniques attain an increasingly higher development as a result of the increase of stability achieved with these systems. Covalent immbolization assays of glucose oxidase and peroxidase of Whatman No. 2 filter paper are presented. 2 variants were assayed: the covalent immobilization of a soluble polymer of enzymes and the covalent immobilizaton of a solution of free enzymes. The results of the process were evaluated against reference glucose solutions in concentrations between 2,0 and 55,0 mmol/L. The best responses were obtained with the lowest immobilization percent in the case of the polymer binding, whereas the highest degree of immobilization was obtained with the solution of free enzimes. Subject headings: ENZYMES, IMMBOLIZED/metabolism; GLUCOSE OXIDASE/metabolism; PEROXIDASES/metabolism.

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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Recibido: 2 de noviembre de 1999. Aprobado: 8 de diciembre de 1999. Ing. Yuria Bilbao Abraham. Empresa de Productos Biolgicos Carlos J. Finlay. Infanta No. 1162, municipio Centro Habana, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):113-9

Empresa de Productos Biolgicos Carlos J. Finlay

SISTEMA DE INSPECCIN DE LA PLANTA DE REACTIVOS CLNICOS

Nancy Oa Aldama,1 Idania Hernndez Oramas,2 Beatriz Portuondo Campbell3 y Miriam Daz de Armas4

RESUMEN
Una de las premisas fundamentales del control de la calidad es detectar las deficiencias en la elaboracin de los productos durante todo el proceso productivo y de esta forma analizar las causas que originan las no conformidades y eliminarlas. Cada etapa del proceso de fabricacin debe estar controlada, de ah la necesidad de un Sistema de Inspeccin que permita incrementar la probabilidad de que el producto terminado cumpla con todas sus especificaciones de calidad y diseo. El presente trabajo tuvo como objetivos detectar los principales problemas que afectan la calidad de los reactivos elaborados en la Planta de Reactivos Clnicos, disear e implantar el Sistema de Inspeccin de sta describiendo los puntos de control, la forma de realizar las inspecciones en los diferentes puntos, la frecuencia y los aspectos a controlar y adems analizar los resultados obtenidos una vez implantado el sistema. Tambin se aplic un Programa de Mejoramiento Continuo con el inters de hacer ms eficiente el sistema implantado. Se emplearon diferentes tcnicas, como: mtodo de expertos, diagrama Pareto, diagrama causa-efecto, entre otros, para determinar los problemas fundamentales y las causas que lo originan. Con el diseo e implantacin del sistema se logr disminuir significativamente los defectos del producto terminado, adems de perfeccionar la aplicacin de ste. Descriptores DeCS: CONTROL DE CALIDAD; INDICADORES Y REACTIVOS; INDUSTRIA FARMACEUTICA.

El Sistema de Inspeccin de la calidad basado en los requerimientos de las Normas ISO-9000 tiene como fundamento garantizar la obtencin de productos confiables. ste
1 2 3 4

debe abarcar todas las etapas del proceso productivo, por lo que va encaminado a minimizar los desperdicios, reprocesos, devoluciones y quejas; haciendo las cosas

Ingeniera Industrial. Aspirante a Investigadora. Licenciada en Farmacia. Aspirante a Investigadora. Licenciada en Farmacia. Master en Ciencias. Licenciada en Farmacia. Investigadora Auxiliar.

113

bien, previendo los defectos y cumpliendo con los requisitos de los clientes dentro de un marco de productividad, costo y tiempo que garantice las actividades de la Empresa para permitir su crecimiento a largo plazo.1 En la Empresa desde 1992 se est trabajando en la implantacin de un Sistema de Calidad segn el modelo ISO-9002 en la Planta de Reactivos Clnicos, por lo que es conveniente el diseo de un sistema a partir del cual se definan todas las variables que brinden la informacin necesaria para poder tomar las acciones correctivas y aplicar los proyectos de mejoras. El objetivo de este trabajo fue realizar el diseo e implantacin del Sistema de Inspeccin en la Planta de Reactivos Clnicos.

Una vez identificados los problemas, se construy un diagrama Pareto con el propsito de conocer los que incidan significativamente, teniendo en cuenta tambin la informacin reportada de las inspecciones realizadas en 1992, 1993 y 1994. Posteriormente se determinaron los puntos a controlar durante el proceso productivo.

Diseo e implantacin del Sistema de Inspeccin Se definieron para cada uno de los puntos de control las variables siguientes: caractersticas de calidad a medir; forma, tipo y frecuencia de inspeccin; plan de muestreo; responsables; mtodos de medicin y ensayo; mtodo estadstico para el procesamiento de los datos; registro de las observaciones; procedimientos normalizados de operacin (PNO) e informes mensuales y trimestrales.3 El proceso de implantacin se realiz paulatinamente segn los niveles de complejidad y especificidad de los procesos.

MTODOS
Para desarrollar y cumplir los objetivos propuestos se defini la metodologa de trabajo siguiente: diagnstico de la situacin actual, diseo e implantacin del Sistema de Inspeccin y un proyecto de mejoramiento continuo.

Diagnstico de la situacin actual Proyecto de mejoramiento continuo Como primer paso se reunieron a 10 expertos entre los que se encontraban inspectores, especialistas de produccin y calidad; con los criterios aportados por ellos se determinaron los problemas que afectaban la calidad de los reactivos con ms frecuencia, para esto se aplic la Tormenta de ideas y el mtodo estadstico: coeficiente Kendall que permiti comprobar la existencia o no de acuerdo entre los expertos.2 Con el objetivo de comparar la presencia de defectos en el producto terminado listo para ser comercializado (cierres incorrectos, etiquetas defectuosas y contenido mnimo inadecuado), se procesaron los reportes de las inspecciones realizadas a 500 reactivos en 1996 y 560 en 1997, lo cual sirvi de base para la aplicacin de un proyecto de mejoramiento continuo al Sistema de Inspeccin.4

114

El proyecto de mejoramiento se realiz teniendo en cuenta que los esfuerzos de mejoramiento de la calidad siempre se debern dirigir hacia la bsqueda constante de oportunidades de mejoras, en vez de esperar que un problema revele oportunidades.5

R E S U LTA D O S
La figura 1 ilustra el diagrama Pareto en el que no se observa ningn defecto significativo, todos tienen el mismo grado de importancia. El diseo del Sistema de Inspeccin de la Planta de Reactivos Clnicos con todas las variables definidas se muestra en la tabla. En sta se aprecia las frecuencias de inspeccin, los responsables, as como en el caso en que se utilicen planes de muestreos se reflejan los niveles de calidad aceptables (NCA). La implantacin del sistema se inici en julio de 1995 con el proceso de loteo y termin en mayo de 1997 con el control de
120

proceso de preparacin de reactivos clnicos. La comparacin de los defectos del producto terminado entre 1996 y 1997 aparece en las figuras 2 y 3, donde se ejemplifican los meses de julio y agosto con una disminucin considerable que oscila entre el 10 y el 20 %. Otra caracterstica analizada fue el contenido mnimo; en 1996 se autorizaron 56 lotes que represent el 66,5 % del total de productos autorizados en la empresa; sin embargo, en 1997 disminuyeron las autorizaciones en 14 lotes. Como resultado de la aplicacin de proyectos de mojoras se obtuvo la estrategia siguiente: redisear el subsistema de inspeccin de entrada a partir del anlisis de la situacin actual y considerando la evaluacin de los proveedores; establecer los crculos de calidad; confeccionar un sofware que permita procesar las informaciones obtenidas de forma automatizada; capacitar sistemticamente el personal.

100 8 3 ,2 80 6 8 ,1 60 5 2 ,0 4

9 5 ,8

9 6 ,6

100

100

100

100

4 0 3 2 ,8

Leyendas: EI: etiqueta inclinada; ED: etiqueta despegada; EP: etiqueta plegada; EM: etiqueta manchada; CI: cierre incorrecto; IM: impurezas mecnicas;CO: caractersticas organolpticas; SLV: sin lote y vence. FIG.1. Diagrama Pareto.

20

EI

ED

EP

EM

CM

CI P o r c i e n to

S LV

IM

CO

LV I

A c u m u la d o

115

TABLA . Sistema de inspeccin Puntos de control Preparacin de reactivos Caracterstica de calidad pH Peso Temperatura Tiempo de centrifugacin Tiempo de agitacin Tiempo de reposo Concentracin Caractersticas organolpticas Volumen dispensado Lote y vence Frecuencia de inspeccin Responsable Inspector de aseguramiento de la calidad Especialista de produccin Tcnicas estadsticas

2 veces por semana Por lote

Llenado Loteo

2 veces por semana Por lote

Inspector de aseguramiento Inspector de la lnea

Etiquetado y envase

Producto terminado

Cierre de los frascos Etiquetado y envase No presencia de impurezas mecnicas Caractersticas organolpticas Etiquetas correctamente Por lote pegadas y sin machas Cierre correcto Lote y vence legibles

Grficos de control por variables X (media) y R Defectos mayores:Lote y vence ilegible, sin lote y/o vence Plan de muestreo de aceptacin por atributo, normal, nivel II NCA:1,5 %. Grficos de control por atributo 100 p

Inspector de aseguramiento de la calidad

Inspeccin final

Integridad de los estuches Integridad de las cajas de cartn ondulado Presencia de los prospectos

Condiciones de almacenamientos Rotacin de los lotes

Defectos mayores NCA: 1,5 % Defectos menores NCA: 2,5 % Plan de muestreo de aceptacin por atributo, normal, nivel II Defectos mayores: Faltante en estuche, faltantes en cajas de cartn y faltante de prospecto Plan de muestreo de aceptacin por atributo, normal, nivel II NCA: 1,5 %

80 70 60 50 40 30 20 10 0 EI CI 1996 ED IM Ju l io EP CO 1997 EM S LV
Leyendas: EI: etiqueta inclinada; ED: etiqueta despegada; EP: etiqueta plegada; EM: etiqueta manchada; CI: cierre incorrecto; IM: impurezas mecnicas; CO: caractersticas organolpticas; SLV: sin lote y vence. FIG.2. Comparacin de los defectos de producto terminado.

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60 50 40 30 20 10 0 EI CI

1996 ED IM EP CO A gos to EM S LV

1997

FIG. 3. Comparacin de los defectos de producto terminado.

DISCUSIN
El Sistema de Inspeccin en la Planta de Reactivos Clnicos va orientado a detectar el origen de los problemas que afectan la calidad, a partir del control de las etapas del proceso de produccin hasta la salida del producto terminado por el grupo de inspeccin de la Subdireccin de Aseguramiento de la Calidad; en ste se analizan todas las variables que se deben tener en cuenta (tabla), donde las caractersticas de calidad reflejan los requisitos establecidos entre el cliente y el productor. Las tcnicas estadsticas se ajustan a cada proceso y los mantienen bajo control, permitiendo tomar acciones correctivas en el momento en que se detectan desviaciones o puntos fuera de control, lo que ayuda a tener un sistema preventivo y no correctivo, y hace ms econmico el proceso.6,7 Cuando se realiz el diseo se necesitaban 2 inspectores de aseguramiento de la calidad y un inspector de la lnea de envase, lo que implicaba un aumento considerable del costo de

evaluacin encareciendo el Sistema de Inspeccin, el cual no aporta valor a un producto, por lo que fue necesario disearlo de forma eficiente, para ello se decidi que un inspector del rea de aseguramiento de la calidad realizara actividades de prevencin y un inspector de la lnea de envase adiestrado y capacitado cumpliera lo establecido y controlado por el inspector de aseguramiento de la calidad. Una vez terminada la implantacin se pudiera pensar que se lleg al final del desarrollo del sistema, pero los sistemas no son estticos, estn en constante cambio siendo indispensable una retroalimentacin con la aplicacin de proyectos de mejoramientos continuos para conocer el comportamiento de los procesos durante un perodo, diagnosticar los principales problemas que afectan la calidad, disear una estrategia de solucin y evaluar los avances de su implantacin para lograr satisfacer las necesidades de los clientes y que la Empresa crezca con utilidades.1,5 En este caso se compararon los resultados obtenidos en las inspecciones a los productos terminados entre los perodos

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1996 y 1997 (figuras 2 y 3); en 2 meses los defectos disminuyeron entre el 10 y el 20 %. Adems se observ que el contenido mnimo que fue la causa ms significativa de autorizaciones de 1996, tambin disminuy considerablemente, lo cual indica que el Sistema de Inspeccin en el control de proceso ha trabajado de forma eficiente. El proyecto mostr el camino a seguir para disear e implantar el proceso de mejoramiento continuo al nivel de toda la Empresa a partir de la creacin de una metodologa y de la integracin de todas las funciones de la Empresa. La estrategia de solucin mediante el empleo del proyecto de mejoramiento continuo del Sistema de Inspeccin de Reactivos Clnicos, tiene en cuenta primeramente el rediseo del sistema de entrada a partir de la evaluacin de los proveedores de

acuerdo con la calidad de sus producciones, la cual influye directamente en el resultado final. Se consider adems el elemento fundamental en una Empresa, los trabajadores, los cuales hacen la calidad a travs de la creacin de los crculos de calidad, que es una de las vas para llegar al control total de la calidad, lo que permite a los trabajadores expresar libremente sus ideas, se sientan importantes, contribuyan al mejoramiento y desarrollo de la Empresa. Estos crculos tienen como ideas bsicas respetar a los trabajadores y crear un lugar de trabajo amable y difano donde valga la pena estar, ejercer plenamente las capacidades humanas y con el tiempo aprovechar capacidades infinitas.8,9 Con la implantacin del sistema se cumpli con uno de los requisitos indispensables para la aplicacin de las Normas ISO-9000.

SUMMARY
One of the main premises of quality control is to detect the deficiencies in the manufacture of products during the productive process and to analyze the causes of inconformities and erradicate them. Each stage of the manufacturing process should be controlled, so an Inspection System is necessary that allows to increase the probability that the finished product meets all the quality and design specifications. The objective of the present paper was to detect the main problems affecting the quality of reagents made at the Plant of Clinical Reagents, to design and implement its Inspection System, describing the control points, the way to carry out the inspections at the different points and the frequency and the aspects to be controlled, as well as to analyze the results obtained once the system has been established. A Program for Continual Improvement was also put into practice in order to make the implanted system better. Techniques such as the expert method, the Pareto diagram, the Pause-effect method, among others, were used to determine the fundamental problems and their causes. With the design and implementation of the system it was possible to reduce significantly the defects of the finished product and to improve the application of the system. Subject headings: PLANTS, MEDICINAL/anatomy and histology; PLANTS, MEDICINAL/chemistry.

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REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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Recibido:19 de noviembre de 1999. Aprobado: 29 de diciembre de 1999. Ing. Nancy Oa Aldama. Empresa de Productos Biolgicos Carlos J. Finlay. Infanta No. 1162, municipio Centro Habana, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):120-4

Plantas Medicinales
Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana

CONTRIBUCIN AL ESTUDIO DE CISSUS SICYOIDES L. (BEJUCO-UB)

Ramn Scull Lizama,1 Migdalia Miranda Martnez2 y Omelio Caballero Prez3

RESUMEN
Se presenta la descripcin micromorfolgica de Cissus sicyoides L. (bejuco-ub) y se resume la composicin fitoqumica preliminar, donde se detecta la existencia de aminocidos, compuestos grasos y flavonoides en toda la parte area de la planta, los cuales no haban sido informados con anterioridad en la bibliografa. Se demuestra que el tipo de secado no altera la composicin de la droga y se marcan pautas sobre la estabilidad de sta. Se comprueba que la planta no posee efectos txicos ni antivirales contra el virus de la influenza A en cepas victoria H3N2 y WSN (H1N1), para las condiciones en que se desarroll el estudio. Descriptores DeCS: PLANTAS MEDICINALES/anatoma e histaloga; PLANTAS MEDICINALES/ qumica.

En la flora medicinal cubana existe un elevado nmero de especies, cuyos usos populares poseen un gran arraigo, los cuales no estn sustentados por estudios que avalen sus propiedades farmacolgicas as como su composicin qumica y farmacognsticas.

Cissus sicyoides L. es una de estas especies, la cual a pesar de encontrarse muy difundida por todo el pas1 y poseer una alta frecuencia de empleo en diferentes afecciones, 2 ha sido poco estudiada desde el punto vista farmacognstico y farmacolgico.

1 2 3

Investigador Agregado. Doctora en Ciencias Qumicas. Profesora Titular. Profesor Auxiliar.

120

A esta especie se le atribuyen propiedades antiinflamatorias, antirreumticas, contra abscesos, etc.3 Roig plantea que durante una epidemia de influenza que azot el pas, result un remedio muy eficaz. Estudios recientes realizados por Weniger y otros3 publican la composicin qumica siguiente:

Esteroides-terpenoides +/ Quinonas + Compuestos fenlicos +

Pineda 4 ratifica la ausencia de alcaloides, mientras que Toledo5 identific diferentes pigmentos, fundamentalmente cianidinas solamente en el fruto. En el presente trabajo se realizan estudios farmacognsticos y farmacolgicos de las hojas y tallos de esta especie, segn lo recomendado en los acuerdos del IV Seminario Tramil efectuado en Honduras en 1989.

MTODOS
El material vegetal fue recolectado en las reas dedicadas a plantas medicinales, del Instituto de Farmacia y Alimentos, de la Universidad de La Habana, e identificado en el Instituto de Ecologa y Sistemtica. Los estudios micromorfolgicos fueron realizados con el material fresco por la tcnica de congelacin con nitrgeno lquido. La inclusin del material para los cortes histolgicos se realiz durante 6 h en una solucin constituida por:

2 g de polietilen glicol-4000 0,5 g de polietilen glicol- 600 0,1 g de lauril sulfato de sodio 8 mL de agua destilada.

Los cortes se realizaron transversalmente con un dimetro de 10 , al semilimbo, nervio central, peciolo y al tallo;

para ello se emple un micrtomo modelo 1-1629-61 MPTY ruso y se observaron los cortes en un microscopio de transmisin Laboval-3 alemn con aumento de 600. Para el estudio de secado, el material fue dividido en 9 lotes de igual peso y se emplearon los mtodos de secado al sol, a la sombra y en estufa a 35 C; para este ltimo se utiliz una estufa MLW-WS-200 alemana con recirculacin de aire; despus de secada las muestras fueron pulverizadas en un micro molino de martillo Culatti, DFH4S con un dimetro de partcula de 2 mm. La determinacin de la humedad residual, cenizas totales y porcentajes de sustancias solubles, se realiz segn lo establecido en la NRSP-309;6 de igual forma para las determinaciones de las constantes fsico-qumicas de los extractos se emple la NRSP-312.7 El liofilizado utilizado fue obtenido a partir de una decoccin concentrada de las hojas y tallos de la planta, en una liofilizadora de frascos Sartorius alemana; tanto a la decoccin como al liofilizado les fueron determinadas las constantes fsico-qumicas, como la composicin fitoqumica preliminar, segn lo descrito en la gua metodolgica para investigaciones fitoqumicas de plantas medicinales, Ministerio de Salud Pblica (MINSAP), 1992. La citotoxicidad fue evaluada segn la tcnica de MTT,8 en clulas MCDK (lneas de clulas de rin de perro), con diluciones del liofilizado a concentraciones de 50, 100, 150, 200, 250 y 300 g/mL. Mientras que en los ensayos preliminares para detectar el efecto antiviral se emplearon 2 cepas del virus de influenza A (cepas victoria H3N2 y cepa WSN-H1N1), obtenidas del Centro Nacional de Biotecnologa de Madrid, sobre las cuales se ensayaron 4 concentraciones diferentes del extracto de Cissus sicyoides L.50, 100, 150 y 200 g/mL.

121

El esquema usado garantiz 1 h de contacto previo del Cissus sicyoides L. con las clulas; y luego la inoculacin de stas con el virus en cuestin, pasado 1 h de interaccin virus-clula se aplic nuevamente el extracto en las concentraciones antes mencionadas; la capacidad antiviral del extracto fue evaluada a las 48 h posinfeccin.

RESULTADOS
En los cortes epidrmicos de las hojas se observ la presencia de clulas hexagonales tpicas, con estomas por ambas superficies acompaadas por 2 clulas oclusivas y 4 acompaantes, mientras que en los cortes realizados en el semi-limbo se aprecia una epidermis mono-estratificada, seguida de 2 a 3 capas de parnquima lagunoso y cristales de oxalato de calcio en forma de drusas. El nervio central de la hoja est compuesto por una epidermis mono-estratificada, seguida de un parnquima cloroflico y otro incoloro, con clulas grandes que aumentan de tamao hacia el tejido vascular, a continuacin del cual se presentan 3 haces conductores y un tejido colenquimatoso; se observa la presencia de oxalato de calcio (drusas y rfidos). El peciolo est formado en lo esencial por haces alargados y cavidades esquiz-

genas desde la periferia hasta el centro, adems de un aro de fibras unidas al xilema que se encuentra entre los haces conductores; se mantiene la presencia de oxalato de calcio. En los cortes efectuados en el tallo, se observ una epidermis formada por una sola capa de clulas seguida de un parnquima cloroflico y otro de reserva, con abundante contenido de almidn, adems de haces conductores de distribucin regular y por ltimo la mdula. Al igual que en los casos anteriores se observa la presencia de oxalato de calcio, en este caso en forma de aguja. En lo relativo al secado, y como puede observarse en las tablas 1 y 2, no existen diferencias entre los 3 mtodos estudiados, salvo el tiempo de secado, como era de esperar, lo que demuestra que el tipo de secado no influye en los parmetros fsico-qumicos de la droga.
TABLA 1. Parmetros de secado, hojas y tallos Estufa 35 C 72,98 3 10 Droga seca Sol 72,71 18 10,1 Sombra 73,30 21 10,2

Parmetros % prdida en peso Das de secado % de humedad

Los resultados son el promedio de 9 determinaciones.

TABLA 2. Resultados de los parmetros de calidad de las partes areas (hojas y tallos) Mtodos de secado Sol 7,6 8,8 17,2 18,2

Parmetros de calidad % de cenizas totales % sustancias solubles en etanol 80 % % sustancias solubles en etanol 30 % % sustancias solubles en agua

Estufa 35 C 7 8,9 16,4 17,9

Sombra 7,1 8,1 17,4 17,6

122

Los anlisis fsico-qumicos realizados a los extractos etreos, alcohlicos y acuosos, tanto en la droga fresca y seca, como en la decoccin y el liofilizado demuestran la presencia de taninos, compuestos reductores, triterpenosesteroides, aminocidos, compuestos grasos y flavonoides. Estos 3 ltimos se informan por primera vez para esta especie en toda la planta, ya que la presencia de flavonoides haba sido enunciada por Toledo, 5 solamente en los frutos, en forma de antocianidinas. Los resultados obtenidos en los ensayos para la evaluacin de la actividad sitotxica, demuestran que el extracto acuoso no posee toxicidad en ninguna de las concentraciones probadas, mientras que la capacidad antiviral de ste, evaluado a las 48 h de la infeccin, mediante el anlisis de la disminucin de los daos o efectos citopticos caractersticos de las cepas de la gripe, producidos en las clulas MDCK, resultaron negativos.

indicativos de la estabilidad que presenta esta especie en forma de droga seca a pesar de haber sido almacenada en envases de cristal blanco en condiciones de estante.
TABLA 3. Parmetros de calidad de la droga seca almacenada Humedad residual 11 8,6 Cenizas totales 8 8,9 Sustancias solubles Etanol Etanol 80 % 30 % Agua 11,1 13,5 15 16,4 17,8 19,2

Ao 1994 1997

DISCUSIN
Como puede observarse en los resultados expuestos, los metabolitos secundarios encontrados, aparecen independiente al tipo de secado, incluso en muestras almacenadas por espacio de 3 a y cuyos parmetros de calidad se muestran en la tabla 3, los cuales son

Al comparar los controles (clulas ms virus sin extracto) frente a los tratamientos (clulas ms virus ms extracto) en las 4 concentraciones, no se detectaron cambios en los efectos citopticos creados, lo cual nos permite aseverar que el extracto empleado no disminuy sustancialmente al virus en ninguna de las cepas objeto de estudio. Teniendo en cuenta estos resultados, se puede afirmar que la especie Cissus sicyoides L., no present actividad antiviral sobre el virus de la influenza A cepa victoria (H 3 N2 ) y cepa WSN (H 1N 1 ), en las condiciones en que se realiz este estudio; su composicin qumica no se altera, al menos cualitativamente durante el secado, siendo sus principales componentes: taninos, compuestos reductores, triterpenos-esteroides, aminocidos, compuestos grasos y flavonoides.

SUMMARY
The micromorphological description of Cissus sicoydes L. (ipecacuanha) is presented and the preliminary phytochemical composition is summarized. Aminoacids, fatty compounds and flavonoids, which have not been previously reported in bibliography, are detected in the whole aerial part of the plant. It is proved that the type of drying does not alter the compositon of the drug and guidelines are set on its stability. It is also demonstrated that the plant does not have toxic or antiviral effects against the virus of influenza A in victoria H3N2 and WSN (H1N1) strains for the conditons under which the study was developed. Subject headings: PLANTS, MEDICINAL/anatomy and histology; PLANTS, MEDICINAL/chemistry.

123

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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Recibido: 20 de diciembre de 1999. Aprobado: 25 de enero del 2000. Ing. Ramn Scull Lizama. Campanario No. 618 entre Reina y Salud, municipio Centro Habana, Ciudad de La Habana, Cuba.

124

Rev Cubana Farm 2000;34(2):125-8

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana

CONTENIDO DEL ACEITE ESENCIAL EN EL FOLLAJE DE PINUS CARIBAEA MORELET EN FUNCIN DE LA EDAD DEL RBOL. II
Rolando Quert lvarez, 1 Migdalia Miranda Martnez, 2 Jorge M. Martnez 3 y Fisma Gelabert Ayn3

RESUMEN
Se presentan los resultados obtenidos en la cuantificacin del contenido de aceite esencial de la especie Pinus caribaea Morelet endmica de Cuba, en funcin de la edad del rbol. El estudio se realiz con rboles existentes en reas de la Estacin Experimental Forestal de Viales, provincia de Pinar del Ro, con edades de entre 8-30 a. El tamao de muestra fue de 3 rboles y el tiempo de destilacin para la extraccin del aceite esencial de 3 h. Los resultados obtenidos demostraron que el contenido de aceite esencial vara significativamente con la edad del rbol en forma ascendente, con el valor ms bajo (0,12 % en peso) a los 8 a y el ms alto (0,27 % en peso) a los 30 a. Descriptores DeCS: ACEITES MEDICINALES; ARBOLES. VOLATILES/anlisis; PLANTAS

El hombre depende mucho del mundo vegetal, porque en ste se encuentran las sustancias bioactivas y nutritivas necesarias para la vida. Sin embargo, a lo largo de muchos milenios no ha sido capaz de alcanzar un conocimiento completo de las plantas ms comunes. El arsenal teraputico moderno se nutre en buena parte de los fitofrmacos y la ventaja del
1 2 3

empleo de stos es, que junto con las sustancias bioactivas, existen en muchos casos otros constituyentes de accin sinrgica, que potencian su actividad y las hacen ms eficaces que en estado puro.1 Dentro de las plantas medicinales que se comercializan con fines medicinales, se encuentran las del gnero Pinus, del cual se pueden obtener aceites esenciales y

Investigador Agregado. Doctora en Ciencias Qumicas. Profesora Titular. Tcnico.

125

otras sustancias extrables para la elaboracin de fitofrmacos. La utilizacin del follaje de este gnero es una direccin que comenz su desarrollo en la dcada de los 50, pero es evidente que ya demuestra un gran valor econmico y perspectivo por los usos que de l se pueden obtener. Entre los metabolitos secundarios que estn presentes en este gnero, son los aceites esenciales, por su naturaleza de mezclas complejas y su volatilidad a temperatura ambiente, los que estn ms influidos por factores intrnsecos y extrnsecos. Teniendo en cuenta estos elementos, el objetivo de nuestro trabajo consisti en determinar cmo influye la edad del rbol (factor extrnseco), en el contenido de aceite esencial de la especie, considerando que en un trabajo anteriormente publicado,2 nos habamos referido a determinar la influencia que tiene la poca del ao (factor intrnseco), en el contenido de aceite esencial.

donde: M1 = Masa final de aceite esencial. M2 = Masa inicial de follaje. 100 = Factor matemtico. Se utiliz un diseo experimental completamente aleatorizado con 3 rplicas para cada edad estudiada. La evaluacin estadstica se realiz mediante un anlisis de varianza simple con el empleo de la prueba de rango mltiples de Duncan para la comparacin de medias, a un nivel de significacin del 5 %.

R E S U LTA D O S
En la tabla y figura se presentan los resultados obtenidos en la determinacin del contenido de aceite esencial en funcin de la edad de los rboles. Como se aprecia, a la edad de 8 a es donde se obtiene el rendimiento ms bajo (0,12 % en peso), el cual difiere significativamente de todas las edades estudiadas. Entre 10 y 12 a se obtuvieron valores constantes de 0,14 % y entre 14 y 18 a de 0,24 %. Un rendimiento de 0,25 % fue obtenido a los 20 a y de 0,27 % a los 30 a de edad del rbol.

MTODOS
El follaje utilizado de muestreo en un sitio forestal III en rboles de 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 30 a. Se tomaron muestras de 3 rboles al azar2 para cada edad; el aceite esencial se obtuvo por el mtodo de hidrodestilacin cohobacin, en un equipo de destilacin con capacidad de 1 L, utilizando 1 kg de follaje sin triturar, libre de corteza y madera. El rendimiento de aceite esencial se determin mediante la expresin: M1 M2

TABLA. Contenido de aceite esencial en funcin de la edad del rbol. Prueba de Duncan Edad (aos) 8 10 12 14 16 18 20 30 % de aceite esencial 0,12 a 0,14 b 0,14 b 0,24 c 0,24 c 0,24 c 0,25 d 0,27 e

P=

. 100
126

Letras iguales no difieren significativamente a p 5 %.

0 ,3 % d e a ce it e e se n c i a l 0 ,2 5 0 ,2 0 ,1 5 0 ,1 0 ,1 2 0 ,1 4 0 ,1 4 0 ,2 4 0 ,2 4 0 ,2 4 0 ,2 5

0 ,2 7

0 ,0 5 0 8
FIG. Contenido de aceite esencial en funcin de la edad.

10

12

14 A os

16

18

20

30

DISCUSIN
De los resultados obtenidos se infiere que a los 30 a de edad de los rboles, es cuando se obtiene el mayor rendimiento de aceite esencial. Segn Lpez3,4 y Carreras,5 la estructura microscpica de la accula de Pinus caribaea Morelet a edades tempranas tiene una capa epidrmica muy fina -la cual se cutiniza y se hace ms gruesa con el envejecimiento del rbol-, que hace que el proceso de evaporacin de los compuestos voltiles sea ms fcil -por la temperatura existente en nuestro pas-, lo que al parecer, es una de las posibles causas de que en rboles jvenes el contenido de aceite esencial extrable sea menor. Otros factores que pudieron haber influido en este fenmeno son los procesos fotosintticos, los cuales en las especies forestales se realizan de forma poliestratificada, necesitando para ello de una superficie de follaje grande. Como caracterstica intrnseca del gnero, el follaje tiene una superficie baja en rboles jvenes y aumenta a medida que ste es ms adulto, lo que puede influir en que a corta edad, la produccin de

compuestos derivados de la fotosntesis sea baja y, por ende, la de los metabolitos secundarios derivados de stos. Para otras especies de Pinus, sin embargo, los resultados reportados difieren de los obtenidos en este estudio. Ejemplo de ello es Pinus scott, 6 para el cual se informan rendimientos de aceite esencial a edades de 4 a 10 a mayores que de 17 a 22 a. Estos resultados pueden ser dados por las caractersticas climticas en que se desarrolla esta especie en Siberia, donde la temperatura alcanza valores inferiores a 0 y pueden producirse cambios en los procesos biosintticos.7 En otras especies forestales como las del genero Eucalyptus, el incremento en la edad de los rboles produce disminucin en los rendimientos de aceite esencial.8,9 Este aspecto se corrobora por Miranda , 1989, en su tesis doctoral Contribucin al estudio del Eucalyptus citriodora Hook que crece en Cuba. En estos resultados pueden haber influido las condiciones climticas en las que se desarrolla la especie en nuestro pas (latitud, temperatura, rgimen de lluvias, etc.), la mayor cutinizacin de las acculas

127

en rboles adultos que impide la volatilizacin del aceite esencial, as como las caractersticas del suelo donde se desarrolla la especie. Si consideramos que la tala o aprovechamiento del pino en Cuba se realiza entre 25 y 30 a y que el follaje de la especie constituye un residuo, el hecho de

que el contenido de aceite esencial sea mayor a edades superiores resulta muy ventajoso, ya que permite aprovechar un residuo que actualmente crea un problema en las reas de tala, lo que hace ms rentable la produccin de madera por el aprovechamiento integral del bosque.

SUMMARY
The results obtained in the quantitation of the content of essential oil of the Pinus caribaea Morelet, an endemic species from Cuba, according to the age of the tree, are presented. The study was conducted with trees existing in the areas of the Experimental Forestal Station in Viales, province of Pinar del Ro, at ages 8-30. The size of the sample was of 3 trees and the distillation time for the extraction of essential oil was of 3 hours. The results obtained showed that the content of esential oil increases significantly with age. The lowest value (0.12% in weight) was registered at 8 and the highest (0,27% in weight) at 30. Subject headings: OIL, VOLATILE/analysis; PLANTS, MEDICINAL; TREES.

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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Recibido: 5 de enero del 2000. Aprobado: 18 de febrero del 2000. Lic Rolando Quert lvarez. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Ave 23 No. 21422 entre 214 y 222, La Coronela, municipio La Lisa, Ciudad de La Habana, Cuba.

128

Rev Cubana Farm 2000;34(2):129-33

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana

CECROPIA PELTATA L. (I) ESTUDIOS FARMACOGNSTICOS Y DE LA COMPOSICIN DE CIDOS GRASOS LIBRES

Abel A. Pardo Concepcin,1 Marta E. Triay Gonzlez,2 Armando Cullar Cullar3 y Juan Agero Agero4

RESUMEN
Se inici el estudio de la yagruma (Cecropia peltata L.) de uso medicinal en Cuba, con la descripcin de los ndices farmacognsticos mnimos necesarios para establecer la calidad de las hojas de la planta como droga, as como el estudio de la fraccin de desengrase de donde se cristaliza una mezcla de 11 cidos grasos metilados en forma libre, los cuales se caracterizan mediante cromatografa gaseosa acoplada a masas. El 50 % de estos cidos son insaturados, lo cual puede favorecer el fundamento del uso de la planta popularmente con fines antiasmticos. Descriptores DeCS: ACIDOS GRASOS/aislamiento y purificacin; PLANTAS MEDICINALES; EXTRACTOS VEGETALES/anlisis; CUBA.

La extraccin de sustancias qumicas a partir de plantas como materia prima para la produccin farmacutica tiene su origen hace muchos aos, pero se retoma con especial inters desde hace 2 dcadas como medicina alternativa. Nuestro pas ha introducido esta teraputica y nuestro grupo ha dedicado su esfuerzo investigativo a estudiar plantas de uso tradicional como antiasmticas en nuestro medio.

Segn Roig,1 en Cuba es bastante popular el uso del cocimiento de las hojas de yagruma como pectoral, para la tos y aliviar las crisis asmticas. Seoane Gallo 2 refiere del folklore cubano que las hojas de la planta torcidas en forma de un tabaco se usan para aliviar el asma, su cocimiento con miel cura el catarro y el cocimiento amargo es efectivo para la tos crnica.

1 2 3 4

Licenciado en Ciencias Farmacuticas. Licenciada en Ciencias Farmacuticas. Profesora Instructora. Doctor en Ciencias Farmacuticas. Profesor Titular. Investigador Agregado. Centro Qumica Farmacutica.

129

TABLA. Resultados de las evaluaciones farmacognsticas Secado Sombra Sol Estufa Humedad residual: 12,5 % Cenizas totales: 7,2 % Sustancias solubles (extractivos) Prdida de peso en agua 70,8 74 77 Tiempo de secado (d) 11 7 2

Etanol - (4,6 %) Etanol/H2O 50 % v/v- (9,1 %) H 2O - (5,1 %) Tamizaje fitoqumico

Ensayo Espuma Shinoda FeCl3 Dragendorff Baljet Kedde Lieb-Burchard Bontragen Ninhidrina Sudan III Fehling Muclago Sabor

Extracto de ter

Et OH ( ) () (+) ( ) ( ) ( ) (+) ( ) (+) (+) Ligeramente astringente

H2O (+) (+) (+) ()

() () (+) () (+)

(+) ()

+ = positivo el ensayo; = negativo en ensayo

Teniendo en cuenta las escasas publicaciones sobre el estudio qumico de la planta (Fonseca,3 Funge4 y Gilbert)5 nos dimos a la tarea de estudiar la planta, tanto desde el punto vista farmacognstico y qumico, as como farmacolgico.

MTODOS
El material vegetal utilizado se colect en los terrenos del Instituto de Farmacia y Alimentos (IFAL) en abril de 1998. Las valoraciones farmacognsticas para el anlisis de calidad de la planta se realizaron de acuerdo con la publicacin de la OMS segn el experto Lou Zhi-cen6 que propone las metodologas de trabajo a utilizar con estos fines.

El tamizaje fitoqumico se realiz mediante la adaptacin de la metodologa de trabajo descrita por Chhabra y otros.7 Para el estudio de la composicin de cidos grasos libres el material vegetal se somete al proceso siguiente: 650 g de hojas secas con tamiz de 1 mm, se extraen por maceracin durante 72 h con 4 L de una mezcla de n-hexano-ciclohexano (4:6). Transcurrido este tiempo, la mezcla se calienta a 50 C y se filtra. El proceso se repite 3 veces. Los 3 extractos resumidos se concentran por destilacin hasta sequedad en evaporador rotatorio. El residuo se somete a un proceso de cristalizacin fraccionada con cloroformo-ter dietlico y el slido sin pigmentos que se recupera por filtracin se destina al anlisis por cromatografa gaseosa acoplada a masas.

130

VG

L A B -B A S E

T h e T R IO -1

G C -M S D a t a S y se m In st ru m e n t: T R I O 1 00 0
9 65 1 3 5 1 2 T IC 1

S a m pe : IFA L -2 1 00
6

%FS

1 4 5 2

5 7

9 1 0 11

M in

1 4 ,5 0

15 ,0 0

1 5 ,5 0

1 6 ,0 0

1 6 , 50

1 7 ,0 0

1 7 ,5 0

1 8 ,0 0

1 8 ,5 0

1 9 ,0 0

FIG. Cromatograma obtenido del extracto de n-hexanociclohexano de las hojas de yagruma (Cecropia peltata L).

El anlisis por crom-mass se realiz en un equipo HRGC Mega 2 acoplado a un espectrmetro de masas cuadrupolar FISONS INSTRUMENTS. Las condiciones del anlisis fueron las siguientes: columna SPB-1(30 m de 1 0,32 mm de d.i) df = 1 m. Programa de temperatura desde 80 C (1 min) hasta 300 C (10 min) con un gradiente de 10 C. La temperatura del inyector igual a la de la interfase y a la de la fuente con un valor de 290 C. El volumen inyectado 1 L de la muestra disuelta en ciclohexano con un splitles de 30 s. Se utiliz un detector EM, 70 eV, EIT.

Los resultados del anlisis por crom-mass del slido recristalizado obtenido del extracto de n-hexano-ciclohexano de las hojas de la planta se presentan en el cromatograma de la figura.

DISCUSIN
Las valoraciones farmacognsticas realizadas muestran que el mejor mtodo de secado es en estufa a 35 C, el cual demora 2 d en tener una prdida en peso constante e igual al 77 %. Esto se complementa con un valor completamente alto de humedad residual del 12,5 %. De igual forma el rendimiento de cenizas totales tiene un valor ligeramente alto del 7,2 % En cuanto a la valoracin de posibles mejores solventes de extraccin, se hace evidente que la mezcla etanol-agua 50 % V/Ves la de mayor poder extractivo de los

RESULTADOS
Los resultados de las evaluaciones farmacognsticas realizadas se resumen en la tabla. Todos los resultados corresponden a un valor promedio de 3 determinaciones.

131

evaluados al contener el 9,1 % en peso de slidos solubles. El tamizaje fitoqumico, de acuerdo con los resultados obtenidos, sugiere la posible presencia de saponinas, flavonoides, fenoles y/o taninos, triterpenos y esteroides, aminas, compuestos reductores y lpidos para los diferentes extractos evaluados, todos realizados en orden de polaridad ascendente sobre el mismo material vegetal. El slido obtenido por cristalizacin fraccionada del extracto con solvente apolar de la planta recristalizado present una fusin neta de 80 C. Se obtuvo en cantidad de 2 g. Con respecto al extracto de partida (12,8 g) corresponde el 16 y el 0,3 % al peso de la planta procesada. Este slido segn el anlisis por crom-mass result una mezcla compleja de 11 productos, la mayora cidos grasos metilados de forma natural, de acuerdo con los anlisis de los espectros de masas correspondientes que se resumen a continuacin: Todos los espectros -con excepcin del correspondiente al pico 1- muestran los fragmentos caractersticos de cidos grasos a m/z 45, 59, 73 y 87, con m/z 73 como pico base. Todos los espectros tienen corridas estas seales 14 unidades, por lo que junto a los valores de la masa molecular se concluye si se comparan con los espectros registrados en la cartoteca del equipo, que corresponden a los productos siguientes: Pico 1: Tiempo de retencin 14,836 min. Se asigna la estructura de la parafina heptadecano C17H36. Pico 2: Tiempo de retencin 14,919 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido mirstico (14:0) C13H27COOCH3. Pico 3: Tiempo de retencin 15,686 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido decanoico (15:0) C14H29COOCH3.

Pico 4: Tiempo de retencin 16,919 min. Se asigna la estructura del metil ster d e l cido 7 hexadecenoico (16:1) CH3(CH2)7HC = CH(CH 2)5CO 2CH3. Pico 5: Tiempo de retencin 16, 929 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido 9 hexadecenoico (16:1) CH3(CH2)7HC = CH(CH2)7CO2CH3. Pico 6: Tiempo de retencin 18,753 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido palmtico (16:0) C15H31COOCH3. Pico 7: Tiempo de retencin 18,753 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido gamma linoleico (18:3) CH 3 (CH2 )4HC = CH H2CCH = CHCH 2 CH = CH(CH2)4CO2CH3. Pico 8: Tiempo de retencin 18,936 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido linoleico (18:2) CH3(CH2)4HC = CH CH2CH= CH(CH2)7CO2CH3. Pico 9: Tiempo de retencin 19,003 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido oleico (18:1) CH 3(CH2)7HC = CH (CH2)7CO2CH3. Pico 10: Tiempo de retencin 19,270 min. Se asigna la estructura del metil ster de un ismetro del cido oleico (18:1). Pico 11: Tiempo de retencin 19,270 min. Se asigna la estructura del metil ster del cido esterico (18:0) C17H35CO2CH3. Se pudo establecer que el pico 6 correspondiente al metil ster del cido palmtico es el componente mayoritario y correspondiente al 37 % de la mezcla. Es de resaltar de los resultados expuestos que, de una fraccin donde usualmente se encuentran triterpenoides y/o esteroles, los componentes principales son cidos grasos libres metilados de forma natural, alrededor del 50 % de ellos insaturados, lo cual sugiere un inters especial por esta planta debido a las caractersticas antioxidantes establecidas para estas estructuras y que pueden, sin dudas, fundamentar el inters de la planta como medicinal.

132

SUMMARY
The study of yagruma (Cecropia peltata L.) of medicinal use in Cuba was started with the description of the minimum pharmacognostic indexes necessary to establish the quality of the leaves of the plant as a drug, as well as the study of the scouring fraction from where a mix of 11 freely methylated fatty acids is crystallized. These acids are characterized by gas chromatography matched to masses. 50% of these acids are unsaturated, which may favor the popular use of the plant with antiasthmatic ends. Subject headings: FATTY ACIDS/isolation and purification; PLANTS, medicinal; PLANT EXTRACTS/analysis; CUBA.

REFERENCIAS
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Recibido: 29 de diciembre de 1999. Aprobado: 2 de febrero del 2000. Lic. Abel A. Pardo Concepcin. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Ave 23 No. 21422 entre 214 y 222, La Coranela, municipio La Lisa, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):134-7

Centro de Investigaciones de Energa Solar Santiago de Cuba

OBTENCIN DE GLICEROL A PARTIR DE LA MICROALGA DUNALIELLA SALINA

Lisethy Hernndez Nazario,1 Mara Magdalena Quintana Cabrales2 y Humberto Joaqun Morris Quevedo3

RESUMEN
En el campo de la tecnologa farmacutica, el glicerol es un disolvente ampliamente utilizado en virtud de sus propiedades fsico-qumicas en la formulacin de diferentes formas farmacuticas. Se investigaron las posibilidades de obtencin de glicerol como un subproducto del proceso de extraccin de -carotenos a partir de cultivos de Dunaliella salina, desarrollados bajo rgimen autotrfico en el Centro de Investigaciones de Energa Solar. El flujo tecnolgico propuesto comprende el tratamiento de la biomasa con hidrxido de calcio, la filtracin del producto resultante, la extraccin del -carotenos con un solvente insoluble en agua y, por ltimo, la separacin del glicerol neutralizando convenientemente del filtrado con cido. El rendimiento de glicerol fue del 4-5 %, valor susceptible de ser incrementado mediante la induccin metablica de los cultivos. Descriptores DeCS: GLICEROL/aislamiento y purificacin; ALGAS VERDES.

El glicerol es un polihidroxialcohol ampliamente utilizado en las industrias Qumica, Farmacutica y Cosmtica en virtud de sus propiedades humectante, antispticas, hidroscpicas y espesantes. Se trata de un lquido incoloro, viscoso y casi inodoro, que posee una temperatura de ebullicin de 290 C y una temperatura

de fusin de 17,9 C. La fuerza de tensin superficial es menor que la del agua, pero mayor que la de muchos disolventes orgnicos; resulta soluble en agua y alcohol e insoluble en ter y cloroformo.1 En el campo de la tecnologa farmacutica, el glicerol es un disolvente de extraordinario valor, capaz de formar

1 2 3

Licencianda en Qumica. Aspirante a Investigadora. Licenciada en Qumica. Investigadora Agregada. Licenciado en Bioqumica. Aspirante a Investigador.

134

disoluciones concentradas y permanentes, imposibles de obtener con otros vehculos. Algunas de estas disoluciones se emplean como medicamentos en su forma original, en tanto otras se usan para preparar diluciones acuosas o alcohlicas de baja solubilidad en estos disolventes. Entre las formas farmacuticas que contienen glicerol en su composicin se pueden citar: geles, lociones, supositorios y diferentes mezclas.2 El glicerol puede ser obtenido de lpidos complejos, por sntesis orgnicas, mediante la fermentacin de los carbohidratos o a partir de derivados sintticos resultantes de la refinacin del petrleo. Tomando en consideracin el aumento del precio de las materias primas utilizadas tradicionalmente para su obtencin, se impone la bsqueda de nuevas y variadas fuentes. En este sentido, el perfil lipdico de las microalgas se caracteriza por la presencia de cantidades apreciables de lpidos neutros, principalmente glicridos, que representan una fuente potencial de gricerol, adems de haberse informado la existencia de glicerol libre en las celulas de un nmero considerable de especies. La microalga marina Dunaliella salina (Chloropyta, Chloropyceae) contiene cantidades significativas de glicerol, que pueden incrementarse en respuesta a un aumento de la presin osmtica externa.3 Esta especie ha sido estudiada intensamente en las ltimas dcadas como fuente de carotenos y glicerol y es oportuno sealar que los cultivos empleados para la obtencin de -caroteno pueden a la vez, constituir una fuente de glicerol.4 En el presente trabajo, los cultivos de Dunaliella salina desarrollados bajo rgimen autotrfico en el Centro de Investigaciones de Energa Solar con el objetivo fundamental de producir -caroteno (provitamina A), se investigan como una posible fuente de glicerol en calidad de

subproducto de la corriente tecnolgica principal.

MTODOS
La biomasa resultante del cultivo de Dunaliella salina, desarrollado a cielo abierto en una instalacin experimental de 12 m 2, fue tratada con hidrxido de calcio (0,3 g de Ca (OH) 2/g de biomasa) en atmsfera de nitrgeno y una temperatura de 100 C durante 2 h, en condiciones de agitacin. Despus de enfriar a 50 C, la mezcla resultante fue filtrada por succin con la adicin de una pequea cantidad de agua, de donde se obtuvo un producto claro verde-amarillento. Se procedi a la extraccin del -caroteno con un disolvente insoluble en agua y acto seguido se neutraliz el filtrado hasta un pH de 6-7, con cido sulfrico al 50 %. La disolucin obtenida despus de filtrado el CaSO4 precipitado se evapor al vaco hasta lograr una sustancia viscosa amarillenta, que fue agitada durante varias horas con 3 mL de insopropanol. Se filtr la sal no disuelta, se evapor el filtrado y se repiti este procedimiento con 2 mL de isopropanol. Esta tcnica de extraccin se emple para 5 rplicas. Como un criterio preliminar de la pureza del producto obtenido se determin el punto de fusin del tribenzoato de glicerilo, sintetizado por benzoilacin del glicerol en presencia de piridina.5

R E S U LTA D O S
El flujo tecnolgico propuesto para la obtencin de glicerol mediante el uso de la microalga Dunaliella salina como materia prima, rindi como promedio 0,23 g de producto bruto a partir de muestras de 5 g

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de biomasa, el cual present un color amarillo plido. El rendimiento alcanzado, en todos los casos, result ser del 4 al 5 % (g/100 g de biomasa, base hmeda). El punto de fusin del tribenzoato de glicerilo, derivado sintetizado para la determinacin de esta constante fsica como criterio de pureza, fue de 68 1 C, ligeramente inferior al informado en la literatura (72 C).

DISCUSIN
Desde hace mucho tiempo se conoce que ciertas especies de microalgas encontradas en los ecosistemas marinos, como Dunaliella salina, acumulan intracelularmente cantidades significativas de -caroteno y glicerol. Sin embargo, la separacin de estos metabolitos puede implicar una serie de dificultades, por lo que se impone desarrollar procedimientos que permitan extraer de forma sencilla

-caroteno y glicerol a partir de las algas, con rendimientos satisfactorios y la mayor pureza posible.6 El mtodo propuesto en el presente trabajo es relativamente sencillo, susceptible de ser escalado, no precisa de reactivos ni equipamientos especiales y garantiz un rendimiento del 4 al 5 %; valores que pueden ser incluso incrementados con la induccin metablica de los cultivos. El punto de fusin se encuentra moderadamente deprimido en relacin con el referido en la literatura para el derivado sintetizado en cuestin, 5 lo cual indica que el gricerol obtenido presenta impurezas propias de la biomasa algal como componentes minoritarios, no eliminadas con la tcnica diseada. Estos resultados sugieren continuar trabajando en fusin de la purificacin del glicerol, con el propsito de lograr que sea aplicado en la formulacin de diferentes formas farmacuticas.

SUMMARY
Due to its physical and chemical properties, Glycerol is widely used as a dissolvent in the formulation of different pharmaceutical forms in the field of pharmaceutical technology. The possibilities of obtaining glycerol as a byproduct of the process of extraction of -carotenes from cultures of Dunaliella salina, developed under autotrophic regime at the Solar Energy Research Center, were investigated. The proposed technological flow comprises the treatment of biomass with calcium hydroxide, the filtration of the final product, the extraction of -carotenes with a solvent insoluble in water and, finally, the separation of Glycerol, conveniently neutralizing the filtration with acid. The yield of glycerol was of 4-5 %, a value that may be increased by the metabolic induction of the cultures. Subject headings: GLYCEROL/isolation and purification; ALGAE, GREEN.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Recibido:15 de noviembre de 1999. Aprobado: 17 de diciembre de 1999. Lic. Lisetly Hernndez Nazario. Edificio 3, Bloque 3, apto 8, Reparto Rajayoga, Santiago de Cuba, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):138-46

Artculo de Revisin
Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos

CRITERIOS PARA LA EVALUACIN DE LAS ACTIVIDADES DE CIENCIA E INNOVACIN TECNOLGICA EN LA INDUSTRIA FARMACUTICA CUBANA
Rafael Diego Len Rodrguez1 y Martha Gmez Carril1

RESUMEN
Uno de los problemas ms complejos en todos los pases que realizan actividades de ciencias e innovacin tecnolgica, es organizar la evaluacin de la investigacin cientfica, la cual enfrenta un cmulo de problemas complejos y muy decisivos por naturaleza. Se hace imprescindible contar con elementos capaces de evaluar esta actividad, tanto desde el punto de vista de su efectividad o eficiencia como de sus posibles usos, con el objetivo de buscar una racionalidad de los recursos de acuerdo con los intereses del desarrollo. Se propone realizar este trabajo en la Industria Farmacutica cubana a partir de la evaluacin del desempeo de la Organizacin de Investigacin como entidad fundamental, en nuestro caso, el Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). Se discuten los modelos de evaluacin, se hace hincapi en el entorno socio-econmico de la organizacin, y se considera que el modelo de toma de decisin y el de goal-free son los ms efectivos para este tipo de trabajo. Descriptores DeCS: INDUSTRIA FARMACEUTICA; INVESTIGACION/ /organizacin y administracin; CUBA; EVALUACION.

La ciencia es la esfera de la actividad investigadora dirigida a la adquisin de nuevos conocimientos sobre la naturaleza, la sociedad y el pensamiento, de sus propiedades, relaciones y regularidades. La ciencia no es un simple cmulo de los conocimientos sobre los hechos y leyes,
1

sino un conjunto sistmico en el que los hechos y leyes aparecen vinculados por determinadas relaciones y se condicionan mutuamente.1 Con la ciencia y la tcnica el hombre progresa y retrocede, crea y destruye. Los conocimientos e instrumentos cientficos salvan millones de vida.2

Investigador Auxiliar.

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Sin embargo, una tarea que no resulta sencilla organizar, pero de vital importancia es la relacionada con la evaluacin de la investigacin cientfica, la cual enfrenta muchos problemas complejos y decisivos por naturaleza. Es imprescindible contar con un mtodo capaz de evaluar tcnica y econmicamente las investigaciones para buscar una racionalidad de los recursos de acuerdo con los intereses de desarrollo, aunque la actividad debe caer esencialmente, dentro de aquellos tipos de clasificacin para los cuales las perspectivas de aplicacin prctica de los resultados de la investigacin son ms cercanas, a saber, la investigacin aplicada y el desarrollo.3 El desarrollo de las ciencias farmacuticas al igual que en el resto de las ciencias, ha tenido un efecto en la cadena ciencia-tecnologa-sociedad. El descubrimiento de nuevas molculas y el desarrollo de formas de administracin de stas, hacen hoy de las ciencias farmacuticas una importante rama de la ciencia, todo esto encaminado a lograr el tratamiento farmacolgico ms eficaz y con menos efectos secundarios que permitan mejorar la calidad de vida de los enfermos. Es as, como los productos genricos que se presentan en forma de administracin convencional, se estn desarrollando desde hace pocas dcadas en forma de administracin modificada. Tambin los adelantos de la biotecnologa como un nuevo paradigma tecnolgico, los anticuerpos monoclonales, el descubrimiento del DNA y el RNA, entre otros, han dado lugar a nuevas tecnologas con los consiguientes cambios en la produccin y en la sociedad. Esto pone de manifiesto la interrelacin ciencia-tecnologa-sociedad en la Industria Farmacutica, siendo el eslabn ms importante de esta cadena los

adelantos de la ciencia. La evaluacin de la poltica cientfica la Industria Mdico-Farmacutica cubana como parte del Sistema de Ciencia y Tecnologa Nacional es un tema de gran inters y puede ayudarnos a reflexionar si observamos otros pases como Espaa, en el que el tema de la ciencia y la tecnologa ha llegado a un punto en que como dijera Sanz y otros en 1993:4 "Los recursos y el apoyo ciego a la ciencia y la tecnologa espaola han pasado a la historia. La utilidad y la inmediatez de los resultados de las actividades cientficas y tecnolgicas, parecen ser reclamadas desde la sociedad. Y desde la administracin del presupuesto pblico se seala la ausencia de medicin de resultados, de rendicin de cuentas de las inversiones realizadas. Este fenmeno se observa no solo en Espaa sino en otros pases incluyendo los EUA, teniendo en cuenta que los cambios producidos en el mundo en los ltimos aos impone la necesidad de nuevos retos para enfrentar la poltica cientfica y tecnolgica por lo que es necesario medir el desempeo en ciencia y tecnologa como parte de las relaciones entre ciencia, tecnologa y sociedad." La investigacin cientfica ha sido objeto de los esfuerzos de los evaluadores. La necesidad de medir desde diferentes pticas, los resultados de la labor investigativa y la innovacin tecnolgica se ha originado por diversas razones, entre las que se pueden sealar la creciente importancia que ha adquirido en los asuntos vinculados al desarrollo econmico y social, la significativa cantidad de recursos que se destinan a ella y el aumento del inters pblico en conocer sus derroteros. La necesidad de evaluar esta actividad en la Industria Farmacutica cubana, tanto desde el punto de vista de su efectividad o eficiencia como de sus posibles usos conforman el objetivo del presente trabajo

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mediante 2 interrogantes asociadas con este problema, es decir: qu es una organizacin cientfica?, y cmo evaluar la actividad de ciencia e innovacin tecnolgica de una organizacin cientfica en la Industria Farmacutica?

EVALUACIN DE LA ORGANIZACIN DE INVESTIGACIN

La organizacin de investigacin se considera a aquellas estructuras permanentes del sistema de ciencia y tecnologa, cuyo origen y misin bsica son la ejecucin y coordinacin de actividades de ciencia e innovacin tecnolgica en determinado campo del espectro cognoscitivo y que se caracterizan por constituir unidades administrativas con estructura definida, ya sea de ndole independiente o de subordinacin parcial o total a otras instituciones.4 El Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) como ejemplo de lo anterior es una institucin que, como su nombre lo indica, tiene la misin de investigar y desarrollar medicamentos, considerando todas las vas de obtencin y utilizacin de tcnicas y tecnologas de avanzada, bajo una concepcin, diseo, produccin y evaluacin del frmaco observando las ms rigurosas exigencias internacionales, contribuyendo as a elevar los niveles de salud de nuestra poblacin, as como el desarrollo cientfico y socioeconmico del pas5 (Carpeta metodolgica, CIDEM, 1997: 1-5 ). Los objetivos estratgicos de la mencionada organizacin cientfica son: 1. Potenciar el Programa de Investigacin mediante la formulacin de proyectos.

2. Incrementar la asimilacin y creacin de tcnicas y tecnologas de avanzada en los proyectos de investigacin que redunden en la elevacin del rigor cientfico y eficiencia econmica del centro. 3. Identificar y desarrollar las diferentes vas de obtencin que propicie la formulacin de nuevos medicamentos y/o la sustitucin de otros. 4. Desarrollar un conjunto de acciones productivas y de servicios cientfico-tcnicos que contribuyan a cumplir el plan de produccin de medicamentos del pas, tanto para el consumo nacional como para la exportacin. 5. Disear e implementar el Sistema de Aseguramiento de la Calidad en todas las reas del centro. 6. Promover el desarrollo armnico de los Recursos Humanos y lograr su utilizacin ms eficiente para que permita el incremento de la eficiencia cientfica y econmica del centro. 7. Promover y fortalecer el intercambio cientfico-tcnico y comercial con instituciones nacionales y extranjeras y organismos internacionales. 8. Disear e implementar un Sistema Tcnico-Econmico que permita estimular la produccin y los servicios, as como el control eficaz de los recursos y el cumplimiento de los econmicos. Dos aspectos resultan destacables de lo anterior. En primer lugar, el carcter permanente de la organizacin de investigacin con lo cual se pone de manifiesto que su existencia no est limitada a priori en el tiempo ni condicionada al cumplimiento de una tarea especfica, como puede ser el caso de un grupo de trabajo creado para el desarrollo de un proyecto o programa concreto. La naturaleza de esta organizacin cientfica dedicada a la

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investigacin y desarrollo, est dada por el desempeo de misiones amplias y estables en el campo de una o varias disciplinas cientficas o en ciertas reas del desarrollo tecnolgico a mediano y largo plazos. En segundo lugar, el carcter de su misin como organizacin delimita claramente su responsabilidad ante los organismos patrocinadores, los potenciales usuarios y la opinin pblica en general, la cual est llamada a asumir determinada funcin, perfectamente identificable, en el contexto de la ciencia y la tecnologa, y no est asociada con individuos o intereses particulares que en ciertas circunstancias podran condicionar su continuidad en el tiempo o su responsabilidad ante el entorno. La evaluacin del desempeo de la organizacin resulta relevante debido, entre otras razones a que: Ofrece la posibilidad de interrelacionar los resultados de la evaluacin, el proceso de toma de decisiones y la conformacin de polticas. Posibilita claridad en los objetivos y/o productos finales de la investigacin, lo que facilita a su vez la bsqueda de juicios de valor. Permite la dimensin temporal de las acciones cientficas. Favorece la aprehensin de la interpelacin entre la responsabilidad por el desempeo y los recursos empleados. Hace comprensible los resultados de la evaluacin para las audiencias externas a la comunidad cientfica. La evaluacin de la organizacin cientfica ofrece un marco de referencia mucho ms amplio y asequible que un programa o proyecto, ya que en su contexto se relacionan prcticamente todas las instancias del sistema de ciencia y tecnologa, tanto desde el punto de vista

de la gestin de la investigacin como desde la ptica de los propios actores de la comunidad cientfica. La organizacin constituye un centro de responsabilidad mucho ms tangible a los efectos de valorar su desempeo en el mbito social, ofreciendo un "rostro" para la ciencia y sus impactos socio-econmicos no directamente asociados con individuos, lo cual hasta cierto punto despersonaliza la evaluacin de la accin cientfica. El CIDEM ha sido evaluado como una organizacin cientfica de resultados relevantes, juzgado en trminos de eficacia o eficiencia y por el aporte socio-econmico que han derivado los resultados de su trabajo, especficamente en la actividad de ciencia e innovacin tecnolgica del Programa de Medicamentos, con lo que ha logrado sustituir la importacin de un gran nmero de medicamentos gracias a los aportes cientfico-tcnicos de un grupo de investigadores y trabajadores de la ciencia. Tambin ha contribuido al desarrollo de la ciencia con la participacin en programas y proyectos de investigacin, como son el desarrollo de tecnologas de avanzada y el trabajo desarrollado en la obtencin de frmacos a partir de plantas medicinales. Las salidas o productos finales expresan, en mayor o menor medida, los resultados del esfuerzo de toda la organizacin, los que se traducen en los diferentes tipos de beneficios que la sociedad espera recibir de la ciencia y la tecnologa, independientemente de la mayor o menor cantidad de proyectos, obviando los inconvenientes asociados con la evaluacin de la investigacin bsica, la cual encierra mltiples dificultades metodolgicas y prcticas. Cualquier actividad de evaluacin relacionada con la organizacin de

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investigacin debe brindar la posibilidad de responder a las preguntas siguientes: qu resultados ofrece a la sociedad la organizacin cientfica? cules son los principales impactos de su desempeo? en qu medida ha alcanzado los objetivos propuestos? qu relacin existe entre los recursos asignados y los resultados ofrecidos? Por tanto, el problema de los criterios para evaluar el desempeo de una organizacin cientfica est relacionado con lo que se considera como los productos finales de la investigacin y desarrollo. Sin embargo, tanto la multiplicidad de efectos que pueden derivarse de la accin de una organizacin de investigacin, como su intangibilidad en trminos de su medicin, a veces dificultan su introduccin en la prctica evaluativa.

CRITERIOS DE EVALUACIN
Para la evaluacin de una organizacin Ernest House5 plante varios modelos en los que trat de sintetizar la gama de posibilidades que ofrece la teora evaluativa para abordar este problema. En la tabla se muestra la taxonoma de los principales modelos de evaluacin. De acuerdo con lo planteado por Mirabal en 1994,6 los que ms se ajustan al propsito de evaluar una organizacin de investigacin son el de toma de decisiones y el de goal-free. En ambos casos, el enfoque del modelo est centrado en la efectividad del objeto evaluado. Tanto en uno como en otro, el enfoque est asociado con los resultados o productos finales del objeto evaluado, por lo que la referencia habr que buscarla en el

entorno socio-econmico de la organizacin cientfica. Se entiende por entorno el conjunto de todos los elementos que influyen de una forma u otra en el intercambio, la entidad de investigacin y los diferentes componentes sociales a los cuales sirve. De esta manera, el entorno comprende la dimensin social, econmica, cientfica, poltica y tecnolgica de la actividad de la organizacin, al mismo tiempo que incluye elementos como empresas, agencias gubernamentales, organizaciones sociales, la opinin pblica y la propia comunidad cientfica, entre otros. A los efectos de nuestro anlisis, se puede plantear la existencia de una estrecha interdependencia entre la actividad del organismo cientfico y los diferentes componentes de su entorno s o c i o - econmico. Esta interpelacin determina en gran medida la propia existencia de la organizacin, por lo que en ltima instancia, la evaluacin de su desempeo est dada por la forma en que dicho entorno percibe y valora su actuacin, as como la envergadura y efectividad de los impactos que se producen como consecuencia de su accin. El impacto socio-econmico de la labor de una organizacin cientfica de investigacin se puede expresar a partir de los criterios generales expresados por Weinberg.7 El impacto cientfico y tecnolgico expresa la capacidad que ha tenido la organizacin para contribuir a la consecucin de nuevos descubrimientos o avances en un campo del conocimiento y su incidencia en el progreso cientfico o desarrollo tecnolgico. En qu medida ha servido de base para el mejoramiento de aplicaciones tecnolgicas a la solucin de problemas sociales. Aplicado esto a la Industria Farmacutica cubana, se pueden considerar como impactos cientficos el

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desarrollo alcanzado por la biotecnologa, el desarrollo de nuevos medicamentos, la sntesis de sustancias qumicas farmacolgicamente activas, la inmunologa molecular, el desarrollo de anticuerpos monoclonales, las tecnologas de avanzada y la produccin de vacunas, entre otros, que han dado lugar a un gran nmero de patentes, publicaciones, informes tcnicos, as como la formacin de un personal cientfico con la capacidad adecuada.8 Los impactos econmicos comprenden todos aquellos efectos econmicos directos e indirectos logrados a partir de los resultados de la organizacin de investigacin, ya sea en trminos de rentabilidad de nuevas aplicaciones tecnolgicas o de otro tipo de beneficios econmicos derivados de su labor. En este aspecto, se puede referir a la introduccin de la produccin de medicamentos para sustituir importaciones, desarrollados por los cientficos de la industria y que representan un ahorro significativo de divisas para el pas; la exportacin de vacunas y medicamentos genricos, con la consiguiente entrada de divisas; la asesora tcnica tanto en el extranjero como en instituciones nacionales que han ofrecido nuestros cientficos permitiendo as un aporte econmico de significativa importancia, por slo nombrar algunos de ellos. El reconocimiento social trata de expresar en qu medida las diferentes audiencias que componen el entorno de la organizacin perciben y valoran su desempeo, ya sea en trminos de los 2 criterios anteriores, como de la propia relevancia de la labor realizada en el marco del Sistema de Ciencia e Innovacin Tecnolgica. Un elemento importante son los emanados de la opinin pblica, expresados a partir de las diferentes instancias polticas y sociales relacionadas de una forma u otra con la labor de la

organizacin. Un ejemplo de ellos lo constituyen la participacin en programas priorizados, como el Programa contra el Cncer, el Programa de Medicamento, etc. De extraordinaria relevancia es el reconocimiento internacional y las relaciones de cooperacin de nuestros investigadores con otras instituciones nacionales y extranjeras.

CONSIDERACIONES FINALES
En el transcurso de este trabajo se ha intentado ofrecer una panormica general de las principales incursiones de las tcnicas de evaluacin en el marco del Sistema de Ciencia e Innovacin Tecnolgica como parte de las relaciones entre ciencia, tecnologa y sociedad. Se abordan 2 temas principales: qu es una organizacin cientfica? y cmo evaluar la actividad de ciencia e innovacin tecnolgica de una organizacin cientfica de la Industria Farmacutica? En el primero, al referirnos al CIDEM, ste constituye una unidad de investigacin independiente, con estructura definida, la que tiene la misin de investigar y desarrollar medicamentos basado en objetivos estratgicos concretos, que permiten evaluar la unidad por sus resultados sobre la base de la eficiencia y eficacia, y que es capaz de dar respuesta a las necesidades de la gestin de la investigacin y de la conformacin de la poltica cientfica. En el desarrollo del trabajo se describe la misin del CIDEM y los objetivos de trabajo; se destacan 2 aspectos fundamentales, el carcter permanente de la organizacin y que el carcter de su misin como organizacin delimita claramente su responsabilidad en el contexto de la ciencia y la tecnologa.

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Por otra parte, se discuten modelos de evaluacin haciendo hincapi en el entorno socio-econmico de la organizacin. Dentro del entorno se mencionan las esferas y elementos que determinan la evaluacin por los resultados o productos finales del objeto evaluado, es decir, son los componentes sociales a quien sirve la organizacin. Las necesidades sociales, econmicas, polticas y cientficas, entre otras, mediante sus demandas, expectativas y recursos, definen las misiones y objetivos, los que se cumplen por medio de programas, proyectos, personal cientfico, etc., y cuyos resultados dan lugar al impacto socio-econmico de la organizacin. Se considera que este tema reviste una importancia vital, pues sin un esfuerzo evaluativo dirigido a los productos finales de esta actividad con las perspectivas de la responsabilidad de la organizacin de investigacin, nunca podr orientarse todo el esfuerzo pblico

hacia las verdaderas necesidades e intereses del desarrollo econmico-social de un pas.9 La evaluacin no constituye un capricho ni una injerencia en los asuntos internos de la ciencia, no se tratara nunca de decir a los cientficos cmo deben realizar sus investigaciones ni a qu deben dedicarse, pues la libertad acadmica constituye un objetivo sagrado que debe ser defendido y reforzado.10 De lo que se trata es de saber qu se obtiene con el esfuerzo realizado? y cmo se revierte en el beneficio de aqullos que pagaron por ello?: los contribuyentes o el propio Estado. Con esto se refuerza la cadena ciencia-tecnologa-produccin, pues el problema no es investigar por investigar, sino lograr nuevas tecnologas que puedan ser introducidas en la produccin y la nica manera de evaluar los resultados de la investigacin es mediante su efecto social.

SUMMARY
One of the most complex problems in all those countries that carry out acitivities in the field of sciences and technoclogical innovation is to organize the evaluation of scientific research, where a series of complex and very decisive problems due to their nature are faced. It is indispensable to have elements capable of evaluating this activity from the point of view of their efficiency and of their possible utlization in order to achieve a rational use of the resources according to the interests of development. It is proposed to carry out this work in the Cuban Pharmaceutical Industry starting from the evaluation of the performance of the Research Organization as a fundamental entity, in our case, the Drug Research and Development Center (CIDEM in Spanish). The evaluation models are discussed, making emphasis on the socioeconomic context of the organization. The decision-making and the goal-free models were considered as the most effective for this type of work. Subject headings: DRUG INDUSTRY; RESEARCH/organization adn administration; CUBA; EVALUATION.

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ANEXO. Taxonoma de los principales modelos de evaluacin

Modelos

Principales audiencias o grupos de referencia Economistas, administradores Objetivos Conocimiento de causa y efecto Variables cuantificadas Planificacin de progragramas y presupuestos, programacin lineal, variacin planificada, anlisis de costo y beneficio Eficiencia

Buscar consenso en:

Metodologa

Resultado

Preguntas tpicas

Anlisis de sistemas

Son alcanzados los efectos esperados? Pueden los efectos ser alcanzados ms econmica mente? Cules son los programas ms eficientes? Est el programa alcanzando los objetivos? Est produciendo el programa? Es efectivo el programa? Qu partes son efectivas?

Objetivos de comportamiento

Administradores, psiclogos

Objetivos preespecificados Variables cuantificadas de resultados Objetivos generales, criterios Consecuencias, criterios Crticas estndares Revisin crtica Control, anlisis lgico, modus operandi Encuestas, cuestionarios, entrevistas, variacin natural

Objetivos de comportamiento, pruebas de resultados

Productividad, responsabilidad

Toma de decisiones

Decisores, especialmente administradores Consumidores Expertos, consumidores

Efectividad, control de calidad

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Prefesionales, pblico Criterios, panel Procedimientos Procedimientos y juicio Revisin por panel, autoestudio Procedimientos quasi-legal Estudio de casos, entrevistas, observaciones Jurado Clientes, practicantes Negociaciones, actividades

Goal-free

Seleccin de consumi- Cules son todos los dores, utilidad social efectos? Estndar mejorados, Debera la crtica aprobar elevada apreciacin este programa? Se ha incrementado la apreciacin de la audiencia? Aceptacin profesional Resolucin Cmo deberan los profesionales ranquear este programa? Cules son los argumentos a favor y en contra del programa? Comprensin diversa Cmo se ve el programa por diferentes personas?

Crtica de arte

Revisin profesional

Quasi-legal

Estudio de caso

Tomado de: House ER. Evaluating with validity. Sage Publication. London: Beverly Hills; 1980

REFERENCIAS

BIBLIOGRFICAS

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Recibido: 25 de enero del 2000. Aprobado: 24 de febrero del 2000. Lic. Rafael Diego Len Rodrguez. Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos. Ave 19 de Mayo No. 13 esquina a amzaga, municipio Plaza de la Revolucin, Ciudad de La Habana, Cuba.

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Rev Cubana Farm 2000;34(2):147-51

Farmacodivulgacin FRMACOS PARA LA HIPERTENSIN *

Inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina Los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA) (benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, moexipril, quinapril, ramipril y trandolapril) son eficaces y bien tolerados en el tratamiento de la hipertensin. Son menos eficaces en los pacientes de la raza negra. No producen efectos adversos sobre la lipidemia o la tolerancia a la glucosa. Algunos de estos frmacos han prolongado la supervivencia en los pacientes con insuficiencia cardiaca o disfuncin ventricular izquierda tras un infarto de miocardio y han preservado la funcin renal de los pacientes diabticos (Freis ED, Papademetriou V, Drugs 1996;52:1). Tambin pueden preservar la funcin renal de los pacientes con nefropata no diabtica (The GISEN Group, Lancet 1997;349:1857). Los pacientes hiperrennicos pueden presentar respuestas hipotensoras excesivas a los inhibidores de la ECA; entre ellos se incluyen los hipovolmicos, los tratados con diurticos y aqullos afectados de hipertensin renovascular o insuficiencia cardiaca congestiva. Los pacientes con afeccin renovascular bilateral, en quienes la perfusin renal se mantiene con ttulos elevados de angiotensina II, pueden desarrollar insuficiencia renal aguda al utilizar inhibidores de la ECA. Estos frmacos producen con frecuencia tos. Pueden dar lugar a hiperpotasemia, especialmente en los pacientes tratados con suplementos de potasio o diurticos ahorradores de potasio o los efectos de deterioro renal. Del 0,1 al 0,2 % de los pacientes se produce un angioedema. Los inhibidores de la ECA no deben utilizarse durante el embarazo debido al riesgo de lesiones fetales y muerte, pero la exposicin a un inhibidor de la ECA durante la concepcin o al principio del embarazo parece ser inocua ( Lip GYH y otros. Lancet 1997;350:1446).

Bloqueadores del receptor de la angiotensina El losartn, el valsartn, el irbesartn, el candesartn (The Medical Letter, 1998; 40:109) y el telmisartn, que inhiben la unin de la angiotensina II a los receptores AT, son eficaces en la disminucin de la presin arterial sin causar tos. No se ha establecido si ofrecen el
*

Tomado de Medicamentos y Teraputica 1999;18(3):44-9.

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mismo grado de proteccin cardiaca y renal que los inhibidores de la ECA. Se ha descrito una disfuncin heptica con el losartn y el valsartn. Raramente se ha producido angioedema. Al igual que los inhibidores de la ECA, estos frmacos son menos eficaces en los pacientes de la raza negra y no deben utilizarse durante el embarazo. Bloqueadores adrenrgicos Los bloqueadores adrenrgicos son eficaces en el tratamiento de la hipertensin, pero tambin pueden ser menos eficaces en los pacientes de la raza negra. Un bloqueador solo podra ser menos eficaz que un diurtico en el tratamiento de la hipertensin en los ancianos. El propranolol, el timolol, el nadolol, el pindolol, el penbutolol y el carteolol son bloqueadores no selectivos. A dosis bajas, el etoprolol, el acebutolol, el atenolol, el betaxolol y el bisoprolol son cardioselectivos, con un efecto ms pronunciado sobre los receptores adrenrgicos cardiacos (1) que sobre los receptores de los bronquios y los vasos hemticos (2). Estos frmacos se tornan menos selectivos al aumentar las dosis, e incluso a dosis bajas pueden causar broncoespasmo en los pacientes con asma. El pindolol, el acebutolol, el pembutolol y el carteolol tienen actividad simpaticomimtica intrnseca. A diferencia de otros bloqueadores , no suelen aumentar las concentraciones de triglicridos ni reducir la de colesterol-HDL. Adems, pueden reducir la presin arterial con un efecto menor sobre la frecuencia cardiaca en reposo y pueden ser preferibles en los pacientes que desarrollan bradicardia sintomtica con otros bloqueadores . El labetalol combina el bloqueo no selectivo y la actividad sinpaticomimtica intrnseca con el bloqueo de los receptores adrenrgicos . Reduce la presin arterial ms rpidamente que otros bloqueadores y es tan eficaz en los pacientes de la raza negra como blanca; no modifica la lipidemia. Se ha descrito toxicidad heptica y la hipotensin ortosttica es ms frecuente que con otros bloqueadores . El carvedilol tambin es un bloqueador adrenrgico y no selectivo, pero no tiene actividad sinpaticomimtica intrnseca. Se ha utilizado ms en el tratamiento de la insuficiencia cardiaca que en el de la hipertensin.

Calcioantagonistas Los calcioantagonistas causan vasodilatacin, lo que reduce las resistencias perifricas. La respuesta cardiaca a una disminucin de la resistencia vascular es variable. Con algunas dihidropiridinas (felodipina, nicardipina, nisoldipina y nifedipina de liberacin inmediada) se produce un aumento inicial reflejo de la frecuencia cardiaca, pero la isradipina, el verapamilo, el diltiazem, la nifedipina de liberacin prolongada y la amlodipina tienen poco o ningn efecto sobre este parmetro. El verapamilo y el dildazem disminuyen la frecuencia cardiaca, pueden alterar la conduccin auriculoventricular y deben utilizarse con precaucin en pacientes tratados simultneamente con un bloqueador adrenrgico . Los calcioantagonistas de accin corta, especialmente la nifedipina, no deben utilizarse en el tratamiento de la hipertensin (The Medical Letter 1998; 39:13). Los calcioantagonistas deben utilizarse con precaucin en los pacientes con insuficiencia cardiaca. En un estudio, el tratamiento de la hipertensin sistlica aislada en pacientes ancianos con nitrendipina, un calcioantagonista

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dihidropiridnico no disponible en los Estados Unidos, redujo la incidencia de afecciones cardiovasculares (JA.Staessen y otros, Lancet 1997;350:757; J. Tuomilehto y otros, N ngl J Med 1999; 340:677). Los calcioantagonistas no modifican la lipidemia.

Diurticos Los diurticos han reducido la mortalidad en los pacientes con hipertensin. Se ha demostrado que los diurticos tazdicos reducen la incidencia de accidentes cerebrovasculares y cuadros cardiovasculares en los ancianos con hipertensin sistlica aislada (SHEP Cooperative Researcb Group, JAMA 1991;265:3255). En el tratamiento de la hipertensin se utilizan muchos diurticos tiazdicos. La hidroclorotiazida y la clortalidona son los ms frecuentemente utilizados. La metolazona y la indapamida pueden ser eficaces en los pacientes con deterioro de la funcin renal cuando los tiazdicos no lo son. Muchos pacientes, especialmente los ancianos, pueden tratarse con dosis bajas de diurticos equivalentes a 12,5-25 mg de hidroctorodazida una vez al da. Dosis de tan slo 6,25 mg se utilizan para potenciar la eficacia de otros frmacos reduciendo al mnimo el riesgo de efectos adversos como la hipopotasemia. Los diurticos de asa pueden utilizarse para tratar la hipertensin en los pacientes con insuficiencia renal (depuracin de creatinina inferior a 30-50 cm3/mL). En los pacientes sin insuficiencia renal previa pueden ser menos eficaces que los tiazdicos en el tratamiento de la hipertensin. Los diurticos ahorradores de potasio se utilizan junto con otros diurticos para prevenir o corregir la hipopotasemia. Estos frmacos pueden causar hipopotasemia, especialmente en los pacientes con insuficiencia renal y en los que toman otros frmacos que reducen la secrecin de aldosterona, como los inhibidores de la ECA y los bloqueadores del receptor de la angiotensina.

Asociaciones Las asociaciones de dosis fijas facilitan el tratamiento y pueden mejorar el cumplimiento. Tambin pueden causar menos reacciones adversas que los frmacos tomados por separado.

Agonistas adrenrgicos centrales Frmacos como la clonidina, el guanabenzo, la guanfacina y la metildopa no inhiben las respuestas reflejas tanto como los frmacos simpaticolticos perifricos, pero suelen causar sedacin, xerostoma y depresin.

Bloqueadores adrenrgicos La prazosina, terazosina y doxazosina causan menos taquicardia que los vasodilatadores directos (hidralazina, minoxidil), pero ms frecuentemente hipotensin postural, especialmente

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tras la primera dosis. A diferencia de los diurticos y los bloqueadores , los bloqueadores no alteran desfavorablemente los lpidos. Pueden aumentar el cociente colesterol-HDL/colesterol total. Los bloqueadores pueden aliviar los sntomas de prostatismo, pero pueden causar incontinencia de estrs en las mujeres, y la incidencia de hipotensin postural es ms elevada en los ancianos.

Vasodilatadores directos Los vasodilatadores directos causan frecuentemente taquicardia refleja, pero raramente producen hipotensin ortosttica. Normalmente se deben administrar con un bloqueador o un frmaco de accin central para reducir al mximo el aumento reflejo de la frecuencia cardiaca y el trabajo cardiaco, y junto con un diurtico de asa para prevenir la retencin de agua y sodio. Deben evitarse en los pacientes con arteriopata coronaria. La dosis de mantenimiento de hidralazina debe limitarse a 200 mg/d para reducir el riesgo de reaccin lupoide. El minoxidilo, un frmaco potente que pocas veces fracasa en la disminucin de la presin arterial debe reservarse para la hipertensin grave resistente a otros frmacos. Suele causar hirsutismo y puede dar lugar a retencin hdrica grave.

Antagonistas perifricos de las neuronas adrenrgicas Estos frmacos pueden causar efectos adversos problemticos. La reserpina es un antihipertensivo barato y eficaz (Fraser HS, Clin Pharmacol Ther 1996;60:368); a dosis superiores a las recomendadas puede causar depresin grave. La guanetidina suele disminuir el trabajo cardiaco y puede reducir la presin sistlica ms que la diastlica; frecuentemente produce hipotensin postural y de esfuerzo que empeora por la vasodilatacin secundaria a un entorno caluroso, el ejercicio o la ingesta de alcohol. El guanadrel es parecido a la guanetidina pero tiene una accin mucho ms corta.

Eleccin de frmacos Los frmacos mejor tolerados en el tratamiento de la hipertensin son los diurticos (especialmente a dosis bajas), los bloqueadores adrenrgicos , los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, los bloqueadores del receptor de la angiotensina y los calcioantagonistas. Los diurticos solos y asociados a bloqueadores reducen la mortalidad en los hipertensos, como han demostrado grandes estudios clnicos (JNC VI. Arch Inter Med 1997;157:2413). Algunos consultores de The Medical Letter, pero no todos, creen que los calcioantagonistas deben reservarse para los pacientes que no responden o no toleran los diurticos, los bloqueadores o los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina. En algunos tipos especiales de pacientes ciertos frmacos pueden tener ventajas. Los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina deben considerarse en pacientes con diabetes, especialmente si presentan nefropata, o insuficiencia cardiaca congestiva o disfuncin ventricular izquierda. Los bloqueadores pueden ser la mejor eleccin en los

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hipertensos con angina de pecho o migraa y los que han padecido un infarto de miocardio. En los pacientes con hiperlipidemia, un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina, un bloqueador o un calcioantagonista seran una buena eleccin. Los diurticos y los calcioantagonistas son ms eficaces que los bloqueadores , los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina y los bloqueadores del receptor de la angiotensina en los pacientes de la raza negra. Un diurtico con o sin un bloqueador adrenrgico o bien un calcioantagonista dihidropiridnico de accin corta son preferibles en los ancianos con hipertensin sistlica aislada. Incluso si se escogen atentamente los frmacos para ajustarse a las necesidades individuales, la respuesta de cada paciente puede ser distinta. Si el frmaco escogido en primera eleccin es ineficaz o mal tolerado, debe cambiarse por otro de una familia farmacolgica distinta. Si es necesario ms de un frmaco e inicialmente no se utiliz un diurtico, la mayora de los consultores de The Medical Letter aaden un diurtico.

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