CARITIPO HUMANO E NODISJUNES

Profa. Dra. Kelly Simes

MDULO: Embriologia, Gentica e Reproduo Assistida Biomedicina 4 Perodo - 2012 Universidade Metodista de So Paulo

DIVISO CELULAR:
Clulas somticas: Mitose Intrfase

Clulas germinativas: Meiose

Primeira diviso

Pareamento dos cromossomos homlogos

Prfase
Diviso celular Segunda diviso

Metfase

Anfase

Telfase

Diviso celular

Esquemas: Bruce R. Korf. Gentica Humana e Genmica. 3ed. 2008. Guanabara Koogan. Online: Blacwell Publishing - http://www2.grupogen.com.br/GBK/suplemento/korf/korf.html

Se cada um dos 25.000 genes que compem o genoma humano fosse replicado e segregado independentemente, o processo de replicao celular seria CATICO

Processo altamente organizado: 23 pares de cromossomos humanos que so replicados, alinhados na clula e divididos. 2n = 23 pares

22 pares comuns (homens e mulheres)

1par # (homens e mulheres)

AUTOSSOMOS
no diferencia o sexo

CROMOSSOMOS SEXUAIS X, Y (ALOSSOMOS)

diferencia o sexo

Bruce R. Korf. Gentica Humana e Genmica. 3ed. 2008. Guanabara Koogan.

1. Dupla fita de DNA 2nm 2. Fibra do nucleossomo, empacotamento do DNA como uma espiral no octmero de histonas (2x H2A, H2B, H3 e H4) formando os nucleossomos de aproximadamente de 10nm de dimetro. 3. Solenide, um segundo nvel de espiralamento, produzindo uma fibra de 30nm. 4. Loops" de solenides, ligados a um esqueleto central protico (300nm). 5. Loops" do esqueleto protico, formando uma mais enrolada, com 700nm. 6. Mxima condensao, a cromtide cromossmica conta com cerca de 1400nm de dimetro.

CROMOSSSOMOS: Podem ser analisados no estgio de metfase ou prometfase CARITIPO - Conjunto de cromossomos tpico de uma espcie (nmero e morfologia). Classificao: Forma (posio do centrmero) Humanos: acrocntrico, submetacntrico e metacntricos

Esquema: retirado da aula da Profa. Dra. Daniela S. Alves

Como obter preparaes cromossmicas?

Podem ser obtidas a partir de clulas que esto em diviso:

Preparao direta tecidos que esto em diviso bao,

intestino, medula ssea, testculos) bipsias Culturas celulares clulas se dividem em um meio nutritivo: Longa durao: fibroblastos, clulas de outros

tecidos
Curta durao: medula ssea, linfcitos T (procedimento menos invasivo e mais utilizado em citogentica) 72 horas
Autoria do Slide: Profa. Dra. Daniela S. Alves

Como obter preparaes cromossmicas?

5 mL de sangue heparina Repouso por alguns minutos separao entre as diferentes fases do sangue

Autoria do Slide: Profa. Dra. Daniela S. Alves

Culturas de linfcitos:
Meio de cultura contendo Fitoemaglutinina os linfcitos amadurecem na medula ssea e na circulao no se dividem mais. A Fitoemaglutinina induz a diviso celular dos linfcitos

Amostra de sangue perifrico inoculado em meio de cultura

Corar e examinar ao microscpio

Fixar em metanol: cido actico e espalhar em lmina de vidro

Linfcitos dividem-se em presena de FITOEMAGLUTININA

Esquemas: Bruce R. Korf. Gentica Humana e Genmica. 3ed. 2008. Guanabara Koogan. Online: Blacwell Publishing - http://www2.grupogen.com.br/GBK/suplemento/korf/korf.html

Clulas em diviso param na metfase com um inibidor de fuso COLCHICINA

Slide: Profa. Dra. Daniela S. Alves

Clulas incham com soluo hipotnica

Figura retirada do site: http://citogeneticapravoce.blogspot.com.br/

Cariograma:

46, XY

Figura site: http://www.chromoscitogenetica.com.br/definicao.html

Idiograma: 46,XY
Sub
Sub

13, 14, 15, 21, 22 Acrocntricos

Meta

Meta

Sub

Sub

Sub

Sub

Sub

Sub

Pedculos regies descondensadas com um bola na ponta - Satlites

Acro

Acro

Acro

Sub

Sub

Sub

Meta

Meta

Acro

Acro

NO CONFUNDIR COM DNA SATLITE

Acro

Sub

Sub

Os braos p apresentam DNA que codifica rRNA

Sub

TCNICAS DE BANDEAMENTO CROMOSSMICO

Casperson 1969 e 1970 Conferncia de Paris cada cromossomo seria subdividido em um nmero varivel de regies com bandas Diferenciao de regies dos cromossomos Existem vrios tipos diferentes: Bandeamento G

Bandeamento Q
Bandeamento C Bandeamento R Bandeamento RONs ou NOR

Autoria do Slide: Profa. Dra. Daniela S. Alves

Bandeamento G
Dretz & Shaw (1971) Mtodo de Giemsa Amplamente empregada em laboratrio de citogentica clnica, por utilizar microscpios comuns e possibilitar a deteco de delees, inverses, translocaes e duplicaes em humanos Os cromossomos so 1 tratados com tripsina para desnaturar protenas cromossmicas Em sequncia so corados com Giemsa Cada par cora-se em um padro caracterstico de bandas claras e escuras alternadas que se correlacionam com as caractersticas da sequncia de DNA como a composio bsica (AT e GC) e a distribuio dos elementos repetitivos do DNA
Bandas G escuras, ricas em AT, genes poucos expressos Bandas G claras, ricas em GC, muitos genes expressos,

Esquemas: Bruce R. Korf. Gentica Humana e Genmica. 3ed. 2008. Guanabara Koogan. Online: Blacwell Publishing - http://www2.grupogen.com.br/GBK/suplemento/korf/korf.html

Bandeamento G

Figura retirada do site: http://www.teliga.net/2011/08/tecnicas-para-estudo-dos-cromossomos.html

Bandeamento G

Bandeamento Q

(Casperson, 1970) cromossomos corados com corantes fluorescentes (quinacrina-mostarda) regies cromossmicas ricas em AT = escuras das bandas G cromossomos com padro de bandas brilhantes e opacas anlise feita em microscpio de fluorescncia (UV) til na deteco de variante ocasionais da morfologia ou da colorao cromossmica heteromorfismos.

Figura retirada do site: http://biomodel.uah.es/citogene/horwitz/cytogen1.htm

Bandeamento R
cromossomos so desnaturados com o uso de soluo salina e calor colorao posterior com corante de Giemsa

cada cromossomo com padro tpica de regies claras e escuras

as bandas R escuras so regies ricas em GC padro inverso das bandas Q e G til na identificao de certas extremidades cromossmicas que ficam claras em

banda G

Bandas G x R

Bandeamento C
cromossomos submetidos a ao de uma soluo de hidrxido de brio;
colorao posterior com corante de Giemsa; Marca regies centromricas dos cromossomos e outras regies que contenham

heterocromatina constitutiva (brao longo do Y).

Heterocromatina: tipo especial de DNA que mais condensado mesmo na intrfase. Constitutiva: regio dos cromossomos ao redor do centrmero. Final do brao longo do cromossomo Y. Facultativa: presente apenas nas mulheres, corresponde ao cromossomo X inativo corpsculo de Barr

Autoria do Slide: Profa. Dra. Daniela S. Alves

Bandeamento C

Bandeamento NOR Os cromossomos so submetidos ao de corantes especficos para as regies ricas em 18S e 28S rRNA, correspondentes s regies organizadoras de nuclolos presentes nos cromossomos acrocntricos humanos (13, 14, 15, 21 e 22)
Promove a formao de um padro de Bandas NOR nas regies localizadas nos braos curtos dos cromossomos acrocntricos. Inicialmente os cromossomos so expostos s solues de nitrato de prata ou nitrato amoniacal e posteriormente corados pelo Giemsa.

FISH Hibridizao in situ por Fluorescnscia (Fluorescence in situ Hybridization) Presena ou ausncia de uma sequncia especfica de DNA em um cromossomo, ou para avaliar o nmero ou a organizao de uma regio cromossmica: Sondas: cromossomos individuais, regies cromossmicas ou genes Diferentes fluorocromos para detectar mltiplas sondas
Prepara os cromossomos na metfase em uma lmina de microscpio
Fluorescncia

Sonda de marcao

Hibridiza a sonda com o DNA cromossomal

lmina de microscpio

Desnaturar DNA cromossmico Visualiza com o microscpio de

fluorescncia

Esquemas: Bruce R. Korf. Gentica Humana e Genmica. 3ed. 2008. Guanabara Koogan. Online: Blacwell Publishing - http://www2.grupogen.com.br/GBK/suplemento/korf/korf.html

FISH Hibridizao in situ por Fluorescnscia

http://www.biomedicinapadrao.com/2012/03/hibridizacao-fluorescente-in-situ-fish.html

FISH Hibridizao in situ por Fluorescnscia

FISH Hibridizao in situ por Fluorescnscia Pode-se gerar anlise cariotpica espectral cada para de um cromossomo de uma cor

INDICAES DE CARITIPO

Indivduos com retardo mental e malformaes congnitas Indviduos com desenvolvimento normal, mas com dificuldades reprodutivas (esterilidades ou abortos repetidos) Citogentica do Cncer (Neoplasia): Leucemias Mielide Crnica - doena mieloproliferativa caracterstica por uma aberrao citogentica ocasionada por uma translocao entre o cromossomo 9 e 22; t (9;22) Gestao em mulher com idade avanada: Pr-natal Histrico familiar

Anomalias cromossmicas:
Constituem uma causa de anormalidades fsicas e/ou funcionais, entretanto em alguns casos pode no haver manifestaes clnicas
Numricas: aumento ou decrscimo do nmero de cromossomos

Estruturais: podem atingir um gene mutaes pontuais, ou aberraes cromossmicas (deleo, inverso, translocao, duplicao, cromossomos dicntricos, cromossomos em anel)

Dependendo do tipo de alterao, podem existir vrias anomalias associadas e que apresentam sintomas tpicos e so chamadas preferencialmente de SNDROMES

NO-DISJUNES ???

http://www.biostudio.com/d_%20Meiotic%20Nondisjunction%20Meiosis%20I.htm

Anomalias cromossmicas numricas:

2n = 46 ( clulas somticas) n= 23 (clulas germinativas)

Aneuploidia = Falta ou excesso de um ou mais cromossomos / Monossomias (2n-1), polissomias (2n + 1, 2n +2, exemplo de trissomia: Sndrome de Down 47,XX,+21)

Prxima aula: Anomalias cromossmicas numricas

Referncias:
NUSSBAUM, RL. Thompson & Thompson Gentica Mdica. 7ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 2002.
KORF, BR. Gentica Humana e Genmica. 3ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 2008. ALBERTS,B, JOHNSON, A, LEWIS, J, RAFF, M, ROBERTS, K & WALTER, P. Molecular Biology of The Cell. 5ed.New York, Garland Science, Taylor & Francis Group, 2008. MOTTA, PA. Gentica Humana: aplicada a psicologia, nutrio, enfermagem e fonoaudiologia. 1ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 1998. Site Scitable by Nature Education - http://www.nature.com/scitable