FAMILIA CORYNEBACTERIACEAE

INTRODUCCION: La familia Corynebacteriaceae esta formada por un gnero, Corynebacterium que contiene bacilos rectos o ligeramente curvados, aerobios y facultativos. Tambin se ven formas en maza. Las bacterias permanecen unidas despus de la divisin crepitante, lo que tiene como consecuencia disposiciones de las clulas en ngulo, o una disposicin en empalizada en la que se alinean hileras de clulas unidas por sus caras laterales. Debido a que la separacin celular no suele ser compIeta en las primeras fases de la divisin, se presentan en L. X. V. Y. en empalizada o adoptando una configuracin especial que recuerda las letras chinas. Son inmoviles. No esporulados y con alguna ligera tendencia a la ramificacin. Son catalasa-positivos, y a pesar de considerarse como anaerobios facultativos, crecen mejor en aerobiosis y producen un velo superficial en los medios lquidos. No son acido-alcohol resistentes, pero presentan rasgos comunes con micobacterias y nocardias, ya que su pared contiene cido mesodiaminopimlico, arabinosa, galactosa y cidos miclicos. Aunque algunas especies son saprofitos inocuos, muchas corinebacterias son patgenas de plantas y animales. Por ejemplo, C. diphtheriae es el agente causante de la difteria en humanos, el cual produce una potente exotoxina causante de la difteria humana.

OBJETIVOS: Estudiar y conocer las caractersticas generales y su clasificacin de la familia Corynebacteriaceae. Estudiar las caractersticas Corynebacterium. diferenciales y especies del genero

Estudiar los aspectos morfolgicos, fisiolgicos, antignicos determinantes de patogenicidad de la especie C. diphtheriae.

FAMILIA CORYNEBACTERIACEAE Una familia de bacilos Gram positivos de morfologa irregular, crecimiento aerbico, no esporulados y no son cido-alcohol resistentes, compuestos de varillas generalmente no mviles, a veces con cuentas o bandas con grnulos metacromticas. Contiene el gnero Corynebacterium CLASIFICACION CIENTIFICA: Segn el Manual de Bergey de Bacteriologa Sistemtica 2da edicin ubica a Corynebacterium en el volumen 4: Bacterias Gram positivas con alto contenido de G+C.
Clasificacin cientfica Dominio: Filo: Clase : Subclase: Orden : Suborden: Familia: Gnero: Bacteria Actinobacteria Actinobacteria Actinobacteridae Actinomycetales Corynebacterineae Corynebacteriaceae Corynebacterium

Manual de Bergey de Bacteriologa determinativo 9na edicin: Categora II: Bacteria Gram (+) con pared celular. Grupo 20: Bacilo Gram (+) no esporulantes irregulares.

GENERO CORYNEBACTERIUM: La diferenciacin entre el gnero Corynebacterium de otras bacterias corineformes est en la positividad de la catalasa, la negatividad de la motilidad, citrato, hidrlisis de gelatina y esculina; no esporuladas; son aerobias o anaerobias facultativas, quimioorganotrofos. La tincin de Gram muestra bacilos Gram positivos rectos o irregulares ligeramente curvados con lados no paralelos y a veces con extremos ensanchados, dando el tpico aspecto de maza, cuyo tamao oscila entre 2-6

micrmetros de longitud y 0,5 micrmetros de dimetro, a menudo con la tpica forma de V (lo que tambin se denomina forma de letras chinas), aunque tambin aparecen formas elipsoidales. Tincin de Gram (izda.) y microscopa de barrido (dcha.) de Corynebacterium spp.

Este gnero incluye especies con metabolismo fermentativo y no fermentativo u oxidativo. Algunas especies son lipfilas, es decir, requieren la presencia de lpidos para su desarrollo en medios de cultivo. Con respecto a los requerimientos nutricionales, todos ellos necesitan biotina para su crecimiento y algunas cepas requieren adems tiamina y cido p-aminobenzoico (PABA). La bacteria crece en caldo simple, medio de Loeffler, agar sangre y telurito potsico (AST), formando colonias pequeas grisceas de aspecto granuloso, traslcidas con centros opacos, convexas con bordes continuos. El color tiende a ser blanco amarillento en los medios de cultivo de Loeffler. En AST, el organismo puede formar colonias grises con centros negros y bordes dentados dando la apariencia de flores (C. gravis), otras tienen bordes contnuos (C. mitis), mientras que otras tienen bordes intermedios entre continuas y dentadas (C. intermedium). Desde el punto de vista quimio taxonmico, las bacterias del gnero Corynebacterium contienen en su pared arabinosa, galactosa y cido mesodiaminopimlico (m-DAP), cidos miclicos de cadena corta con 22 a 36 tomos de carbono, a excepcin de C. amycolatum, C. atypicum y C. kroppenstedtii. Los principales cidos grasos celulares son el cido palmtico, oleico y esterico. El contenido habitual de guanina ms citosina (G+C) en el ADN del gnero Corynebacterium est en un rango entre 51 y 63 mol %, indicando la gran diversidad de este gnero. La relacin filogentica fue establecida en 1995 (Ruimy et al., 1995; Pascual et al., 1995) crendose una amplia base de datos para futuros estudios comparativos de la secuenciacin del gen 16S rARN, y poder incluir o excluir miembros en este gnero.

 De las 68 especies de corinebacterias descritas en total: 31 se han aislado de forma exclusiva en humanos, 24 nunca en humanos (15 solo en animales y 9 solo en vegetales o ambiente) y 14 en humanos y adems en animales o vegetales y/o ambiente, que se exponen a continuacin: C. diphtheriae C. amycolatum (mastitis en vaca) C. aquaticum C. bovis (pielonefritis y mastitis en bvidos) C. caspium C. equi C. glutamicum C. haemolyticum C. jeikeiun C. parvum (tambin llamada Propionibacterium acnes) C. pseudodiptheriticum (tambin llamada C. hofmannii) C. pseudotuberculosis (quidos, bvidos, vidos) C. pyogenes C. urealyticum C. renale C. striatum C. tenuis C. ulcerans (mastitis en vaca, exudado nasofarngeo de perro y gato). C. xerosis (cerdo y cabra) C. mucifaciens (polvo del ambiente en granjas) Dos subespecies: C. afermentans subsp. afermentans y C. afermentans subsp. lipophilum. Biotipos de C. diphtheriae: gravis, mitis, intermedius.

Corynebacterium diphtheriae: Corynebacterium diphtheriae, tambin conocido como bacilo de Klebs-Lffler es el bacilo causante de la difteria, fue descubierto en 1884 por el patlogo Edwin Klebs y el bacterilogo Friedrich Lffler. Segn el Manual de Bergey de Bacteriologa Sistemtica 2da edicin, ubica a Corynebacterium diphtheriae en el volumen 4: Bacterias Gram positivas con alto G+C. I. HABITAT: Se encuentran en el suelo y el agua; en el ser humano la localidad primaria es en el tracto respiratorio superior, tambin en la mucosa y piel del hombre y de los animales. II. ASPECTOS MORFOLOGICOS: C. diphtheriae es un microrganismo Gram positivo delgado en forma de bastn que no es acido resistente y no forma esporas, no capsulado. Las clulas miden entre 1.5 y 5um de largo y de 0.5 a 1 um de ancho. En frotis teidos aparecen en empalizadas o como clulas individuales que yacen en ngulos agudos unos con otras en formaciones en V y en L. Estas presentaciones similares a letras chinas son causadas por el movimiento quebrado que se produce cuando dos clulas se dividen. Cuando proliferan en medios de nutricin complejos con velocidad mxima, los bacilos diftricos son uniformes. En cambio, cuando proliferan en medios sub ptimos, como por ejemplo suero coagulado de Loffler o medio con huevo coagulado de Pai, las clulas son pleomrficas y se tien de forma irregular con azul de metileno o con azul de toluidina. Son frecuentes las formas en cuentas y barras, as como los engrosamientos en forma de palo de golf. Los grnulos metacromticos (de Babes-Ernst) responsables del aspecto en cuentas representan cmulos de polifosfatos polimerizados.

Coloracin Gram para Corynebacterium diphtheriae

III. ASPECTOS FISIOLOGICOS: Caractersticas de su cultivo: C. diphtheriae es un microrganismo aerobio y anaerobio facultativo pero crece mejor en condiciones aerobias. Se requieren medios complejos para el aislamiento primario y la caracterizacin. La mayor parte de las cepas crecen como una pelcula seria en la superficie de los medios lquidos. En medio con suero coagulado de Loeffler, til para el aislamiento primario del microrganismo, luego de 12 a 24 hs de incubacin a 37C aparecen diminutivas colonias brillantes, de color blanco grisceo. El medio de Loffler tambin es til porque no permite el crecimiento de los estreptococos y los neumococos que pueden estar presentes en la muestra clnica. Cuando se incorporan sales de telurito a los medios utilizados para el aislamiento primario tambin se reducen el nmero de contaminantes. En el medio de telurito las colonias de C. diphtheriae adoptan un color negro o gris caracterstico y se pueden diferenciar tres tipos principales de colonias: Gravis, Mitis, Intermedius. Las colonias de las cepas gravis son grandes y planas, 1.5-2.5 mm; de color gris a negro, con superficie opaca, centro elevado, bordes irregulares. Los microrganismos mitis producen colonias de tamao mediano que son mas pequeas, 1.5 2 mm; negras, brillantes, mas convexas y redondas. Las colonias de cepas intermedius son muy pequeas, 0.5-0.75 mm; lisas o rugosas, centro elevado, borde sinuoso, griscea. El ion telurito atraviesa la membrana celular hacia el citoplasma, donde es reducido a telurio metlico y precipitado. No existe una relacin constante a la severidad de la enfermedad y los tres tipos de colonias. Medio Agar Sangre: C. diphtheriae var. Intermedius: ms pequeas, planas, cremosas, transparentes, no hemolticas. C. diphtheriae var. Mitis y C. diphtheriae var. Gravis: ms grandes, convexas, dbil beta hemlisis. Corynebacterium diphtheriae en Agar Columbia con 5% de sangre de carnero citratada. Cultivo de 24 horas, 37C en una atmsfera enriquecida con 5% de dixido de carbono

Medio Agar Sangre Cistina Telurito: Corynebacterium diphtheriae reduce el telurito del medio a telurito metlico, el cual precipita y produce el desarrollo de colonias negras, gris acero, de 1 a 3 mm de dimetro. El aspecto de las colonias es orientador de los posibles biotipos. C. diphtheriae var. Intermedius: Colonias negras planas y pequeas. C. diphtheriae var. Mitis y C. diphtheriae var. Gravis : Colonias negras, ms grandes, convexas, lisas y brillantes

Medio Agar Tinsdale: Este medio de cultivo se utiliza para la deteccin de la enzima cistinasa y es de utilidad para la identificacin presuntiva de C. diphtheriae. El medio agar Tinsdale contiene telurito y cistina. La cistinasa produce sulfuro de hidrgeno a partir de la cistina, el cual reacciona con el telurito formando un halo marrn difuso alrededor de una colonia negra, luego de incubar a 37 C durante 24-48 hs. Otras especies de corinebacterias pueden dar colonias negras, pero sin la formacin del halo marrn. Izquierda: C. diphtheriae, produce sulfuro de hidrogeno con formacin de halo marrn alrededor de la colonia. Derecha: C. xerosis, no produce sulfuro de hidrogeno

Metabolismo de C. diphtheriae: Oxidativo- fermentativo. Catalasa (+). Ureasa (-). Gelatinasa (-). Fermentacin de glucosa (+). F. de maltosa (+). F. de sacarosa (-). F. de lactosa (-). Reduccin de nitratos (+). F. de trehalosa (-). Produccin de cistinasa en el medio Tinsdale (+). Resistencia: C. diphtheriae es mas resistente a la accin de la luz, la desecacin y el congelamiento de la mayor parte de los bacilos no formadores de esporas. Los microrganismos pueden resistir por lo menos 14 semanas en fragmentos secos de seudomembranas. Sin embargo, los grmenes son destruidos con facilidad y rapidez al ser expuestos a 100C durante un minuto o a 58C durante 10 minutos. Son susceptibles a casi todos los desinfectantes de uso habitual. IV. ASPECTOS ANTIGENICOS: C. diphtheriae es una especie heterognea desde el punto de vista antignico. En pruebas de aglutinacin con suspensiones de clulas enteras se observan un gran nmero de tipos serolgicos. Los tres tipos principales de colonias gravis, mitis e intermedius reflejan diferencias en la superficie celular y constituyen los principales biotipos del microrganismo. Dentro de cada uno de estos biotipos se encuentran un grupo ms o menos separado de serotipos aglutinantes. Tambin se han detectado diferencias adicionadas en los componentes de la superficie celular por medio de pruebas ms sensibles de tipificacin con bacterifagos y produccin de bacteriocina. No obstante, y sin importar el tipo, todas las cepas toxigenicas producen una toxina que es idntica desde los puntos de vista biolgicos e inmunolgicos. ANTIGENO K: Los antgenos responsables de la especificidad del tipo de las cepas de C. diphtheriae son protenas termolbiles, los antgenos k, localizados en las capas superficiales de la pared. Estos antgenos desempean un papel importante de la inmunidad antibacteriana y en la hipersensibilidad, aparte de la inmunidad antitxica. Es probable que la aparicin de tipos antignicos diferentes de C. diphtheriae explique el desarrollo de diphtheria en pacientes inmunizados que presentan un nivel detectable de antitoxina circulante. Los antgenos k localizados sobre la superficie, junto con el factor cordn glicolipdico, son los principales determinantes de la invasibilidad y la virulencia de los bacilos diftricos. ANTIGENO O: El antgeno O termostable es un antgeno de grupo comn a las corinebacterias parasitas del ser humano y de lo animales. Se trata de un polisacrido que contiene arabinogalactanos y es el antgeno responsable de la reactividad cruzada con micobacterias y nocardias. Las clulas de las

corinebacterias y todos sus componentes subcelulares son antgenos excelentes. Cuando se las administra a los animales con agentes inmunizantes, tambin actan como adyuvantes. V. DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD: Existen varios factores de patogenicidad: El antgeno K. cord factor. Hialuronidasa, neuraminidasa y ADNasa. Que contribuyen a que la bacteria invada la superficie de las membranas mucosas de las vas respiratorias altas, desde donde liberan la toxina. Aunque no produce hemolisina difusible, en medios de agar-sangre puede dar una pequea zona de hemolisis situada debajo o alrededor de las colonias. Esta hemolisina no tiene un papel demostrado en la patognesis de la enfermedad. Antgeno K: Es antifagocitario. Cord factor: Es un glicolpido txico (6,6' diester de trehalosa), que posee los cidos micolicos caractersticos de C. diphtheriae: Acido corinemiclico (C32H6203) y corinemicolnico (C32H6403)' Su actividad farmacolgica es similar al cord factor aislado de Mycobacterium tuberculosis. En el ratn lesiona las mitocondrias, disminuye los procesos de respiracin y fosforilacin, y ocasiona la muerte celular. Hialuronidasa y ADNasa: Son factores de difusin que contribuyen al edema, necrosis y hemorragia. Neuraminidasa: Degrada los residuos de acido N-acetilneuramnico, que existen en las clulas de epitelio y favorece, por tanto, la colonizacin. Exotoxina La sntesis de toxina diftrica esta en relacin con un mecanismo controlado por el gen de un fago, que convierte la bacteria receptora en lisogena y Ie confiere al mismo tiempo el carcter toxignico. Existe, por tanto, correlacin entre lisogenia y toxinogenesis. La presencia del carcter txico se debe a que llevan un gen estructural responsable de l, el gen tox. Las cepas toxignicas (tox +) son portadoras del profago B y las no toxigenicas (tox-) pueden convertirse en toxigenicas por lisogenizacin con el fago temperado. En definitiva, la toxina se produce por las cepas de C. diphtheriae lisgenas para el bacterifago B, que es el que lleva el gen estructural tox. El gen tox se ha detectado tambin en otros corinebacterifagos diferentes genticamente, que hace suponer que el gen tox esta muy difundido en la poblacin de corinebacterifagos. La regulacin de la sntesis de la toxina diftrica es compleja. Las cepas de C. diphtheriae toxigenicas varan ampliamente en su capacidad de producir aquella. Adems, esta influida por las condiciones ambientales y del medio de cultivo. La sntesis y liberacin de toxina se inhiben cuando se incrementa el contenido de hierro inorgnico.

El modelo que a nivel molecular se ha propuesto reflejar la regulacin de la produccin de toxina es el siguiente: C. diphtheriae posee un gen (ctr) que lleva la informacin estructural para la sntesis de un aporrepresor tox (ar). En presencia de hierro puede formarse un complejo represor hierro (rte) y unirse especficamente al locus operador tox del fago. En condiciones de escaso contenido de hierro, el complejo hierro-represor puede disociarse y el gen tox deja de estar reprimido. Propiedades La toxina diftrica se produce y se libera hacia el exterior en forma de una simple cadena polipeptdica, de peso molecular de 61.000 daltons. Esta cadena, que integra no es toxica, posee dos puentes disulfuro, uno de los cuales se hidroliza fcilmente por la tripsina y proteasas bacterianas, lo cual hace que la toxina adquiera propiedades txicas y aparezcan dos fragmentos A y B. En el fragmento B existe un puente disulfuro, que, cuando se rompe, da lugar a dos cadenas y consiguiente perdida de la mayor parte de la toxicidad. Las propiedades biolgicas de los dos fragmentos A y B son distintas, pero ambos son necesarios para la accin toxica en las clulas animales y cultivos celulares. El fragmento A tiene un peso molecular de 21.000, es el fragmento enzimticamente activo que penetra en el interior de las clulas y es, adems, responsable de la inhibicin de la sntesis proteica. El fragmento B es esencial para la unin de la toxina a las clulas eucariotas y el paso del fragmento A al citoplasma. Los animales varan en su sensibilidad a la toxina diftrica. Esta es letal para el hombre, conejo y cobayo. Las ratas y ratones son ms resistentes, posiblemente a causa de que sus clulas muestran algn defecto en la unin de la toxina a los receptores de la membrana celular o en el transporte al interior de la clula del fragmento A.

Modo de accin: Aunque no se conoce la naturaleza de los receptores de la membrana celular ni el mecanismo por el que el fragmento A atraviesa esta, ciertos datos indican que el receptor especfico puede ser una glicoprotena que contiene un oligosacrido. Se ha sugerido que se produce una interaccin entre estos receptores especficos de la membrana (HB-EGF) y el residuo terminal COO- del fragmento B. A continuacin se produce un cambio estructural en la toxina, que la hace hidrofbica, permitiendo la insercin del fragmento B en la membrana, el cual abrir un canal par el que posteriormente se introduce el fragmento A hacia el citoplasma. El fragmenta B permanece por fuera de la membrana. La toxina diftrica por medio de su fragmento A inhibe la sntesis proteica de las clulas eucariotas sin inhibicin de otras funciones metablicas ni dao evidente de la membrana celular. El fragmenta A inhibe la elongacin de la cadena polipeptdica, siempre y cuando exista nicotinamida-adenin-dinucletido (NAD), inactivando el factor de elongacin 2 (FE-2), que es necesario para la translocacin del polipeptidil- tRNA desde el receptor al sitio donante de los ribosomas eucariticos. El fragmento A, al inactivar el factor FE-2, cataliza una reaccin que libera nicotinamida libre, mas un complejo inactivo de FE-2-ADPR (adenosin-difosfo-ribosa). La reaccin que cataliza, en definitiva, la toxina diftrica es la siguiente: FE-2 + NAD~ ADPR - FE-2 + nicotinamida + H El fragmento A cataliza la transferencia de ADP-ribosa desde el NAD al factor de elongacin 2 (EF-2) de la clula eucariota. Se inhibe la funcin de EF-2 en la sntesis de protenas, lo que causa la muerte de la clula.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: Prescott, L.M., J.P. Harley y D.A. Klein. MICROBIOLOGA. McGraw-Hill Interamericana. 7 edicin. Madrid. 1999 JOKLIK, W.K; H.P. WILLET Panamericana. Buenos Aires. (1997) Microbiologa de Zinsser. Ed.

MADIGAN, MICHAEL T; MARTINKO, JOHN M.; PARKER, JACK. 2004. Microbiologa de Brock. 10 edicin. Prentice Hall. Pumarola A, Rodriguez-Torres A, Garca-Rodriguez JA, Pidrola-Angulo G. Microbiologa y parasitologa mdica.2da ed. Barcelona: Salvat; 1990. http://www.bacterio.cict.fr/c/corynebacterium.htlm. http://alumnatbiogeo.blogspot.com/2008/11/microbiologa-hasta-qu-puntosomos.html