UNIVERSIDADE SAGRADO CORAO

GABRIELA BRASIL ROMO

AUTOMAO E CONTROLE DE PROCESSOS FERMENTATIVOS E PURIFICAO DE PRODUTOS BIOTECNOLGICOS

BAURU 2012

AUTOMAO E CONTROLE DE PROCESSOS FERMENTATIVOS 1. Introduo Devido aos avanos dos recursos computacionais e a sua grande utilizao nas indstrias, houve a possibilidade de baratear esses componentes, ter maior interfaceamento, acompanhamento e gerenciamento de dados, e aumentar as funes lgicas e programveis dos controladores. Os recursos computacionais podem ampliar as opes de algoritmos de controle, bem como realizar tarefas mais complexas, como a estimativa de variveis no medidas, implementao de tcnicas de otimizao identificao de processos. Em processos fermentativos o desenvolvimento da aplicao do controle automtico lento devido s caractersticas especficas dos processos biotecnolgicos que dificultam o trabalho automtico. Essa aplicao em processos fermentativos permite uma maior reprodutibilidade da produo, garantindo a melhor qualidade do produto, maior segurana e otimizao da produo, para maior economia do processo. 2. Desenvolvimento 2.1. Principais instrumentos para monitorao em linha de processos fermentativos Para o entendimento e controle do processo fermentativo necessrio obter os dados que caracterizam a evoluo no tempo das reaes biolgicas e para isso foram se desenvolvendo sensores para fornecer os sinais adequados, mesmo sob condies ambientais complexas e que indiquem a evoluo do processo. Algumas tcnicas recentes vm sendo incorporadas aos processos fermentativos que aumentam a capacidade de observ-los e control-los como Turbedimetria utilizando Fibras pticas, Cromatografia Lquida de Alto Desempenho (HPLC) e Anlise por Injeo em Fluxo (FIA), etc. Abaixo est representada uma breve explicao das principais determinaes em linha aplicadas a processos fermentativos.

2.2. Medidas baseadas em princpios fsicos 2.2.1. Temperatura A temperatura a varivel mais frequentemente medida e controlada devido sua dependncia para com o crescimento microbiano e pela facilidade de sua determinao. Nos processos fermentativos o intervalo de medida situa-se entre 0C e 130C e essa medida feita, principalmente, por termmetros baseados na variao da resistncia de sensores metlicos como os de cobre, nquel, platina ou liga rdio/ferro. Esses termmetros contm um fio metlico, dentro de um cilindro metlico para proteo, por onde se faz passar uma corrente eltrica constante. Devido variao da resistncia com a temperatura, ocorre variao de tenso no fio, que pode ser relacionado com a temperatura. 2.2.2. Presso A presso afeta indiretamente o metabolismo dos microrganismos pela sua influncia na solubilidade dos gases dissolvidos. Devido necessidade de interfaceamento eltrico, os medidores de presso, manmetros, contm elementos que convertem a deformao elstica do elemento sensor em sinal eltrico (transdutores de presso). Como o deslocamento produzido proporcional presso, pode-se estabelecer uma relao entre a deformao mecnica e o sinal eltrico. Os transdutores podem ser os capacitivos, que consistem em duas placas capacitivas, separadas por uma membrana ou elemento sensor de capacitncia e a presso a ser medida transmitida atravs da membrana isoladora para o elemento sensor imerso no leo, ocorrendo a deformao do elemento sensor e a alterao da capacitncia entre as duas placas gerando um sinal eltrico, na forma de corrente ou tenso, proporcional presso exercida; os piezoeltricos que se baseiam na propriedade do elemento sensor, um cristal, que submetido a uma tenso mecnica gera uma carga eltrica diretamente proporcional fora aplicada; e os extensmeros eltricos (strain-gages) que so compostos por um cilindro oco, em cuja superfcie so colocadas quatro tiras de medio extensomtrica de forma transversal em relao ao eixo do cilindro. Essas tiras so fios metlicos ou outro condutor eltrico. Quando se aplica uma presso, a parede do cilindro se expande as tiras aumentam sua resistncia eltrica. Essas tiras so ligadas eletricamente, formando uma ponte de Wheatstone. Nesse circuito estabelece-

se uma tenso fixa e qualquer diferena das resistncias gera um sinal eltrico (corrente ou tenso), que pode ser correlacionado com a presso. 2.2.3. Medidas de vazo gasosa As medidas de vazo gasosa so necessrias para quantificar o ar fornecido ao fermentador e para o controla de oxignio dissolvido no meio ou para quantificar o consumo de oxignio e a produo de gs carbnico, na fermentao, e a correlao dessas medidas com o crescimento celular. Os principais instrumentos utilizados para a determinao de vazo gasosa so: Medidores de vazo de rea varivel (Rotmetros): nesses medidores, o fluido escoa em tubo cnico, vertical, de baixo para cima, no qual h um flutuador. Como o peso do flutuador constante, o aumento da vazo acarreta um aumento da rea livre de escoamento, uma vez que a perda de carga permanece constante. A posio do flutuador pode ser convertida em sinal eltrico gerando medidas de linha de vazo; Medidor trmico de vazo mssica: mais utilizado em fermentadores pequenos e no medidor, uma frao dos gases passa atravs de um duto, que apresenta uma fonte de calor e dois sensores (termistores) mantidos antes de depois da fonte de calor. O princpio da medida baseia-se no fato de que a quantidade de energia necessria para manter um perfil de temperatura constante em um fluido funo da vazo mssica. Assim, medindo-se o calor fornecido e a diferena de temperaturas, possvel estimar a vazo mssica. Dependendo das faixas de temperaturas utilizadas, da variao das propriedades do fluido (calor especfico) e do fio (elemento sensor), possvel estabelecer uma relao linear entre a vazo e a relao calor gerado/diferena de temperaturas. A vazo gasosa calculada por circuito eletrnico e pr-ajustada com um gs de calibrao. Quando se utiliza um gs diferente, o fabricante fornece fatores de correo que levam em conta as especificidades do gs utilizado. Como as medidas necessrias (calor fornecido e temperatura) so facilmente convertidas em sinais eltricos, pode-se dispor de uma medida em linha de vazo. A principal vantagem dessa medida a sua interdependncia da presso do gs. Dessa forma, uma manuteno exige cuidados para evitar a entrada e o acmulo de impurezas no

sensor. Em geral, o medidor vem junto com uma unidade para controle de vazo (vlvula de controle e controlador). 2.2.4. Medidas de vazo lquidas Nos processos fermentativos, os medidores de vazo lquida so equipamentos comuns aos processos qumicos, porm devem atender a algumas caractersticas especficas, especialmente a necessidade de esterilidade do processo e a manipulao de meios naturais (presena de slidos em suspenso). Os mais utilizados so: Medidos de presso diferencial: vrios medidores so disponveis para correlacionar medidas de diferena de presso, geradas por dispositivos mecnicos, com vazes (placas de orifcio, tubos de Venturi). A forma mais comum a utilizao de placas de orifcio. Nesses dispositivos o diferencial de presso proporcional ao quadrado do fluxo. Assim, utilizando-se transdutores de presso, possvel obter-se uma medida em linha de vazo; Medidores magnticos: consistem em um tubo no magntico coberto com material isolante, com dois eletrodos em lados opostos, que produzem um campo magntico perpendicular ao fluxo do fluido. A passagem de lquidos eletricamente condutores por esse dispositivo permite o surgimento de uma fora eletromotriz entre os dois eletrodos. Essa fora amplificada em um conversor e fornece um sinal de corrente linear com a vazo. Esse tipo de medidor muito apropriado para medies de lquidos contendo lamas, polpas e lquidos condutores em geral. No oferece nenhuma restrio passagem dos fluidos, tendo uma perda de carga equivalente a de um duto com o mesmo comprimento ocupado pelo medidor; Balanas: reservatrios de alimentao, colocados sobre balanas conectadas a microcomputadores, so extremamente teis para a determinao da massa (volume) adicionada ao fermentador a qualquer instante. Sua principal vantagem a preciso da medida. Contudo, a diminuio significativa do peso do reservatrio, dependendo das vazes empregadas, pode tardar fraes de horas e pode levar a erros quando de realizam determinaes diferenciais em intervalos de tempo curtos.

2.3. Medidas baseadas em princpios fsico-qumicos 2.3.1. Acidez (pH) Como a temperatura, o pH frequentemente controlado nos processos

biotecnolgicos, devido sua influncia na atividade enzimtica e no metabolismo microbiano. O pH medido potenciometricamente com sondas esterilizveis, que consistem numa combinao de eletrodo de vidro com eletrodo de referncia. A metade correspondente ao eletrodo de vidro composta de membrana de vidro, fio de prata recoberto com cloreto de prata imerso em soluo de AgCl, saturado com KCl slido. A metade correspondente ao eletrodo de referncia feita do mesmo material (fio de prata e doluo de AgCl saturada). Variaes do pH do meio de cultura alteram a diferena de potencial eltrico nas faces da membrana de vidro. Essa diferena de potencial, medida em relao ao eletrodo de referncia, proporcional concentrao de ons entre as faces. Como a concentrao de ons H+ mantida constante dentro do eletrodo de vidro por soluo tampo, possvel correlacionar o potencial eltrico e a concentrao de ons H+ no meio de cultivo. O principal problema na operao prolongada do eletrodo a deteriorao do eletrlito devido a esterilizaes sucessivas da sonda.

PURIFICAO DE PRODUTOS BIOTECNOLGICOS 1. Introduo A recuperao e a purificao dos produtos presentes nos biorreatores fazem parte dos chamados tratamentos finais em processos biotecnolgicos. Em geral, essa a etapa mais complexa e onerosa de um processo fermentativo. Na recuperao e purificao de produtos so usadas muitas tcnicas comuns nos processos qumicos, dependendo das caractersticas de cada produto e do meio em que ele est contido. preciso, primeiramente, separar as clulas e outros materiais slidos do meio, atravs de mtodos fsicos como a sedimentao, a filtrao e a centrifugao. Em seguida, dependendo se o produto intracelular ou extracelular, so usados, para o primeiro caso, mtodos de ruptura de clulas, para liberao do produto, e feito o enriquecimento, usando diferentes tcnicas como, por exemplo, no caso da fermentao alcolica, a destilao, entre outras tcnicas. 2. Desenvolvimento 2.1. Principais tcnicas de purificao de produtos biotecnolgicos

Abaixo est representado um resumo sobre os principais mtodos de purificao em processos fermentativos. 2.1.1. Destilao A separao de componentes de baixo peso molecular pode realizada por destilao ligada diretamente ao biorreator. A utilizao de vcuo no fermentador permite, por exemplo, a remoo de etanol diretamente do meio de fermentao. O processo no apresenta riscos para os microrganismos (levedura ou bactria). O mtodo vantajoso para bactrias termoflicas, embora os custos para manuteno de vcuo sejam altos. uma operao que permite a separao de misturas de lquidos em componentes puros na qual se realiza a vaporizao e condensao sucessivas devido diferena de volatilidade entre os componentes do lquido.

Destilao descontnua ou simples: realizadas em bateladas. A carga lquida introduzida em um vaso provido de aquecimento, entrando em ebulio. Os vapores so retirados no topo atravs do condensador, onde so liquefeitos e coletados em outros recipientes. A primeira poro do destilado ser a mais rica em componentes mais volteis. A medida que prossegue a vaporizao, o produto vaporizado torna-se mais voltil e o lquido residual torna-se menos voltil, pois o percentual de componentes leves no lquido residual vai sendo esgotado. O destilado, que o vapor condensado, poder ser coletado em fraes separadas, denominadas de cortes;

Destilao fracionada: o tipo de destilao mais utilizada em indstrias de grande porte. Na destilao em batelada e por expanso brusca, a separao das substncias realizada de forma imperfeita e incompleta. Na destilao fracionada possvel obter a separao em vrias fraes, pois pode-se ter temperaturas, vazes e composies constantes em dado ponto da coluna. A destilao fracionada ocorre por meio de vaporizao e condensaes sucessivas por meio das diferentes volatilidades das substncias. A alimentao introduzida no meio da coluna descendo at atingir o trocador de calor aquecido por vapor, onde entrar em ebulio. Este vapor ascender a coluna em contra corrente com a alimentao atingindo o condensador onde ser liquefeito. 2.1.2. Cristalizao O processo de cristalizao principalmente utilizado para purificao de

produtos de baixo peso molecular. Os exemplos conhecidos so a precipitao de penicilina G (adio de lcool + acetato de potssio) e na produo de cido ctrico. Os bioprodutos podem ser removidos do meio fermentado por cristalizao. Este processo pode ser realizado na produo enzimtica de certos aminocidos e peptdeos como o aspartame. A cristalizao pode ocorrer tambm pela remoo de solventes volteis. A cristalizao uma operao de separao onde, partindo de uma mistura lquida (soluo ou slido fundido-magma) se obtm cristais de um dos componentes da mistura, com 100% de pureza. Na cristalizao criam-se as condies termodinmicas que levam as molculas a aproximarem-se e a agruparem-se em estruturas altamente organizadas, os cristais. Por vezes, as condies operatrias no permitem obter cristais

100% puros verificando-se a existncia, nos cristais, de incluses (impurezas) de molculas que tambm tm grande afinidade para o soluto. 2.1.3. Extrao por solvente O uso de solventes para extrair continuamente produtos a partir do meio fermentado, sob condies adequadas, especialmente o pH, uma tecnologia empregada com sucesso na indstria de antibiticos. So obtidos rendimentos de 95% em 1 a 4 estgios de contato. Uma forma elegante de integrar a separao de clulas com a separao primria de protenas a aplicao de tcnicas de extrao aquosa em duas fases. O meio fermentado ou o homogenato pode ser separado em duas fases pela adio de dois polmeros ou de um sal de polmero em soluo aquosa. Os pares usualmente empregados incluem: polietileno glicol/dextrana ou polietileno glicol/sais de sulfato ou fosfato. As vantagens e desvantagens so: A possibilidade de separar e purificar simultaneamente as clulas; A separao pode ser realizada continuamente; A desvantagem o alto custo dos polmeros, embora exista a possibilidade de recuper-los no processo. A separao de clulas neste tipo de processo pode ser atrativa para produo de protenas ou enzimas de alto valor, particularmente de origem intracelular.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

MLLER, J. M. Recuperao de Bioprodutos. UFSC, 2012. Disponvel em: <http://www.google.com/url? sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=18&cad=rja&ved=0CE4QFjAHOAo&url=http %3A%2F%2Fmoodle.ufsc.br%2Fmod%2Fresource%2Fview.php%3Fid %3D293019&ei=b86mULuAB-2M0QHJ8YGoDg&usg=AFQjCNHNGsvEv8t0Pk8S fP_oqRiKr42lrw>. Acesso em: 16 nov. 2012. SCHMIDELL, W. et al. Biotecnologia industrial. So Paulo: Editora Edgard Blcher Ltda, 2001. v. 2. http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_grad2004/queijos/processo. htm Disponvel em: <www.esalq.usp.br>. Acesso em: 6 mar. 2012.