ADN MITOCONDRIAL: Las mitocondrias son organelos intracelulares presentes en todas las clulas human as (excepto los glbulos

s rojos maduros). Las mitocondrias son esenciales para la p roduccin de energa, estn presentes en el citoplasma de las clulas y - lo que es rele vante aqu - poseen su propio ADN. Sucede que cuando ocurre el proceso de fecundacin del vulo por el espermatozoide, slo el ncleo del espermatozoide logra penetrar el vulo. En consecuencia, las mitoco ndrias (y su ADN mitocondrial) del nuevo ser engendrado provienen exclusivamente del vulo, es decir de la madre

J Forensic Sci Dent. 2011 Ene-Jun; 3 (1) : 38-45. doi: 10.4103/0975-1475.85295 PMCID: PMC3190439 Aspectos prcticos de ADN basados en estudios forenses en odontologa J Muruganandhany G Sivakumar Informacin sobre el autor Informacin de copyright y licencia Ir a: Abstracto Odontologa forense como ciencia ha evolucionado a partir de mtodos sencillos de es timacin de la edad y el anlisis de un bocado marca, a una nueva era de investigaci ones genticas y serolgicas. Anlisis de ADN en la ciencia forense requiere una muest ra o fuente de un individuo (vivo o muerto) o un delito y / o Zona incidente. La regin orofacial es una buena fuente de dicho material, debido al hecho de que ci ertos tejidos orales son relativamente resistentes a la degradacin ambiental y la destruccin por agresin trmica, elctrica y mecnica. Los dentistas pueden ser llamados a proporcionar muestras y anlisis de expertos en muchas situaciones. Las fuentes incluyen los tejidos blandos y duros de los dientes y las mandbulas, saliva, mat erial de biopsia y frotis mucosas. Las muestras de tejido se deben manejar con c uidado, y el protocolo correcto en la recoleccin y la preparacin tiene que ser seg uido. Esto asegura un alto rendimiento de la ADN requerido. Tejidos duros como l os dientes requieren procedimientos especiales para extraer el material gentico. La investigacin ha demostrado que hay una amplia variacin en la calidad y cantidad de ADN extrado de individuos diferentes del mismo sitio incluso bajo condiciones similares. Para ello se requiere la calibracin de los diferentes mtodos para logr ar mejores resultados. Anlisis de ADN puede proporcionar una identificacin muy pre cisa si se usa correctamente. He aqu una descripcin de las diversas fuentes en la regin oral se ha facilitado desde el cual era posible enviar las muestras al labo ratorio forense. Tcnicas ms comnmente empleados de recogida y manipulacin de los pro cedimientos de laboratorio se han esbozado. Palabras clave: ADN, odontologa forense, saliva, dientes Ir a: Introduccin Los profesionales dentales estn siendo cada vez ms utilizado en la evaluacin de exp ertos y testimonio en procedimientos judiciales. A medida que la frontera entre la ciencia forense y odontologa forense desdibuja en parte debido a los avances t ecnolgicos, los dentistas se ven obligados a ampliar sus fronteras del conocimien to y prctica para hacer frente a situaciones difciles forenses. [ 1 , 2 ] Escenas del crimen presentar posibles fuentes de ADN de las vctimas, sospechosos, y los objetos inanimados en las proximidades [ Figura 1 ]. La fuente dando el m ayor contenido de ADN es sangre completa, sin embargo, pueden no estar disponibl es en todas las situaciones. La recogida y almacenamiento de sangre requiere un alto nivel de protocolo asptico y personal capacitado. Por otra parte, en ciertos sistemas de jurisprudencia criminal, recoleccin de sangre de un sospechoso puede ser negada debido a las leyes de privacidad. [ 3 , 4 ] Figura 1 Fuentes de ADN para el anlisis forense

Por lo tanto, las tcnicas no invasivas son ms aceptables y popular. La cavidad ora l es una fuente til de pruebas. Dentistas puede ser necesaria para proporcionar m uestras para anlisis de ADN en muchos casos. Las fuentes incluyen la saliva, hiso pos de la mucosa, y dientes [ Figura 2 ]. Figura 2 Mtodos de recogida de muestras en la regin oral Tcnicas de ADN implicar la deteccin, cuantificacin y anlisis de ADN del ncleo y las m itocondrias. El ADN nuclear es representativa de la herencia paterna y materna a la vez. El ADN mitocondrial (ADNmt) se deriva del vulo y por lo tanto puramente materna. En los dientes sobre todo, la dentina se compone de extensiones celular es (fibras Tom) ricos en mitocondrias. Dentina en polvo es por lo tanto presumibl emente una buena fuente de ADNmt. Este artculo describe varios mtodos de recogida y preparacin de muestras tomadas pa ra llegar al resultado con una dificultad mnima y retardo. Los procedimientos de laboratorio y pocos casos se mencionan. Hay una nota sobre las consideraciones ti cas y jurdicas que intervienen en los procesos de investigacin y judiciales. El diente: Manipulacin, almacenamiento y preparacin Los dientes son tiles para las pruebas que el material gentico est protegido por lo s tejidos calcificados. Se obtienen a partir de encuestas antropolgicas y de los sitios de desastre / crimen. Los dientes se limpian y se almacenan generalmente en solucin salina normal y puede o no puede ser refrigerado, dependiendo del tiem po y las instalaciones. En los dientes, las fuentes de ADN son la pulpa, dentina , cemento, fibras periodontales, y fragmentos de hueso unidos. Tejido pulpar es ms comnmente utilizado, ya que suele ser abundante y tiene menor posibilidad de contaminacin por ADN no humano. El muestreo de la pulpa se lleva a cabo de tres maneras: trituracin, separacin vertical u horizontal, y por el acces o endodntico [. 5 ] Trituracin o molienda no es aconsejable ya que no da margen para una mayor evalua cin de la morfologa de los dientes y la histologa. Adems, la muestra triturada tiene que someterse a mltiples ciclos de descalcificacin y purificacin, y la cantidad ut ilizable de ADN no puede ser obtenida. Esto se hace como ltimo recurso. Una docum entacin completa de la morfologa de los dientes, incluyendo las fotografas desde ngu los mltiples, y las radiografas, son obligatorias antes de la molienda. Dulce y Hildebrand han sido pioneros en el uso de la molienda criognica de diente s. Esta tcnica consiste en la pulverizacin de un diente limpiado en un molino cong elador refrigerado por nitrgeno lquido. Los trabajadores informaron de que su mtodo minimiza en gran medida el riesgo de contaminacin y toma tan poco como 2 min. El polvo se disuelve en una solucin tampn de proteinasa K y se incubaron durante la noche. Hibridacin slot blot se utiliz para cuantificar el ADN. El rendimiento de A DN por gramo de polvo de diente fue 18,4 g. [ 5 ] Divisin vertical o longitudinal del diente se realiza en muchos casos. Este mtodo proporciona para la excavacin fcil del tejido pulpar con toda probabilidad mnima de contaminacin. Morfologa de la corona se puede perder. La divisin se hace con disco s de carborundo, con guantes para trabajo pesado, de preferencia bajo una capuch a, como aerosol puede comunicarse con la piel o los ojos, o pueden ser inhalados . El diente se mantiene sujeta o se pueden montar en piedra dental. Los discos d e carborundo se utilizan para dividir el diente desde el borde incisal, con el l avado frecuente con agua destilada. Cuando la cavidad pulpar se alcanza, el dien te puede ser dividido por un cincel para evitar daos por calor y mecnica para el t ejido de la pulpa. La pulpa es entonces excavado y se transfirieron a viales. El diente rodajas se puede utilizar para la evaluacin histolgica [ Figura 3 ]. Figura 3 Diente de divisin para la extraccin de pulpa Divisin horizontal es esencialmente el mismo procedimiento y se realiza cuando la estructura de corona ha de ser preservada. La raz es seccionado y toma de muestr as de la pulpa, la dentina y el cemento se puede hacer. El otro mtodo es la prepa racin de una cavidad de acceso convencional en el diente y la excavacin de la pulp a utilizando un instrumento de mano apropiado. [ 5 ]

Pulpa de aislamiento de ADN Despus de que el tejido de la pulpa se obtiene, se colocan en viales de Eppendorf . Un mililitro de agua desionizada estril se aade y se centrifug tres veces a inter valos de 5 min. Un tampn de extraccin que contiene Tris HCl y EDTA, y se incuba co n proteinasa K durante 18 horas. Los contenidos estn sujetos a mltiples etapas de centrifugacin y purificacin para obtener el sedimento final. Esto se aade a un 1% e n gel de agarosa en TBE (Tris HCL, cido brico, y EDTA) y se prepararon para electr oforesis en gel. [ 6 ] Tejido pulpar es ms fcil de preparar y analizar. Sin embargo, en muchos casos, el diente se carece de la pulpa, o puede ser llenado endodnticamente. Tambin puede es tar contaminada por microorganismos, que introducen ADN no humano en la muestra. En tales casos, la dentina o del cemento se utiliza para extraer el ADN. La pos ibilidad de encontrar ADN no humano es menor en los tejidos calcificados, except o en los casos de lesiones de caries. El material orgnico se calcificado, hay ms p robabilidad de recuperacin de ADN intacto. La dentina y muestras cementum se obti enen por molienda de la raz, ya sea como un polvo puro de la dentina, o como un p olvo de dentina-cemento. El polvo se solubilizan despus y se almacenan en viales. Un procedimiento similar se sigue para la extraccin de ADN como para el tejido d e pulpa. Como se discuti previamente, la dentina en polvo es una buena fuente de ADNmt. Es to es ms til que el ADN genmico o nuclear. ADNmt tiene slo 13 genes, en comparacin co n casi 100.000 en el ADN nuclear. Las clulas contienen un alto nmero de copias de ADNmt que son sobrevivir por perodos prolongados en comparacin con el ADN nuclear. Es puramente maternal y por lo tanto mejor para la identificacin de las relacion es y de linaje, con ejemplos de casos que data hasta miles e incluso millones de aos. [ 7 ] El tratamiento con ultrasonidos de los dientes sin dividir, aplastamiento, o de otro modo daar un diente, se ha encontrado para producir el material gentico para el anlisis de ADN. Sin embargo, la cantidad obtenida es por lo general insuficien te y puede ser utilizado en casos limitados cuando otros mtodos no estn justificad as. [ 5 ] Las tcnicas para el uso de hueso son esencialmente la misma que para los dientes. La trituracin se realiza ms comnmente. Extraccin de la mdula sea tambin se puede real zar. Toma de muestras y preparacin de las clulas de la mucosa - Saliva El objetivo de usar saliva como fuente es analizar el ADN de clulas epiteliales d escamadas. La saliva es rica en ADN, a ras con tales clulas. Toda la saliva se re coge normalmente ya sea como en reposo o estimuladas (mastica en parafina o el u so de un pequeo cristal de cido ctrico). Saliva diluida tambin se puede obtener del sujeto mediante enjuague bucal con un volumen especificado de enjuague bucal y e scupir en un tubo de ensayo. El kit de ensayo Oragene (ADN Genotek Inc., Canad) a hora es cada vez emplearse como un mtodo sencillo y seguro para la recogida de mu estras. Consiste en un tubo de ensayo con una tapa personalizado flappable que t iene un compartimiento que contiene la solucin Oragene (para la estabilizacin de A DN a temperatura ambiente). La saliva se llena hasta el nivel marcado y la tapa se cierra entonces, la perforacin de la tapa del compartimiento, lo que resulta e n la mezcla de saliva y el lquido. El tubo de ensayo se lleva luego al laboratori o en condiciones de transporte normales o refrigerados. [ 8 ] El intervalo entre la recogida de la saliva y el procedimiento de extraccin de AD N no afecta significativamente el resultado. Los estudios han demostrado que la pureza de las muestras de ADN y los resultados de PCR no se vieron afectados si el procedimiento se realiz en el mismo da, o despus de una semana a 4 C, o un mes a -70 C. La cuantificacin de ADN sin embargo era diferente en diversas condiciones . [ 9 ] La saliva recogidas de esta manera se puede sec en tarjetas especializadas. La ta rjetas FTA (Flinders Technology Associates, fabricado por Whatman Co, GE Healthc are, Reino Unido) estn tratadas qumicamente papeles de filtro diseado para la recog ida y el almacenamiento a temperatura ambiente de las muestras biolgicas para anli sis moleculares; estas tarjetas de proteger el ADN y estn impregnados con agentes desnaturalizantes que protegen contra oxidacin, nucleasa y dao ultravioleta, y la

degradacin tanto de bacterias y hongos [ Figura 4 ]. Tarjetas FTA proporcionar u n mtodo conveniente y seguro para la recogida y almacenamiento de ADN a partir de sangre total, tejidos, frotis bucal, virales, bacterianas y especmenes. Beckett et al . observ que el ADN de muestras de hisopo bucal inmovilizados sobre tarjeta s FTA permaneci estable durante aos a temperatura ambiente y por lo tanto, el retr aso en el envo de la muestra al laboratorio no afecta a la integridad del anlisis. [ 10 ] Figura 4 TLC tarjetas La presencia de un ecosistema de la microflora en la cavidad oral puede introduc ir una enorme carga de ADN no humano (por lo general de bacterias y hongos) en l a muestra. Los mtodos de ADN ms nuevos anlisis general se puede compensar esto y so n altamente especficos. En tiempo real de reaccin en cadena de la polimerasa (RT-P CR) es ampliamente utilizado. Otros mtodos como espectrofotometra y fluorimetra han fracasado para discriminar entre ADN humano y bacterianas. Toma de muestras de saliva por estos mtodos se ha encontrado para producir el may or contenido de ADN con la menor tasa de fragmentacin. Por lo tanto, la PCR es el mtodo ms recomendado. Algunos estudios han identificado problemas con el procedimiento de PCR especial mente cuando las tarjetas especializadas no han sido utilizados. El problema se ha atribuido a la presencia de inhibidores de la PCR en saliva. Enzimas salivale s o productos bacterianos pueden retardar reacciones de amplificacin y de la poli merasa. El uso de las tarjetas FTA y el lavado repetido de la muestra de punzn ap areci para minimizar en gran medida la inhibicin. [ 10 ] Toma de muestras y preparacin de las clulas de la mucosa - Hisopos Limpiando el interior de la boca con una punta de algodn es ampliamente utilizado para obtener muestras de ADN. Las clulas de la mucosa exfoliadas tambin se pueden recoger con Dacron recubiertos consejos, consejos de espuma recubiertos o depre sores de lengua. La tcnica ms habitual es la de limpiar la cavidad bucal con agua y enjuague bucal y un uso de una firma, raspado repetido movimiento para recoger muestras. Cepillados puede ser usado para recolectar las clulas vivas. El cytobrush se pres iona con suavidad pero con firmeza en el sitio, se gira una vez y se retira. Est a tcnica extrae las clulas basales y suprabasal con un contenido nuclear de altura . Frotar y cepillados se han encontrado para tener un mayor cumplimiento por parte de los nios pequeos que no cooperan con la toma de muestras de saliva. Hay una pr esencia de ADN no humano en las muestras recogidas por estos mtodos, pero la carg a es mucho menor en comparacin con las muestras de saliva. [ 11 ] Hamburguesa et al . intentado un nuevo mtodo de toma de muestras de clulas bucales llamado el colector de ADN bucal, que implica el uso de un papel de filtro unid o a un mango de plstico. Una simple pasada y tcnica seca puede proporcionar una mu estra lista para el anlisis. Estos trabajadores se ha encontrado que, a pesar de que ms nmero de golpes aument el rendimiento de ADN, el ADN se obtuvo slo suficiente de deslizar dos veces. El estudio identific temas como excretores altos y bajos excretores basados en el rendimiento de ADN. Muestreo repetido desde el mismo si tio fue encontrado para producir rendimientos decrecientes. [ 12 ] Toma de muestras de saliva de mordida marcas y otras fuentes Depsitos salival izquierda detrs como resultado de las picaduras tambin pueden ser una fuente potencial de ADN de un sospechoso. En funcin de la duracin, el hisopado para el muestreo puede ser un mtodo adicional despus de la replicacin de un bocado marca, especialmente cuando los registros de impresin no estn disponibles. Saliva seco puede ser difcil de detectar, requiriendo el uso de un ensayo de amilasa pa ra confirmar su presencia. Un mtodo fiable para la toma de muestras de saliva marcan los sitios de mordida e n la piel es la tcnica de hisopado doble. Dulces y colaboradores informaron de qu e los depsitos salivales podra ser extrada por hisopado primero con un algodn hmedo p ellet y luego usando una torunda de algodn seco. Esta tcnica presumiblemente rehid rata las clulas en el depsito salival. Tanto el secado y las bolitas de algodn moja

do se utilizan para la recogida y transferencia sin el riesgo de contaminacin o d eterioro. [ 13 ] La saliva tambin puede ser aislado de diversas fuentes en la escena del crimen, p or ejemplo, los sellos y los sobres, vasos, pajitas, cigarrillos, alimentos y ch icles, cepillos de dientes y use el hilo dental, y las impresiones dentales. [ 1 4 , 15 ] Obleas de impresin se emplean para el registro de mordida, como parte de los proc edimientos de tratamiento protsico, entre otros. Pueden ser de uso, sin embargo, como una fuente limitada de saliva. Ellis y colaboradores determinaron el rendim iento y la calidad del ADN obtenido a partir de obleas de impresin que se han uti lizado para registro de mordida. A pesar de la cantidad de ADN fue menor en comp aracin con la de hisopos bucales y enjuagues enjuague bucal, escribiendo para el anlisis y la identificacin fue posible. Esto se debe principalmente al hecho de qu e tan bajo como 0,001 g de ADN de la muestra es suficiente para el anlisis por RT -PCR. [ 16 ] Las muestras de ADN fueron obtenidas mediante el uso de colillas de cigarrillos en muchos casos penales. Las colillas de cigarrillos contienen muchos inhibidore s de la PCR como los compuestos fenlicos / tar y aditivos de color y sabor, por l o que dieron resultados negativos en el pasado. Ahora, los investigadores han de sarrollado kits especficos para el anlisis de muestras de colilla de cigarrillo. H ochmeister y compaeros de trabajo han logrado el xito en la identificacin basada en ADN utilizando cigarrillos. En su estudio, 1 cm de la circunferencia del papel colilla de cigarrillo se elimin usando tijeras y pinzas estriles. Este documento h a sido cortado en cuartos. Cada cuarto se cort de nuevo en cuatro secciones y el papel a un pocillo de una bandeja de 96 pocillos o un tubo de PCR de 0,2 ml. Des pus de la amplificacin por PCR, electroforesis en gel de agarosa se realiz para la visualizacin. [ 17 ] Biopsia La biopsia es la extirpacin quirrgica de tejido de un organismo vivo con el propsit o de examen microscpico y el diagnstico. Las muestras de tejido, especialmente mue stras congeladas, se puede utilizar para el anlisis gentico. La degradacin del mate rial gentico convencional en el tejido fijado con formalina puede limitar la util idad de esta fuente especficamente para el anlisis de ADN. Este mtodo se utiliza mu y poco a menos que sea la nica fuente disponible. Ir a: Mtodos de Laboratorio Extraccin de ADN y cuantificacin - Las muestras de saliva (Oragene kit) La muestra de saliva en el vial se incuba a 50 C durante 1 hr. Acerca de 500 l d e la muestra Oragene / saliva se transfiere a un tubo Eppendorf de 1,5 l. Un tot al de 20 l de la purificador Oragene (suministrado con el kit) se aadi a cada mues tra, y se mezcla con la inversin. Las muestras se incubaron en hielo durante 10 m in y se centrifug durante 3 min a 13.000 rpm. El sobrenadante transparente de cad a muestra es micro-pipeta en un tubo nuevo y el sedimento de protena se descarta. Un total de 500 l de etanol al 95% se aade entonces y se mezcla. La solucin se de ja durante 10 minutos para permitir que el ADN precipitado. Centrifugacin durante 1 min a 13.000 rpm se realiza de nuevo. [ 8 ] El sobrenadante de etanol se retira, dejando el sedimento de ADN en la parte inf erior del tubo de Eppendorf sin perturbaciones. Las muestras se centrifugaron de nuevo durante 10 s a 13.000 rpm y ms etanol se elimina. Un total de 100 l de tam pn se aadi a cada muestra, para disolver el precipitado de ADN. Las muestras se hiz o girar vigorosamente y se incub a 50 C durante 10 min para disolver el ADN. Desp us de la incubacin durante la noche, se toman muestras para el espectrofotmetro. Va lores de absorbancia a 230, 260, y 280 nm se registran. Estos valores dan la con centracin de ADN en la muestra dada. [ 8 ] Reaccin en cadena de polimerasa procedimiento Este es un mtodo por el cual las cantidades demostrables de ADN se puede generar utilizando la muestra dada como una plantilla. Esto se hace usando una enzima po limerasa de ADN y secuencias de cebador de ADN. PCR es til en los casos de muestr as muy degradadas minutos y para aumentar la cantidad de ADN. Secuencias selecci onadas exigidas por los cientficos forenses pueden amplificar preferentemente. De

spus de la amplificacin, la determinacin de las secuencias se lleva a cabo. En la c iencia forense, el procedimiento de tipificacin del ADN laborioso, el fragmento d e restriccin polimorfismo de longitud (RFLP), ha dado paso a nuevas tcnicas como S TR (short tandem repeat) anlisis. Tambin conocido como simple secuencia se repite (SSRs) y los microsatlites, los RT S son secuencias polimrficas de ADN (200-500 pares de bases [pb]) que estn muy con servadas entre especies son similares y especialmente en familiares de primer gr ado. Esta tcnica es especialmente adecuada para la determinacin de la identidad de los sospechosos, las vctimas y restos humanos. Los pases desarrollados han manten ido una base de datos nacional de ADN, y el procedimiento STR ha simplificado el trabajo de los cientficos forenses y de otro tipo en el ADN basada en la identif icacin. [ 18 , 19 ] SRT anlisis ha reducido la susceptibilidad a contaminantes (ADN no humanos) de am plificacin y ayuda en el anlisis de mezclas complejas de muestra. El perfil se rea liz usando gel (agarosa, poliacrilamida) electroforesis, electroforesis capilar, y cromatografa. La electroforesis es mucho tiempo y requiere trabajo manual consi derable. La cromatografa por lo tanto es cada vez ms popular. Basados en STR-siste mas proporcionan una excelente sensibilidad a menos de 0,20 ng de ADN. [ 20 ] La deteccin automtica fluorescente de fragmentos de ADN en la muestra se realiza p or el "multiplex" mtodo. Varias regiones de ADN se pueden etiquetar simultneamente con una etiqueta fluorescente diferente color en un nico tubo de reaccin durante el proceso de amplificacin. Unidades de electroforesis utilizar una serie de capi lares que dirigen una sola muestra a la vez a travs de una matriz qumica que conti ene un polmero "tamiz." Fragmentos migran a travs del capilar de acuerdo con el ta mao. Fragmentos de ADN son precisamente empresas, normalizada, y la informacin per tinente se ingresa en una base de datos a medida que avanzan desde el punto de o rigen hasta el detector. [ 2 ] La precisin y la exactitud se proporcion a travs del uso de un sistema interno de g estin de tamao estndar en el mismo carril o capilar con cada muestra STR. El carril estndar interna acta como una regla molecular y es reconocido por el ordenador pa ra generar un fragmento de tamao curva de calibracin. Este procedimiento permite u na evaluacin precisa de no slo el tamao de todos los fragmentos de ADN, sino tambin la cantidad del fragmento de ADN basado en la cantidad de una seal fluorescente. El carril interno estndar es un estndar de precisin para evaluar cualquier potencia l patrn aberrante migracin electrofortica. Con la ayuda de la computadora y preciso s datos digitales de dimensionamiento, el cientfico forense evala cada fragmento p ara el partido o nonmatch [ Figura 5 ]. Futuros mtodos incluyen biochip y las tec nologas de micro-ensayo. [ 2 ] Figura 5 Pasos en el anlisis de ADN Hay muchas secuencias en el genoma humano que pueden ser etiquetados y se analiz aron para la identificacin. Los cientficos usan 9-16 secuencias en una muestra. Cu anto mayor sea el nmero de muestras, mayor es la precisin. Por ejemplo, al usar 13 loci, las probabilidades de que dos personas diferentes que tienen perfil simil ar es de 1 en 250 mil millones. Los marcadores como D21S11, D7S820, TH01, D13S31 7, D19S433 y se utilizan comnmente para la resolucin de paternidad en disputa. Y-S TR anlisis se puede utilizar en el caso de los varones paternalmente relacionados . Marcadores mitocondriales se puede utilizar en el caso de linaje materno. [ 2 ] Amelogeninas para la determinacin del sexo Amelogeninas son protenas esenciales para la formacin de la matriz del esmalte. Lo s genes que codifican para las protenas estn presentes en los cromosomas X e Y. Lo s genes son AMEL cromosoma especfico, que tiene 106 pb de X y 112 pb en Y. Esto p roporciona una base para la determinacin de gnero en el anlisis de ADN. Adems, estos 106/112 pb amplicones AMEL se han encontrado para ser ms fiable que otros amplic ones como telomerasas y beta-globinas tradicionalmente utilizados para el anlisis de ADN. Las pruebas que emplean los genes AMEL son rpidos, ms precisos, y requier en una cantidad de muestra pequea. [ 21 , 22 ] Sin embargo, algunos estudios han arrojado dudas sobre la fiabilidad del anlisis

del gen AMEL. Hay informes de prdida del alelo del gen de amelogenina X en hombre s, debido al polimorfismo de sitios de unin del cebador. Una alta prevalencia de deleciones y otras variaciones en el cromosoma Y se conoce, algunas de las cuale s afectan Yp11.2, el locus del gen AMEL. Esto da lugar a los hombres que se iden tifican como mujeres errneamente debido a un perfil AMEL similar. La frecuencia g lobal de este tipo de errores en la identificacin de gnero haban sido tan bajas com o 0,006% en varones y 0,015% en las mujeres. Sin embargo, los errores se observa ron a ser mayor en estudios de la India (3.2 hasta 3.6%) y tambin en Malasia (0,6 -0,88%) y los grupos austriacos (0,018%). [ 23 , 24 ] El estndar de oro para la determinacin del sexo es Y-STR y SRY (sexo regiones dete rminantes de Y) y las pruebas de estas pruebas tienen que ser realizadas en conj uncin con la prueba AMEL. [ 24 ] Un estudio reciente ha utilizado las clulas epiteliales exfoliadas recuperados de las dentaduras de acrlico para extraer el ADN, y se realiz el anlisis SRY para la determinacin del sexo. Los trabajadores informaron que estas muestras tuvieron xit o en la deteccin y cuantificacin de ADN. Se examinaron las condiciones que podran d ar resultados contradictorios, como en trastornos cromosmicos (sndrome de Klinefel ter, sndrome de Turner, sndrome XYY, y otros), el quimerismo (debido a trasplante de mdula sea), y microquimerismo, por ejemplo, en el embarazo (feto masculino), y trasplantes de rganos . Se recomienda que SRY empleando tcnicas deben ser a prueba la fiabilidad en todas las condiciones mencionadas anteriormente. [ 25 ] Los trabajadores han determinado el gnero de las personas mediante la deteccin de cuerpos de Barr en los ncleos de las clulas exfoliadas / cytobrush muestreados en los frotis bucales. Cuerpos de Barr son el resultado de lyonizacin, en el que uno de los cromosomas X en las clulas femeninas se inactiva y se somete a fusin telmer o y la condensacin. Se ven generalmente como una extensin del material de la croma tina nuclear. La identificacin positiva de cuerpos de Barr se ha hecho en 20-78% de las clulas en las mujeres y hasta 4% en hombres. Por lo tanto, es evidente que mientras que la presencia de cuerpos de Barr no es confirmatoria del gnero femen ino, un alto porcentaje de positivos Barr cuerpo-clulas es tpica de las hembras. L a principal desventaja de este mtodo es el deterioro del material nuclear con el paso del tiempo. Sin embargo, este mtodo es simple y econmico. [ 26 ] Labor meritoria de los odontlogos forenses en los casos de resolucin de Odontlogos forenses han ayudado a la polica a resolver innumerables casos, especia lmente cuando pareca imposible de descubrir los hechos. Paul Revere fue probablem ente el primer dentista forense, quien ayud a identificar a los soldados muertos de la guerra revolucionaria americana. En 1954, un sospechoso fue declarado culp able de un asesinato despus de que se tom para dar una muestra de un bocado marca de queso para comparar con una pieza similar a la escena del crimen. En 1975, un hombre fue declarado culpable de asesinato sobre la base de mordida marcas hech as en la nariz de la vctima. [ 27 ] D Sweet Sweet CHW y fue uno de los pioneros en la identificacin basado en el ADN. Se inform de un caso de un cuerpo humano completamente quemado en el que las pos ibilidades de recoleccin de la muestra era casi imposible. Sin embargo, se descub ri un molar no erupcionado tercero en la mandbula de la vctima. Ellos fueron capace s de extraer la muestra de pasta de dientes que, que fue preservado razonablemen te, y el anlisis realizado ADN. La cantidad de ADN recuperado fue de alrededor de 1,3 mg, lo cual era ms que suficiente para la amplificacin y tipificacin. [ 28 ] En un reciente caso de asalto sexual en los EE.UU., los investigadores emplean e l anlisis de ADN para atrapar al criminal con el cigarrillo que fumaba durante su interrogatorio por un caso no relacionado. Los cientficos forenses utilizan kits de anlisis de ADN especficamente diseados para recibir muestras de cigarrillos a t ope para obtener resultados ms rpidos y estandarizados. [ 29 ] Hubo ms de 20.000 muestras de restos humanos recuperados despus de los ataques del 9/11. Slo la mitad de las vctimas fueron identificadas el ao 2005 y el resto se co nsideraron no identificable. Pero en 2007, se reiniciaron los procesos como una tecnologa avanzada basada STR-lleg a estar disponible e incluso pequeas muestras de gradadas y de los dientes y los huesos se convirti adecuada para su identificacin. [ 27 ] El ejrcito indio ha iniciado el anlisis de ADN de todos sus soldados en 2011. Esta

base de datos es para ser de uso inestimable para identificar soldados para fin es de registro, as como para presentar los restos a los familiares. Basado en las etiquetas de sangre in situ emitidos por el Ejrcito de los EE.UU., que se puede utilizar para la identificacin. [ 30 ] Aspectos ticos y legales El odontlogo forense est obligado a seguir las directrices establecidas por el com it de tica regional y la autoridad de aplicacin de la ley. Esto es importante en la s cuestiones mdico-legales tanto para la aceptacin de pruebas forenses y de proteg er al dentista frente a las reclamaciones de negligencia, manipulacin y otros pas ivos. El Consejo Americano de Odontlogos forenses (ABFO) ha publicado manuales a sus diplomticos detallan las directrices estndar para tales procedimientos. La nue va biologa y la unidad de Investigacin Criminal (NBCI) ha dado exhaustivas directr ices jurdicas para todos los procedimientos de investigacin clnica y de laboratorio . [ 31 , 32 ] El cdigo de tica Como una manera de promover la ms alta calidad de conducta personal y profesional de los miembros ABFO, el cdigo de tica fue promulgada, que est avalado y respetado s por todos los diplomticos de la ABFO y reglas similares son seguidas por la may ora de las organizaciones contrapartes en todo el mundo. Cada diplomtico a. debern abstenerse de toda declaracin falsa de la educacin, la formacin, o rea de especializacin; b. debern abstenerse de toda declaracin falsa de los datos en que se basa la opinin de expertos o conclusin; c. debe proporcionar una declaracin firmada y notariada tica adoptado por el Comit Ejecutivo; d. debe mantener su / su competencia profesional a travs de los programas ex istentes de educacin continua; e. podrn presentar las alegaciones escritas formales de violacines en relacin con un compaero diplomtico con la prueba y las interpretaciones correctas; f. rendir cuentas tcnicamente correctas en todos los informes escritos y oral es, testimonios, direcciones pblicas o publicaciones, y debe evitar cualquier pub licidad engaosa o inexacta. [ 31 ] El resumen del razonamiento cientfico es la siguiente: a. Recopilar toda la informacin relevante necesaria. b. Utilice la informacin recopilada. No selectivamente ignorar pruebas o col ocar injustificada creencia en poco slida o informacin irrelevante. c. No permita que la opinin de estar contaminados por falta de cegamiento o parcialidad. Mantener una imparcialidad. d. Utilizar los conocimientos eficazmente al hacer interpretaciones, infere ncias o las haya dictado una opinin. En el caso del examen de un sospechoso, lo siguiente debe ser estrictamente real izadas: a. Obtenga una copia del documento legal pertinente, por ejemplo, la autori zacin, para el examen del sospechoso. b. Obtener registros dentales y tomar una historia clnica detallada, especia lmente en relacin con el tiempo del presunto delito. c. El examen detallado extraoral e intraoral con fotografas y radiografas. d. Haga impresiones y las mordeduras de muestra. e. Muestra para anlisis de ADN. [ 31 ] Hay que recordar que voluntarios hisopos bucales se consideran muestras nonintim ate, mientras que oblig hisopo bucal, saliva y las impresiones dentales se consid eran procedimientos ntimos y puede requerir rdenes de magistrados. Por escrito el consentimiento tambin es necesario, excepto bajo condiciones especificadas. El contenido de un informe forense debe prescribirse en un formato estndar, y deb e cubrir los siguientes puntos: a. la calificacin del analista b. operaciones examinadas c. resultar d. anlisis estadstico y e. conclusin. [ 32 ]

Las tcnicas estndar de anlisis aceptados por los tribunales deben seguir la mayor f idelidad posible. Mtodos alternativos tienen que ser verificables y validados en cuanto a su aplicacin en el caso en cuestin. El comit de tica regional supervisa todos los expertos y lleva a cabo las actuacio nes pertinentes en relacin con todas las cuestiones al respecto. Si todas las dir ectrices se cumplan estrictamente, el experto dental ser considerado como una aut oridad competente y estarn aisladas de cualquier responsabilidad. Si no se cumple , el experto podra enfrentar una accin disciplinaria por parte de la junta entre p ares, as como juicios civiles / penales. Ir a: Conclusin La regin oral es una fuente rica de mtodos sencillos y no invasiva de muestras de ADN. El mtodo ms comn en el caso de investigaciones penales es hisopado bucal, que es muy til en la determinacin de los sospechosos en casos de homicidio y asalto fsi co / sexual. En los casos de desastre masivo y otras calamidades, restos seos y d entales son tiles para establecer la identidad. Siempre que los profesionales den tales son requeridos o solicitados para proporcionar dichas muestras, el conocim iento de muestreo y almacenamiento para la optimizacin del procedimiento de anlisi s de ADN puede mejorar enormemente la eficacia de la investigacin. El experto den tal tiene que ser consciente de las pertinentes cuestiones jurdicas y ticas y oper an dentro del mbito de la ley. Ir a: Notas al pie Fuentes de financiacin: Ninguna Conflicto de intereses: Ninguno declarado Ir a: Referencias 1. BC Smith, MM Holanda, Sweet D, DiZinno JA. ADN y el odontlogo forense. En:. CM Bowers, Bell GL, editores . Manual de odontologa forense 3 ed. Colorado Springs: la sociedad americana de la odontologa forense, 1997. pp 283-98. 2. Fourney RM. Realidad Forense y la experiencia prctica de actualizacin de tipifi cacin del ADN. Artculo proporcionado a la sociedad internacional para la reforma d e la ley penal de 2002. nacional de datos de ADN del banco de Canad, Servicios de Laboratorio Forense. [citado en 2002]. Disponible en: http://www.isrcl.org/Pape rs/Fourney.pdf . 3. Leung KK. . Odontologa Forense Dent Bull Hong Kong Med Diario. 2008; 13 :16-20 . 4. Silva RH, Peres AS, RN Oliveira, Oliveira FT, Sales-Peres SH. El uso de la te cnologa del ADN en la odontologa forense. App J Oral Sci.. 2007; 15 :156-61. 5. Sweet DJ, Hildebrand DP. . Recuperacin de ADN de los dientes humanos por molie nda criognica J Forensic Sci. 1998; 43 :1199-202. [ PubMed ] 6. Preseki A, H Brkic, D Primorac, Drmick I. Mtodos de preparacin del diente para el aislamiento de ADN. Acta Stomatol croata. 2000; 34 :21-4. 7. Silva LAF, Passos NS. ADN forense: Coleta de amostras biolicas em Locais de c rimen prrafo estudo do ADN. Macei Ed UFAL. 2002 8. Mitsouras K, Faulhaber EA. La saliva como fuente alternativa de ADN genmico de alto rendimiento canino para el genotipado estudios. BMC Notas Res. 2009; 2 :. 219 [ PMC libres artculo ] [ PubMed ] . 9 . Daniel PK, David K, Serena GL, Vivian N, Qiuyun F. Efecto de las condicion es de almacenamiento en la extraccin de ADN genmico por PCR calidad de la saliva C lin Chem. Acta. 2004; 343 :191-9. 10. Beckett SM, Laughton SJ, Pozza LD, McCowage GB, Marshall G, Cohn RJ, et al. . Hisopos bucales y tarjetas de tratados: consideraciones metodolgicas para estud ios epidemiolgicos moleculares que examinaron poblaciones peditricas Am J Epidemio l. 2008; 167 :1260-7. [ PubMed ] 11. Closas MG, KM Egan, J Abruzzo, PA Newcomb, LT Ernstoff, T Franklin, et al. . Coleccin de ADN genmico de los adultos en los estudios epidemiolgicos por cytobrus h bucal y enjuagues bucales Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2001; 10 . :687-96 [ PubMed ] 12. Hamburguesa MF, Song EY, Schumm JW. Muestras bucales de ADN para el anlisis d

e ADN: Nueva coleccin y procesamiento de los mtodos. biotecnolgicos. 2005; 39 :25766. . 13 . Sweet D, M Lorente, JA Lorente, Valenzuela A, Villanueva E. Un mtodo mejor ado para recuperar la saliva de la piel humana: la tcnica del hisopo doble . J Fo rensic Sci 1997; 42 . :320-2 [ PubMed ] 14. Kanto A, Hirata MH, Hirata RD, Nunes FD, RFH Melani, Oliveira RN. Extraccin d e ADN de saliva humana depositada sobre la piel y su uso en procedimientos de id entificacin forense. Braz Res oral. 2005; 19 :216-22. [ PubMed ] 15. Silva RHA, Musse JO, Francisco RH, Melani RF, Oliveira RN. Mordedura humana marca de identificacin y la tecnologa del ADN en la odontologa forense. Braz J Oral Sci.. 2006; 5 :1193-7. 16. Ellis MA, Song F, Parques ET, Eckert GJ, Dean JA, Windsor LJ. . Evaluacin del rendimiento de ADN, la calidad del ADN y registro de mordida de una oblea de im presin dental J Am Dent Asociacin. 2007; 138 :1234-40. [ PubMed