Prctica 1: Manejo, distribucin y marcado de animales

Resumen El manejo, distribucin y marcado correcto de los animales de laboratorio es de suma importancia en la investigacin actual. La prctica tiene como objetivo: Aprender el manejo y el marcado correcto de los animales as como conocer y comparar dos mtodos para llevar a cabo su distribucin. Para lograr este fin se utilizaron ratas y ratones hembra los cuales se distribuyeron de manera aleatoria. Dichos animales fueron pesados, los datos obtenidos se conjuntaron y con ello realizamos el mtodo de la culebra japonesa. Las medias de los pesos de las ratas y ratones en ambos casos no mostraron diferencia significativa en los mtodos utilizados para su distribucin, pero el mtodo de la culebra japonesa tiene una menor dispersin de los datos obtenidos, aunque este tiene la desventaja de requerir mayor tiempo para realizarlo. Por tanto el mtodo aleatorio resulta ms eficiente para experimentos donde se requiere mayor cantidad de animales. Introduccin El avance en la investigacin en el rea de la salud se ha debido en gran medida al uso de modelos animales de experimentacin; prctica realizada desde la antigedad, gracias a ello se ha podido por ejemplo probar la seguridad de los frmacos. Los griegos reportaron investigacin acerca de la anatoma y fisiologa del ser humano basndose en los animales. Actualmente los animales que se utilizan son ratas, ratones, cobayos, pjaros, conejos, perros, gatos y primates. El tipo de animal depende en gran medida al tipo de investigacin a realizar; aunque los animales predilectos son ratas y ratones por ser animales fcilmente adaptables, fcil conservacin y tener periodos de reproduccin frecuentes2. Tanto en Mxico como en el mundo existen normas que regulan el uso y manejo adecuado de los animales para experimentacin. La Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999 se encarga de aplicar el principio de las 3R en el manejo de animales en el laboratorio: Reemplazar (utilizacin de alternativas que produzcan los mismos resultados, Reducir (utilizar un nmero mnimo de animales), Refinar (utilizar tcnicas adecuadas para evitar al mximo el sufrimiento)5. Los mtodos de marcaje generalmente utilizados son Fsicos, que consiste en alguna marca ya sea directamente en el animal o en jaulas (indirecto). Qumicos que consiste en la aplicacin de tatuajes o colorantes de manera temporal y los Biolgicos que son caractersticas propias del animal, como sexo, edad o caractersticas fenotpicas. El marcaje depende del tiempo que durar la investigacin; as para investigaciones a largo plazo se utilizan perforaciones o muescas en las orejas y para investigaciones a corto plazo son marcados con tatuajes o colorantes4. La distribucin de los animales permite tener una poblacin ms homognea, es decir que entre los individuos de un mismo grupo de investigacin no predomine alguna caracterstica y esto pueda afectar el curso de la misma. Existen dos mtodos para la distribucin de los animales. Uno de ellos es la Distribucin Aleatoria en el cual los individuos de la poblacin son asignados al azar para cada tratamiento. Otro mtodo utilizado es el de la Culebra Japonesa, el cual consiste en ordenar de manera decreciente alguna caracterstica de los animales utilizados. Se hace una tabla con el nmero de lotes necesarios y se acomoda la caracterstica medida de manera horizontal del mayor al menor simulando el movimiento de una culebra6. El manejo de los animales se realiza de acuerdo a la especie con la que se va a trabajar3; as los ratones tienen que ser sujetados por la base de la cola y colocarlo sobre una superficie rugosa donde pueda agarrarse, de tal modo que las patas traseras queden suspendidas. Se pinza la piel del cuello con el pulgar y el ndice de la otra mano y se levanta al animal4. Para la rata se coloca una mano alrededor del pecho con el pulgar situado bajo el mentn y el ndice alrededor del cuello, y se asegura la cabeza con firmeza. Con el resto de la mano, se sujeta toda la piel de alrededor de los hombros4. En el caso del conejo el modo adecuado de sujetarlo es tomndolo

con la mano derecha por la piel del dorso, a nivel de la regin lumbar y con la izquierda inmovilizando las patas traseras, que en ningn caso, deben quedar libres por la facilidad de poder herir con ellas a las personas que tratan de sujetarlo1.

Hiptesis Se sabe que el mtodo de la culebra japonesa tiene una mucho mejor homogeneidad en cuanto a su distribucin, entonces; si se reparten las ratas y ratones por este mtodo de distribucin se obtendra una menor variacin en los promedios y error estndar de pesos de animales de experimentacin entre los distintos lotes. Este mtodo distribuye los pesos en orden ascendente y se van haciendo lotes de seis en seis de izquierda a derecha y regresa de derecha a izquierda para una distribucin equitativa, pero es un mtodo tardado.

Diagrama

Tomar 6 ratas aleatoriamente, marcalas y pesarlas. Registrar los datos obtenidos . Tomar 10 ratones aleatoriamente, marcarlos y pesarlos. Registrar los datos obtenidos.

Ordenar los datos de cada uno de los animales tratados en forma decreciente de acuerdo al peso corporal otenido.

Practicar el manejo adecuado en los animales proporcionados.

Analizar las diferencias estadsticas con un anlisis de varianza unifactorial entre los diferentes lotes de animales.

Realizar dos grficas de barras (ratones y ratas) comparando los dos mtodos empleados. indicando la media, error estndar y s se encontr diferencia estadstica significativa.

Concluir el mtodo por el cual se obtuvo una distribucin homognea en los animales.

Resultados

Figura 1. Distribucin de ratones mediante los mtodos Aleatorio y de la Culebra Japonesa. Se muestra media de pesos corporales (g) el error estndar. *p<0.05. Mtodo aleatorio (azul), mtodo de la Culebra Japonesa (rojo).n=10 para ambos mtodos. De acuerdo al ANOVA realizado, no hay diferencia significativa entre los lotes y entre ambos mtodos de distribucin realizados, solo se nota una mayor dispersin de los datos en el mtodo Aleatorio y una mayor uniformidad de los datos en el mtodo de la Culebra Japonesa, en cuanto datos es referido a las medias de los pesos corporales (g) el error estndar.

Figura 2: Distribucin de ratas mediante los mtodos Aleatorio y de la Culebra Japonesa. Se muestra media de pesos corporales
(g) el error estndar. *p<0.05. Mtodo aleatorio (azul), mtodo de la Culebra Japonesa (rojo).n=6 para ambos mtodos. De acuerdo al ANOVA realizado, no hay diferencia significativa entre los lotes y entre ambos mtodos de distribucin realizados, solo se nota una mayor dispersin de los datos en el mtodo Aleatorio y una mayor uniformidad de los datos en el mtodo de la Culebra Japonesa, en cuanto datos es referido a las medias de los pesos corporales (g) el error estndar.

Fa

Discusin Los animales de laboratorio son instrumentos de trabajo, siempre tiles, y con frecuencia indispensables, para conseguir resultados efectivos dentro de la investigacin cientfica y biolgica. Es por esto que al ser manipulados debemos de evitar el ms mnimo error entro de su obtencin de datos. Se consideraron 2 diferentes formas para distribuir a los animales, de tal manera que sea homognea y equitativa, para que los datos a tratar no tengan variaciones altas que no nos determine en verdad lo que se busca. Es necesario determinar las medias de los pesos de las ratas y ratones en ambos casos, los cuales no mostraron diferencia significativa con respecto a los dos mtodos utilizados para que los animales fueran distribuidos, pero en ambos casos se nota que el mtodo de la culebra japonesa tiene una menor dispersin de los datos obtenidos, lo cual se ve reflejado en el error estndar, as como las medias marcan una tendencia ms uniforme entre los lotes sujetos a este mtodo de distribucin, debido a que distribuye los pesos en orden ascendiente y se van haciendo lotes de seis en seis de izquierda a derecha despus de derecha a izquierda (movimiento de zigzag), ya que este mtodo, al distribuir descendentemente y distribuye ms homogneamente a los animales sujetos a estudio en comparacin con el mtodo de distribucin aleatoria, hay una dispersin un poco mas notable en las medias de los pesos corporales error estndar, ya que en este mtodo se utiliza una calculadora para hacer la distribucin, en la cual los nmeros que aparecen pueden a veces ser repetitivos, causando poca uniformidad en la distribucin de los animales de laboratorio, por tanto una dispersin ms notable en nuestros resultados (medias de los pesos corporales error estndar). Por otro lado el mtodo de la culebra japonesa requiere que todos los animales sean pesados antes de ser distribuidos y acomodados en forma descendente conforme a los pesos obtenidos, lo cual no sera eficiente en lotes de animales de laboratorio de gran numero, debido a que se llevara mucho tiempo en realizar las mediciones de los pesos de todos animales, sin embargo el mtodo aleatorio aunque las medias y errores estndar varan un poco ms que en el mtodo de la culebra japonesa, es un mtodo ms rpido ya que no hay necesidad de pesar antes de la distribucin a todos los animales, y nuestros resultados no se veran afectados por una mala distribucin, ya que la diferencia entre ambos mtodos estadsticamente no existe, solo las tendencias de variacin en el mtodo aleatorio son un poco ms evidentes que las del mtodo de la culebra japonesa. La hiptesis planteada fue cierta con respecto a que si hay rangos menores en la dispersin de datos y a su uniformidad en los promedios, ya que al acomodarlos de manera creciente, siendo 60 datos diferentes, es mucho ms difcil ordenarlos de menor a mayor para cada lote, siguiendo la forma de zigzag en la tabla de registro.

Conclusiones El mtodo de distribucin de la culebra japonesa proporciona medias de los pesos corporales error estndar, con menor dispersin entre estos. El mtodo de distribucin aleatoria es mas rpido de realizar que el mtodo de distribucin de la culebra japonesa

Referencias 1. Fuentes, F., Mendoza R., Rivera R. 2010. Gua de manejo adecuado de animales de laboratorio: Conejo. Ministerio de Salud Lima. Instituto Nacional de Salud. 32-34 2. Falconi E., Garca L., Marn O., Padrn R., 2010. Manual para el manejo de animales con fines de experimentacin y enseanza. Universidad Jurez Autnoma de Tabasco. 3-6 3. Muoz J., Zaldvar S., Maldonado C., Muoz C., Moreno A. 2010. La habilidad para sujetar y manejar animales de laboratorio. Universidad Autnoma de Zacatecas. 2-4 4. Muoz J., Zaldvar S., Reveles G., Muoz Y. El uso de animales en el laboratorio de experimentacin. REDVET Vol. VII, No. 2. 1-29. 5. Secretaria de Agricultura, Ganadera, Desarrollo rural, Pesca y Alimentacin. Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999. Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de animales de laboratorio. 6. lvarez R. 2007. Estadsticas aplicadas a las Ciencias de la Salud. Ediciones Daz Santos. Espaa. 869-871