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DIAGNSTICO DE LABORATORIO
SEMINARIO Microbiologa General 2010
Bioq. Mara Viviana Bojanich
RECOLECCIN DE MUESTRAS
CONCEPTOS BSICOS La muestra debe ser material del verdadero sitio de infeccin. Debe recogerse con un mnimo de contaminacin (ej. saliva, piel, orina) Momento o perodo ptimo para tener la oportunidad de aislar los m.o. Obtener suficiente cantidad de muestra. Uso de dispositivos de recoleccin de muestras y medios de cultivo adecuados.
Obtener las muestras antes de la administracin de ATB. Rotular correctamente el envase que contiene la muestra
Nombre N de ID Material de .. Mdico Da/Hora Diagnstico presuntivo CUANDO LA MUESTRA NO ES BUENA POCO PUEDE HACER EL LABORATORISTA PARA LLEGAR A UN BUEN RESULTADO. TENER CLARO SI EL AISLAMIENTO EST ASOCIADO AL CUADRO CLNICO
Transporte de muestras
Tiempo lmite de dos horas entre la recoleccin y su procesamiento. Medios de transporte ( Stuart, Amies, CareyBlair). Funcin: preservar la viabilidad sin permitir multiplicacin significativa de m.o. Transporte externo embalar y rotular .
Ejemplos de sistemas de embalaje/envasado triple (Ilustraciones amablemente cedidas por la IATA, Montreal (Canad))
OMS 2005- Manual de Biseguridad en el laboratorio
Algunas consideraciones
Inoculacin: proceso de introduccin de bacterias viables en un medio de cultivo lquido o sobre la superficie de un medio slido. Cultivo puro: poblacin bacteriana homognea. Colonia: masa visibles de bacterias que se replicaron luego de ser diseminadas en la superficie de un medio de cultivo slido. Clon: las bacterias que se encuentran en una colonia y derivan de una nica clula. UFC (unidad formadora de colonias)
Identificacin: permite encuadrar un organismo en un grupo taxonmico especfico, dentro de una clasificacin previamente establecida. Nomenclatura: forma en que se puede definir y comunicar las caractersticas taxonmicas de un grupo de bacterias, denominadas especies. Especie: bacterias agrupadas y estudiadas segn sus aspectos genticos, morfolgicos, fisiolgicos y culturales. (Sistema binomial de Ligneo, Gnero y especie, ms variedades, biovares, tipos, etc) Ejemplo: Staphylococcus aureus, Escherichia coli
Procesamiento de muestras
MUESTRA
EXAMEN MICROSCPICO
EXAMEN MACROSCPICO
Fresco
Observacin directa entre porta y cubre
Gram
Ziehl-Neelsen Kinyoun
Examen en Fresco
Permite ver: Calidad de la muestra Grado de inflamacin (neutrfilos, piocitos, hemates) Elementos levaduriformes y miceliales Estructuras parasitarias Movilidad bacteriana
Coloraciones
Gram Zielhl-Neelsen Giemsa Azul de metileno
Coloracin de GRAM
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Medios selectivos
Medios diferenciales
Tcnicas de siembra
Estra Agotamiento Recuento semi-cuantitativo de colonias
Condiciones de cultivo
1) Seleccionar temperatura y atmsfera de incubacin - Temperatura 35-37C - Atmsfera :(de acuerdo a las exigencias de O2 y CO2) Aerobiosis o aire: 21% O2 Lata con vela: 12 a 17% O2 y 3 a 5 % CO2 Microaerofilia: porcentaje constante de 10% CO2 y 5% O2 Anaerobiosis: sistemas que provean 5% CO2, 85% N2, 10% H2 y NADA de O2 de manera constante. - Humedad 2) Tiempo necesario para visualizar el desarrollo En general: 24-48 hs Mycobacterium tuberculosis ms de 30 das
Estudio de colonias
Caractersticas macroscpicas de las colonias Observar: bordes o margen, color, hemlisis, textura, forma, elevacin Coloracin de gram o gram de colonia
Catalasa
Oxidasa
PyR