CAPTULO IV ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LA MITOCONDRIA

INTRODUCCIN
Mitocondria, diminuta estructura celular de doble membrana responsable de la conversin de nutrientes en el compuesto rico en energa trifosfato de adenosina (ATP), que acta como combustible celular. Por esta funcin que desempean, llamada respiracin, se dice que las mitocondrias son el motor de la clula. Se encuentran mitocondrias en las clulas eucariticas (clulas con el ncleo delimitado por membrana). El nmero de mitocondrias de una clula depende de la funcin de sta. Las clulas con demandas de energa particularmente elevadas, como las musculares, tienen muchas ms mitocondrias que otras. Por su acusado parecido con las bacterias aerbicas (es decir, que necesitan oxgeno), los cientficos creen que las mitocondrias han evolucionado a partir de una relacin simbitica o de cooperacin entre una bacteria aerbica y una clula eucariticas ancestral.

MITOCONDRIA
ORIGEN Y EVOLUCIN DE LAS MITOCONDRIA
EL ORIGEN ENDOSIMBINTICO DE LAS MITOCONDRIAS La explicacin ms aceptada del origen de las mitocondrias se conoce como la teora de la endosimbiosis. Sin embargo, no existe an total acuerdo sobre quienes fueron los protagonistas involucrados en este proceso de endosimbiosis, por lo que se han planteado varias alternativas. Una de las ms aceptadas, propone que estos organelos son descendientes de un endosimbionte bacteriano (una -proteobacteria) que se estableci en el citosol de un protoeucariote en una etapa temprana de la evolucin. Las secuencias de genes mitocondriales han permitido rastrear los orgenes de las mitocondrias hacia un ancestro de los miembros de la subdivisin de los rikettsiales, a la cual pertenecen parsitos intracelulares obligados de los gneros Rickettsia, Anaplasma y Ehrlichia Una hiptesis alternativa, la hiptesis del hidrgeno, sugiere que los eucariontes se originaron por la asociacin metablica entre una -proteobacteria anaerbica facultativa que generaba hidrgeno y bixido de carbono como productos de desecho, y una archaea metangena anaerbica estricta y autotrfica cuyo metabolismo dependa del hidrgeno. Esta propuesta explica las posibles presiones evolutivas que favorecieron el establecimiento de la endosimbiosis Esta hiptesis tambin sugiere que el origen de las mitocondrias y de las clulas eucariontes ocurri de manera simultnea. Una tercera hiptesis, la hiptesis de la sintrofa, sugiere que la fusin inicial entre una archea y una -proteobacteria dio lugar al primer protoeucariote. Este proceso fue seguido por la endosimbiosis de una -proteobacteria, la cual di origen a las mitocondrias Sea cuales fueren los protagonistas involucrados, se piensa que la endosimbiosis que dio origen a las mitocondrias ocurri en una sola ocasin por lo que se dice que estos organelos tienen un origen monofiltico (es decir, derivan de un ancestro comn). La endosimbiosis no es un fenmeno raro en la naturaleza, existen varias especies de bacterias que coexisten con un hospedero eucarionte o bacterias que habitan en el interior de otras bacterias Incluso, el fenmeno de simbiosis intracelular ha sido reproducido en el laboratorio, al introducir ciertas cepas bacterianas en algunas amibas y formar endosimbiontes estables. Actualmente, las mitocondrias conservan varias caractersticas similares a clulas procariontes: se dividen mediante un mecanismo similar a la fisin binaria; los procesos respiratorios que suceden en su interior son muy similares a los que ocurren en las bacterias aerbicas actuales; y en la matriz mitocondrial es posible encontrar varias copias de un genoma (Gonzlez-Halphen, Prez-Martnez, Funes, Reyes-Prieto y Santilln-Torres) mitocondrial as como ARNs y ribosomas de tipo bacteriano que participan en la sntesis de protenas. Recientemente, Karlberg y Col realizaron un anlisis de las ms de 400 protenas que se predice son funcionales en la mitocondria de la levadura Saccharomyces cerevisiae, y encontraron que la mayora de los genes provenientes de la -proteobacteria que dio origen a la mitocondria se han perdido en el transcurso de la evolucin del organelo.

As mismo, resulta interesante que no todas las protenas mitocondriales tienen su origen en el endosimbionte bacteriano, muchas de ellas provienen del hospedero, tal es el caso del translocador de adenn nucletidos, por lo tanto el proteoma mitocondrial actual es un mosaico de protenas de origen eubacteriano y arqueobacteriano. De tal suerte que slo un grupo pequeo de protenas se codifica en el genoma mitocondrial y se sintetiza utilizando la maquinaria traduccional del organelo. Sin embargo, la mayor parte de los componentes del proteoma mitocondrial (ms del 97%) son sintetizados en el citosol, ya sea en ribosomas que se encuentran libres o en polisomas que se encuentran adyacentes a la membrana externa mitocondrial. Se ha planteado que el reclutamiento de ribosomas por la membrana externa sucede exclusivamente para la sntesis de las protenas codificadas por los genes provenientes del ancestro premitocondrial

LA DIVERSIDAD DE LOS GENOMAS MITOCONDRIALES

Los genomas mitocondriales actuales son el resultado de una reduccin del genoma bacteriano del endosimbionte original, y a pesar de que en principio todos los genomas mitocondriales son derivados de un mismo ancestro comn, cada grupo particular de organismos ha evolucionado de manera distinta. Actualmente los genomas mitocondriales presentan una gran diversidad en tamao, organizacin, y complejidad gnica. Existen genomas mitocondriales circulares o lineales; el tamao puede variar desde un poco menos de 6 kb en Plasmodium falciparum hasta ms de 2000 kb en algunas plantas cucurbitceas Las diferencias tan notables en los tamaos de las molculas obedecen fundamentalmente a diferencias en el contenido de regiones intergnicas no codificantes. Por ejemplo, en plantas, slo entre el 10 y el 20 % del ADN mitocondrial (ADNmt) contiene genes estructurales el resto son regiones intergnicas no codificantes. En contraste, algunos genomas mitocondriales en protozoarios, ms del 90% de su ADNmt corresponde a genes estructurales. A pesar de la enorme diversidad de los genomas mitocondriales, en general todos ellos presentan genes que codifican para ARNs ribosomales (ARNr), ARNs de transferencia (ARNt), un conjunto variable de protenas involucradas en la sntesis de protenas, y un conjunto limitado de subunidades polipeptdicas de los complejos membranales translocadores de protones de la fosforilacin oxidativa (FOS-OX). Algunos genomas mitocondriales presentan incluso variaciones en el cdigo gentico universal. Por ejemplo, las mitocondrias de mamferos reconocen el codn UGA como codificador del triptofano en lugar de codn de trmino, y a los codones AGA y AGG como seales de terminacin en lugar de codificar una arginina. En las mitocondrias de algunos hongos, de mamferos, y de Drosophila, el codn AUU es reconocido como codificador de metionina en lugar de isoleucina, como sucede en el cdigo gentico universal. Cuando pensamos en la complejidad gnica y no en el tamao (es decir, cuando pensamos en el genoma mitocondrial que contiene el mayor nmero de genes funcionales), nos encontramos con el ADNmt de 69 kb del protista Reclinomonas americana. La mitocondria de este flagelado se conoce como la mitocondria que el tiempo olvid, ya que la estructura y organizacin de su genoma se asemeja mucho al de un genoma bacteriano reducido.

El genoma mitocondrial de R. americana es el que contiene el mayor nmero de genes, los cuales codifican 24 protenas que participan en la FOS-OX, y 38 protenas involucradas en la transcripcin, la traduccin, la importacin, y la maduracin de protenas. La comparacin del genoma mitocondrial de R. americana con el genoma completo de Rickettsia prowazekii (el genoma bacteriano ms parecido a un genoma mitocondrial) muestran semejanzas tanto en las secuencias como en la organizacin y disposicin de sus genes. Protistas

En el otro extremo del espectro de complejidad gnica se encuentran los genomas mitocondriales extremadamente reducidos de los parsitos apicomplejos Plasmodium falciparum y Theileria parva; el primero corresponde al agente responsable de la malaria, y el segundo, es el causante de la enfermedad conocida como fiebre de la Costa del Este en el ganado vacuno.

Estos ADNmt contienen nicamente tres genes que codifican para componentes de la cadena respiratoria cob, cox1, y cox3, que codifican al citocromo b y a las subunidades I y III de la citocromo c oxidasa respectivamente. Entre los genomas mitocondriales de tamao medio, encontramos los ADNmt de vertebrados y hongos. En mamferos encontramos un conjunto casi invariable de 13 genes que codifican para componentes clsicos de la FOS-OX (probablemente los componentes ancestrales, es decir, aquellas subunidades que se encontraban presentes en los complejos de la bacteria endosimbionte): nad1, nad2, nad3, nad4, nad4L, nad5, nad6 (subunidades del complejo I o NADH:ubiquinona oxidorreductasa), cob (el citocromo b del complejo III o ubiquinol:citocromo c oxidorreductasa), cox1, cox2, cox3 (subunidades del complejo IV o citocromo c oxidasa), atp6, atp8 y atp9 (subunidades de la F1FO-ATP sintetasa)

INTERNALIZACIN EN LA MITOCONDRIA DE LAS PROTENAS SINTETIZADAS EN EL CITOPLASMA

Aunque la contribucin del ADNmt es esencial, la mayor parte de la informacin para la funcin y biognesis mitocondrial se encuentra en el genoma nuclear. Estos genes, que en elcaso de la levadura se estima en poco ms de 400, son transcritos y eventualmente traducidos en el citosol. Las protenas resultantes son posteriormente transportadas al compartimento mitocondrial. Uno de los requerimientos para la importacin exitosa de la mayora de protenas, es la presencia de un pptido seal o presecuencia mitocondrial, es decir, una extensin polipeptdica en el extremo amino terminal de la protena que dirige a la protena recin sintetizada hacia la mitocondria. Esta presecuencia es generalmente pequea (de 20 a 60 residuos de aminocidos), capaz de formar una alfa-hlice anfiflica, que puede ser reconocida por la maquinaria de importacin mitocondrial. El trnsito de las protenas desde el citoplasma hasta su destino final en alguno de los compartimentos mitocondriales requiere, adems de las presecuencias mitocondriales, a chaperonas citoslicas y de la matriz mitocondrial, receptores localizados en la superficie mitocondrial, protenas que rodean los canales de paso y protenas de maduracin La insercin de las presecuencias en la membrana interna requiere adems, en la mayora de los casos, que la mitocondria est energizada, es decir, que exista un potencial electroqumico (.), probablemente para promover el movimiento electrofortico de cargas positivas a travs del aparato importador. Finalmente, una proteasa de la matriz mitocondrial cataliza (MPP) la remocin proteoltica de la presecuencia mitocondrial, obtenindose as, una protena madura. Las protenas cuya localizacin funcional se restringe a la membrana externa mitocondrial, suelen no presentar presecuencia. Al ser reconocidas por los receptores mitocondriales de la membrana externa, son transportadas a su destino final en la membrana externa o en el espacio intermembranal

LA MIGRACIN DE GENES Y LA EVOLUCIN DE LOS GENOMAS MITOCONDRIALES A partir del conjunto de 1000 genes o ms que debieron encontrarse en el genoma del ancestro premitocondrial, la tendencia general de la naturaleza ha sido la de reducir el contenido gnico de las mitocondrias. De esta manera, los genomas mitocondriales actuales representan Gonzlez-Halphen, PrezMartnez, Funes, Reyes-Prieto y Santilln-Torres solo una fraccin de aquellos genes que estaban presentes en el endosimbionte. La mayor parte de esta prdida de material gentico debe haber sucedido durante el establecimiento de la endosimbiosis, y en principio puede ser el resultado de dos fenmenos distintos: i) ii) la eliminacin de genes no esenciales o redundantes, cuya funcin pudo ser substituida por los genes nucleares del hospedero la exportacin de material gentico desde la protomitocondria hacia el ncleo celular

En los ltimos aos el estudio de genes que han cambiado su localizacin del genoma mitocondrial al nuclear ha permitido identificar pasos intermedios del fenmeno de migracin de genes. Entre ellos, destacan los resultados obtenidos con los genes: i) cox2, ii) rps12, y iii) rpl2: i) En el grupo de las plantas leguminosas es posible observar la coexistencia de dos copias diferentes del gen cox2 (el gen que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa). Se determin que al menos en cinco gneros de leguminosas el gen cox2 se encuentra presente tanto en el genoma mitocondrial como en el nuclear, y que ambas copias son transcritas y editadas Tambin en este grupo de plantas es posible observar pasos intermedios en la evolucin de la migracin del gen cox2 al ncleo: en el chcharo, una copia del gen se encuentra en la mitocondria y otra en el ncleo, sin embargo la copia nuclear no es funcional (ya hubo migracin, pero no una activacin exitosa). En el caso de la soya, la copia mitocondrial se encuentra intacta, sin embargo no es posible detectar ningn transcrito en la mitocondria, por lo que no se trata de un gen activo. En cambio, el gen nuclear si se expresa (migracin, integracin, y activacin exitosas, seguidas del silenciamiento del gen mitocondrial original). En el gnero Dumasia, se observan transcritos tanto del gen cox2 mitocondrial como de su copia nuclear (coexistencia de dos genes activos provenientes de diferentes compartimentos celulares). Finalmente, en el caso del frijol mungo, la copia mitocondrial ha sido alterada por mutaciones y prdida de algunos de sus fragmentos, de manera que es inactivo y apenas reconocible, mientras que slo la copia nuclear es activa (migracin exitosa hacia el ncleo conel gen mitocondrial original en vas de extincin). ii) El gen rps12 de Oenothera (que codifica a la protena ribosomal mitocondrial S12) migr al genoma nuclear y dos terceras partes del gen mitocondrial original han sido eliminadas iii) En el grupo de las plantas angiospermas se ha identificado que el gen rpl2 (que codifica a la protena ribosomal L12) ha sufrido diversas modificaciones, y actualmente se puede encontrar en cuatro diferentes versiones: a) el gen funcional est en el ADNmt; b) el gen funcional est en el genoma nuclear; c) el gen se encuentra fragmentado en dos, la regin 5 se encuentra en la mitocondria y la regin 3 se encuentra en el ncleo; o bien d) el gen se encuentra fragmentado en dos y ambas regiones se encuentran en el ncleo Estas observaciones indican que la fragmentacin de genes en dos genes funcionales, es un factor que contribuye a la migracin gnica. La migracin de genes desde la mitocondria al ncleo es un proceso que puede dividirse en varios pasos: en primer lugar, el material gentico debe atravesar las membranas mitocondriales e ingresar al ncleo a travs de los poros de la membrana nuclear. Posteriormente, debe integrarse en el genoma y adquirir elementos de regulacin y expresin nucleares. Despus de un cierto perodo durante el cual tanto el gen mitocondrial como la copia nuclear son funcionales, cualquiera de las dos copias puede ser silenciada y eventualmente eliminada.

Se han estudiado diversos modelos en los que se observan etapas intermedias de la relocalizacin, lo que nos permite conocer algunos de los patrones que rigen este fenmeno.

a) Salida del material gentico mitocondrial En primer lugar, debe existir una amplia disponibilidad del material gentico, ya que en principio los segmentos de ADN transferibles pueden incluir cualquier regin del genoma mitocondrial. Esto se resuelve de manera muy sencilla gracias a la redundancia de organelos: en general se localizan varias mitocondrias en cada clula y cada mitocondria a su vez, contiene un nmero variable de genomas. Estas dos caractersticas permiten que exista una fuente continua de molculas de ADN disponibles para migrar. Se ha encontrado que el tamao de los fragmentos mitocondriales transferidos al ncleo en varias especies van desde 31 pares de bases hasta 270 kb Este ltimo valor representa un caso nico, en el cual el 75% del genoma mitocondrial en Arabidopsis thailana migr y se integr en el ncleo. La relocalizacin del material gentico tambin puede suceder a partir de transcritos mitocondriales (ARNm) los cuales deben encontrarse en abundancia. En la migracin

mediada por ARNm solo se transfiere la informacin madura, ya que se eliminan los intrones La migracin de informacin gentica en forma de ARN requerir un paso ulterior de transcripcin reversa, de tal manera que sea finalmente una molcula de ADN la que se integre en el genoma nuclear. La migracin del material gentico implica su salida de la mitocondria, que podra suceder a travs de rompimientos temporales de las membranas mitocondriales. El escape del ADNmt tambin puede suceder a travs de la formacin de una vacuola que contenga un fragmento de ADN. Algunos estudios citolgicos han mostrado que existen asociaciones fsicas directas entre las membranas: nuclear y mitocondrial, las cuales podran favorecer la migracin de genes. Tambin se ha relacionado la transferencia de material gentico con factores del medio ambiente que rodea a las clulas, como cambios en la fuente de carbono disponible o en la temperatura, los cuales pueden modificar la fluidez de las membranas mitocondriales En S. cerevisiae se ha observado que la migracin de genes mitocondriales al ncleo puede ocurrir durante el transcurso de la vida de un solo organismo, lo que ha permitido realizar observaciones experimentales directas. En esta levadura, la migracin gnica es un fenmeno intracelular dependiente del estado del ADNmt y del estado metablico de la clula, pero no de un intermediario de ARNm. La tasa de escape del ADNmt al ncleo en levadura sucede con una frecuencia de aproximadamente 5 x 10-6 fragmentos por clula por generacin; mientras que la tasa de migracin inversa, del ADN nuclear hacia la mitocondria, es 100,000 veces menor Otra forma de migracin de fragmentos del ADNmt hacia el ncleo ocurre en el hongo Podospora anserina. En este organismo, el envejecimiento celular est relacionado con la migracin de genes. Se ha observado que fragmentos discretos de ADNmt son cortados del genoma y permanecen en el interior de las mitocondrias de individuos senescentes formando plsmidos que se replican a una velocidad ms acelerada que el resto del genoma mitocondrial. De esta manera, al final de la etapa de envejecimiento estos vectores constituyen la mayor parte del material gentico presente. Una fraccin de los plsmidos formados migran al ncleo y se integran al genoma nuclear Otro caso particular de migracin de genes al ncleo lo presentan las algas clorofceas, como Chlamydomonas reinhardtii y Polytomella sp. En la mayora de los organismos eucariotes, las tres subunidades ms grandes de la citocromo c oxidasa (COXI, COXII, COXIII) se encuentran codificadas en el ADNmt en los genes correspondientes cox1, cox2, y cox3, y son sintetizadas en la matriz mitocondrial. En las algas clorofceas, las subunidades COXII y COXIII se encuentran codificadas en el genoma nuclear. Adems, el gen cox2 de las algas clorofceas se escindi en dos genes independientes, denominados cox2a y cox2b. El gen cox2a codifica para la subunidad COXIIA, que corresponde al extremo amino terminal y a la regin hidrofbica (transmembranal) de una subunidad COXII ortodoxa. Por su parte, el gen cox2b codifica para la protena COXIIB, equivalente a la porcin soluble, que une al centro diatmico de cobre CuA en una subunidad COXII tradicional. Se piensa que ambas subunidades son importadas al interior de la mitocondria y se ensamblan de manera no covalente para formar un heterodmero estructural y funcionalmente equivalente a la subunidad COXII tradicional Este es el primer ejemplo en la literatura de un gen mitocondrial que codifica para un componente de la FOS-OX que fue escindido en dos fragmentos funcionales, los cuales migraron independientemente y se relocalizaron en diferentes sitios del genoma nuclear.

b) Insercin del material gentico mitocondrial en el genoma nuclear Una vez que un fragmento de ADN ha salido de la mitocondria puede entrar al ncleo fcilmente. Los genes migrantes pueden integrarse en el genoma nuclear a travs de varios mecanismos, que incluyen fusin en los extremos recombinacin homloga y recombinacin no homloga En estos tres mecanismos se ha propuesto que la integracin de los genes migrantes se lleva a cabo en regiones que no interfieren con la actividad de los genes nucleares, como en intrones, en regiones adyacentes, o en regiones telomricas Sin embargo, como se describe ms adelante, hay excepciones: existen genes mitocondriales que migraron y se insertaron en los marcos de lectura abiertos de los genes nucleares, interrumpindolos e inactivndolos. c) Activacin del gen relocalizado en el ncleo Una vez que el gen mitocondrial se ha insertado en el genoma nuclear, debe sufrir ciertas modificaciones para poder expresarse. Estos cambios consisten en la adquisicin de secuencias que codifiquen para presecuencias mitocondriales, cambios en el uso de codones, adquisicin de promotores, y de seales de poliadenilacin. Algunas de estas modificaciones se discuten a continuacin: i) Adquisicin de una presecuencia que codifique para un pptido seal que le permita a la protena ingresar a la mitocondria. La protena mitocondrial sintetizada en el citosol debe ser dirigida hacia el interior de la mitocondria. Se ha planteado que las presecuencias mitocondriales pueden adquirirse: 1) como resultado de un reordenamiento de ADN que coloca, al azar, presecuencias mitocondriales potenciales en el extremo 5 de algunos marcos abiertos de lectura. 2) por la modificacin puntual de los extremos amino terminales de algunas protenas que pueden generar una secuencia importadora funcional; 3) por un mecanismo de duplicacin y recombinacin de presecuencias ya existentes Se ha sugerido que cualquier genoma nuclear contiene un nmero de secuencias latentes que podran funcionar como presecuencias mitocondriales. En otro tipo de experimentos, se hicieron fusiones gnicas entre fragmentos al azar del genoma de Escherichia coli y genes que codifican a protenas mitocondriales, y se estudi la importacin de las protenas quimricas correspondientes. Se encontr que aproximadamente un 2.5% de las clonas de E. coli mostraron la capacidad de codificar una presecuencia capaz de dirigir a las protenas correspondientes hacia la mitocondria Esto denota la extrema versatilidad de las presecuencias mitocondriales, las cuales para poder funcionar, requieren solamente de una estructura secundaria helicoidal, cargada positivamente anfiflica, an cuando la estructura primaria est poco conservada. La estructura anfiflica es importante para reconocer y unirse a los receptores localizados en la membrana externa mitocondrial. La carga neta positiva puede ser necesaria para el proceso de importacin a travs de la membrana interna mitocondrial.

Un caso extraordinario de adquisicin de pptido seal es el ilustrado por el gen sdh3 de Arabidopsis (que codifica una subunidad de la succinato deshidrogenasa) y que migr de la mitocondria al ncleo, insertndose en una de las dos copias del gen hsp70 (que codifica para una chaperona mitocondrial). La insercin del gen sdh3 interrumpi a uno de los dos genes hsp70, inactivndolo, pero manteniendo intacta a la regin que codifica para la presecuencia de hsp70. De esta manera, el gen migrante sdh3 adquiri una regin preexistente que codifica un pptido seal que le permite a la protena SDH3 ingresar a la mitocondria. Otro ejemplo interesante es el del gen mitocondrial migrante rps14 del arroz, el cual se insert en un intrn del gen nuclear sdh2, y adquiri una regin codificante para presecuencia mitocondrial por procesamiento alternativo de los ARNm. As, la misma presecuencia mitocondrial de la protena RPS14 funciona tanto para la propia RPS14 como para la SDH2. Las presecuencias identificadas en las protenas mitocondriales COXIII, COXIIA, ATP6 y NAD4L codificadas en el ncleo del alga C. reinhardtii son particularmente largas, de 107, 133, 119 y 143 residuos de aminocidos respectivamente, y son ricas en alaninas, prolinas, y en residuos cargados positivamente, especialmente argininas. En S. cerevisiae se ha observado que la duplicacin de las presecuencias mitocondriales favorece la importacin in vivo e in vitro de protenas hidrofbicas a la mitocondria ,tal vez porque mejora de alguna manera la interaccin entre el precursor y la maquinaria de importacin Una presecuencia larga tambin podra alterar el plegamiento de la protena como lo hace una chaperona, aumentando su capacidad de importacin En general, las presecuencias mitocondriales tienen dos sitios de edicin, y el fenmeno de importacin al interior de la mitocondria involucra a tres regiones diferentes de la presecuencia: el primer segmento dirige a la protena hasta la mitocondria; la segunda seccin gua a la protena hasta la matriz mitocondrial, y el tercer segmento lleva a la protena hasta la membrana interna mitocondrial. ii) Modificacin del uso de codones Los cambios en el uso de codones que sufrieron los genes migrantes son particularmente evidentes en el caso de C. reinhardtii. Esta alga verde utiliza el cdigo gentico universal tanto en la mitocondria como en el ncleo, hecho que facilita la migracin de genes. Sin embargo, el uso preferencial de codones utilizado en el ncleo es radicalmente distinto al uso de codones mitocondrial. El genoma nuclear tiene un alto contenido de G + C y por lo tanto los codones ms utilizados son aquellos que presentan una G o una C en la tercera posicin. Todos los genes que migraron de la mitocondria al ncleo de esta alga verde (los genes cox3, cox2a, cox2b, atp6 y nad4L), presentan un uso de codones claramente nuclear, lo que sugiere que una vez integrados en el ncleo, su secuencia original sufri numerosas modificaciones Para que una migracin sea exitosa, el gen mitocondrial relocalizado en el genoma nuclear debe activarse y convertirse en un gen funcional. Si por alguna razn no se llevan a cabo las modificaciones necesarias para activarlo, el gen puede desaparecer, o bien permanecer en el genoma nuclear como un pseudogene. En algunos grupos de organismos la migracin de genes al ncleo y su activacin funcional parece haber cesado en algn momento de la evolucin. Tal es el caso de los vertebrados, los cuales muestran un contenido gnico prcticamente constante Una de las razones por las cuales la migracin de genes mitocondriales al ncleo se ha detenido en los animales y no en las plantas, podra relacionarse con la diferencia que existe entre el cdigo gentico de las mitocondrias animales y el cdigo gentico universal que se emplea en el ncleo celular, ya que en las plantas no existe tal diferencia. Es interesante hacer notar que existen copias de genes mitocondriales que se localizan actualmente en los genomas nucleares de los vertebrados en la forma de pseudogenes, y que podran sugerir que han existido migraciones no exitosas, en las cuales los genes se integraron, pero nunca se activaron (o bien se activaron pero sus productos proteicos nunca pudieron importarse correctamente al interior de la mitocondria, por lo que eventualmente se inactivaron) En el genoma nuclear de los

primates se localizan pseudogenes de cob y en los seres humanos, se han identificado numerosos pseudogenes de cox1 y cox2. Dichas secuencias se consideran fsiles moleculares que representan migraciones al ncleo que no fueron exitosas La presencia de estos pseudogenes mitocondriales en el genoma nuclear ilustra una vez ms la tendencia de la mitocondria a exportar su material gentico hacia el ncleo. d) Prdida del gen original Durante un periodo probablemente corto, el gen mitocondrial y el gen migrante establecido en el ncleo deben expresarse simultneamente. Dependiendo del azar y de la tasa de mutacin de cada genoma, eventualmente algunas de las dos copias del gen se silenciar y se eliminar. La eliminacin de un gen es un fenmeno paulatino durante el cual se van perdiendo y editando fragmentos, hasta que llega un momento en que su transcripcin desaparece. La inactivacin de los genes tambin puede suceder por la introduccin de un codn de trmino en la secuencia nucleotdica .En cualquier caso, eventualmente el gen se elimina por completo y desaparece de alguno de los dos genomas. Como se mencion la tasa de migracin de material gentico desde la mitocondria hacia el ncleo es mucho mayor que en el sentido inverso. Sin embargo, aunque es un fenmeno raro, existen algunos ejemplos de la adquisicin de genes forneos por la mitocondria, dos de ellos son los que se describen a continuacin: i) En el genoma mitocondrial de Arabidopsis thaliana se encuentran 16 secciones que corresponden a fragmentos de ADN del cloroplasto, fragmentos de genes nucleares, retrotransposones y secuencias de origen viral. Algunos de los genes contenidos en estos fragmentos son funcionales, por ejemplo, seis de los genes que codifican a ARNt de origen cloroplastdico, ahora residen en el genoma mitocondrial. ii) En el genoma mitocondrial de ciertos corales existe un gen que podra codificar una protena involucrada en el proceso de reparacin del ADN (similar a la protena MutS). Se ha planteado que este gen es de origen mitocondrial y en algn momento se transfiri al ncleo, donde se diversific y origin una familia de seis genes. Finalmente uno de ellos se reintegr al genoma mitocondrial, donde se localiza actualmente. Es evidente que la migracin de genes desde la mitocondria hasta el ncleo es un proceso complejo que requiere de cambios importantes en los genes migrantes. El proceso nos lleva a postular dos preguntas: 1) Qu presiones evolutivas favorecen la migracin de genes mitocondriales al ncleo? 2) Qu ha ocasionado que en los genomas mitocondriales permanezcan ciertos genes? Actualmente, estas dos preguntas no pueden ser contestadas con precisin, pero algunas ideas nos permiten acercarnos a posibles respuestas.

QU FAVORECE LA MIGRACIN DE GENES MITOCONDRIALES AL NCLEO? Una de las hiptesis planteadas parte del hecho de que en los organelos suceden reacciones de xido reduccin que pueden incrementar la tasa de mutacin gnica inducida por la presencia de radicales libres y especies reactivas de oxgeno, por lo que la informacin gentica podra conservarse de

mejor manera estando en un ambiente como el nuclear Sin embargo, esto no es necesariamente cierto para los hongos y las plantas, cuyos genes nucleares tienen tasas de mutacin ms altas que los mitocondriales. Otra explicacin toma como base el que las mitocondrias se reproducen exclusivamente de manera asexual. Cuando no existe reproduccin sexual en un grupo de organismos (en este caso de organelos), no existe recombinacin gentica y por lo tanto, la produccin de mutaciones letales o de prdidas en el genoma sucede de manera irreversible. Eventualmente la acumulacin de mutaciones llevara a la extincin de los organelos. Cuando un gen migra al ncleo, se mueve de un ambiente predominantemente asexual hacia un genoma con recombinacin sexual. Sin embargo, en organismos como la levadura S. cerevisiae el ADNmt presenta una alta tasa de recombinacin que puede ser usada como mecanismo de reparacin de lesiones del genoma mitocondrial

QU FAVORECE QUE CIERTOS GENES PERMANEZCAN EN EL GENOMA MITOCONDRIAL?

La migracin de genes de los organelos al ncleo es el resultado de un proceso indispensable para el establecimiento de simbiosis metablicas estables. Este fenmeno est ampliamente documentado tanto en mitocondrias como en cloroplastos En principio, los mismos procesos que han hecho que la mayor parte de los genes mitocondriales hayan migrado al ncleo deberan estar actuando sobre los genes que an permanecen en las mitocondrias. Esto nos puede llevar a concluir que todos los genes mitocondriales deberan eventualmente migrar hacia el ncleo. Un ejemplo de esta posible migracin total lo representan los hidrogenosomas. Se piensa que estos organelos, presentes en algunos protistas amitocondriados, se originaron a partir de las mitocondrias. La mayora de los hidrogenosomas reportados hasta ahora carecen de material gentico, representando un caso extremo de migracin total; tal vez porque el proceso de fosforilacin oxidativa no existe en estos organelos y por lo tanto los genes que participan en esta va, y que se encontraban en la mitocondria se perdieron sin ninguna dificultad. Sin embargo, todas las mitocondrias estudiadas a la fecha poseen un genoma, y como se mencion, el contenido mnimo de genes es ms o menos conservado entre las diferentes especies. Existen varias hiptesis acerca de por qu en los genomas mitocondriales se conserva todava un conjunto limitado de genes. Una posible explicacin ha sido que en las mitocondrias de algunos organismos se utiliza un cdigo gentico diferente al cdigo gentico que se emplea en el genoma nuclear. Esta heterogeneidad de lenguajes, podra evitar la expresin de los genes mitocondriales relocalizados en el ncleo. Sin embargo, esto no explica por qu cierto grupo de genes permaneci en los genomas mitocondriales durante la migracin masiva de genes hacia el ncleo, cuando el fenmeno de endosimbiosis apenas comenzaba y no existan diferencias en los cdigos genticos. Existen varias hiptesis acerca de por qu en los genomas mitocondriales se conserva todava un conjunto limitado de genes. Una posible explicacin ha sido que en las mitocondrias de algunos organismos se utiliza un cdigo gentico diferente al cdigo gentico que se emplea en el genoma nuclear. Esta heterogeneidad de lenguajes, podra evitar la expresin de los genes mitocondriales relocalizados en el ncleo. Sin embargo, esto no explica por qu cierto grupo de genes permaneci en los genomas mitocondriales durante la migracin masiva de genes hacia el ncleo, cuando el fenmeno de endosimbiosis apenas comenzaba y no existan diferencias en los cdigos genticos. Tambin se ha planteado que en la mitocondria permanecen aquellos genes cuya expresin se regula por el estado redox de sus productos o de los acarreadores de electrones con los cuales interactan. Esto permitira que la clula disponga de una localizacin adecuada del gen que codifica protenas cuya funcin demanda un control regulatorio rpido, directo e independiente de

otros compartimentos y procesos celulares En esta hiptesis, se asume que los genomas mitocondriales ya exportaron todos los genes potencialmente exportables. Otra hiptesis que explica la permanencia de ciertos genes en el ADNmt toma en consideracin la hidrofobicidad de los productos proteicos correspondientes. Las protenas codificadas en los ADNmt son generalmente aquellas que se localizan en la membrana interna mitocondrial y que se caracterizan por ser altamente hidrofbicas. Se ha propuesto que la sntesis en el citosol de este tipo de protenas podra ocasionar que no se dirigieran al compartimento celular adecuado (por ejemplo, que se insertaran en las membranas del retculo endoplsmico en lugar de hacerlo en las mitocondrias). Adems, al tratarse de polipptidos hidrofbicos podra ocurrir que el transporte a travs del sistema de membranas mitocondrial resultara imposible, o bien que los productos proteicos se agregaran irreversiblemente. Se ha propuesto que las protenas altamente hidrofbicas, no pueden ser importadas correctamente a la mitocondria ; por lo que deben ser sintetizadas en el interior del organelo para ser insertadas a la membrana interna mitocondrial y adquirir la conformacin topolgica necesaria para su acoplamiento correcto en el complejo respiratorio al que pertenecen. Hay dos ejemplos de protenas que se han conservado en los genomas mitocondriales de todos los organismos caracterizados hasta la fecha: el gen cob que codifica un citocromo tipo b de ocho cruces transmembranales y el gen cox1 que codifica la subunidad I de la citocromo c oxidasa que tiene doce cruces transmembranales. Aquellos organismos que poseen complejo I (NADH-ubiquinona oxidorreductasa), tambin contienen varios de los genes nad en su genoma mitocondrial (los genes nad1, nad2, nad3, nad4, na4L y nad5), que codifican para protenas altamente hidrofbicas con 3 a 16 cruces transmembranales. En S. cerevisiae se han realizado estudios in vivo intentando dirigir hacia la mitocondria construcciones citoplsmicas de longitudes variables del citocromo b; mostrando que la importabilidad de los polipptidos no se encuentra forzosamente relacionada al nmero de cruces transmembranales que posea. Estos estudios sugirieron que los parmetros crticos son el promedio mximo de hidrofobicidad de una cadena de entre 60 y 80 residuos de aminocidos (mesoH) y la hidrofobicidad mxima de las regiones transmembranales. Estos valores son indicadores de la facilidad o dificultad con la que una protena puede ser importada a la mitocondria. De acuerdo a estos parmetros, las protenas de orgen nuclear ATP6, NAD4L, COXIII, COXIIA y COXIIB del alga C. reinhardtii tienen una hidrofobicidad reducida que permite su importacin a la mitocondria. Los anlisis de hidropata realizados para las subunidades COXIII y ATP6 mostraron que la reduccin de la hidrofobicidad sucede preferentemente en aquellos segmentos transmembranales que no estn involucrados en la funcin de la subunidad ni en interacciones importantes subunidadsubunidad. La gran importancia de la disminucin de la hidrofobicidad lo ilustra el caso de la subunidad COXII de leguminosas. Todas las leguminosas que exhiben genes cox2 tanto nucleares como mitocondriales, muestran una hidrofobicidad disminuda en el primer segmento transmembranal de la protena COXII codificada en el ncleo con respecto a la codificada en la mitocondria (es decir, la protena mitocondrial es siempre ms hidrofbica que la nuclear). Con tcnicas de ingeniera gentica, Daley y col. (59) expresaron la COXII mitocondrial con la presecuencia de la COXII nuclear, y observaron que la protena mitocondrial no ingresaba a la mitocondria. Al mutar dos residuos de la primera regin transmembranal de la COXII mitocondrial madura, y substituirla por los aminocidos (menos hidrofbicos) de la COXII nuclear, la protena ingres a la mitocondria sin problemas. Por lo tanto, la disminucin de la hidrofobicidad en unos cuantos residuos crticos, son suficientes para permitir la importacin de una protena mitocondrial expresada en el ncleo que cuente con una presecuencia.

EVA MITOCONDRIAL Eva mitocondrial habra sido una mujer africana, que segn la teora genetista, correspondera en la evolucin humana al ancestro femenino que poseea las mitocondrias del cual descienden todas los mitocondrias de la poblacin humana actual. Por ello, Eva mitocondrial correspondera a un nico antepasado femenino de la que diverge toda la poblacin actual de Homo sapiens (seres humanos); la cual vivi hace unos doscientos mil aos, y cuyos descendientes se habran extendido por todo el planeta desde hace unos ciento cincuenta mil aos. Una comparacin del ADN mitocondrial de distintas razas y regiones sugiere que todas las secuencias de este ADN tienen envoltura molecular en una secuencia ancestral comn. Asumiendo que este se obtiene slo de la madre estos hallazgos implicaran que todos los humanos vivos descienden en ltima instancia de una mujer, posiblemente una mujer prehumana. A esta mujer la llaman Eva mitocondrial y es el antepasado comn a todos los seres humanos si seguimos la lnea de las madres de cada persona, en el rbol genealgico de toda la humanidad. Basndose en la tcnica de Reloj molecular (molecular clock en ingls), los investigadores creen que Eva vivi aproximadamente hace 150.000 aos o como mximo 200.000 aos. Esto sirve de sustento a la teora que afirma que el ser humano (Homo sapiens) evolucion en frica hace unos 450.000 aos aproximadamente (ver Evolucin humana).

DESCENDENCIA POR LNEAS MITOCONDRIALES

La Eva mitocondrial recibe su nombre de la Eva que se relata en el libro del gnesis de la Biblia. Esto ha llevado a algunos malentendidos entre el pblico general. Un error comn es creer que Eva fue el nico ancestro femenino viviendo en su tiempo. Es muy probable que muchas mujeres anteriores a Eva y tambin muchas pertenecientes a aquella poca, hayan tenido descendencia hasta el da de hoy. Sin embargo, solo la Eva mitocondrial produjo una lnea completa de hijas mujeres hasta nuestros tiempos; y es el ancestro del cual converge toda la poblacin actual. El fundamento del linaje de la Eva mitocondrial, es que al revisar el rbol genealgico de todos los seres humanos que viven en la actualidad (a travs de la gentica), si se sigue una lnea de cada individuo a su madre, y si estas lneas se continan desde cada una de esas madres a sus respectivas madres, se estar retrocediendo en el tiempo y todas las lneas convergern en un punto en que todas las hijas comparten la misma madre. En este seguimiento, cuanto ms se retroceda en el tiempo, menos linajes quedarn hasta que quede solo uno; el cual correspondera a la Eva mitocondrial. Por ello, cuanto ms pequea es una poblacin, ms rpidamente converge el ADN mitocondrial; las migraciones de pequeos grupos de personas derivan (Deriva gentica) luego de unas pocas generaciones hacia un ADN mitocondrial comn. Esto sirve de sustento a la teora del origen comn (Single-origin hypothesis en ingls). Esta teora plantea que todos los primeros pobladores de Asia, Europa y Amrica descendan de un grupo que emigr de frica hace entre 100.000 y 200.000 aos.

ADN MITOCONDRIAL
Sabemos de Eva a causa de las mitocondrias (un orgnulo celular) que slo se pasan de la madre a la prole. Cada mitocondria contiene ADN mitocondrial y la comparacin de las secuencias de este

ADN revela una filogenia molecular. As como las mitocondrias se heredan por va materna, los cromosomas Y se heredan por va paterna. Por lo tanto es vlido aplicar los mismos principios con estos. El ancestro comn ms cercano por va paterna ha sido apodado Adn cromosomal-Y. Es muy importante aclarar que no vivi en la misma poca que la Eva mitocondrial. Por el contrario, su existencia fue por lo menos 50 mil aos ms reciente.

ESTRUCTURA DE LA MITOCONDRIA
El tamao, forma y organizacin estructural de las mitocondrias, as como el nmero de estos organelos por clula y su localizacin intracelular, varan considerablemente dependiendo del organismo, tejido y estado fisiolgico de la clula examinada. Algunas clulas, por lo comn organismos unicelulares, contienen una sola mitocondria. En la figura se muestra una Fotomicrografa de la mitocondria de la espora mvil de Blastocladielia ernersonia, un hongo, y un modelo de la de mitocondria de Chlorella fusca, un alga. En el otro extremo de las clulas como Chaos chaos, una amiba, que contiene varios cientos de miles de mitocondrias. Las clulas de los animales superiores tambin numerosas mitocondrias. Los espermatozoides contienen menos de 100 de estos organelos. Las clulas del rin tienen por lo general menos, de 1000 y las clulas del hgado varios miles. Como se mencion anteriormente, las clulas procariticas, como las bacterias y algas verdiazules, carecen de mitocondrias. Las funciones asociadas a estos organelos se llevan a cabo en el citosol o estn asociadas a la membrana plasmtica. Considerando su fina estructura, las mitocondrias son organelos especialmente interesantes y muy, complejos. Debido a que son muy pequeas, la microscopia ptica revela en forma activa sustancias dentro de ella o muestran movimientos) pueden revelar grandes nmeros de mitocondrias durante los perodos de actividad y aun menor nmero durante los periodos de reposo. En levaduras que carecen en un medio, anaerobio, las generaciones sucesivas contienen cada vez menos mitocondrias. Sin embargo las clulas que han sido cultivadas en ausencia de oxgeno, rpidamente producen grandes nmeros de mitocondrias si al cultivo se le aaden los nutrientes y el oxgeno necesarios. Se observa tambin una mayor velocidad de crecimiento y divisin celulares debido a que el gran numero de mitocondrias produce ms ATP para facilitar la absorcin de los nutrientes y la sntesis de los componentes celulares. El tamao y la forma de las mitocondrias, al igual que su nmero en la clula, vara de un tejido a otro y con el estado fisiolgico de las clulas. La mayora de las mitocondrias son organelos ovoides que tienen un dimetro de 0.5 a 1.0 m y una longitud mayor a los 7 m. Por lo comn, cuanto menor es el nmero de mitocondrias por clula ms grandes son los organelos individuales. En muchas fotomicrografas electrnicas, las mitocondrias parecen la tener la forma de clavas o de raqueta. Estas formas irregulares pueden ser un reflejo del proceso de fisin a travs del cual se piensa las mitocondrias proliferan. Las formas de observan la arquitectura mitocondrial est por lo tanto basado en dcadas de estudio, utilizando el microscopio electrnico de transmisin. En la figura 16.6 se muestra la organizacin tpica observada, en cortes finos de estos organelos. En aos recientes, se han obtenido algunas fotomicrografas casi espectaculares y con una gran informacin acerca de la estructura mitocondrial mediante la microscopia electrnica, de barrido de organelos que se han abierto. En el pasado, el MEB no haba ofrecido el grado de resolucin necesario para revelar la subestructura de estos organelos. Sin embargo, utilizando una tcnica especial de fractura y un nuevo MEB de alta resolucin, K. Tanaka, Y. Masunaga y T. Naguro han obtenido fotomicrografas detalladas de mitocondrias y de varios otros organelos. Despus de la fijacin del tejido en OsO4, las muestras se congelan, se abren y, son tratadas con dimetisulfxido (DMSO). Despus de un segundo tratamiento con osmio, seguido de deshidratacin con etanol y desecacin hasta un punto crtico, la estructura fina se observa con claridad. El efecto tridimensional es notable y coincide en forma sorprendente con los modelos tridimensionales formulados en base en los primeros estudios con el MET. Debido a que las mitocondrias de diferentes orgenes tienen ciertas caractersticas en comn, es posible describir un organelo generalizado. La mitocondria est limitada por dos membranas distintas llamadas membranas interna y externa. La membrana interna

separa el volumen del organelo en dos fases: la matriz, que es un lquido semejante a un gel rodeado por la membrana interna, y el espacio intermembrana lleno de lquido entre las membranas interna y externa. La matriz y los espacios intermembrana, as como las membranas interna y externa, contienen varias enzimas. La matriz contiene varias de las enzimas del ciclo de Krebs (ciclo de cido tricarboxlico o ciclo ATC) as como tambin sales y agua. Suspendidos en la matriz hay filamentos de DNA circular y ribosomas. Se han observado varios otros corpsculos en la matriz mitocondrial de varios tipos de clulas. stos incluyen filamentos y tbulos, que parecen ser inclusiones cristalinas de protenas, y un gran nmero de grnulos pequeos. El espacio intermembrana posee algunas enzimas, pero en general carece de inclusiones en forma de partculas.

MEMBRANAS MITOCONDRIALES
Las membranas interna y externa difieren notablemente en estructura y funcin. Cerca del 50% del peso de la membrana externa la constituye los lpidos y contiene una mezcla curiosa de enzimas que participan en actividades tan diversas como la oxidacin de la adrenalina y la degradacin del triptfano y la organizacin de los cidos grasos. La membrana interna es mucho mas rica en protenas que la membrana externa y estos ltimos estn fijas a mayor profundidad de la membrana. La membrana interna es rica en cardiolapina, un fosfolpido con cuatro cidos grasos lo que no existe en la membrana externa. La cardiolipina contribuye para dificultar el trnsito de los iones a travs de la membrana mitocondrial interna ya que es funcionalmente muy importante, porque una concentracin elevada de iones, en la matriz de la mitocondria, perturbar el gradiente que genera el flujo de protones y la aceptacin de energa en el ATP, por el proceso quimioosmtico . Las membranas mitocondriales externa e interna definen dos compartimiento submitocondriales: el espacio intermembranoso, entre las dos membranas, y la matriz o compartimiento central. La membrana externa define el permetro exterior liso de la mitocondria y contiene la purina mitocondrial, un canal proteico transmembrana de estructura similar a los de las purinas bacterianas. La membrana interna presenta invaginaciones en forma de tabiques, formando las cretas, que aumentan significativamente la superficie de esa membrana. En ciertos Protozoarios y en clulas que sintetizan esteroides, las invaginaciones de la membrana interna adoptan una forma de tubos o dedos de guantes, lo que conduce al aparecimiento de etructuras circulares en el interior de las mitocondrias, cuando son observadas en corte. Una misma mitocondria puede presentar crestas en repisas e invaginaciones tubulares. En la membrana interna se encuentran con las siguientes funciones principales: 1. Enzimas y protenas que constituyen la cadena de transporte de electrones. 2. Protenas de los corpsculos elementales con actividad de ATP- sintetasa sin la cual la membrana no tendra la capacidad de acoplar el transporte de la sntesis de ATP; 3. Protenas que forman parte de los mltiples sistemas de transporte activo presentes en la membrana interna. En las clulas Procariontes (bacterias) no existen mitocondrias, y la cadena transportadora de electrones se encuentra en la cara interna de la membrana plasmtica de esas clulas. Por lo tanto,

el flujo de electrones y la oxidacin fosforilativa estn siempre asociados a membranas y ese es un principio general de organizacin en todos los seres vivos, sean ellos constituidos Por clulas eucariontes o procariontes. Adems de sus diferencias estructurales, las membranas interna y externa difieren notablemente en su permeabilidad. La membrana externa es permeable a una amplia variedad de sustancias que tienen un peso molecular mayor de aproximadamente 5,000 daltons. Cuando el lquido del espacio intermembrana es aislado, refleja los componentes hidrosolubles y de bajo peso molecular del citosol. En contraste, la membrana interna tiene una permeabilidad limitada, en especial a sustancias con pesos moleculares por arriba de 100 a 150 daltons.

LA MATRIZ MITOCONDRIAL
En el interior de las mitocondrias se encuentra una sustancia finamente granular-densa (oscura en las microfotografas electrnicas) llamada matriz. Es frecuente observar grnulos electrn-densos (grnulos densos) en el seno de la matriz, con un dimetro de 30 a 50 nm, conteniendo calcio y de funcin poco conocida. Adems de esos componentes, se distinguen con cierta dificultad, en el interior de la matriz, regiones filamentosas constituidas por filamentos de DNA. En la matriz mitocondrial existe, en su mayora unidos a la membrana interna, ribosomas que miden 15 nm de dimetro (menores que los del citosol). Existen algunas variaciones en la estructura mitocondrial, segn el tipo de clula y su estado funcional. De un modo general, la cantidad de crestas es proporcional a la actividad respiratoria de la clula; la densidad electrnica de la matriz tambin sigue esa relacin. En las clulas del tejido muscular, por ejemplo, se encuentran mitocondrias, extremadamente ricas en crestas y con matriz muy densa a los electrones. Adems de varias enzimas, la matriz mitocondrial tambin contiene ribosomas y varias molculas de DNA, el cual es circular en plantas superiores y animales. Por lo tanto, las mitocondrias tienen su propio material gentico y, los mecanismos para producir su propio RNA y protenas. Este DNA no cromosmico es importante porque codifica un pequeo nmero de polipptidos mitocondriales (13 en los seres humanos) que se integran a la membrana mitocondrial interna con los polipptidos codificados por genes que se encuentran en el ncleo. El DNA mitocondrial humano tambin codifica dos RNA ribosmicos y 22 RNA de transferencia (tRNA) que se utilizan en la sntesis de protenas dentro del organelo. El DNA mitocondrial es una reliquia.

LOCALIZACIN DE ALGUNAS ENZIMAS MITOCONDRIALES

Membrana externa: Monoamino oxidasa cido graso tiocinasas Quinurenina hidroxilasa Citocromo o reductasa insensible a la rotenona Espacio entre las membranas: Adenilato cinasa Nuclesido difosfocinasa Membrana interna: Enzimas de la cadena respiratoria Enzimas sintetizadoras de ATP -ceto cido deshidrogenasas Succinato deshidrogenasa D--Hidroxibutirato deshidrogenasa Carnitina aeyl grasa transferasa Matriz: CompIejo de piruvato deshidrogenasa Citrato sintasa Isocitrato deshidrogenasa Fumarasa Malato deshidrogenasa Aconitasa Glutamato deshidrogenasa Enzimas de la oxidacin de los cidos grasos La membrana interna y la matriz mitocondrial son los sitios de la mayora de las reacciones que intervienen en la oxidacin del piruvato y los cidos grasos a CO 2 y H2O, como tambin de la sntesis acoplada de ATP a partir de ADP y Pi. En estos procesos complejos hay muchos pasos, pero las reacciones pueden subdividirse en tres grupos, cada uno de los cuales se da en una membrana o un espacio bien definidos de la mitocondria:

1. Oxidacin de piruvato y cidos grasos a CO2, acoplada a la reduccin de las coenzimas

NAD+ y FAD a NADH y FADH2, respectivamente. Estas reacciones tienen lugar en la matriz o en protenas de la membrana interna que miran hacia la matriz. 2. Transferencia de electrones de NADH o FADH2, al O2. Estas reacciones se producen en la membrana interna y estn acopladas a la generacin de una fuerza protn-motriz a travs de ella. 3. Aprovechamiento de la energa almacenada en el gradiente electroqumico de protones, para la sntesis de ATP por el complejo F0F1, en la membrana interna. La ATP sintasa est formada por una unidad transportadora de protones y una unidad cataltica. Los estudios bioqumicos, de microscopa electrnica y cristalogrficos de la ATP sintasa han puesto de manifiesto muchos detalles estructurales. Es un enzima grande y complejo, anclado en la membrana y que parece una pelota sujetada a un palo. La pelota, de 85 de dimetro, recibe el

nombre de subunidad F1, se proyecta hacia la matriz mitocondrial y posee la actividad cataltica de la sintasa. De hecho, las subunidades F1, aisladas exhiben actividad ATPasa. La subunidad F1 est formada por cinco tipos de cadenas polipeptdicas (3, 3, , y ) con la estequiometra indicada en los subndices. Las subunidades y , que constituyen el meollo de F1, se disponen de forma alternada en un anillo hexamrico, son homlogas entre s y, son miembros de la familia de NTPasas con bucle P. Las dos se unen a nucletidos pero slo las subunidades P participan directamente en la catlisis. El tallo central est formado por dos protenas: y . La subunidad contiene un superhelicoide de hlices a que llega hasta el centro del hexmero 33. La subunidad rompe la simetra del hexmero 33: cada una de las subunidades se distingue por la forma en que interacciona con una cara distinta de . Poder distinguir entre las tres subunidades resulta crucial durante el mecanismo de la sntesis de ATP. Aunque la esfera F1, es la porcin cataltica de la enzima que produce el ATP en la mitocondria, esto no es una descripcin completa. La enzima productora de ATP, la sintasa de ATP, es un complejo proteico en forma de hongo formada por dos componentes principales: una cabeza F1 esfrica (de unos 90 de dimetro) y una seccin basal, llamada F0, incrustada en la membrana interna. Las micrografas electrnicas de alta resolucin revelan que las dos porciones se conectan, mediante un tallo central y uno perifrico como se muestra. Una mitocondria tpica del hgado de un mamfero tiene apenas 15 000 copias de la sintasa de ATP. Existen versiones homlogas de la sintasa de ATP en la membrana plasmtica de las bacterias, en la membrana tilacoide de los cloroplastos vegetales y en la membrana interna de las mitocondrias. Las porciones F1 de las sintasas de ATP bacteriana y mitocondrial estn muy conservadas; ambas contienen cinco polipptidos diferentes con una estequiometra de 33 y . Las subunidades alfa y beta se disponen en forma alternada dentro de la cabeza F 1 de modo que se parecen a los gajos de una naranja. Se pueden sealar dos aspectos para una discusin ulterior: a) cada F1 posee tres sitios catalticos para la sntesis de ATP, uno en cada subunidad beta, y b) la subunidad gamma se extiende desde la punta exterior de la cabeza de F1, por el tallo central y hace contacto con la porcin basal F0. En la enzima mitocondrial, los cinco polipptidos de F1 estn codificados por el DNA nuclear, sintetizado en el citosol, y se importa despus de la traduccin. La porcin F0 de la sintasa de ATP reside dentro de la membrana y consiste en tres polipptidos diferentes con una estequiometra de ab2c10-14. El nmero de subunidades en el anillo c se escribe como 10-14 porque los estudios estructrales revelan que este nmero vara segn sea la fuente de la enzima. Por ejemplo, ahora se cree que la sintasa de ATP, tanto de las mitocondrias de levaduras como de E. coli, tiene 10 subunidades c, en tanto que ya se demostr que la enzima del cloroplasto posee 14. La base F0 contiene un canal por el cual se conducen los protones desde el espacio intermembranoso a la matriz. La presencia de un canal transmembranoso se descubri en experimentos en los que la membrana mitocondrial interna se rompi en fragmentos que forman vesculas de membrana, llamadas partculas submitocondriales. Las partculas submitocondriales intactas, que contienen la sintasa de ATP incrustada en la membrana de la vescula, son capaces de oxidar sustratos, generar un gradiente de protones y sintetizar ATP. Sin embargo se retiran las esferas F 1 de las partculas, la membrana de la vescula ya no puede mantener un gradiente de protones a pesar de continuar la oxidacin de sustrato y el transporte de electrones. Los protones que se trasladan a travs de la membrana durante el transporte de electrones tan slo cruzan de regreso por la sintasa de ATP "decapitada" y la energa se disipa.

REACCIONES BIOQUMICAS EN LA MITOCONDRIA

METABOLISMO AERBICO: CICLO DEL CIDO CTRICO
Al emerger sobre la Tierra las primeras formas primordiales de vida, stas se mantuvieron utilizando molculas orgnicas simples ya formadas como los cidos carboxlicos y los aminocidos. La fuente de estas sustancias, que se utilizaron como bloques de construccin y molculas combustibles por los seres vivos primitivos, se cree que fueron las reacciones qumicas impulsadas por las descargas elctricas, la radiacin solar y las fuerzas trmicas profundas del interior del planeta. Adems, llegaron del espacio exterior incontables toneladas de materia qumica al ser bombardeada la tierra por meteoritos y otros desechos csmicos. Los primeros organismos (clulas procariotas primordiales) finalmente llegaron a ser tan abundantes que consuman las molculas orgnicas a mayor velocidad de la que se formaban por las fuerzas naturales. Al menguar los suministros de molculas ya formadas, algunos organismos produjeron mecanismos nuevos para obtener alimentos. Algunos organismos generaron la capacidad de sintetizar pigmentos fotosensibles que capturaban la energa luminosa y la convertan en energa de enlace qumico. Este mecanismo, la fotosntesis, tuvo un efecto impresionante y trascendente sobre el ambiente global. Hace unos 3000 millones de aos, las clulas fotosintetizadoras comenzaron a producir su propio alimento utilizando la energa luminosa para transformar el CO2 y el H20 en molculas orgnicas. El dioxgeno (O2) es un producto secundario de este proceso. Al producirse la fotosntesis en una escala cada vez mayor, aument el contenido de oxgeno de la atmsfera. Debido a que el O2 se combina fcilmente con otras molculas (p. ej., 4 NH3 + 3O2 2N2 + 6 H20), la atmsfera de la Tierra se convirtiendo gradualmente (durante un tiempo de 1000 millones de aos) en otra que contena principalmente dinitrgeno, vapor de agua, dixido de carbono y oxgeno. La mayora de los seres vivos que surgieron en las condiciones reductoras de la Tierra primitiva no estaban preparados para vivir en una atmsfera oxidante. Las especies que sobrevivieron a la transicin lo hicieron debido a que crearon mtodos para autoprotegerse de los efectos txicos del oxgeno. Sus descendientes, los organismos actuales, utilizan alguna de las estrategias siguientes. Los anaerobios estrictos que slo crecen en ausencia de oxgeno, evitan el gas viviendo en ambientes muy reducidos corno el suelo. Utilizan procesos fermentadores para satisfacer sus requerimientos energticos. Los anaerobios tolerantes al aire, que dependen tambin de la fermentacin para sus necesidades energticas, poseen enzimas destoxificantes y molculas antioxidantes que les protegen de los productos txicos del oxgeno. Los anaerobios facultativos no slo poseen los mecanismos necesarios para destoxificar a los metabolitos del oxgeno, sino que tambin pueden generar energa utilizando el oxgeno como aceptor electrnico cuando se encuentra presente el gas. Finalmente, los aerobios estrictos son muy dependientes del oxgeno para producir energa. Se protegen a s mismos de las consecuencias potencialmente peligrosas de la exposicin al oxgeno con mecanismos complejos formados por enzimas y molculas antioxidantes. Los anaerobios facultativos y los aerobios estrictos que utilizan el oxgeno para generar energa emplean los procesos bioqumicos siguientes: ciclo del cido ctrico, ruta de transporte electrnico y fosforilacin oxidativa. En los eucariotas estos procesos tienen lugar dentro de la mitocondria. El ciclo del cido ctrico es ruta metablica en la que los fragmentos de dos carbonos procedentes de las molculas orgnicas combustibles se oxidan para formar CO2, y las coenzimas NAD+ y FAD se reducen para formar NADH y FADH2, que actan como transportadores electrnicos. La ruta de transporte electrnico, que tambin se denomina cadena de transporte electrnico (CTE), es un mecanismo mediante el cual los electrones se transfieren desde las coenzimas reducidas a un aceptor (normalmente e1 O2). En la fosforilacin oxidativa, la energa liberada por el transporte electrnico se captura en forma de gradiente de protones que impulsa la sntesis de ATP, la moneda de intercambio energtico de los seres vivos.

METABOLISMO AEROBIO EN LA MITOCONDRIA.

En las clulas eucariotas, el metabolismo aerobio tiene lugar dentro de la mitocondria. La acetilCoA, el producto de la oxidacin del piruvato, los cidos grasos y determinados aminocidos, se oxida por las reacciones del ciclo del cido ctrico dentro de la matriz mitocondrial. Los productos principales del ciclo son las coenzimas reducidas NADH y FADH 2 y el CO2. Los electrones de energa elevada del NADH y del FADH2 se ceden a continuacin a la cadena de transpone electrnico (CTE), un conjunto de transportadores de electrones de la membrana interna. El aceptor electrnico terminal de la CTE es el O2. La energa que deriva del mecanismo de transporte electrnico impulsa la sntesis de ATP al crear un gradiente de protones a travs de la membrana interna. La superficie plegada grande de la membrana interna est tachonada de complejos CTE, numerosos tipos de protenas transportadoras y la ATP sintasa, el complejo enzimtico responsable de la sntesis de ATP. REACCIONEs DE OXIDACIN-REDUCCIN EN LA MITOCONDRIA En los seres vivos, tanto los procesos que capturan energa como los que la liberan constan en gran medida de reacciones redox. Recuerde que las reacciones redox se producen cuando se transfieren electrones entre un donador electrnico (reductor) y un aceptor electrnico (oxidante). En algunas reacciones redox slo se transfieren electrones. Por ejemplo, en la reaccin Cu+ + Fe3~ Cu2~ + Fe2~

se transfiere un electrn del Cu+ al Fe3~. El Cu+, el reductor, se oxida para formar Cu2+. Al tiempo, el Fe3~ se reduce a Fe2+. Sin embargo, en muchas reacciones se transfieren electrones y protones. Por ejemplo, en la reaccin catalizada por la lactato deshidrogenasa, se transfieren dos protones (H +) y 2 electrones al reducirse el piruvato para formar lactato y NAD+.

Las reacciones redox se entienden mejor si se separan en dos semireacciones. Por ejemplo, en la reaccin entre el cobre y el hierro, el in Cu+ pierde un electrn para convertirse en Cu2+: Cu+ Cu2+ + e-

Esta ecuacin indica que el Cu+ es el donador del electrn. Al perder Cu+ un electrn, el Fe3+ gana un electrn para formar Fe2+: Fe3+ + eFe2+

En esta semireaccin, el Fe3+ es un aceptor de electrones. La separacin de las reacciones redox resalta que los electrones siempre son intermediarios comunes entre las semireacciones. Los constituyentes de las semireacciones pueden observarse en una clula electroqumica. Cada semireaccin tiene lugar en un contenedor individual o semiclula que experimentan la oxidacin (Cu+ Cu2+ + e-) origina un voltaje entre las dos semiclulas. El signo de voltaje (que se mide con un voltmetro) es positivo o negativo segn la direccin del flujo de electrones. La magnitud de la diferencia de potencial es una medida de la energa que impulsa la reaccin. La tendencia de una sustancia especifica para perder o ganar electrones se denomina potencial redox. El potencial redox de un par redox conjugado se mide en una clula electroqumica frente a un estndar de referencia, normalmente un electrodo estndar de hidrgeno. El potencial del electrodo estndar es, por definicin, 0.0 V a 1atm. Las sustancias con un potencial de reduccin ms negativo transfieren los electrones a una sustancia con un potencial de reduccin ms positivo y la E0 ser positiva. En bioqumica, la semirreaccin de referencia es:

2 H+ + 2 eCuando pH = 7 Temperatura = 25 C Presin = 1 atm.

H2

En estas condiciones el potencial de reduccin del electrodo de hidrgeno es 0.42V cuando se mide frente al electrodo de hidrgeno estndar en el que concentracin de H + es 1 M. Las sustancias con potenciales de reduccin menores de 0.42 V (es decir, aquellas con valores ms negativos) tienen una afinidad menor por los electrones que el H+. Las sustancias con potenciales de reduccin mayores (es decir, aquellas con valores ms positivos) tienen una afinidad mayor por los electrones. (El pH en el electrodo de anlisis es 7.0 para cada una de las semirreacciones redox y el pH del electrodo estndar de referencia es 0.) Los electrones fluyen de forma espontnea desde las especies con un valor de E0 ms negativo a las especies con un E0 ms positivo, de forma que AE0 es positiva. La relacin entre A E0 y AG0 es G0 = -nFE0 Donde: G0 = energa libre estndar n = nmero de electrones que se transfieren F = constante de Faraday (96,485 J/V mol) E0 = diferencia del potencial de reduccin entre el donador de electrones y el aceptor de electrones en condiciones estndar. La mayor parte de la energa libre de las clulas aerobias se captura por el sistema de transporte electrnico mitocondrial. Durante este proceso, los electrones se transfieren desde un par redox con un potencial de reduccin ms negativo (NADH/NAD+) a aquellos con potenciales de reduccin ms positivos. El ltimo componente del sistema es el par H2O/ O2: O2 + NADH + H+ H2O + NAD+ La energa libre que se libera al pasar el par de electrones desde el NADH al O 2 condiciones estndar se calcula de la siguiente forma: G0 = -nFAE0 = - 2(96.5 kJ/V.mol)(0.815 (- 0.32)) = - 220 kJ/mol Una porcin significativa de la energa libre que se genera al moverse los electrones desde el NADH al O2 en el sistema de transporte electrnico se utiliza para sintetizar ATP.

En varios procesos metablicos, los electrones se mueven desde pares redox con potenciales de reduccin ms positivos a aquellos con potenciales de reduccin ms negativos. Evidentemente, se requiere energa. El ejemplo ms destacado de este fenmeno es la fotosntesis. Los organismos fotosintetizadores utilizan la energa luminosa capturada para impulsar los electrones desde los donadores electrnicos, como al agua, a los aceptores electrnicos con potenciales de reduccin ms negativos. Los electrones energetizados regresan finalmente a los aceptores con potenciales de reduccin ms positivos, proporcionando de esta manera energa para la sntesis de ATP y la reduccin del CO2 para formar hidratos ce carbono.

En la ruta del ciclo del cido ctrico, que es la primera fase del metabolismo aerobio, la energa liberada por la oxidacin de fragmentos de dos carbonos procedentes de la glucosa, los cidos grasos y algunos aminocidos se convierte en las coenzimas reducidas NADH y FADH2.

CICLO DEL CIDO CTRICO

El ciclo del cido ctrico es un conjunto de reacciones bioqumicas qu utilizan los organismos aerobios para liberar la energa qumica almacenada en el grupo acetilo de dos carbonos de la acetilCoA. sta est formada por un grupo acetilo que procede de la degradacin de los hidratos de carbono, los lpidos y algunos aminocidos, que est unido a la molcula transportadora de acilo coenzima A. La acetil-CoA se sintetiza a partir de piruvato (un producto parcialmente oxidado de la degradacin de los azcares y determinados aminocidos) en varias reacciones. La acetil-CoA tambin es el producto del catabolismo de los cidos grasos y de determinadas reacciones del metabolismo de los aminocidos. En el ciclo del cido ctrico, los tomos de carbono se oxidan a CO2 y los electrones de energa elevada se transfieren al NAD + y al FAD para formar las coenzimas reducidas NADH y FADH2, respectivamente. En la primera reaccin del ciclo del cido ctrico, un grupo acetilo de dos carbonos se condensa con una molcula de cuatro carbonos (oxalacetato) para formar una molcula de seis carbonos (citrato). Durante las siete reacciones siguientes, en las que se producen dos molculas de CO 2 y se eliminan cuatro pares de electrones de compuestos carbonados, el citrato se convierte de nuevo en oxalacetato. Durante un paso del ciclo, se produce la molcula de energa elevada guanosina trifosfato (GTP) durante una fosforilacin a nivel de sustrato. La reaccin neta del ciclo del cido ctrico es: Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi +2 H2O 2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + CoASH + GTP + 3 H+ El ciclo del cido ctrico desempea otro papel importante en el metabolismo, adems de su funcin en la produccin de energa. Los intermediarios del ciclo son sustratos de diversas reacciones de sntesis.

Conversin del piruvato en acetil-CoA Tras su transporte a la matriz mitocondrial, el piruvato se convierte en acetil-CoA en un conjunto de reacciones catalizadas por las enzimas del complejo piruvato deshidrogenasa. La reaccin neta una descarboxilacin oxidativa, es la siguiente: Piruvato + NAD+ + CoASH Acetil-CoA + NADH + CO2 + H2O + H+

A pesar de la simplicidad aparente de esta reaccin muy exergnica (G0 = -33.5 kJ/mol), su mecanismo es uno de los mas complejos que se conocen. El complejo piruvato deshidrogenasa es una estructura multienzimtica grande que contiene tres actividades enzimticas: piruvato deshidrogenasa (E1), conocida tambin como piruvato descarboxilasa, dihidrolipoil transacetilasa (E2) y dihidrolipoil deshidrogenasa (E3). Cada actividad enzimtica esta presente en varias copias. En el cuadro de la siguiente hoja se resume el nmero de copias de cada enzima y las coenzimas que requiere el complejo piruvato deshidrogenasa de E. coli.

Resumen de las enzimas del ciclo del cido ctrico Coenzima Tiamina pirofosfato cido lipoico NADH FADH2 Coenzima A (CoASH) Descarboxilacin de grupos aldehdos Transportador de grupos hidrgeno o acetilo Transportador electrnico Transportador electrnico Transportador de grupos acetilo Funciones y transferencia

En el primer paso, la piruvato deshidrogenasa cataliza la descarboxilacin piruvato. Se forma un nuclefilo cuando un residuo bsico de la enzima extrae protn del anillo de tiazol de la tiamina pirofosfato (TPP). Se forma el intermediario, hidroxietil-TPP (HETPP), tras el ataque del anillo nuclefilo de tiazol al grupo carbonilo del piruvato con la prdida de CO2 (figura de la pgina siguiente). En los pasos siguientes, el grupo hidroxietilo del HETPP se convierte en acetil-CoA por la dihidrolipoil transacetilasa. El cido lipoico desempea un papel crucial en esta transformacin. El cido lipoico est unido a la enzima a travs de un enlace amida con el grupo -amino de un residuo de lisina. Reacciona con el HETPP para formar un cido lipoico acetilado y TPP libre. El grupo acetilo se transfiere a continuacin al grupo sulfhidrilo de la coenzima A. Posteriormente, el cido lipoico reducido se vuelve a oxidar por la dihidrolipoil deshidrogenasa. El FADH 2 se vuelve a oxidar por el NAD+ (con su potencial de reduccin ms negativo) para formar el FAD que se requiere para la oxidacin del siguiente residuo de cido lipoico reducido. La actividad de la piruvato deshidrogenasa est regulada por dos mecanismos: Inhibicin por el producto y modificacin covalente. El complejo enzimtico se activa alostricamente por el NAD+, la CoASH y el AMP. Se inhibe por concentraciones elevadas de ATP y los productos de la reaccin acetil-CoA y NADH. En los vertebrados, estas molculas activan tambin una quinasa, que convierte el complejo piruvato deshidrogenasa activo en una forma fosforilada inactiva. Las elevadas concentraciones de los sustratos piruvato, CoASH y NAD+ inhiben la actividad de la quinasa. El complejo piruvato deshidrogenasa se reactiva por una reaccin de desfosforilacin catalizada por una fosfoprotena fosfatasa. La fosfoprotena fosfatasa se activa cuando la concentracin mitocondrial de ATP es baja. Actividad enzimtica Piruvato deshidrogenasa (E1) Dihidrolipoil transacetilasa (E2) Dihidrolipoil deshidrogenasa (E3) Funcin Descarboxila al piruvato N de copias por Coenzimas complejo* 24 (20-30) TPP cido CoASH NAD+, FAD lipoico,

Cataliza la transferencia 24 (60) del grupo acetilo a la CoASH Oxida de nuevo a la 12 (20-30) dihidrolipoamida

*En parntesis se presenta el nmero de molculas de cada actividad enzimtica que se encuentra en la piruvato deshidrogenasa de mamferos.

Reacciones catalizadas por el complejo piruvato deshidrogenasa. Las piruvato carboxilasa, que contiene TPP, cataliza la formacin de HETPP. Utilizando como cofactor cido lipoico, la dihidrolipoil transacetilasa convierte al grupo hidroxietilo del HETPP en acetil-CoA. La dihidrolipoil deshidrogenasa vuelve a oxidar al cido lipoico reducido.

Reacciones del ciclo del cido ctrico El ciclo del cido ctrico est formado por ocho reacciones que tienen lugar en dos fases: 1. El grupo acetilo de dos carbonos de la acetil-CoA entra en el ciclo al reaccionar con el compuesto de cuatro carbonos oxalacetato (reacciones 1-4). A continuacin se liberan dos molculas de CO2. 2. El oxalacetato se regenera de forma que pueda reaccionar con otra acetilCoA. Las reacciones del ciclo del cido ctrico son como sigue: 1. Introduccin de dos carbonos como acetil-CoA. El ciclo del cido ctrico comienza con la condensacin de la acetil-CoA con el oxalacetato para formar citrato:

Obsrvese que esta reaccin es una condensacin aldlica. En esta reaccin la enzima separa un protn del grupo metilo de la acetil-CoA, convirtindola de esta manera en un carbanin. El carbanin metilo nuclefilo a continuacin ataca al carbono carbonlico del oxalacetato. El producto, la citroil-CoA, se hidroliza rpidamente para formar citrato y CoASH. Debido a la hidrlisis del enlace tioster de energa elevada, la variacin de energa libre estndar global es igual a -3.3.5 kJ/mol, y la formacin de citrato es muy exergnica. 2. El citrato se isomeriza para formar un alcohol secundario que puede oxidarse fcilmente. En la reaccin siguiente del ciclo, el citrato, que contiene un alcohol terciario, se convierte de forma reversible en isocitrato por la aconitasa. Durante esta reaccin de isomerizacin, se forma por deshidratacin un intermediario denominado cis-aconitato. El doble enlace carbono-carbono del cisaconitato se rehidrata a continuacin para formar el alcohol secundario ms reactivo, isocitrato. 3. El isocitrato se oxida para formar NADH y CO2. La descarboxilacin oxidativa del isocitrato, que cataliza la isocitrato deshidrogenasa, se produce en dos pasos. En el primero, el isocitrato se oxida para formar oxalsuccinato, un intermediario transitorio. La descarboxilacin inmediata del oxalsuccinato da lugar a la formacin de -cetoglutarato, un cetocido. Existen en los mamferos dos formas de isocitrato deshidrogenasa. La isoenzima que requiere NAD+ slo se encuentra en las niitocondrias. La otra isoenzima, que requiere NADP +, se encuentra tanto en la matriz mitocondrial como en el citoplasma. En algunas circunstancias la ltima enzima se utiliza dentro de ambos compartimientos para generar NADPH, que se requiere en los procesos de biosntesis. Obsrvese que el NADH producido en la conversin del isocitrato en cetoglutarato es el primer enlace entre el ciclo del cido ctrico y la CTE, y la fosforilacin oxidativa. 4. El -cetoglutarato se oxida para formar una segunda molcula de NADH y de CO2. La conversin del -cetoglutarato en succinil-CoA est catalizada por las actividades enzimticas del complejo -cetoglutarato deshidrogenasa: -cetoglutarato deshidrogenasa, dihidrolipoil transsuccinilasa y dihidrolipoil deshidrogenasa. Esta reaccin muy exergnica (G = -33.5 kJ/mol), una descarboxilacin oxidativa, es anloga a la conversin del piruvato en acetil-CoA, que cataliza la piruvato deshidrogenasa. En ambas reacciones, los productos son molculas de tioster con energa abundante, esto es, acetil-CoA y succinil-CoA. Otras semejanzas entre los dos complejos multienzimticos son que se requieren los mismos cofactores (TPP, CoASH, cido lipoico, NAD+ y FAD) y que son inhibidores los mismos o semejantes efectores alostricos. La -cetoglutarato deshidrogenasa se inhibe por la succinil-CoA, el NADH, el ATP y el GTP. Una diferencia importante entre los dos complejos es que el mecanismo de control del complejo -cetoglutarato deshidrogenasa no, implica una modificacin covalente. 5. La ruptura de la succinil-CoA est acoplada a una fosforilacin a nivel de sustrato. La ruptura del enlace tioster de energa elevada de la succinil-CoA para formar succinato, que cataliza la succinato tioquinasa, est acoplada en los mamferos a la fosforilacin a nivel de sustrato del GDP. En otros organismos, se fosforila el ADP.

6. La molcula de cuatro carbonos succinato se oxida para formar fumarato y FADH2. La succinato deshidrogenasa cataliza la oxidacin del succinato para formar fumarato:

De forma diferente a otras enzimas del ciclo del cido ctrico, la succinato deshidrogenasa no se encuentra dentro de la matriz mitocondrial, sino que est firmemente unida a la membrana mitocondrial interna. La oxidacin de un alqueno requiere un agente oxidante ms fuerte que el NAD+. La succinato deshidrogenasa es una flavoprotena que emplea el FAD para impulsar la oxidacin del succinato a fumarato. (En la reaccin completa los electrones donados al FAD unido covalentemente a la succinato deshidrogenasa pasan a continuacin a la coenzima Q, un componente de la CTE. La G para este proceso es de -5.6 kJ/mol.) La succinato deshidrogenasa se activa por concentraciones elevadas de succinato, ATP y Pi, y se inhibe por el oxalacetato. Recuerde que la enzima tambin se inhibe por el malonato, un anlogo estructural del succinato. (Este inhibidor fue utilizado por Hans Krebs en sus trabajos pioneros sobre el ciclo del cido ctrico.) 7. Hidratacin del fumarato. El fumarato se convierte en L-malato en una hidratacin estereoespecfica reversible catalizada por la fumarasa (que tambin se denomina fumarato hidratasa):

8. El malato se oxida para formar oxalacetato y un tercer NADH. Finalmente, el oxalacetato se regenera con la oxidacin del L-malato:

La malato deshidrogenasa utiliza como agente oxidante el NAD+ en una reaccin muy endergnica (G= +29 kJ/mol). La reaccin es empujada hasta que se completa debido a la eliminacin del oxalacetato en la siguiente vuelta del ciclo. Destino de los tomos de carbono en el ciclo del cido ctrico En cada vuelta del ciclo del cido ctrico entran dos tomos de carbono como grupo acetilo de la acetil-CoA y se liberan dos molculas de CO2. Una revisin cuidadosa del diagrama del ciclo del cido ctrico descubre que los dos tomos de carbono que se liberan en forma de molculas de CO 2 no son los mismos dos carbonos que han entrado en el ciclo, sino que los tomos de carbono liberados proceden del oxalacetato que reaccion con la acetil-CoA entrante. Los tomos de carbono entrantes consecuentemente forman la mitad del succinato. Debido a la estructura asimtrica del succinato, los tomos de carbono que derivan del grupo acetilo entrante finalmente se distribuyen en todas las molculas que proceden del succinato. Por consiguiente, los tomos de carbono que entran se liberan como CO2 slo tras dos o ms vueltas del ciclo. Ciclo del cido ctrico anfiblico Las rutas anfiblicas pueden actuar como procesos anablicos o catablicos. El ciclo del cido ctrico es obviamente catablico, dado que los grupos acetilo se oxidan para formar CO2 y la energa se conserva en las molculas de coenzima reducidas. El ciclo del cido ctrico es tambin anablico, dado que varios intermediarios del ciclo del cido ctrico son precursores de rutas de biosntesis. Por ejemplo, el oxalacetato se utiliza en la gluconeognesis y en la sntesis de los aminocidos. El cetoglutarato desempea tambin un papel importante en la sntesis de aminocidos. La sntesis de porfirinas como el hemo utiliza la succinil-CoA. Finalmente, la sntesis de los cidos grasos y del colesterol en el citoplasma requiere acetil-CoA.

Los procesos anablicos extraen del ciclo del cido ctrico molculas que se requieren para mantener su funcin en la generacin de energa. Varias reacciones, denominadas anaplerticas, lo rellenan. Una de las reacciones anaplerticas ms importante es la que cataliza la piruvato carboxilasa. Una concentracin elevada de acetil-CoA, un indicador de concentracin insuficiente de oxalacetato, activa la piruvato carboxilasa. Como consecuencia, aumenta la concentracin de oxalacetato. El exceso de oxalacetato que no se utiliza dentro del ciclo del cido ctrico se emplea en la gluconeognesis. Otras reacciones anaplerticas son la sntesis de succinil-CoA a partir de determinados cidos grasos y los -cetoacidos, -cetoglutarato y oxalacetato, a partir de los aminocidos glutamato y aspartato, respectivamente, mediante reacciones de transaminacin. El ciclo del cido ctrico es una ruta anfiblica; es decir, acta tanto en el catabolismo como en el anabolismo. Los intermediarios del ciclo del cido ctrico que se utilizan en los procesos anablicos se reponen mediante varias reacciones anaplerticas.

Regulacin del ciclo del cido ctrico

El ciclo del cido ctrico est regulado con precisin de forma que se satisfagan constantemente los requerimientos energticos y de biosntesis de la clula. La regulacin se consigue principalmente modulacin de enzimas clave y la disponibilidad de determinados sustratos. Dado su papel destacado en la produccin de energa, el ciclo depende tambin de un aporte continuo de NAD +, FAD y ADP. Las enzimas del ciclo del cido ctrico citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y -cetoglutarato deshidrogenasa estn estrechamente reguladas dado que catalizan reacciones que representan importantes puntos de ramificacin metablicos.

La citrato sintasa, la primera enzima del ciclo, cataliza la formacin de citrato a partir de acetil-CoA y oxalacetato. Dado que la concentracin de acetil-CoA y de oxalacetato son bajas en la mitocondria con relacin a la cantidad de la enzima, cualquier aumento de la disponibilidad del sustrato estimula la sntesis de citrato. (En estas condiciones la reaccin es de primer orden con respecto al sustrato. Por lo tanto, la velocidad de la sntesis de citrato est influenciada por las variaciones de las concentraciones de acetil-CoA y oxalacetato.) Las concentraciones elevadas de succinil-CoA (un producto intermediario lejano del ciclo) y de citrato inhiben la citrato sintasa actuando como inhibidores alostricos. Otros reguladores alostricos de esta reaccin son el NADH y el ATP, cuyas concentraciones reflejan el estado energtico celular del momento. Una clula en reposo posee cocientes elevados de NADH/NAD+ y ATP/ADP. Al activarse metablicamente una clula, las concentraciones de NADH y ATP descienden, y como consecuencia se hacen ms activas las enzimas como la citrato sintasa.

La isocitrato deshidrogenasa cataliza la segunda reaccin del ciclo muy regulada. Su actividad se estimula por las concentraciones relativamente elevadas de ADP y NAD+ y se inhibe por el ATP y el NADH. La isocitrato deshidrogenasa est muy regulada debido a su importante papel en el metabolismo del citrato. Como se ha descrito anteriormente, la conversin de citrato en isocitrato es reversible. Una mezcla de equilibrio de las dos molculas consta en gran medida de citrato. (La reaccin se impulsa hacia delante debido a que el isocitrato se transforma rpidamente en cetoglutarato.) De las dos molculas, solo el citrato puede penetrar en la membrana mitocondrial interna. (Cuando se mueven al citoplasma un nmero sustancial de molculas de citrato, el requerimiento energtico de la clula es bajo.) El transporte del citrato se utiliza para sacar fuera de la mitocondria al acetil-CoA debido a que la acetil-CoA no puede atravesar la membrana mitocondrial interna. Una vez en el citoplasma, el citrato se fracciona por la citrato liasa. La acetilCoA que se forma se utiliza en varios procesos de biosntesis, como la sntesis de cidos grasos. El oxalacetato se utiliza en las reacciones de biosntesis o puede convertirse en malato. ste puede volver a entrar en la mitocondria, donde vuele a convertirse en oxalacetato o se convierte en el citoplasma en piruvato por la enzima mlica. El piruvato vuelve a entrar en la mitocondria. Adems de ser un precursor de la acetil-CoA y del oxalacetato en el citoplasma, el citrato acta tambin directamente para regular varios procesos citoplsmicos. El citrato es un activador alostrico de la primera reaccin de la sntesis de los cidos grasos. Adems, el metabolismo del citrato proporciona parte del NADPH que se utiliza para la sntesis de cidos grasos. Finalmente, debido a que el citrato es un inhibidor de la PFK- 1, inhibe la gluclisis. La actividad de la -cetoglutarato deshidrogenasa est estrictamente regulada dado la importancia del -cetoglutarato en varios procesos metablicos (p. ej., metabolismo de los aminocidos). Cuando los almacenes celulares de energa son bajos, la -cetoglutarato deshidrogenasa se activa y se retiene el -cetoglutarato dentro del ciclo a expensas de los procesos de biosntesis. Al aumentar el suministro celular de NADH, la enzima se inhibe, y las molculas de -cetoglutarato quedan disponibles para las reacciones de biosntesis. Dos enzimas ajenas al ciclo del cido ctrico afectan profundamente su regulacin. Las actividades relativas de la piruvato deshidrogenasa y de la piruvato carboxilasa determinan el grado de utilizacin del piruvato para generar energa y precursores de biosntesis. Por ejemplo, si una clula est utilizando un intermediario del ciclo como el -cetoglutarato en la biosntesis, la concentracin de oxalacetato cae y se acumula acetil-CoA. Dado que la acetil-CoA es un activador de la piruvato carboxilasa (y un inhibidor de la piruvato deshidrogenasa), se produce ms oxalacetato a partir de piruvato, rellenando el ciclo.

CICLO DEL GLIOXILATO

Los vegetales y algunos hongos, algas, protozoos y bacterias pueden crecer utilizando compuestos con dos carbonos. (Las molculas como el etanol, el acetato y la acetil-CoA, que derivan de los cidos grasos, son los sustratos ms comunes.) El conjunto de reacciones responsables de esta capacidad, que se denomina ciclo del glioxilato, es una versin modificada del ciclo del cido ctrico. En los vegetales, el ciclo del glioxilato tiene lugar en orgnulos denominados glioxisomas. Por ejemplo, en ausencia de la fotosntesis, el crecimiento de las semillas germinadas se mantiene por la conversin de las reservas grasas (triacilgliceroles) en hidratos de carbono. En otros organismos eucariotas y en las bacterias, las enzimas del glioxilato se encuentran en el citoplasma.

El ciclo del glioxilato consta de cinco reacciones. Las dos primeras reacciones (la sntesis de citrato e isocitrato) son familiares, debido a que tambin tienen lugar en el ciclo del cido ctrico. Sin embargo, la formacin de citrato a partir de oxalacetato y acetil-CoA y la isomerizacin de citrato para formar isocitrato estn catalizadas por isoenzimas especficas de los glioxisomas. Las dos reacciones siguientes son nicas del ciclo del glioxilato. El isocitrato de desdobla en dos molculas (succinato y glioxilato) por la isocitrato liasa. (Esta reaccin es una escisin aldlica.) El succinato, una molcula de cuatro carbonos, finalmente se convierte en malato por enzimas mitocondriales. La molcula de dos carbonos glioxilato reacciona con una segunda molcula de acetil-CoA para formar malato en una reaccin catalizada por la malato sintasa. El ciclo se completa al convertirse el malato en oxalacetato por la malato deshidrogenasa. El ciclo del glioxilato permite la sntesis neta de molculas ms grandes a partir de molculas de dos carbonos por la siguiente razn. Se evitan las reacciones de descarboxilacin del ciclo del cido ctrico, en las que se pierden dos molculas de CO2. Utilizando dos molculas de acetil-CoA, el ciclo del glioxilato produce una molcula de succinato y otra de oxalacetato. El succinato se utiliza para la sntesis de molculas de importancia metablica, de las que la ms importante es la glucosa. (En los organismos como los animales, que no tienen isocitrato liasa ni malato sintasa, la

gluconeognesis siempre implica molculas con al menos tres tomos de carbono. En estos organismos no hay sntesis neta de glucosa a partir de los cidos grasos.) El oxalacetato producto del ciclo se utiliza para mantener el ciclo del glioxilato.

Papel del ciclo del glioxilato en la gluconeognesis. La acetil-CoA que se utiliza en el ciclo del glioxilato procede de la degradacin de los cidos grasos (-oxidacin). En los organismos con las enzimas adecuadas, puede formarse glucosa a partir de compuestos de dos carbonos como el etanol y el acetato. En los vegetales, las reacciones estn localizadas dentro de cuerpos lipdicos, los glioxisomas, las mitocondrias y el citoplasma.

TEMAS DE INTERS Cncer y metabolismo energtico

El cncer consiste en un conjunto de enfermedades en las que las clulas daadas genticamente proliferan de forma autnoma. Estas clulas no pueden responder a los mecanismos reguladores normales que aseguran la cooperacin intercelular que se requiere en los organismos multicelulares. Como consecuencia, continan proliferando, robando de esta manera a las clulas normales cercanas los nutrientes e invadiendo en ltima instancia el tejido sano de los alrededores. Se ha reconocido desde hace tiempo que los tumores cancerosos poseen un metabolismo energtico anmalo. Por ejemplo, en los aos 1930, Otto Warburg (1883-1970), el bioqumico alemn que dise los primeros mtodos fiables para estudiar el metabolismo energtico en los tejidos animales,

observ que las clulas tumorales convierten la glucosa en cido lctico a una velocidad anmalamente elevada con independencia de su suministro de oxgeno. Como se ha descrito previamente, en presencia de oxgeno el flujo de glucosa a travs de la gluclisis es considerablemente inferior en las clulas aerobias normales que cuando est ausente el oxgeno. Hasta los aos 1980 se supona que los valores de pH intracelular y extracelular de las clulas tumorales eran cidos. En esa poca los avances tecnolgicos que permitieron la medida no invasora de los valores de pH de los tumores descubrieron que las clulas malignas regulan su pH interno de forma que es neutro o ligeramente alcalino. Actualmente se sabe que ambas circunstancias (el pH externo bajo y los valores relativamente elevados de los valores internos de pH) benefician a las clulas tumorales. Un pH externo bajo estimula las metstasis (la migracin a otros tejidos de las clulas malignas que se dividen rpidamente), y un pH interno elevado estimula los procesos implicados en el crecimiento y la divisin celular. Durante muchos aos los onclogos moleculares (bioqumicos y bilogos moleculares que investigan las bases moleculares del cncer) han intentado descubrir cmo contrarrestan las clulas malignas la regulacin del metabolismo energtico. Aunque todava no se conocen los mecanismos precisos, se cree que los cambios del metabolismo energtico se producen por alteraciones de la expresin gentica, muchas de las cuales estn estimuladas por la hipoxia (concentraciones de oxgeno inadecuadas) crnica. Las investigaciones ms recientes han descubierto que en el tejido normal la hipoxia desencadena cambios de la expresin de los genes que producen una cascada de respuestas fisiolgicas que permiten sobrevivir a las clulas durante condiciones temporales adversas. Muchos de estos cambios de la expresin de los genes son consecuencia de la activacin del factor de trascripcin factor 1 inducible por la hipoxia (HIF-l). (Los factores de trascripcin son protenas que regulan o inician la sntesis de RNA al unirse a secuencias especficas de DNA denominadas elementos de respuesta.) Destacando entre los genes cuya expresin est sobrerregulada por el HIF- 1 se encuentran los que codifican las protenas transportadoras de glucosa, la mayora de las enzimas glucolticas, y la LDH. En las primeras fases de la carcinognesis (el proceso mediante el cual las clulas se hacen inestables genticamente y finalmente cancerosas) las clulas profundas del tumor quedan privadas de oxgeno y nutrientes. Aquellas clulas que pueden adaptarse a estas condiciones hostiles tienen una ventaja de supervivencia sobre las que no pueden hacerlo. Consecuentemente, son caractersticas comunes de los tumores un aumento del flujo glucoltico y la sobreproduccin resultante de lactato. Al producirse la carcinognesis y formar el tumor su propio aporte sanguneo (un proceso denominado angiognesis) induciendo la sntesis de protenas como el VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular), sus clulas finalmente reciben las cantidades adecuadas de oxgeno y nutrientes. Sin embargo, el ritmo glucoltico de estas clulas permanece elevado. En este fenmeno, que se denomina gluclisis aerobia, las clulas tumorales obtienen la energa para el mantenimiento de sus rpidas divisiones celulares a partir de un metabolismo mixto con un ritmo elevado de gluclisis y algo de fosforilacin oxidativa. En muchas clulas tumorales, la produccin de lactato es tan elevada que se produce poca acetil-CoA. En estas circunstancias, el aminocido glutamina frecuentemente es el sustrato oxidable principal para un ciclo del cido ctrico anmalo e incompleto. (La glutamina se convierte en glutamato, el precursor del -cetoglutarato. La oxidacin del cetoglutarato slo produce dos molculas de NADH, en lugar de las tres molculas normales.) En otras palabras, la sobrerregulacin transitoria normal de los genes inducibles por la hipoxia y los consumos elevados de glucosa que lo acompaan son ahora caractersticas permanentes del tumor que crece.

Hans Krebs y el ciclo del cido ctrico

Hans Krebs (1900-1981), un bioqumico alemn, es conocido por su descubrimiento del ciclo del cido ctrico, probablemente una de las contribuciones ms importantes de la bioqumica en el siglo xx. Los esfuerzos de Krebs para elucidar los detalles del metabolismo oxidativo (los medios por los que los nutrientes se convierten en energa) fueron posibles gracias a muchos factores. Como en la mayora de la investigacin bioqumica, Krebs se benefici de descubrimientos de otros muchos cientficos que proporcionaron informacin sobre los sustratos (p. ej., succinato, fumarato y malato) y las reacciones (p. ej., deshidrogenaciones, hidrataciones y deshidrataciones) que se saba que intervenan en la respiracin celular. Los ms destacados de estos cientficos fueron Otto Warburg (1883-1970) y Albert Szent-Gyrgyi (1893-1986). Krebs tuvo tambin la fortuna de emplear los primeros aos de su carrera trabajando en el laboratorio de Otto Warburg en el Kaiser Willielm Institut de Berln. All aprendi Krebs tcnicas puestas a punto por Warburg, que posteriormente demostraron ser cruciales en sus propios proyectos de investigacin. Entre stas estaban la manometra (un mtodo para determinar la concentracin de una sustancia especfica utilizando un instrumento que mide la captura de O2 o la liberacin de CO2), la espectrofotometra (una tcnica que mide la concentracin de una sustancia determinando la proporcin de la luz incidente que absorbe el sustrato a una determinada longitud de onda), y la preparacin de cortes experimentales de tejidos. Durante varios aos, empezando en 1933, Krebs, ayudado por los esfuerzos prodigiosos de su estudiante de investigacin William A. Johnson, lentamente junt los elementos de la ruta oxidativa que l finalmente dedujo era un ciclo. Slo unos aos despus de que Krebs y Johnson comunicaran su trabajo en 1937 se reconoci al ciclo como el medio principal por el que los hidratos de carbono se oxidan en las clulas. Adems de la naturaleza controvertida de su trabajo (p. ej., Szent Gyorgyi crea que las molculas como el succinato y el fumarato actuaban como lanzaderas de los tomos de hidrgeno hacia el 02), uno de los problemas principales que retrasaron el reconocimiento fue la identidad del acetato activo, el intermediario en la conversin del piruvato en citrato. Krebs observ que cuando se aada piruvato a cortes de tejido, se producan grandes cantidades de citrato. Sin embargo, la adicin de acetato, el producto, esperado de la reaccin, no produca ningn efecto. Mucho despus, Fritz Lipmann y Nathan Itaplan descubrieron la acetil-CoA (1945) y Severo Ochoa y Feodor Lynen establecieron que la acetil-CoA reacciona con el oxalacetato para formar citrato (1951). Por estos esfuerzos Krebs recibi el ttulo de caballero y el Premio Nobel de fisiologa y medicina en 1953 (compartido con Fritz Lipmann). Otras contribuciones importantes de Hans Krcbs fueron el descubrimiento del ciclo de la urea y el ciclo del glioxilato. El ciclo de la urea, el mecanismo por el que algunos animales convierten el nitrgeno txico de desecho en urea (un producto hidrosoluble que puede eliminarse) lo descubrieron en 1932 Krebs y Kurt Heinsleit, un estudiante de medicina. En 1957, en una publicacin conjunta de Hans Komberg y Hans Krebs comunicaron el descubrimiento del ciclo del glioxilato. Muchos aos despus de su descubrimiento del ciclo del cido ctrico, al decirle que reflexionara sobre su xito cuando otros cientficos brillantes haban fracasado en la elucidacin del mecanismo, Krebs replic en parte, Mi enfoque fue el de un bilogo tratando de elucidar los sucesos qumicos de las clulas. Yo estaba acostumbrado a relacionar las reacciones qumicas en la materia viva con las actividades de la clula como un todo. Juntando las piezas de informacin como en un puzzle e intentando encontrar los enlaces perdidos, trat de llegar a una imagen coherente de los procesos metablicos. De esta forma, mi mente estaba preparada para utilizar cualquier pieza de informacin que pudiera tener un apoyo en las fases intermediarias de la combustin de los alimentos. Esta diferencia de enfoque fue, creo yo, un factor importante para determinar quin tropez primero con el concepto del ciclo del cido tricarboxlico.

CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES

De dnde obtenemos las cantidades de energa necesarias para sobrevivir? Si analizamos brevemente la ecuacin de combustin , G= 2840 kJ/mol Ser evidente que la ecuacin nos indica que los electrones pasaron directamente a O2 reducindolo a H2O, pero esta reaccin no ocurre en forma tan directa en la naturaleza y los 12 pares de electrones que se liberaron en la oxidacin de la glucosa no se transfieren directamente al oxgeno, sino que se transfieren a las coenzimas NAD+ y FAD para formar NADH y FADH2 respectivamente. De sta manera:

Estructura de NAD

Estructura de FAD

Reducen Enzimas Gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenada Complejo de la Piruvato deshidrogenasa NAD+ Isocitrato deshidrogenasa -cetoglutarato deshidrogenasa Malato deshidrogenasa FAD Succinato deshidrogenasa

Luego de la Gluclisis y del ciclo de Krebs, los electrones pasan a la cadena transportadora de electrones, un sistema de transportadores de electrones ubicado en la membrana interna mitocondrial, que actan secuencialmente.

Los transportadores son protenas integrales de membrana con grupos prostticos capaces de aceptar y/o donar 1 o 2 electrones. La cadena de transportadores puede ser descrita como un gran proceso de 3 eventos, que son:

1. Transferencia de los electrones del NADH y FADH2 a otras sustancias, donde finalmente se
reoxidan a NAD+ y FAD para seguir participando en mas reacciones redox. 2. Los electrones transferidos participarn en la oxidacin-reduccin secuencial de +10 centros redox en 4 complejos enzimticos, antes de reducir el O2 a H2O. 3. Durante la transferencia de los electrones, los H+ liberados por las coenzimas, sern expulsados de la matriz mitocondrial al espacio intermembrana, y creando una gradiente entre ambas. Finalmente, la G de sa gradiente electroqumica conducir la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi a travs de la fosforilacin oxidativa. Los transportadores realizan 3 tipos de transferencias en todo ste proceso: 1. Transferencia directa de electrones (asociada a metales) 2. Transferencia de tomo de hidrgeno H+ + e3. Transferencia de in hidruro H- (H+ + 2e-) 4. Existen 5 tipos de molculas transportadoras de electrones en ste proceso:

1. NAD+ y NADP+
2. 3. 4. 5. Flavoprotenas Ubiquinona Protenas Ferro-sulfuradas Citocromos

La mayor cantidad de electrones es provista de las enzimas de tipo deshidrogenasas, presentes en las vas catablicas, y los envan a nucletidos de amina o flavina. 1).- NAD+ y NADP+; son carriers electrnicos solubles que pueden acoplarse reversiblemente a las deshidrogenasas, y que son incapaces de atravesar la membrana interna mitocondrial, pero son capaces de aportar sus electrones a la cadena transportadora de manera indirecta. El NADH lleva sus electrones al Complejo I o NADH-deshidrogenasa, y el NADPH otorga electrones a variadas reacciones anablicas en nuestro organismo. Reacciones catalizadas por stas coenzimas: Si observan atentamente las ecuaciones, vern que tanto NAD+ y NADP+ son aceptores de grupos hidruros (H-)

NAD+

NADP+

2).- Flavoprotenas; Son protenas que poseen flavin-mononucleotidos (FMN) o Flavin-adenindinucleotido (FAD) unidos de forma covalente a su sitio activo. El nucletido de flavina oxidado puede aceptar 1 o 2 electrones, como semiquinona o FMNH 2/FADH2 respectivamente. La transferencia electrnica ocurre, puesto que la protena tiene un potencial de reduccin mayor que el del compuesto oxidado. Las flavoprotenas pueden actuar como intermediarios entre reacciones en las que se donan 2 electrones (como deshidrogenaciones) o 1 electrn (cmo la reduccin de quinona a hidroquinona).

FAD

FMN

3).-Ubiquinona; Tambin llamada coenzima Q (CoQ o simplemente Q), la ubiquinona es una benzoquinona con una larga cadena lateral isoprenoide. Su nombre viene del ingls UBI (quitous), QUINONE (Quinona ubicua u omnipresente) La ubiquinona puede actuar como puente entre un dador de 2 electrones y un aceptor de 1 electrn, adems, puesto que Q es una molcula pequea e hidrofbica, puede difundir a travs de la membrana interna mitocondrial y actuar como una lanzadera (shuttle) de equivalentes de reduccin entre otros transportadores menos mviles.

Ubiquinona. El isoprenoide se muestra entre corchetes Transformaciones qumicas de la Ubiquinona:

Estructura

Nombre

Forma oxidada de la Ubiquinona, tambin conocida como CoQ. Cmo la imagen mostrada tiene 3 unidades isoprnicas, sta ubiquinona sera de tipo Q3. En mitocondrias humanas, la ubiquinona mas comn es la de tipo Q10 Cuando la ubiquinona acepta 1 electrn o equivalente de reduccin, se transforma en un radical libre llamado semiquinona (Q. o QH). A pesar de lo que se muestra, cualquiera de los dos oxgenos unidos al anillo bencnico (en forma de grupo carbonilo) puede aceptar se electrn. Si la ubiquinona es reducida por 2 electrones o equivalentes de reduccin, se transforma en ubiquinol (QH2), transformando sus dos grupos carbonilos en grupos hidroxilos.

4).- Protenas Ferro-sulfuradas; Son protenas que contienen Fe3+ asociado con azufre (S), sea ste inorgnico o como el encontrado en las cadenas laterales de Cistidina (Cys). Van de formulas sencillas donde participa 1 tomo de Fe3+, hasta motivos mas complejos donde actan mas de 4 tomos de Fe3+. Protenas de Rieske; variantes de las protenas ferro-sulfuradas, dnde el Fe3+ se agrupa a 2 residuos de Histidina, en vez de Cisteina. En la transferencia electrnica mitocondrial, actan al menos 8 protenas ferro-sulfuradas.

5).- Citocromos; Los citocromos son protenas que presentan un cofactor Hemo (Fe3+). Existen 3 tipos de citocromos de inters en sta etapa: citocromo a, citocromo b y citocromo c, los que son distinguibles por sus diferencias en el espectro de absorcin de luz.

Tipo de Citocromo Imagen Grupo Hemo

max

Citocromo a

600 nm

Citocromo b

560nm

Citocromo c

550nm

En los citocromos a y b, los cofactores Hemo estn unidos fuertemente, pero no covalentemente con la protena, mientras que en el citocromo c, el grupo hemo se une de forma covalente con la protena mediante residuos de Cys.

El Potencial de reduccin del Fe3+, en el grupo Hemo de los citocromos, depende de la interaccin con las cadenas laterales de la protena, por lo que es diferente para cada citocromo. El citocromo a y b son protena integrales de la membrana interna de la mitocondria, mientras que el citocromo c de las mitocondrias es soluble, y se asocia de forma electrosttica con la parte externa de la membrana interna.

Complejos de la Cadena Transportadora Esquema de la Cadena Transportadora

Complejo I:

Nombre

NADH Deshidrogenasa NADH: ubiquinona oxido-reductasa

Masa Molar

850 kDa

Subunidades Proteicas 43 Grupos Prostticos FMN, centros Fe-S Amital Inhibidores rotenona Pieridicina A ste complejo cataliza dos procesos simultneos acoplados: 1.- Transferencia de hidruro y un protn a la ubiquinona. , G = 2.- Transferencia de 4 protones desde la matriz al espacio intermembrana (G = +) El complejo I es una bomba de protones, impulsada por la transferencia electrnica que cataliza una reaccin vectorial.(mueve protones en una direccin especfica desde un lugar a otro) Reaccin Global del Complejo I:

Los inhibidores del complejo actan bloqueando el paso de electrones en los centros Fe-S. El ubiquinol (QH2) difunde por la membrana del complejo I al complejo III, donde se oxida a Q, en un proceso acompaado de la salida de electrones. Complejo II:

Nombre

Succionato Deshidrogenasa

Masa Molar

140 kDa

Subunidades Proteicas 4

Grupos Prostticos

FAD, centros Fe-S

Inhibidores

Es la nica protena perifrica de ste proceso (est adherida hacia el lado interno de la membrana interna, o sea, hacia la matriz) y forma parte del ciclo de Krebs. Posee 4 subunidades: 2 subunidades hacia la matriz: A y B (en la imagen, de amarillo y azul respectivamente) y 2 subunidades integradas en la membrana: C y D (en la imagen, de violeta y rojo respectivamente. sta enzima transpasa electrones desde el succinato a la ubiquinona (Q), a travs de 1 molcula FAD, 3 centros Fe-S y un citocromo b. Los complejos I y II no operan en secuencia, pero logran el mismo objetivo, traspasar electrones a la ubiquinona, desde sustratos reducidos. Complejo III:

Nombre

Ubiquinona-citocromo C oxido-reductasa

Masa Molar

250 kDa

Subunidades Proteicas 11

Grupos Prostticos

Hemos, Fe-S

Inhibidores

Antimicina A

Transfiere electrones desde QH2 (ubiquinol) a citocromo C, junto al transporte vectorial de protones (H+) desde la matriz al espacio intermembrana, por un proceso denominado Ciclo Q. Ciclo Q: modelo de paso de electrones y protones a travs del Complejo III, en 2 Ciclos. La esencia del ciclo Q es que QH2 pasa por una reoxidacin bicclica en donde QH (semiquinona) ser un intermediario estable. Reaccin del primer ciclo:

En el primer ciclo, QH2 del complejo 1 se une al sitio Qo donde transfiere 1 electrn a la protena ferro*sulfurada, liberando 2 H+ al espacio intermembrana y formando QH La protena ferro-sulfurada reduce el cit.C1 y QH transfiere sus electrones al cit.B L, formando Q. El cit.BL reducir el cit.BH. El Q formado es liberado del sitio Qo, y se une al sitio Qi, dnde adquiere el electrn del cit.BH, formndose QH. Reaccin del segundo ciclo:

En el segundo ciclo, otra molcula de QH2 proveniente del Complejo I, pasa por el proceso anterior, luego 1 electrn reduce la protena Fe-S y el cit.C1. El otro electrn reduce secuencialmente el cit.BL y el cit.BH. ste segundo electrn reduce el QH del primer ciclo, formando QH2. Los protones consumidos en ste ltimo paso fueron originados de la matriz. Reaccin Global del Ciclo Q:

De sta manera, por cada 2 molculas de QH2 que entran al ciclo Q, se regenera 1 QH2

Complejo IV:

Nombre

Citocromo Oxidasa

Masa Molar

160 kDa

Subunidades Proteicas 13

Grupos Prostticos

Hemos, CuA, CuB

Inhibidores

CN- (cianuro)

Transporta electrones desde el citocromo C a O2 (Oxgeno molecular) formando H2O. Los electrones transportados siguen el siguiente camino: Citocromo C CuA Hemo A Hemo A3-CuB O2 Por cada 4 electrones que pasan por el complejo, la enzima consume 4H + de la matriz, reduciendo el O2 en H2O, y usa la energa de sta reaccin pasando un H+ al espacio intermembrana por cada electrn que pasa por ella. Reaccin Global del Complejo IV:

Los intermediarios se mantienen fuertemente unidos la complejo hasta que se convierten completamente en H2O, y evitar la formacin de radicales libres de oxgeno. De sta forma, la ecuacin vectorial dada por todo el proceso de la cadena transportadora es:

La energa almacenada por ste gradiente, llamada fuerza protn-motriz, tiene 2 componentes: 1. Energa Qumica Potencial: dada por la diferencia en las concentraciones de protones a ambos lados de la membrana interna 2. Energa Elctrica Potencial: originada con la separacin de cargas, cuando un H+ cruza la membrana interna sin un contrain. Sntesis de ATP

Teora Quimiosmtica: La G del transporte de electrones es conservada al bombear protones desde la matriz al espacio intermembrana para crear un gradiente electroqumico de H+ a travs de la membrana interna. El potencial electroqumico de sta gradiente se acopla a la sntesis de ATP. Observaciones explicadas por la teora quimiosmtica 1. La fosforilacin oxidativa requiere una membrana interna intacta. 2. La membrana interna es impermeable a iones como H +, OH-, K+, Cl-, cuya difusin libre reducira la gradiente electroqumica. 3. El transporte de electrones resulta en el transporte de H+ fuera de la mitocondria intacta (el espacio intermembrana es equivalente al citosol), creando una gradiente electroqumica medible a travs de la membrana interna. 4. Los compuestos que incrementan la permeabilidad de la membrana interna a los H+ y disipan la gradiente, adems, permiten que el transporte de electrones contine, pero inhiben la sntesis de ATP, es decir, desacoplan el transporte de electrones de la

fosforilacin oxidativa. Al contrario, incrementando la acidez en el espacio intermembrana, la sntesis de ATP es estimulada. ATP-Sintetasa La ATP-sintetasa es una ATP-asa de tipo F que contiene 2 componentes:

1. F0: Canal de H+ transmembrana hidrofbico que contiene al menos 8 subunidades proteicas

(la zona de azules y violetas en la imagen) 2. F1: Protena perifrica hidrosoluble, compuesta de 5 tipos de subunidades (la zona roja en la imagen). EL Componente F0

Su estructura no se conoce en detalle. Utilizando DCCD, un reactivo hidrofbico, se bloque el transporte de protones de F0 reaccionando con un residuo Glu (Acido Glutmico, Glutamato a ph 7) en alguna subunidad de F0. sta reaccin implica que un grupo carboxilo se encuentra en un ambiente lipdico, o sea, est contenido en la membrana. Los mamferos contienen 6 copias de protenas ligadas a DCCD en su F0, que se cree se asocian como un barril, formando el canal de transporte de H+ polar que contiene residuos Glu.

El Componente F1

Posee una composicin proteica de tipo 3 3 El arreglo cclico y las estructuras similares de las subunidades y , le otorgan a ambas, simetra rotacional. Sin embargo, la protena es asimtrica debido a la presencia de la subunidad , y adems porque cada par de y adoptan conformaciones diferentes, cada una con una distinta afinidad por el sustrato. La subunidad ctliza la sntesis de ATP, aunque la subunidad tambin se adhiere al ATP. Las diferencias en la conformacin de son diferentes en los sitios de unin ATP/ADP. sta diferencia en la unin de nucletidos en las 3 subunidades, son esenciales en el mecanismo del complejo.

Las conformaciones que adopta son las siguientes: -ATP; -ADP; -vaca Catlisis Rotacional Los 3 sitios activos de F1 se alternan en la sntesis de ATP. El mecanismo de sntesis de ATP, puede ser descrito en 3 pasos:

1. Translocacin de H+ por F0. 2. Catlisis de Formacin del enlace fosfoanhidrido del ATP por F1. 3. Acoplamiento de la disipacin de la gradiente protnica con la sntesis de ATP, que
requiere la interaccin de F1 y F0.

De acuerdo al mecanismo propuesto por Boyer, F1 tiene 3 protmeros catalticos interactuantes (subunidades ), cada uno en un estado conformacional diferente: Uno que se une al sustrato y producto dbilmente, llamado Estado L (loosely); otro que se une a stos fuertemente, llamado Estado T (tight); y otro que no se une a ellos, llamado Estado O (open).

LA FOSFORILACIN OXIDATIVA MITOCONDRIAL

Concepto bsico Se define FOSFORILACION como la sntesis de ATP a partir de ADP y fosfato. Teniendo en cuenta el papel central que el ATP presenta como fuente de energa para todos los procesos endergnicos celulares, est claro la importancia de la fosforilacin en el metabolismo celular . Hay dos mecanismos diferentes de fosforilacin: a) A nivel de sustrato, en los que una molcula fosforilada cede su fosfato al ADP, y b) Quimiosmticos, en los que la sntesis de ATP est acoplada al movimiento exergnico de hidrogeniones a favor de su potencial electroqumico:

LA FOSFORILACIN OXIDATIVA
Se define la fosforilacin oxidativa como la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi acoplada a la transferencia de electrones desde un donador reducido a un aceptor final. La energa del proceso deriva, precisamente, de este proceso redox. En eucariotas, el donador ltimo de electrones es siempre un compuesto orgnico que se oxida por los nucleotidos de nicotinamida o de flavina. Tenemos que considerar dos apartados diferentes en la FO:

1) La cadena de transferencia de electrones desde el donador inicial al aceptor final: es la cadena respiratoria, y este proceso lo vamos a llamar respiracin. 2) La sntesis de ATP propiamente dicha empleando la energa liberada en la transferencia de electrones. Como ya hemos detallado todo lo referente a transporte de electrones en el punto anterior (cadena transportadora de electrones), este se acpite de fosforilacin oxidativa solamente detallaremos como es q se fosforiliza el ADP a ATP. La sntesis de ATP por la ATPsintetasa F

Fo: est formada por un anillo unos 5,5 nm de dimetro, formado por 10 (en levadura) o 12 subunidads c, pequeos pptidos hidrofbicos de 8 kD, por la subunidad a y por 2 subunidades b. Est completamente integrada en la membrana

Modelo de la sntesis de ATP mediante cambios conformacionales sucesivos en cada uno de los dmeros funcionales

CONTROL DE LA FOSFORILACIN OXIDATIVA.

Experimentalmente se ve que la respiracion (consumo de oxgeno por las mitocondrias, en presencia de un donador de electrones) requiere ADP y fosfato SI las mitocondrias estn intactas. Sin embargo, si las mitocondrias estn rotas, NO se requiere ADP.

La explicacin de esto es que las reacciones catalizadas por los centros resopiratorios I y III son reversibles, y puedes alcanzar el equilibrio. Adems, la reaccin redox y el bombeo de protones estn acoplados estequiomtricamente, esto es, NO puede suceder uno sin el otro.

De tal forma que cuando NO puede disiparse el gradiente de hidrogeniones, el transporte de electrones se bloquea en los centros I y III. Si el gradiente se disipa, o no puede formarse como sucede en las mitocondrias rotas, el transporte electrnico (la respiracin) sucede sin limitacin alguna.

Inhibidores del transporte electrnico

El flujo de electrones a travs de la cadena de transporte electrnico se ha podido determinar experimentalmente mediante varias tcnicas; entre las ms tiles se encuentra el empleo de inhibidores especficos que bloquen en puntos determinados de la cadena de transporte electrnico:

Estos inhibidores suprimen el transporte electrnico y, como consecuencia, bloquean la fosforilacin

Desacoplantes de la fosforilacin oxidativa

Permeabilizan la membrana a los hidrogeniones, de tal manera que aunque las mitocondrias estn intactas el gradiente de hidrogeniones no se puede formar, ya que una vez expulsados por la cadena de transporte electrnico vuelven a entrar en la matriz mitocondrial. Estos compuestos activan la respiracin e inhiben la fosforilacin, ya que al no haber gradiente de hidrogeniones no hay energa para que funcione la ATPsintetasaF. Desacoplante fisiolgico: las Termogeninas, pequeas protenas que se intregran en la membrana mitocondrial interna. Actan en la grasa parda de mamferos invernantes, que es un tejido termognico: la energa de la respiracin se disipa en forma de calor. Desacoplantes de sntesis: el dinitrofenol, compuesto amarillo usado como colorante alimentario a principios del s.XX , y luego como componente de productos milagro para adelgazar. Est terminantemente prohibido, por ser altamente peligroso

BIOGNESIS MITOCONDRIAL
La biognesis mitocondrial es un proceso central en la fisiologa celular que requiere la expresin coordinada de dos genomas localizados en compartimentos fsica y genticamente diferentes, ncleo y mitocondria. Consta de dos procesos diferentes, la proliferacin mitocondrial o aumento del nmero de mitocondrias por clula, y la diferenciacin mitocondrial, donde el orgnulo adquiere las caractersticas estructurales y funcionales adecuadas a las necesidades especficas de las distintas clulas del organismo. Se trata, en efecto, de un proceso complejo para el que deben expresarse de forma coordinada protenas codificadas tanto por el ADN nuclear como por el ADN del propio orgnulo. El ADN mitocondrial codifica un porcentaje muy pequeo de las protenas del orgnulo; la gran mayora de ellas son codificadas por el ADN nuclear e importadas durante el proceso de diferenciacin. El estudio de la biognesis mitocondrial ha sido abordado por el Grupo de Investigacin de Metabolismo Energtico y Nutricin de la UIB mediante el seguimiento de factores nucleares de trasncripcin que controlan el proceso de replicacin y de diferenciacin mitocrondrial. En este sentido, es especialmente ilustrativo el TFAM (un factor de transcripcin mitocondrial) sintetizado por el ncleo celular, que es necesario para la expresin del genoma mitocondrial. De esta manera, tal como afirma la doctora Pilar Roca, "no es que los tejidos analizados en animales hembra presenten un mayor nmero de mitocondrias, sino que presentan un proceso distinto de diferenciacin". Por lo tanto, el proceso de biognesis mitocondrial evolucionara de distinta manera en los dos gneros, conduciendo a mitocondrias estructural y funcionalmente distintas. La biognesis mitocondrial requiere de la cooperacin del genoma nuclear y mitocondrial. Uno de los aspectos ms interesantes de la sntesis mitocondrial es que requiere la accin coordinada de los genes nucleares y de los mitocondriales. La mitocondria posee numerosas copias de una molcula pequea de ADN circular (ADNmt) que comprende aproximadamente 16.659 nucletidos. A partir de ese ADN, puede sintetizar 13 protenas que forman parte esencial de la cadena de transporte de electrones, sin embargo la gran mayora de las protenas mitocondriales provienen de la informacin codificada en el ADN del ncleo celular. Los mecanismos de sealizacin, como los que son activados por el ejercicio, inician la activacin de factores de trascripcin, que aumentan la produccin de ARNm a partir del DNA nuclear y mitocondrial. Los productos de los genes nucleares son traducidos en el citosol como "protenas precursoras" con una secuencia seal (targeting) localizada en el extremo amino terminal o en una secuencia interna protenas precursoras. Estas protenas precursoras interaccionan con otras protenas llamadas chaperonas (ej: protena de shock trmico de 70-kDa o HSP70 y el factor mitocondrial de estimulacin de la importacin o MSF), que mantienen la protena recin sintetizada en forma desplegada y la dirigen a la maquinaria de importacin de la membrana mitocondrial externa, donde hay un grupo de protenas conocidas como complejo Tom. El precursor se transfiere luego a travs de la membrana externa, por el espacio intermembranoso, hacia otras protenas llamadas traslocasas, o complejo Tim, de la membrana mitocondrial interna. Ciertos componentes intramitocondriales, empujan al precursor hacia la matriz mitocondrial, clivan la secuencia de reconocimiento de destino, y la protena termina replegndose en la conformacin madura. Situaciones de estrs fisiolgico como la actividad contrctil y la hormona tiroidea aceleran

la importacin de protena hacia la mitocondria, coincidentemente con el aumento en la expresin de algunos componentes de la maquinaria de importacin. En forma contraria, deterioros en el proceso de importacin puede causar disfuncin mitocondrial y enfermedad.

Qu seales disparan la biognesis mitocondrial?

Est bien establecido que el ejercicio de resistencia, empleando una duracin apropiada por da, cierta frecuencia semanal y una intensidad submxima por sesin de entrenamiento, puede producir un aumento del contenido mitocondrial, usualmente en un rango de 50 al 100% en 6 semanas. Esto produce una mejora en la performance de resistencia, mayormente en forma independiente de los cambios mucho ms pequeos inducidos por el ejercicio en el consumo mximo de oxgeno. La biognesis mitocondrial puede ser replicada utilizando modelos artificiales de ejercicio, como la actividad contrctil crnica producida por estimulacin elctrica del nervio motor. Tambin puede ser el resultado de otras condiciones fisiolgicas, incluyendo el tratamiento con hormona tiroidea, actuando a travs de receptores nucleares y mitocondriales. La respuesta del msculo a la hormona tiroidea es especfica segn el tipo de fibra, dependiendo en parte de las diferencias en la distribucin de los receptores nucleares para esta hormona. Las vas que utilizan el tratamiento con hormona tiroidea y las que utiliza la actividad contrctil para producir biognesis mitocondrial son independientes entre s, y esto ha sido evidente porque aumentos en el contenido mitocondrial son an notables en los msculos de animales que han sido tiroidectomizados y sometidos a actividad contrctil crnica. De cualquier manera, ambas condiciones parecen producir un incremento en la masa mitocondrial en las clulas musculares, resultando en una capacidad mayor para el consumo de oxgeno por gramo de tejido. Mediciones de protenas marcadoras como la actividad del citocromo c o de la citocromo c oxidasa (COX), han permitido a los fisilogos del ejercicio reconocer que, en respuesta a un estmulo de ejercicio constante, se requieren 6 semanas de entrenamiento de la resistencia (endurance) para alcanzar un contenido mitocondrial estacionario mayor. Este tiempo depende del tipo de fibra que est siendo reclutado, como tambin de la duracin, frecuencia e intensidad de la sesin de ejercicio. Las adaptaciones mitocondriales no ocurrirn en las clulas musculares esquelticas que no hayan sido reclutadas durante la sesin de ejercicio, consistentemente con la idea de que el estmulo para la biognesis se origina en el msculo en contraccin, independientemente de otras influencias. Un corolario de esto es que los programas de entrenamiento de la resistencia deben ser apuntados, en parte, hacia el reclutamiento de unidades motoras conteniendo fibras tipo IIb (blancas rpidas). Interesantemente, el entrenamiento en contra de resistencia, el cual s recluta unidades motoras fatigables rpidamente, no conduce a una adaptacin mitocondrial. Como la muy alta intensidad y la corta duracin de la mayora de los programas de entrenamiento contra resistencia representan un estmulo fuerte para la sntesis de protenas miofibrilares, conduciendo a la hipertrofia, el contenido mitocondrial en las fibras musculares agrandadas, podra estar "diluido". Esto incrementa la distancia de difusin del oxgeno y de los sustratos, y no representa una adaptacin favorable con respecto a la performance en el entrenamiento de endurance. El perodo de tiempo aproximado de 6 semanas requerido para lograr una nuevo estado estacionario (steady-state) en el contenido mitocondrial en respuesta al entrenamiento de resistencia, claramente no refleja los eventos moleculares tempranos que en ltima instancia conduce a cambios morfolgicamente mensurables.

Las protenas mitocondriales se recambian con una vida media de 1 semana luego del inicio de un nuevo nivel de actividad contrctil muscular. Esto significa que se requiere un estmulo de ejercicio continuo para mantener el contenido de mitocondrias en un nivel elevado luego de un perodo de entrenamiento; de otra manera, se producir la prdida de la capacidad oxidativa y de resistencia. Es interesante hacer notar que los cambios en el contenido mitocondrial de fosfolpidos, ocurren con una vida media an ms corta (4 das), sugiriendo que el ensamblado y/o la degradacin de la organela podra ser iniciada por cambios en la composicin de fosfolpidos. Por ejemplo, en el msculo con deficiencia de hierro, se alteran las velocidades normales de sntesis de citocromo (ya que se necesitan grupo hemo) y su incorporacin a la membrana interna, sin embargo cuando se le impone una actividad contrctil a ese msculo, la misma parece conducir a la sntesis continua de lpidos de membrana, produciendo un volumen mitocondrial aumentado, con un contenido proteico notablemente reducido y anormal. Estos datos sugieren que la sntesis de protenas y de fosfolpidos no necesariamente estn acopladas durante la biognesis mitocondrial inducida por actividad contrctil. Los datos tambin sugieren que la proporcin de lpidos a protenas en la mitocondria debe cambiar un poco durante la transicin tanto hacia contenidos mitocondriales ms altos o ms bajos. Este cambio parece ser sutil como resultado del entrenamiento o de la estimulacin crnica, y en la mayora de los casos parece no afectar la velocidad de consumo de oxgeno por unidad de volumen mitocondrial. Sin embargo, podra ser mucho ms evidente bajo condiciones de steady-state en tejidos que posean contenidos mitocondriales ampliamente divergentes, como el corazn y el msculo esqueltico blanco.

Cambios en el metabolismo celular producidos por la biognesis mitocondrial durante el ejercicio de resistencia.
La notable mejora en la performance de la resistencia que resulta de la biognesis mitocondrial es una consecuencia de cambios en el metabolismo muscular durante el ejercicio. Durante la contraccin muscular intensa, la concentracin de ADP libre (ADPl) aumenta. Este incremento conduce el equilibrio de la reaccin en la que interviene la creatina fosfokinasa (CPK) hacia la formacin de ATP y creatina. El ADPl es tambin un sustrato y efector alostrico en la va glucoltica, y controla la respiracin mitocondrial activa. Como el entrenamiento de la resistencia incrementa el contenido mitocondrial del msculo esqueltico sin grandes efectos sobre la CPK o las enzimas glucolticas, parece razonable asumir que una fraccin mayor del requerimiento de energa para un determinado trabajo de esfuerzo, derivar ahora del metabolismo aerbico. Esto ha sido referido como una sensibilidad mayor de la respiracin mitocondrial al ADPl, ya que se requiere un incremento menor en la concentracin de este metabolito, para lograr el mismo nivel de consumo de oxgeno. Este incremento reducido en el ADPl atenuar la gluclisis y la formacin de cido lctico, y se producir una economa de fosfocreatina. Adems, la formacin de ADP ocurrir a una velocidad menor. En el msculo rpido, con una alta actividad de la AMP-deaminasa, la sntesis de amonaco y de IMP se reducir. En el msculo lento, que posee menos AMPdeaminasa y actividades mayores de 5-nucleotidasas, la menor formacin de AMP ser traducida en una conversin reducida a adenosina. Con la declinacin ms pequea de creatina fosfato, una sntesis reducida de AMP, conducir a una activacin menor de la AMP kinasa (AMPK), un factor que podra ser importante para la reduccin inducida por el entrenamiento de la traslocacin de GLUT4 (transportador de glucosa) hacia la membrana plasmtica. Esto, en coincidencia con actividades aumentadas de enzimas mitocondriales de la b-oxidacin, predispone al individuo hacia una oxidacin lipdica mayor durante el ejercicio.

Se ha sugerido que la performance aerbica aumentada requiere una mejora tanto de la capacidad muscular oxidativa como de los mecanismos de control respiratorio, dando muestra de la importancia de la coordinacin temporal de los flujos de energa por la CK, para ms eficacia. Otros estudios tambin muestran que despus del entrenamiento, la sensibilidad de la mitocondria al ADP, disminuye, mientras que el efecto de la creatina en la respiracin se encuentra aumentado, lo cual resulta en una mejora en el control de la produccin de energa aerbica. El incremento del contenido mitocondrial producido por el ejercicio de resistencia no solamente conduce a una produccin menor de lactato, sino tambin a una mejora en lavado del mismo. El transporte de lactato hacia la mitocondria puede ocurrir va el transportador mitocondrial monocarboxilado (MCT1), por lo tanto el aumento del contenido de mitocondrias aumentar la oxidacin del lactato, produciendo velocidades menores de liberacin desde el msculo. Adems, cuanto mayor es el contenido de mitocondrias por gramo de msculo, menor es la velocidad de respiracin requerida por mitocondria para cualquier carga de trabajo dada. Esto predice una reduccin en los niveles de las especies reactivas de oxgeno (ROS), potencialmente peligrosas, an a una velocidad constante de consumo de oxgeno por gramo de msculo. La combinacin de la produccin reducida de ROS, con un aumento de las enzimas protectoras, sustenta la idea de un beneficio adicional de la actividad contrctil crnica: adems de la capacidad oxidativa aumentada, tambin atena el dao potencial que podran producir las ROS en las protenas, los lpidos y el ADN. Contrariamente, un contenido reducido de mitocondrias, como es evidente en algunos tejidos, como consecuencia del envejecimiento, se correlaciona con una mayor tendencia al dao inducido por ROS, particularmente sobre el ADNmt. Este hecho pone de manifiesto una razn potencialmente importante para mantener el contenido mitocondrial del msculo con un programa de actividad fsica regular durante el proceso de envejecimiento.

Mecanismos celulares de biognesis mitocondrial los msculos

La iniciacin de la biognesis mitocondrial en las clulas musculares comienza con ciertas seales provocadas por la contraccin del msculo. La magnitud de la seal/es, indudablemente hasta cierto punto, est relacionada con la intensidad y duracin del esfuerzo contrctil. Esta sealizacin puede potencialmente conducir a 1) la activacin o inhibicin de factores de trascripcin, los cuales afectarn la velocidad de trascripcin, 2) la activacin o inhibicin de factores de estabilizacin del RNAm, los cuales median cambios en la velocidad de degradacin del RNAm, 3) alteraciones en la eficiencia de la traduccin a protenas, 4) la modificacin post-traduccional de las protenas, 5) cambios en la cintica de importacin de protenas mitocondriales y/o 6) alteraciones en la velocidad de ensamblado de las subunidades que conforman los complejos enzimticos mitocondriales.

Adems, la seal/es podra ser transmitida directamente a la mitocondria para iniciar la replicacin o trascripcin del ADN mitocondrial (ADNmt), o tener un efecto sobre la traduccin del RNAm a protenas o en el ensamblado de los complejos enzimticos.

Eventos iniciales de sealizacin

Si hablamos de la actividad contrctil, al inicio de la misma, se sucede un nmero de eventos rpidos, que forman parte del proceso de sealizacin inicial, que conduce a la sntesis de protenas y lpidos. Estos incluyen: 1) cambios en la conformacin de protenas sensibles al voltaje, respondiendo a potenciales de accin del sarcolema (membrana plasmtica del msculo); 2) activacin de unas protenas de la superficie celular llamadas integrinas, que son mecanotransductores (traducen seales mecnicas desde el exterior al interior celular); 3) flujo de iones (por Ej. de Ca2+) en la clula muscular en contraccin; 4) cambios en la duracin de los puentes cruzados y el desarrollo de la tensin y 5) el recambio de ATP y la subsiguiente estimulacin del metabolismo. Se discutirn principalmente los eventos relacionados con la sealizacin por calcio y el recambio de ATP. Calcio. Su liberacin del retculo sarcoplsmico, permite la interaccin de la actina y la miosina en la clula muscular. Tambin es muy reconocido como un importante segundo mensajero en una variedad de clulas, incluyendo las musculares. Incrementos en la concentracin de calcio citoslico pueden activar un nmero de protenas kinasas (por ej la Ca2+/calmodulina kinasa II, la protena kinasa C (PKC)) y fosfatasas (por ej, la calcineurina), las cuales en ltima instancia envan sus seales al ncleo para alterar la velocidad de la trascripcin de ciertos genes (proceso de sntesis de ARNm a partir del ADN). Existen otros eventos en los que participa el calcio que podran estar relacionados con la biognesis mitocondrial. Primero, el incremento de calcio citoslico influencia directamente la velocidad de la respiracin u oxidacin mitocondrial. Esto ocurre a travs de la activacin de enzimas deshidrogenasas, las cuales requieren calcio para su actividad completa. El cambio en el calcio mitocondrial causa incrementos en los niveles de ATP tanto en el citosol como en la mitocondria, los cuales permanecen ms tiempo, luego de que las elevaciones de calcio mitocondrial han declinado.

En segundo trmino, se han reportado cambios mediados por calcio en eventos de fosforilacin en la membrana mitocondrial interna, particularmente con la fosforilacin de la subunidad c de la ATPasa F0 F1 (la que participa en la sntesis de ATP). Aunque el significado de estos hechos respecto a la biognesis mitocondrial an no ha sido establecido, podran estar formando parte de una cascada de sealizacin intramitocondrial. Tercero, disminuciones en la concentracin de calcio en el medio que baa miotubos en cultivo, produce cambios paralelos en las actividades de las enzimas mitocondriales. En cuarto lugar, han sido documentados incrementos mediados por calcio en la expresin de citocromo c, un importante componente de la cadena de transporte de electrones. Finalmente, estudios realizados en clulas con una deplecin inducida del ADN mitocondrial (ADNmt), han sostenido la conclusin de que algunos eventos sealizados por calcio en el msculo, son propagados como resultado directo de desbalances en la relacin suministro-demanda de energa. En la deplecin del ADNmt, la sntesis de ATP est reducida por una cadena respiratoria defectuosa, resultado de niveles inadecuados de ciertas protenas codificadas por el genoma mitocondrial. Esto conduce a un incremento de la concentracin de calcio citoslico, presumiblemente porque los procesos dependientes de energa como la extrusin (salida) y la entrada de calcio estn deteriorados. Ms recientemente Wu y col. generaron un ratn transgnico que expresa selectivamente en el msculo esqueltico, una forma constitutivamente activa de la protena kinasa IV dependiente de calcio/calmodulina (CaMKIV). Los msculos esquelticos de estos ratones mostraron una replicacin aumentada de ADN mitocondrial y biognesis de mitocondrias, una regulacin aumentada de las enzimas mitocondriales involucradas con el metabolismo de los cidos grasos y el transporte de electrones, y una susceptibilidad reducida a la fatiga durante contracciones repetitivas. La CaMK indujo la expresin de PGC-1 (peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1 (PGC-1), un regulador maestro de la biognesis mitocondrial in vivo, y activ el promotor del gen PGC-1 en miocitos en cultivo. Por lo tanto una va de sealizacin regulada por calcio, controla la biognesis mitocondrial en clulas de mamfero (Wu, 2002). Sin embargo, algunos estudios han mostrado que un incremento de calcio no puede, por s mismo, conducir a un aumento de la biognesis mitocondrial, sino que estara formando slo parte de una serie ms amplia de seales positivas y negativas que median los cambios en la sntesis de componentes mitocondriales.

Recambio de ATP
Por muchos aos, ha sido hipotetizado que disturbios en el metabolismo energtico que conduce a una deplecin de ATP, una alteracin en la carga energtica, o un cambio en el potencial de fosforilacin, podran iniciar una respuesta compensatoria, conduciendo en ltima instancia a un incremento del contenido mitocondrial. Sin embargo, el entrenamiento fsico de moderada intensidad puede conducir a la biognesis mitocondrial en ausencia de cambios notables en los niveles celulares de ATP. Por lo tanto, a pesar de que las condiciones de deplecin de ATP son conocidas por conducir a un contenido mayor de mitocondrias, pareciera ser que un incremento en la velocidad de recambio del ATP (es decir, velocidades aumentadas de sntesis y degradacin de ATP), es suficiente para provocar la biognesis mitocondrial. Estas ideas se apoyan en un considerable soporte experimental: experimentos realizados con una droga (el cido b-

guanidinoproprinico) para depletar los compuestos con grupos fosfatos de alta energa como la fosfocreatina y el ATP, muestran una regulacin elevada de las enzimas mitocondriales y el ARNm del citocromo c, en msculo. En segundo trmino, como resultado del recambio acelerado de ATP, el ejercicio incrementa los niveles de AMP y disminuye los de fosfocreatina en el msculo, provocando la activacin de una protena kinasa, la a2-AMPK. El desacople o desacoplamiento mitocondrial se refiere a la disipacin del gradiente electroqumico a travs de la membrana interna, lo cual disminuye la produccin de ATP, inhibiendo la actividad de la ATPasa F1 F0. Subsecuentemente, el transporte de electrones y el consumo de oxgeno se aceleran porque se pierde el control ejercido por el ADP, y la utilizacin de ATP excede la sntesis. En este sentido, esta condicin es anloga al ejercicio intenso. El desacople puede lograrse por el uso de drogas especficas in vitro, o por la sobreexpresin de protenas de desacople (UCPs). En 6 horas de desacople, se observ una induccin del factor de trascripcin llamado factor-1 respiratorio nuclear (NRF-1). NRF-1 ha sido ampliamente involucrado en la activacin de mltiples genes implicados en la biognesis mitocondrial. Seguidamente a la induccin del NRF-1, se observ un aumento en la expresin de los genes que son target o blanco de este factor, incluyendo la d-cido amino levulnico sintasa (ALAs), la enzima limitante de la velocidad en la sntesis del grupo hemo. Este grupo es un componente vital de la cadena respiratoria, ya que acta como grupo prosttico de los citocromos mitocondriales. Por lo tanto parece que el incremento de la respiracin mitocondrial, o el dficit entre la demanda celular de ATP y la provisin de ATP mitocondrial, proporciona un estmulo para la subsecuente induccin de una variedad de genes involucrados en la biognesis de la organela. En relacin a las protenas de desacople, la funcin fisiolgica de la protena de desacople-3 (UCP3) an no ha sido dilucidada. Estudios previos muestran que el ejercicio induce aumentos muy considerables de la protena UCP3 en el msculo esqueltico. Como la expresin de UCP3 parece estar regulada por los mismos mecanismos que rigen otros componentes mitocondriales, resultaba poco probable que el ejercicio produjera esos cambios tan impresionantes y divergentes en la composicin mitocondrial. Jones y col, testearon la hiptesis de que los principales cambios en la concentracin de protena UCP3 no ocurren independientemente de la biognesis mitocondrial, y que UCP3 aumenta como parte del incremento de mitocondrias inducido por el ejercicio. Ellos encontraron un gran aumento del ARNm de UCP3 inmediatamente y 3 hs. despus de una sesin de natacin. La concentracin de protena UCP3 se increment aproximadamente 35% 18hs despus de una nica sesin de ejercicio, aproximadamente 63% luego de 3 das, y aproximadamente 84% luego de 10 das. Estos resultados son consistentes con la interpretacin acerca de que el ejercicio de resistencia induce un incremento adaptativo en la mitocondria que posee un contenido normal de UCP3. Esta protena tambin aumenta durante el ayuno y las comidas altas en grasa. En estas situaciones la disponibilidad de cidos grasos excede la capacidad de metabolizarlos, sugiriendo que la UCP3 cumplira un rol de regulacin y manejo de estos cidos grasos no metabolizables. Para testear la hiptesis que indica que esta protena actuara como exportadora de cidos grasos no metabolizables desde la matriz mitocondrial, Schrauwen y col., le suministraron a pacientes Etomoxir (bloqueador de la entrada de cidos grasos a la mitocondria), o un placebo, durante 36hs en una cmara respiratoria. El etomoxir inhibi la oxidacin de grasa durante 24hs y la oxidacin de grasas durante el ejercicio aproximadamente entre 14-19%. Sorpresivamente, el contenido de UCP3 en el msculo vastus lateralis, sufri una marcada upregulacin en las 36hs de la administracin de Etomoxir. Este aumento de la UCP3 fue acompaado

por una glucosa sangunea en ayuno ms baja, y un incremento de la traslocacin del transportador de glucosa 4 (GLUT-4). Estos datos apoyan la hiptesis que supone que la funcin fisiolgica de la UCP3 es facilitar la salida de los cidos grasos no metabolizables desde la matriz mitocondrial hacia el citosol, lo cul preserva a la mitocondria de los potenciales efectos deletreos de niveles altos de cidos grasos. Adems los datos muestran que la regulacin aumentada de la UCP3, puede ser beneficiosa en el tratamiento de la diabetes tipo2 (Schrauwen, 2002). En conclusin, existe fuerte evidencia para sostener roles interactivos y complementarios de la sealizacin por calcio y por disturbios en el recambio de ATP, como importantes contribuyentes a la iniciacin de los eventos que conducen a la biognesis mitocondrial.

ENFERMEDADES MITOCONDRIALES
As como algunas enfermedades reciben el nombre de la parte del cuerpo que afectan (como las enfermedades del corazn), las enfermedades mitocondriales se llaman as porque afectan una parte especfica de las clulas de las que nuestros cuerpos estn formados. El trmino fue introducido por Luft en 1962 al describir un paciente con hipermetabolismo no causado por una disfuncin tiroidea que presentaba un desacoplamiento de la fosforilacin oxidativa en mitocondrias de msculo. Como las protenas componentes de los complejos multienzimticos de la cadena respiratoria y fosforilacin oxidativa estn codificadas tanto en el DNA nuclear como en el mitocondrial, estas enfermedades pueden estar causadas por mutaciones en los genes de ambos sistemas genticos. Sin embargo, habitualmente se conoce con el nombre de enfermedades mitocondriales a los daos producidos en el mtDNA, que presentan un tipo de herencia materna, En general, son trastornos multisistmicos que afectan fundamentalmente a los tejidos y rganos que mas dependen de la energa mitocondrial (sistema nervioso central, msculo cardiaco y esqueltico, riones y sistema endocrino). Sin embargo, al estar las mitocondrias presentes en todos los tejidos, otros muchos rganos pueden estar implicados en estos sndromes tan heterogneos. De hecho, una de las pistas que conduce a la sospecha de enfermedad mitocondrial es la implicacin de muchos rganos diferentes. Otros caracteres morfolgicos y bioqumicos que suelen estar asociados a enfermedades mitocondriales son la presencia de fibras rojo-rasgadas (acumulacin de mitocondrias anormales en tamao y nmero) en biopsias musculares teidas con tricromo de Gomori, la presencia de fibras no reactivas a la tincin histoqumica de la citocromo c oxidasa, y defectos en uno o varios complejos de la cadena respiratoria. Sin embargo, algunas enfermedades claramente mitocondriales no presentan estos caracteres tan tpicos de los trastornos mitocondriales, especialmente en pacientes en edad peditrica. Dada la heterogeneidad de las manifestaciones clnicas, morfolgicas y bioqumicas presentes en las enfermedades mitocondriales, su clasificacin se basa en las caractersticas moleculares y genticas de las mutaciones. As, las enfermedades mitocondriales se pueden dividir en dos grandes grupos: Enfermedades asociadas a mutaciones puntuales y enfermedades debidas a reorganizaciones del mtDNA por inserciones y/o deleciones. A continuacin se hace una relacin de las entidades patolgicas ms comunes asociadas a estos tipos de mutaciones. Especficamente, las enfermedades mitocondriales afectan las mitocondrias - pequesimas fbricas de energa que se encuentran dentro de casi todas nuestras clulas.

QUE SON LAS ENFERMEDADES MITOCONDRICAS? 1. Sistema nervioso Convulsiones, espasmos, retrasos en el desarrollo, sordera, demencia, apopleja antes de los 40 aos, defectos del sistema visual, mal balance, problemas con los nervios perifricos 2. Ojos Prpados cados (ptosis), incapacidad de mover los ojos de un lado a otro (oftalmoplegia externa), ceguera (retinitis pigmentosa, atrofia ptica), cataratas 3. Corazn Cardiomiopata (debilidad del msculo cardaco), bloqueo de la conduccin 4. Hgado Fallo heptico (poco comn, excepto en bebs con sndrome de agotamiento de mtADN) 5. Riones Sndrome de Falconi esenciales en la orina), mioglobinuria 6. Msculos esquelticos Debilidad intolerancia al ejercicio, calambres muscular,

7. Tracto digestivo Reflujo cido, vmito, diarrea crnica, obstruccin intestinal 8. Pancreas Diabetes Los principales problemas asociados con las enfermedades mitocondriales poca energa, produccin de radicales libres y acidosis lctea pueden dar lugar a una variedad de sntomas en muchos rganos diferentes del cuerpo. Este diagrama describe sntomas comunes de enfermedades mitocondriales, de los cuales la mayora de las personas tienen un subconjunto especfico. Muchos de estos sntomas son muy tratables. Las mitocondrias son responsables de producir la mayor parte de la energa que se necesita para que funcionen nuestras clulas. De hecho, proporcionan una fuente tan importante de energa que una clula humana tpica contiene cientos de ellas. Una enfermedad mitocondrial puede desconectar algunas o todas las mitocondrias, desconectando as sta fuente esencial de energa. Cuando la mitocondrias fallan, se genera cada vez menos energa al interior de la clula. Puede entonces presentarse lesin celular o incluso la muerte de la clula. Si este proceso se repite en todo el cuerpo, los sistemas completos comienzan a fallar y la vida de la persona que lo sufre, est en grave riesgo. Esta enfermedad afecta principalmente a los nios, pero los brotes en adultos se estn volviendo ms y ms comunes. Casi todas nuestras clulas dependen de las mitocondrias para tener una fuente estable de energa, de manera que una enfermedad mitocondrial puede ser un trastorno de mltiples sistemas que afecta ms de un tipo de clula, tejido u rgano. Los sntomas exactos no son los mismos para todos,

porque una persona con una enfermedad mitocondrial puede tener una mezcla nica de mitocondrias sanas y defectuosas, con una distribucin nica en el cuerpo. Debido a que las clulas musculares y nerviosas tienen necesidades especialmente altas de energa, los problemas musculares y neurolgicos tales como debilidad muscular, intolerancia al ejercicio, prdida de control motor, desrdenes gastrointestinales y dificultades para deglutir; complicaciones respiratorias, convulsiones, problemas visuales y auditivos, acidosis lctica, retrasos en el desarrollo y susceptibilidad a contraer infecciones son caractersticas comunes de las enfermedades mitocondriales. Otras complicaciones frecuentes incluyen cataratas, defectos del corazn, diabetes y crecimiento atrofiado. Usualmente, una persona con una enfermedad mitocondrial tiene una o ms de estas condiciones, algunas de las cuales ocurren juntas en forma tan regular que son agrupadas en sndromes. Una enfermedad mitocondrial que ocasiona problemas musculares prominentes se llama una miopata mitocondrial (mio significa msculo y pata significa enfermedad), mientras que una enfermedad mitocondrial que ocasiona problemas prominentes tanto musculares como neurolgicos se llama una encefalomiopata mitocondrial (encfalo se refiere al cerebro). A pesar de sus muchos efectos potenciales, las enfermedades mitocondriales a veces ocasionan muy poca discapacidad. A veces, una persona tiene suficientes mitocondrias sanas para compensar las defectuosas. Adems, debido a que algunos sntomas de las enfermedades mitocondriales (tales como diabetes o arritmia del corazn) son comunes en la poblacin general, existen tratamientos efectivos para esos sntomas (tales como la insulina o las drogas contra la arritmia). Las enfermedades de las mitocondrias parecen ocasionar el mayor dao a las clulas del cerebro, del corazn, del hgado, msculo esquelticas, del rin as como a los sistemas endocrino y respiratorio.

CAUSA DE LAS ENFERMEDADES MITOCONDRIALES

Primeramente, las enfermedades mitocondriales no son contagiosas y no son causadas por nada que una persona hace. Son causadas por mutaciones, o cambios, en los genes los planes de accin de las clulas para producir protenas. Los genes son responsables de construir nuestros cuerpos y son pasados de padres y madres a hijos, junto con cualquier mutacin o defecto que tengan. Esto significa que las enfermedades mitocondriales son heredables, aunque a menudo afectan a miembros de la misma familia en formas diferentes. Los genes involucrados en las enfermedades mitocondriales normalmente producen protenas que trabajan dentro de las mitocondrias. Dentro de cada mitocondria, estas protenas constituyen parte de una lnea de ensamblaje que utiliza molculas de combustible derivadas

de la comida para producir la molcula de energa ATP. Este proceso de manufactura, de alta eficiencia, necesita oxgeno; aparte de las mitocondrias, hay formas menos eficientes de producir ATP sin oxgeno. Las protenas al inicio de la lnea de ensamblaje mitocondrial actan como manejadores de carga, introduciendo las molculas de combustible azcares y grasas dentro de la mitocondria. A continuacin, otras protenas descomponen los azcares y grasas, extrayendo energa en forma de partculas cargadas, llamadas electrones. Las protenas al final de la lnea - organizadas en cinco grupos llamados complejos I, II, III, IV y V -utilizan la energa de esos electrones para producir ATP. Los complejos I al IV transportan los electrones por la lnea y de all se les llama la cadena de transporte de electrones. El complejo V de hecho produce ATP, de donde tambin se le llama sintasa de ATP. Una deficiencia en uno o ms de estos complejos es la causa tpica de las enfermedades mitocondriales. (De hecho, las enfermedades mitocondriales algunas veces reciben su nombre de una deficiencia especfica, tal como deficiencia de complejo I.) Cuando una clula se llena de mitocondrias defectuosas, no solamente se encuentra sin ATP puede adems acumular una cantidad de oxgeno y molculas de combustible sin usar, con resultados potencialmente desastrosos. El exceso de molculas de combustible es utilizado para producir ATP por medios ineficientes, lo que puede generar productos secundarios potencialmente dainos como el cido lctico. (Esto tambin ocurre cuando una clula tiene un suministro inadecuado de oxgeno, lo que puede suceder a las clulas musculares durante el ejercicio vigoroso.) La acumulacin de cido lctico en la sangre -llamada acidosis lctea - est asociada con la fatiga muscular y puede efectivamente daar los msculos y tejidos musculares. Para mientras, el oxgeno sin usar en la clula puede ser convertido en compuestos destructivos llamados especies reactivas de oxgeno (los cuales constituyen el blanco de las as llamadas drogas y vitaminas antioxidantes.) La ATP derivada de las mitocondrias proporciona la fuente principal de energa para la contraccin de las clulas musculares y el disparo de las clulas nerviosas. Por ello, las clulas musculares y las clulas nerviosas son especialmente sensitivas a defectos mitocndricos. Los efectos combinados de la privacin de energa y la acumulacin de toxinas en estas clulas probablemente dan lugar a los sntomas principales de las miopatas mitocondrial y las encefalomiopatas.

CUNDO SOSPECHAR QUE HAY UNA DISFUNCIN MITOCONDRIAL

No hay una caracterstica nica para identificar una enfermedad mitocondrial. Los pacientes presentan varios problemas que pueden surgir desde el nacimiento hasta en la edad adulta madura. Piense en las mitocondrias cuando:

Una enfermedad comn presente caractersticas atpicas que la distingan del

resto. Haya tres o ms rganos involucrados Se presenten recadas recurrentes, o cuando ocurran brotes de infeccin en una enfermedad crnica.

Las enfermedades mitocondriales o citopatas, debern considerarse como posibles en diagnsticos diferenciales, cuando aparezcan estas caractersticas inexplicables, especialmente cuando ocurran en combinacin con: Sntomas

Encefalopata o Convulciones o Retraso en el Desarrollo o Regresin (incluyendo demencia temprana o episodios tardos) o Mioclono o Desrdenes de Movimiento (distonia, disquinesias, corea, etc.) o Migraa Complicada o Infartos Neuropata Defectos en los Conductos Cardiacos o Cardiomiopatas Deficiencias en la Audicin Estatura corta Desrdenes de Msculos Extraoculares o tosis o estrabismo adquirido o oftalmoplegia Diabetes Enfermedad Renal Tubular Prdida de la Visin o retinitis pigmentosa o atrofia ptica Acidosis lctica (puede ser leve)

Problemas Asociados a las Citopatas Mitocondriales SISTEMA DE PROBLEMAS POSIBLES RGANOS Retraso en el desarrollo, retardo mental, demencia, convulsiones, desrdenes neuroCerebro psiquitricos, paralsis cerebral atpica, migraas, infartos Debilidad (que puede ser intermitente), dolor neuroptico, ausencia de reflejos, problemas gastrointestinales (reflujo gastroesofgeo, vaciado gstrico retrasado, Nervios constipacin, pseudo obstruccin), desmayos, ausencia o exceso de sudor relacionados con problemas de regulacin de la temperatura Msculos Debilidad, hipotonia, calambres, dolor muscular Desgaste proximal renal tubular que provoca prdida de protenas, magnesio, Riones fsforo, calcio y otros electrolitos

Corazn Hgado Ojos Odos Pncreas Sistmico

Defectos en los conductos cardiacos (bloqueos del corazn), cardiomiopata Hipoglicemia (niveles de azcar bajos en la sangre), falla del hgado Prdida de visin y ceguera Prdida auditiva y sordera Diabetes y falla pancreattica exocrina (incapacidad para generar encimas digestivas) Incapacidad para subir de peso, corta estatura, fatiga, problemas respiratorios incluyendo sofocamientos intermitentes

QUE LE SUCEDE A UNA PERSONA CON UNA MM? Miopata La miopata mitocondrial infantil, enfermedad fatal y acompaada de lesin muscular y disfuncin renal (las clulas renales y musculares son ricas en mitocondrias), es resultante de la disminucin acentuada, o an de la ausencia completa de las enzimas de la cadena trasportadora de electrones. Esas enfermedades mitocondriales son hereditarias, pero solamente por va materna. Hombres y mujeres pueden presentar las enfermedades hereditarias mitocondriales, pero solamente las mujeres las trasmiten a sus descendientes, porque en la fertilizacin la contribucin del espermatozoide, con relacin a las mitocondrias, es insignificante. Las mitocondrias del vulo fecundado (zigoto) y de las clulas de l originadas son prcticamente todas derivadas de la multiplicacin de las mitocondrias del vulo, y por lo tanto, maternas. Las enfermedades hereditarias mitocondriales presentan una gran variacin en los sntomas de un enfermo a otro, debido a la heteroplasma, es decir, la clulas de los enfermos presentan cantidades variables de DNA mitocondrial normal y DNA mitocondrial mutante. El vulo que lleva mitocondrias maternas mutantes tambin lleva mitocondrias maternas con el DNA normal. Los principales sntomas de la miopata mitocondrial son debilidad y desgaste muscular e intolerancia al ejercicio. Es importante recordar que la severidad de cualquiera de estos sntomas vara grandemente de una persona a otra, aun dentro de la misma familia. La debilidad y el desgaste son usualmente ms prominentes en los msculos que controlan los movimientos de los ojos y los prpados. Dos consecuencias comunes son la parlisis gradual de los movimientos de los ojos, llamada oftalmoplegia externa progresiva (PEO) y la cada de los prpados superiores, llamada optosis. Con frecuencia, las personas compensan la PEO automticamente, moviendo su cabeza para ver en diferentes direcciones y quiz ni siquiera noten algn problema visual. La optosis es potencialmente ms frustrante porque puede perjudicar la visin y adems causar una expresin indiferente, pero puede ser corregida mediante ciruga, o mediante el uso de anteojos que tienen una "muleta de optosis" para levantar los prpados superiores. Las miopatas mitocondriales tambin pueden ocasionar debilidad y desgaste en otros msculos de la cara y el cuello, lo que puede llevar a problemas de pronunciacin y dificultad al comer. En estos casos, pueden ser tiles la terapia del habla o los cambios en la dieta hacia comidas Esta mujer tiene debilidad muscular generalizada debido a una miopata mitocondrial.

ms fciles de comer. Algunas veces las personas con miopatas mitocondriales experimentan prdida de la fuerza muscular en los brazos o las piernas y pueden necesitar aparatos ortopdicos o sillas de ruedas para movilizarse. La intolerancia al ejercicio, tambin llamada fatiga de ejercicio, se refiere a sensaciones extraordinarias de agotamiento como resultado de un esfuerzo fsico. El grado de intolerancia al ejercicio vara grandemente entre individuos. Algunas personas pueden tener problemas solamente con actividades atlticas como correr, mientras que otras pueden experimentar problemas con actividades cotidianas como caminar al buzn del correo o levantar un litro de leche. A veces, la intolerancia al ejercicio est relacionada con calambres dolorosos de los msculos y/o con el dolor producido por una lesin. Los calambres generalmente son contracciones punzantes que pueden aparentar la paralizacin temporal del msculo, mientras que el dolor resultante de una lesin es causado por un proceso de dao muscular agudo llamado rabdomilisis. Los calambres o la rabdomilisis generalmente ocurren cuando alguien con intolerancia al ejercicio "se excede" y pueden suceder durante el exceso de ejercicio, o varias horas ms tarde. Encefalomiopata Una encefalomiopata mitocondriales tpicamente incluye algunos de los sntomas de miopata mencionados arriba, ms uno o ms sntomas neurolgicos. De nuevo, estos sntomas demuestran una gran variedad individual, tanto con relacin a su tipo como a su severidad. El menoscabo auditivo, las jaquecas tipo migraa y las convulsiones son algunos de los sntomas ms comunes de una encefalomiopata mitocondrial. En por lo menos un sndrome, las jaquecas y convulsiones se presentan acompaadas de apopleja (interrupcin del suministro de sangre al cerebro). Afortunadamente, existen buenos tratamientos para algunas de estas condiciones. El menoscabo auditivo puede manejarse utilizando aparatos para sordos y formas alternas de comunicacin. A menudo, las jaquecas pueden aliviarse con medicamentos y las convulsiones pueden prevenirse con drogas utilizadas para la epilepsia (anti-epilpticos). Actualmente existen varias drogas que se estn investigando para el tratamiento de apoplejas. Adems de afectar la musculatura del ojo, una encefalomiopata mitocondrial puede afectar el ojo en s y partes del cerebro involucradas en la visin. (Por ejemplo, las cataratas el engrosamiento de los lentes que enfocan la luz en el ojo son un sntoma comn de encefalomiopata mitocondriales.) Comparados con los problemas musculares, estos efectos tienen mayor tendencia a ocasionar menoscabos serios de la visin. Con frecuencia, la encefalomiopata mitocondriales causa ataxia, o problemas con el balance y la coordinacin. Las personas con ataxia generalmente estn predispuestas a momentos de mareo y cadas, pero pueden evitar parcialmente esos problemas a travs de terapia fsica y ocupacional, as como el uso de ayudas para sostenerse como pasamanos, un caminador o en casos severos una silla de ruedas.

CUESTIONES ESPECIALES
Cuidado Respiratorio

Algunas veces, estas enfermedades pueden ocasionar debilidad significativa en los msculos que mantienen la respiracin. Adems, las encefalomiopatas mitocondriales a veces causan anormalidades cerebrales que alteran el control del cerebro sobre la respiracin.

La miopata mitocondrial puede llevar a problemas Una persona con problemas respiratorios leves puede necesitar respiratorios que requieren ocasionalmente oxgeno suplementario, mientras que alguien con la ayuda de un ventilador. problemas ms severos puede necesitar mantenimiento permanente por medio de un ventilador. Si usted tiene un trastorno mitocndrico, debe estar atento a las seales de insuficiencia respiratoria (falta de aliento o jaquecas matutinas) y ver que su respiracin sea examinada regularmente por un especialista. Cuidado del Corazn Algunas veces, las enfermedades mitocondriales afectan directamente al corazn. En estos casos, la causa usual es una interrupcin en el latido rtmico del corazn, llamada bloqueo de conduccin. Aunque peligrosa, esta condicin es tratable con un marcapasos, el cual estimula el latido normal del corazn. Si usted tiene un trastorno mitocndrico, puede necesitar exmenes regulares por un cardilogo. Otras Cuestiones Potenciales de Salud Algunas personas con enfermedades mitocondricales sufren de serios problemas de los riones, problemas gastrointestinales y/o diabetes. Algunos de estos problemas son efectos directos de defectos mitocndricos en los riones, el sistema digestivo o el pncreas (en la diabetes), mientras que otros son efectos indirectos de defectos mitocndricos en otros tejidos. Por ejemplo, la rabdomilisis puede llevar a problemas renales al dejar escapar a travs rupturas en clulas musculares una protena llamada mioglobina, que se acumula en la corriente sangunea. Esta condicin, llamada mioglobinuria, sobrecarga la habilidad de los riones de filtrar los desechos de la sangre hacia la orina y puede causar dao a los riones.

Cuestiones Especiales en los Nios Visin: Aunque la PEO y la optosis tpicamente causan una prdida leve de la visin en los adultos, pueden ser potencialmente mucho ms dainas en nios con miopatas mitocondriales. Debido a que el desarrollo del cerebro es sensitivo a las experiencias de la niez, el sufrir PEO u optosis durante la niez puede a veces causar dao permanente en el sistema visual del cerebro. Por esta razn, es importante que un especialista examine la visin de nios con seales de PEO u optosis. Retrasos en el desarrollo: Debido a debilidad muscular, anormalidades cerebrales o una combinacin de ambas, los nios con enfermedades mitocondriales pueden tener dificultad para desarrollar El sistema visual del cerebro puede ser afectado en nios con miopata mitocondrial.

ciertas habilidades. Por ejemplo, pueden tomarse un tiempo excepcionalmente largo para alcanzar las marcas motoras (tales como sentarse, gatear y caminar). A medida que crecen, pueden no ser capaces de movilizarse como otros nios de su edad y pueden tener problemas de pronunciacin y/o discapacidades de aprendizaje. Si su hijo est siendo severamente afectado por estos problemas, puede beneficiarse de terapia fsica, terapia del habla y posiblemente un programa de educacin individualizada (IEP, siglas en ingls) en la escuela.

COMO

Algunos nios con miopatas mitocondriales experimentan Al mismo tiempo que las miopatas mitocondriales y las retrasos en el desarrollo. encefalomiopatas son relativamente raras, algunas de sus manifestaciones potenciales son comunes entre la poblacin general. En consecuencia, esas complicaciones (incluyendo problemas del corazn, apoplejas, convulsiones, migraas, sordera y diabetes) tienen tratamientos altamente efectivos (incluyendo medicamentos, modificaciones en la dieta y cambios en el estilo de vida.) Es afortunado que, a menudo, estos sntomas tratables constituyen las complicaciones que ms ponen en peligro la vida en las enfermedades mitocondriales. Teniendo eso en mente, las personas con enfermedades mitocondriales pueden lograr mucho en cuanto a su propio cuidado, controlando su salud y programando exmenes mdicos regulares. En vez de enfocarse en complicaciones especficas de las enfermedades mitocondriales, algunos tratamientos nuevos y menos comprobados tratan de reparar o pasar por alto las mitocondrias defectuosas. Estos tratamientos consisten en suplementos dietticos basados en tres sustancias naturales que se presentan en la produccin de ATP en nuestras clulas. Una de estas sustancias, la creatina, acta normalmente como una reserva de ATP al formar un compuesto llamado fosfato de creatina. Cuando la demanda de ATP de una clula excede la cantidad que sus mitocondrias pueden producir, la creatina puede liberar fosfato (la "P" en ATP) para mejorar rpidamente el suministro de ATP. De hecho, tpicamente el fosfato de creatina (tambin llamado fosfocreatina) proporciona la inyeccin inicial de ATP requerida para una actividad muscular vigorosa. Otra sustancia, la carnitina, generalmente mejora la eficiencia de la produccin de ATP al ayudar a importar ciertas molculas de combustible dentro de las mitocondrias y al remover algunos de los productos secundarios txicos de la produccin de ATP. La carnitina puede obtenerse sin receta como un suplemento llamado L-carnitina. Finalmente, la coenzima Q10, o coQ10, es un componente de la cadena de transporte de electrones que utiliza oxgeno para producir ATP. Algunas enfermedades mitocondriales son causadas por una deficiencia de coQ10 y existe buena evidencia que el suplemento de coQ10 es beneficioso en estos casos. Algunos mdicos piensan que el suplementar coQ10 tambin puede aliviar otras enfermedades mitocondriales.

SE TRATAN LAS MITOCONDRICAS?

ENFERMEDADES

La creatina, la L-carnitina y los suplementos coQ10 son a menudo combinados en un "cctel" para el tratamiento de enfermedades mitocondriales. Aunque hay poca evidencia cientfica que demuestre que este tratamiento funciona, muchas personas con enfermedades mitocondriales han reportado beneficios modestos. A lo menos, no parece haber ningn efecto secundario daino de los tres suplementos cuando se toman con moderacin, pero usted debiera consultar con su doctor o el director de la clnica MDA antes de tomar cualquiera de ellos.

Enfermedades mitocondriales
Hay gran nmero de enfermedades mitocondriales, las cuales mayormente se acompaan se sndromes los cuales son heredados, ya sea en un patrn materno ( ) o en un as llamado patrn Mendeliano ( ), y/o son espordicos ( ), es decir que ocurren sin ningn antecedente hereditario.

Enfermedad de Alpers
Nombre completo: Poliodistrofia Infantil Progresiva Sntomas: convulsiones, demencia, espaticidad, ceguera, disfuncin del hgado y degeneracin cerebral. Deficiencia del Complejo I Nombre completo: Deficiencia NADH dehidrogenasa (NADH-Co! Reductasa) Sntomas: Tres formas principales: 1. Desorden fatal infantil multisistmico, caracterizado por un retraso en el desarrollo, debilidad muscular, enfermedad cardiaca, acidosis lctica congnita y paro respiratorio. 2. Miopata que inicia en la infancia o en la vida adulta, manifestndose como intolerancia al ejercicio o debilidad. Es comn la elevacin del cido lctico. 3. Encefalomiopata mitocondrial (incluyendo MELAS), que puede comenzar en la infancia o en la edad adulta y que consiste en combinaciones variables de sntomas y signos, incluyendo oftalmoplegia, convulsiones, demencia, ataxia, prdida auditiva, retinopata pigmentosa, neuropata sensorial y movimientos incontrolables. Puede provocar el Sndrome de Leigh. Deficiencia del Complejo III Nombre completo: Deficiencia ubiquinona-citocroma c xidoreductasa Sntomas: Cuatro formas principales: 1. Encefalomiopata mortal infantil, acidosis lctica congnita, hipotonia, postura distrfica, convulsiones y coma. Es comn la fibrosis roja. 2. Encefalomiopata de brotes posteriores (desde la infancia hasta la edad adulta): varias combinaciones de debilidad, estatura corta, ataxia, demencia, prdida auditiva, neuropata sensorial, retinopata pigmentosa y sntomas piramidales. Es comn la fibrosis roja. Posibilidad de acidosis lctica.

3. Miopata, con intolerancia al ejercicio que deviene en debilidad continua. Es comn la fibrosis roja. Posibilidad de acidosis lctica. 4. Cardiomiopata histiocitoide infantil. Deficiencia del Complejo IV / Deficiencia COX Nombre completo: La deficiencia citocroma c xidoreductasa es ocasionada por un defecto en el Complejo IV de la cadena respiratoria. Sntomas: Dos formas principales: 1. Encefalomiopata: normal durante los primeros 6 a 12 meses de vida; despus presenta regresin en el desarrollo, ataxia, acidosis lctica, atrofia ptica, oftalmoplegia, nistagmus, distonia, signos piramidales y problemas respiratorios. Frecuentes convulsiones Puede provocar el Sndrome de Leigh. 2. Miopata: dos variantes principales: a. Miopata infantil mortal: puede empezar pronto despus del nacimiento acompaada de hipotonia, debilidad, acidosis lctica, fibrosis, paro respiratorio y problemas de rin. b. Miopata infantil benigna: puede empezar pronto despus del nacimiento acompaada de hipotonia, debilidad, acidosis lctica, fibrosis, falla respiratoria, pero (si el nio sobrevive) le sigue un mejoramiento espontneo.

CPEO
Nombre completo: Sndrome de Oftalmoplegia Externa Crnica Progresiva. Sntomas: Similares a los del KSS ms: miopata visual, retinitis pigmentosa, disfuncin del sistema nervioso central.

LCHAD
Nombre completo: Dehidrogenasa de Cadena Larga Hidoxiacil-CoA. Sntomas: Encefalopata, disfuncin del hgado, cardiomiopata y miopata. Tambin retinopata pigmentaria y neuropata perifrica.

LHON
Nombre completo: Neuropata ptica Hereditaria de Leber La neuropata ptica hereditaria de Leber (LHON) fue la primera enfermedad humana heredada por va materna que se asoci con una mutacin en el mtDNA . Est caracterizada por una ceguera bilateral aguda o subaguda , originada por atrofia del nervio ptico, que aparece en la segunda o tercera dcada de la vida. Normalmente, los pacientes solo tienen afectada la visin, pero en algunos casos puede ir acompaada de anormalidades en la conduccin cardiaca, neuropata perifrica y ataxia cerebelar.

Son muchas las mutaciones puntuales que se han asociado con esta enfermedad, pero solamente 3 de ellas, las localizadas en los nucletidos 11.778, 3.460 y 14.484, estn consideradas como primarias o patognicas, siendo la primera de ellas la ms frecuente. El resto de las mutaciones se consideran como secundarias/intermedias y se desconoce su relacin directa con la enfermedad. Suelen acompaar a las mutaciones primarias y estn siempre presentes en forma homoplsmica. Todas estas mutaciones estn localizadas en genes estructurales. La mayor predominancia de la enfermedad en hombres sugiere que puede existir alguna influencia de un gen nuclear situado en el cromosoma X y, de hecho, en familias finlandesas se ha descrito un ligamiento con el locus DXS7 aunque no se ha confirmado en familias de otro origen. Sndrome de Leigh: encefalomiopata necrosante subaguda heredado maternalmente) Inicio: infancia El sndrome de Leigh es una enfermedad muy heterognea con trastornos degenerativos multisistmicos que aparece en el primer ao de vida. Es una enfermedad muy devastadora que se caracteriza por disfunciones del tallo cerebral y de los ganglios basales, desmielinizacin, regresin psicomotora, retraso en el desarrollo, convulsiones, ataxia, neuropata perifrica. La presencia de lesiones necrticas cerebrales focales en el tlamo, tallo cerebral y ncleo dentado confirman el diagnstico. Est producida por la mutacin T8993G, la misma que la descrita anteriormente en el sndrome de NARP, pero con un porcentaje de la mutacin por encima del 90%. Formas menos severas de esta enfermedad se han asociado con un cambio en la misma posicin del mtDNA. Asimismo, se ha descrito por primera vez una mutacin en el gen nuclear de la subunidad flavoproteinica de la succinato deshidrogenasa del complejo II que causa un defecto en la cadena respiratoria mitocondrial. Esta mutacin produce un cambio C en el nucletido 1684 (Arg T Trp en el codon 554). Este sndrome puede estar causado tambin por mutaciones en otros genes nucleares que codifican subunidades de la piruvato deshidrogenasa. MDS: sndrome de agotamiento del ADN mitocndrico Inicio: infancia Caractersticas: Este trastorno tpicamente causa debilidad muscular y/o fallo heptico y, ms raramente, anormalidades cerebrales. La "flojedad", las dificultades de alimentacin y los retrasos en el desarrollo son sntomas comunes; la PEO y las convulsiones son menos comunes. MELAS: encefalomiopata mitocondrial, acidosis lctea y episodios semejantes a la apopleja Inicio: niez a edad adulta temprana Este sndrome se ha asociado en el 90% de los casos con una mutacin (AG) en la posicin 3.243 del genoma mitocondrial, localizada dentro de la secuencia del tRNALeu(UUR). MELAS est caracterizado fundamentalmente por accidentes cerebro-vasculares que provocan una disfuncin cerebral subaguda y cambios en la estructura cerebral, acidosis lctica y/o presencia de fibras rojorasgadas. Estos caracteres pueden ir acompaados tambin de encefalomiopata con convulsiones generalizadas, dolor de cabeza, sordera y demencia. Esta enfermedad se han relacionado tambin con otras mutaciones localizadas en el tRNALeu(UUR) que parece ser muy propenso a sufrir (MILS = sndrome de Leigh

mutaciones patognicas (Tabla1). La mutacin principal, en la posicin 3.243, se ha relacionado tambin con otras enfermedades muy distintas como oftalmoplegia progresiva externa, cardiomiopatas e incluso con diabetes mellitus y sordera, por lo que la relacin genotipo-fenotipo no es muy fija. MERRF: epilepsia mioclnica con fibras rojas desiguales Inicio: tarde en la niez a adolescencia MERRF es un sndrome de herencia materna caracterizado por epilepsia mioclnica, debilidad muscular, ataxia, convulsiones generalizadas y miopata mitocondrial con presencia de fibras rojorasgadas. Otros sntomas menos comunes son demencia, sordera, baja estatura, neuropata, atrofia ptica, fallo respiratorio y cardiomiopata. Puede aparecer tanto en la infancia como en edad adulta y es de curso progresivo. El 80-90% de los casos de MERRF estn asociados con la presencia de una mutacin AG en la posicin 8.344 del gen del tRNALys, pero en algunos casos se han encontrado tambin otras mutaciones en el mismo tRNA. Recientemente, se ha demostrado utilizando hbridos transmitocondriales (clulas r0 repobladas con mitocondrias con la mutacin 8.344) que la mutacin produce una disminucin de la sntesis de protenas mitocondriales originada por una deficiencia en la aminoacilacin del tRNALys. MNGIE: encefalomiopata neurogastrointestinal mitocondrial Inicio: usualmente antes de los 20 aos de edad Caractersticas: Este trastorno causa PEO, optosis, debilidad en las extremidades y problemas gastrointestinales (digestivos) incluyendo diarrea crnica y dolores abdominales. Otro sntoma comn es la neuropata perifrica (una disfuncin de los nervios que puede llevar a reduccin sensorial y debilidad muscular).

NARP: neuropata, ataxia y retinitis pigmentosa Inicio: infancia a edad adulta Este sndrome, caracterizado por una debilidad muscular neurognica, retraso en el desarrollo, neuropata sensorial, convulsiones, ataxia, demencia y retinopata pigmentaria y se ha asociado a un cambio T aG en el nucletido 8.993 de la subunidad 6 de la ATPasa. La mutacin se encuentra en forma heteroplsmica y el porcentaje de la mutacin se correlaciona con la severidad de la enfermedad. COMO SE DIAGNOSTICAN LAS MMs? Ninguno de los sntomas distintivos de las enfermedades mitocondriales debilidad muscular, intolerancia al ejercicio, deterioro del odo, ataxia, convulsiones, discapacidades de aprendizaje, cataratas, defectos del corazn, diabetes y crecimiento atrofiado son exclusivos de las enfermedades mitocndriales. Sin embargo, una combinacin de tres o ms de estos sntomas en una persona constituye una fuerte indicacin de enfermedad mitocndrial, especialmente cuando los sntomas afectan ms de un sistema de rganos.

Para evaluar la dimensin de estos sntomas, el mdico a menudo comienza por recabar la historia personal del paciente y despus procede a efectuar exmenes fsicos y neurolgicos.

PRUEBAS DE DIAGNOSTICO EN ENFERMEDADES MITOCONDRICAS Tipo Historia Prueba Qu demuestra

Examen clnico o Algunas veces indica un patrn historia oral de los famil miembros de la hereditario al mostrar "seales suaves" en familiares no iar familia afectados. Estas incluyen sordera, baja estatura, jaquecas tipo migraa y PEO. 1. 1. Detecta la proliferacin anormal de mitocondrias y deficiencias en citocromo C oxidasa (COX, que es el complejo IV en la cadena de transporte de 2. Inmunohistoqumica electrones) musc ular 3. Bioqumica 2. Detecta la presencia o ausencia de protenas especficas. Puede descartar otras enfermedades o confirmar la prdida de protenas de la cadena de transporte de electrones. Histoqumica

Biopsia

4. Microscopa de 3. Mide la actividad de enzimas especficas. Una prueba especial electrones llamada polarografa mide el consumo de oxgeno en las mitocondrias. 4. Puede confirmar apariencia anormal de las mitocondrias. No se utiliza mucho hoy en da. Prueba 1. Niveles de lactato de y piruvato enzi mas en la 2. Creatina quinasa sangr de suero e 1. Si son altos, pueden indicar deficiencias en la cadena de transporte de electrones; niveles anormales de ambos pueden ayudar a identificar la parte de la cadena que est bloqueada. 2. Puede estar ligeramente alta en

enfermedades mitocndricas, pero usualmente es alta nicamente en casos de agotamiento de ADN mitocndrico. 1. Mutaciones 1. Utiliza muestras de sangre o conocidas msculo para buscar mutaciones conocidas, tratando de encontrar las mutaciones comunes primero. 2. Mutaciones raras o desconocidas 2. Puede buscar tambin mutaciones raras o desconocidas, pero puede necesitar muestras de familiares; esto es ms costoso y requiere ms tiempo.

Prueba gentica

El examen fsico tpicamente incluye pruebas de fuerza y resistencia, tales como una prueba de ejercicio, la cual puede involucrar actividades como hacer un puo repetidamente, o subir y bajar un tramo corto de escalera. El examen neurolgico puede incluir pruebas de reflejos, visin, habla y habilidades bsicas de cognicin (pensar). Dependiendo de la informacin obtenida durante la historia personal y los exmenes, el mdico puede proceder a efectuar pruebas ms especializadas que pueden detectar anormalidades en los msculos, el cerebro y otros rganos. Adems de la biopsia muscular, pueden utilizarse tcnicas no invasivas para examinar el msculo sin tomar una muestra del tejido. Por ejemplo, una tcnica llamada espectroscopa de resonancia magntica de fsforo muscular (MRS) puede medir los niveles de fosfocreatina y ATP (que a menudo se agotan en msculos afectados por enfermedades mitocndricas). Adems, la exploracin TC o las imgenes de resonancia magntica (MRI) son herramientas para visualizar la estructura general de los msculos. Las exploraciones TC y las MRI pueden tambin usarse para inspeccionar visualmente el cerebro en busca de seales de dao y electrodos superficiales colocados en el cuero cabelludo pueden ser utilizados para producir un rcord de la actividad cerebral llamado electroencefalograma (EEG). Una prueba de sangre puede ser ordenada para que el laboratorio pueda buscar un aumento de lactato o molculas de combustible sin usar, en la sangre o en el lquido cefalorraqudeo (liquido que baa el cerebro y la mdula espinal). Pueden usarse tcnicas similares para examinar las funciones de otros rganos y tejidos del cuerpo. Por ejemplo, un electrocardiograma (EKG) puede monitorear la actividad del corazn y una prueba de sangre puede detectar seales de disfuncin renal. Finalmente, una prueba gentica puede determinar si una persona tiene una mutacin gentica que causa enfermedades mitocondriales. Idealmente, la prueba se hace utilizando material gentico extrado de la sangre y de una biopsia muscular. Es importante saber que, aunque un resultado

positivo de la prueba puede confirmar el diagnstico, un resultado negativo no es necesariamente significativo. ES HEREDITARIO? Con frecuencia, puede resultar difcil seguir la pista de las enfermedades mitocondriales a travs de un rbol genealgico. Pero como son causadas por genes defectuosos, las enfermedades mitocondriales s son hereditarias. Para entender cmo se transmiten las enfermedades mitocondriales por herencia, es importante saber que hay dos tipos de genes esenciales para las mitocondrias. El primer tipo se alberga dentro del ncleo la parte de nuestras clulas que contiene la mayor parte de nuestro material gentico o ADN. El segundo tipo reside exclusivamente dentro del ADN contenido en el interior de las mitocondrias mismas. Las mutaciones, ya sea en el ADN nuclear (nADN) o en el ADN mitocndrico (mtADN), pueden causar enfermedades mitocondriales. La mayor parte del nADN (juntamente con las mutaciones que tenga) es heredado en un patrn Mendeliano, significando a grandes rasgos que una copia de cada gene viene de cada progenitor. Adems, la mayora de las enfermedades mitocondriales causadas por mutaciones del nADN (incluyendo el sndrome de Leigh, la MNGIE y aun la MDS) son recesivos autosomales, queriendo decir que se necesitan mutaciones en ambas copias de un gene para causar la enfermedad. A diferencia del nADN, el mtADN pasa nicamente de la madre al hijo. Esto es as porque durante la concepcin, cuando la esperma se fusiona con el vulo, las mitocondrias de la esperma - y su mtADN - son destruidas. Por lo tanto, las enfermedades mitocondriales causadas por mtADN son nicas porque son heredadas en un patrn maternal (ver la ilustracin). Otra caracterstica nica de las enfermedades de mtADN surge del hecho que una clula humana tpica incluyendo la clula del vulo contiene solamente un ncleo, pero cientos de mitocondrias. El resultado es que una sola clula puede contener tanto mitocondrias normales como mitocondrias mutantes y el equilibrio entre las dos determinar la salud de la clula. Esto ayuda a explicar por qu los sntomas de las enfermedades mitocondriales pueden variar tanto de persona a persona, aun dentro de la misma familia.

LA BUSQUEDA DE TRATAMIENTOS Y CURAS DE LA MDA

Con el apoyo de la MDA, los cientficos continan logrando progresos significativos en su bsqueda del entendimiento completo y el tratamiento de las enfermedades mitocondriales. En un esfuerzo continuado, los cientficos financiados por la MDA han identificado muchos de los defectos genticos que causan las enfermedades mitocondriales. Han utilizado el conocimiento de esos defectos genticos para crear modelos animales de enfermedades mitocondriales, los que pueden ser utilizados para investigar tratamientos potenciales. Tambin han diseado pruebas genticas que permiten el diagnstico preciso de defectos mitocndricos y proporcionan informacin valiosa para la planificacin familiar. Tal vez ms importante aun, el conocimiento de los defectos que causan las enfermedades mitocondriales abre la posibilidad de algn da reparar esos defectos por medio de terapia gentica. Mientras algunos de los cientficos de la MDA persiguen la terapia gentica para enfermedades mitocondriales, otros estn conduciendo pruebas clnicas para evaluar los beneficios de los suplementos dietticos (tales como la creatina, carnitina y coQ10) y de ciertas drogas (tales como el dicloroacetato, que puede reducir la acidosis lctea). Para personas que tienen enfermedades causadas por mutaciones del mtADN, los cientficos financiados por la MDA estn trabajando en varias estrategias novedosas de tratamiento. Por ejemplo, el mtADN no es fcilmente accesible a la terapia gentica convencional (porque est atrapado dentro de las mitocondrias), as que los cientficos estn desarrollando nuevas tcnicas de terapia gentica para superar este obstculo. Adems, algunos cientficos estn investigando tratamientos con drogas y ciertos tipos de ejercicios para incrementar los niveles celulares del mtADN normal con relacin al mtADN mutante. LA MDA ESTA AQUI PARA AYUDARLE La Asociacin de la Distrofia Muscular ofrece una amplia gama de servicios para ayudarle a usted y a su familia a tratar con una miopata mitocondrial. Ya sea que usted sea un adulto que acaba de recibir el diagnstico de una miopata mitocondrial, o el padre o madre de un nio o nia con dicha enfermedad, el personal de su oficina local de la MDA est all para ayudarle en muchas formas. Los servicios de la Asociacin incluyen lo siguiente: Una red nacional de 230 clnicas afiliadas a hospitales, con especialistas preeminentes en enfermedades neuromusculares Campamentos de verano de una semana de duracin, para nios con enfermedades neuromusculares Grupos de apoyo. Ayuda con la compra y reparacin de sillas de ruedas y ortosis. Evaluaciones de terapia fsica, ocupacional y respiratoria. Vacunas contra la gripa para proteger el sistema respiratorio. Prstamo de equipo. El programa pblico de enseanza en salud de la MDA le ayuda a mantenerse al tanto respecto a novedades en la investigacin, hallazgos mdicos e informacin de discapacidad a travs de oradores educativos, seminarios, videos, boletines informativos y mucho ms. Asegrese de pedirle

a su oficina local algunos de los folletos ms recientes de la MDA, incluyendo "Servicios para la Persona, la Familia y la Comunidad". Muchos folletos de la MDA estn disponibles en espaol. Todos los que estn inscritos con la MDA reciben tambin Quest, la revista nacional de la MDA. La pgina electrnica a nivel mundial de la MDA en www.mdaenespanol.org contiene ms de 1.500 pginas de informacin valiosa, incluyendo los textos de artculos de nmeros pasados de Quest y otras publicaciones de la MDA. Un aspecto, "Pregntele a los Expertos", le permite plantear preguntas especficas acerca de una enfermedad neuromuscular y recibir respuestas de los mdicos o cientficos expertos. Enfermedades causadas por mutaciones en el DNA mitocondrial Las primeras mutaciones en el mtDNA asociadas a enfermedades humanas se describieron en 1988 consistentes en deleciones, mutaciones puntuales en los genes codificantes de protenas y en tRNAs. Un poco ms tarde, en 1991, se describieron los primeros casos de deplecin. En 1990, y anticipando la importancia futura de este campo en la medicina, creamos en nuestro laboratorio la primera unidad en Espaa de diagnstico gentico-molecular de enfermedades mitocondriales en la Universidad de Zaragoza. Desde entonces, este servicio ha crecido mucho y, actualmente, se reciben muestras de diversos hospitales que abarcan una amplia zona geogrfica de Espaa, de Italia y de diversos pases de Amrica latina. En l se realiza el diagnstico de rutina en patologa mitocondrial analizando las mutaciones ms comunes asociadas a cada una de las enfermedades. Cuando los resultados son negativos y se tienen todos los indicios de que se trata de una mitocondriopata, se lleva acabo un estudio de investigacin con el fin de poder encontrar mutaciones nuevas que originen la enfermedad. El hallazgo de una mutacin nueva implica que hay que determinar si realmente es patolgica. Como el ndice de mutacin del mtDNA es muy alto, es bastante posible encontrar un gran nmero de mutaciones puntuales. Sin embargo, la mayora son mutaciones silenciosas, polimorfismos, que no van a causar ningn tipo de defecto. Para que una mutacin pueda ser considerada como patognica requiere que cumpla los siguientes criterios: 1) estar presente solamente en pacientes y nunca en individuos controles; 2) afectar a poblaciones tnicas diferentes; 3) encontrarse en lneas mitocondriales diferentes; 4) existencia de una correlacin entre el porcentaje de la mutacin y el fenotipo; 5) segregar junto con el fenotipo; 6) afectar a una base muy conservada evolutivamente; 7) afectar a dominios funcionales importantes; 8) presencia de un porcentaje mayor de la mutacin en fibras cox negativas; y 9) trasmisin del defecto molecular a lneas celulares transmitocondriales. Sin embargo, no siempre se cumplen todos estos criterios y puede tratarse de mutaciones patolgicas. En muchos casos, para poder demostrar que la mutacin tiene un efecto fenotpico, se procede a la utilizacin de modelos celulares con hbridos transmitocondriales. Estas lneas celulares se construyen mediante fusin de clulas rho cero, que carecen de mtDNA, con plaquetas del paciente que portan mitocondrias con el mtDNA mutado. Despus de una seleccin de las lneas de inters, se realizan estudios de medida de respiracin, de actividades de los complejos del sistema de fosforilacin oxidativa, de crecimiento, etc., para ver si la mutacin ha originado una deficiencia de actividad. Una mutacin en un gen codificante de protenas suele crear lneas celulares con defectos en el complejo del cual forma parte el polipptido mutado. En el caso de mutaciones en tRNAs, es la sntesis de protenas mitocondriales lo que se ve afectada, con una disminucin de la sntesis total de las mismas y la consiguiente disminucin de la actividad de varios complejos respiratorios. Esta disminucin de la sntesis de protenas por mutaciones en

tRNAs puede estar originada por muchas causas, entre ellas se ha descrito una disminucin de la aminoacilacin de los tRNAs, es decir, de unin del aminocido al extremo 3 del tRNA Las mutaciones en los rRNAs tambin afectaran a la sntesis de protenas, pero esto est menos estudiado. A pesar del gran avance conseguido en estos 17 aos en el diagnstico de las mitocondriopatas, muy poco se conoce todava sobre los mecanismos patogenticos y menos aun sobre las terapias a emplear. En estos aos, nuestro servicio ha analizado ms de 1.700 muestras, entre pacientes y familiares relacionados por va materna, y se ha encontrado que solamente alrededor de un 16% de los mismos presentan alguna de las mutaciones conocidas. Se trabaja intensamente en la bsqueda de nuevas mutaciones asociadas a enfermedades o nuevas enfermedades que puedan estar causadas por mutaciones en el mtDNA. As, en nuestro laboratorio se ha encontrado numerosas deleciones nuevas asociadas a los clsicos sndromes de CPEO, Kearns-Sayre y Pearson, y mutaciones puntuales nuevas como la T14487C asociada a necrosis bilateral del estriado y distona, o mutaciones en el tRNALys asociadas a lipomatosis mltiple simtrica (37-39) o a otras enfermedades que cursan con esta sintomatologa como una ms de las caractersticas de las mismas. Con todos estos resultados se han presentado cuatro Tesis Doctorales sobre patologa mitocondrial y se han publicado ms de 50 artculos en revistas cientficas. El apogeo de las enfermedades mitocondriales ha llevado a otros grupos en Espaa a establecer otros centros de diagnstico, fundamentalmente en Madrid y Barcelona, si bien nuestro servicio es el que ms muestras recibe. Desde hace tres aos, estos y otros centros se han reunido en una red temtica de investigacin cooperativa sobre enfermedades del sistema OXPHOS (Red Mitoespaa) con el fin de aunar esfuerzos, unificar protocolos de diagnstico clnico, histoqumica, bioqumico y gentico, y de, si es posible, enfrentar una terapia de las mismas. Adems, desde finales de los aos 90, se viene observando que la variacin gentica poblacional en el mtDNA es un factor importante en el desarrollo de las enfermedades multifactoriales asociadas a la edad y en la longevidad y recientemente se estn acumulando evidencias acerca del papel de las mutaciones en el mtDNA y el desarrollo del cncer. Nuestro grupo tambin ha sido pionero en el desarrollo de este campo. As a mediados de los 90, se comenz a estudiar la influencia de estos polimorfismos mitocondriales en distintos fenotipos y se pudo detectar que el haplogrupo T est sobre representado en la astenozoospermia moderada. Nuestro trabajo de ms de 15 aos en mitocondriopatas y fenotipos multifactoriales nos esta permitiendo plantearnos retos ms ambiciosos como la farmacogenmica mitocondrial y el sistema OXPHOS como diana farmacolgica en las enfermedades multifactoriales y el cncer. Los sntomas de estas enfermedades son muy variados y en muchos casos estn solapados entre diversos sndromes. Adems, muy frecuentemente afectan a nios en los que la determinacin de la patologa que padecen es, muy a menudo, muy complicada porque no han desarrollado todava la mayora de los sntomas que hacen que se puedan encuadrar en un tipo de sndrome determinado. Por ello, es bastante habitual que estas enfermedades se clasifiquen en base a las caractersticas gentico-moleculares de las mutaciones ms que con respecto a los sntomas cnicos, a pesar de que, en algunos casos, como ya se ha mencionado, una misma mutacin pueda dar lugar a fenotipos clnicos diferentes. De este modo, las enfermedades producidas por daos en el mtDNA se pueden dividir en tres grandes grupos segn estn asociadas a: 1) mutaciones puntuales tanto en genes codificantes de protenas como en tRNAs y rRNAs; 2) reorganizaciones (deleciones y duplicaciones); y 3) deplecin de mtDNA (disminucin de nmero de copias).

Clasificacin esquemtica de las enfermedades mitocondriales La disminucin del nmero de copias del mtDNA se ha encontrado en los sndromes de deplecin de los que se han descrito fundamentalmente dos tipos, la forma hepatocerebral y la mioptica. En ambos casos, como se ha citado en un apartado anterior, parece que esta disminucin del nmero de copias del mtDNA se debe a mutaciones recesivas en genes nucleares que afectan al metabolismo de nucletidos. Sin embargo, tambin se han encontrado en el sndrome de Alpers causadas por mutaciones en la DNA polimerasa gamma que replica el mtDNA. Las enfermedades mitocondriales, tomadas en su conjunto, son uno de los tipos de enfermedades genticas mas frecuentes. En algn estudio realizado, se ha encontrado que uno de cada 8.000 habitantes padece o es portador de una mutacin en el mtDNA. Este nmero es, posiblemente, muy bajo debido a que estas enfermedades solo se pueden diagnosticar bien en centros especializados y, por tanto, pasan desapercibidas en muchos centros sanitarios. Adems, como se ha mencionado en apartados anteriores, las enfermedades mitocondriales, pueden estar causadas tambin por mutaciones en genes nucleares, ya que una gran parte de las protenas de este sistema estn codificadas en el genoma nuclear. As, mutaciones en genes nucleares codificantes de protenas mitocondriales, de protenas que participan en el ensamblaje de los complejos respiratorios, de las protenas implicadas en el importe de las mismas a la mitocondria, etc., pueden dar lugar tambin a enfermedades mitocondriales y todas estas no estn contabilizadas en las cifras de prevalencia antes mencionadas. Por todo ello, se deduce que estas enfermedades genticas pueden contarse entre las ms frecuentes de las enfermedades genticas metablicas. De todas las maneras, hay que mencionar que, cada una de ellas, tomadas por separado, presenta una prevalencia baja. Enfermedades con mutaciones puntuales Debido al alto ndice de mutacin del mtDNA es posible encontrar un gran nmero de mutaciones puntuales. Sin embargo, la mayor parte de stas van a ser mutaciones silenciosas que no van a causar ningn tipo de defecto. Para que una mutacin pueda ser considerada como patognica se requiere que cumpla los criterios: que se encuentre en familias afectadas de poblaciones tnicas

diferentes, que exista una correlacin entre el porcentaje de la mutacin y el fenotipo, que segregue junto con el fenotipo y que afecte a una base muy conservada evolutivamente. Se han encontrado ms de 50 mutaciones puntuales que se localizan en los tres tipos de genes codificados en el mtDNA. Algunas de ellas descritas anteriormente.

Mapa de Morbilidad del DNA Mitocondrial humano. Aparecen sealados los genes en los que existen mutaciones puntuales responsables de enfermedades mitocondriales. Otras enfermedades asociadas a mutaciones puntuales en el mtDNA. Adems de las mutaciones puntuales descritas anteriormente, se han encontrado un buen nmero de mutaciones puntuales asociadas a otros muchos sndromes. Entre ellos podemos citar la diabetes de herencia materna con sordera que afecta a 15% de la poblacin diabtica, las cardiomiopatas de herencia materna; LHON y distona; miopatas de herencia materna unidas a mutaciones en tRNALeu, tRNAPro, tRNAAsn, tRNATyr; la sordera inducida por aminoglicsidos y otros tipos de sordera sindrmica o no-sindrmica de herencia materna; anemia sideroblstica; deficiencia fatal de la cadena respiratoria infantil, etc. Recientemente, se ha descrito una familia espaola con el sndrome de lipomatosis simtrica mltiple asociada a la mutacin 8.344 del gen del tRNALys que no presenta ninguna de las caractersticas tpicas de MERRF Enfermedades asociadas a reorganizaciones del mtDNA Algunos pacientes con enfermedades que afectan al sistema OXPHOS presentan mutaciones originadas por reorganizaciones del mtDNA. Estas pueden deberse tanto a deleciones como, menos frecuentemente, a inserciones (duplicaciones). Este tipo de mutaciones, al contrario que las mutaciones puntuales, suelen ser espontneas aunque hay descrito algn caso de herencia materna. Hasta el momento se han descrito varios cientos de reorganizaciones del mtDNA. Son heteroplsmicas y pueden aumentar la gravedad con la edad. Se han descrito una amplia variedad de sndromes clnicos, algunos de los cuales se describen a continuacin.

Sndromes de oftalmoplegia externa progresiva (PEO). La oftalmoplegia externa progresiva crnica est caracterizada por oftalmoplegia, ptosis bilateral de los prpados y miopata. Adems, suele ir acompaada de intolerancia al ejercicio y debilidad muscular. En el msculo se encuentran fibras rojo-rasgadas y COX negativas. En general, es una enfermedad benigna que suele aparecer en la adolescencia o en adultos jvenes. Aparece de forma espordica sin historia familiar. Se ha asociado fundamentalmente a deleciones grandes y nicas en mtDNA (ver mas adelante). Asimismo, se han encontrado otras formas de PEO con mutaciones puntuales de herencia materna (Tabla 1) o con deleciones mltiples de herencia autosmica dominante. Sndrome de Kearns-Sayre. El sndrome de Kearns-Sayre es una enfermedad multisistmica progresiva que aparece antes de los 20 aos de edad y que est caracterizada clnicamente por PEO y retinopata pigmentaria. Adems suele ir acompaada de otros sntomas como ataxia, miopata mitocondrial, bloqueo de la conduccin cardiaca, elevados niveles de protena CSF (fluido cerebro espinal) por encima de 100 mg/dl, sordera y demencia, fallos endocrinos y renales. La biopsia muscular muestra fibras rojorasgadas. Los pacientes suelen morir antes de los 40 aos. Esta enfermedad est asociada a la presencia de deleciones grandes nicas en el mtDNA (ver mas adelante). No se han encontrado deleciones en la madre de los pacientes por lo que parece que la aparicin de las deleciones es espordica. Sndrome de Pearson. El sndrome de mdula sea-pncreas de Pearson es una enfermedad de los primeros aos de vida que afecta a la hematopoiesis y a la funcin pancretica exocrina. Las caractersticas clnicas mas comunes son anemia sideroblstica con vacuolizacin de precursores de la mdula sea que se manifiesta con una anemia macroctica, trombocitopenia y neutropenia. Los nios afectados suelen morir antes de los 3 aos y los que sobreviven suelen desarrollar mas tarde un fenotipo de KearnsSayre. Estos pacientes presentan deleciones grandes nicas del mtDNA, en general son espordicas aunque se ha descrito algn caso de herencia materna [45]. Estos tres sndromes, PEO, Kearns-Sayre y Pearson, tienen en comn el presentar grandes deleciones (de 2 a 9 Kb) en el mtDNA que suelen aparecer de forma espontnea. En general, estas deleciones son nicas pero tambin se han descrito deleciones mltiples [45,46]. Hay dos tipos de deleciones, de 4.997 y 7.436 pb, que se presentan con mayor frecuencia (deleciones comunes). La mayor parte de las deleciones estn flanqueadas por secuencias de repeticin directa (alrededor de un 70%), pero otras no lo estn. En general, estn localizadas en el arco grande comprendido entre los orgenes de replicacin, nunca se pierde el OH e incluyen varios genes del mtDNA. Esta prdida de genes, especialmente la de los tRNAs, hace que estos genomas no se puedan traducir y, por tanto, son dependientes de complementacin con molculas de mtDNA normales en la misma mitocondria. El umbral se alcanza cuando el porcentaje de molculas delecionadas supera el 60%. La presencia de estas deleciones se detecta con relativa facilidad por la tcnica de hibridacin Southern en la que se encuentran poblaciones de mtDNA de menor tamao que el normal (16.569 pb). Las deleciones son siempre heteroplsmicas, pueden llegar a constituir un porcentaje muy alto de la poblacin de mtDNA y se encuentran en varios tejidos. Su determinacin se hace fundamentalmente en biopsias de msculo pero, si la afectacin es muy grave, se pueden llagar a detectar tambin en sangre.

Existen otras muchas enfermedades que estn asociadas a la presencia de grandes deleciones en el mtDNA. Entre otras se puede mencionar los fenotipos de diabetes, sordera y atrofia ptica; miopatas en general; el sndrome de encefalomiopata mitocondrial neurogastrointestinal (MNGIE); el de diabetes mellitus, diabetes inspida, atrofia ptica y sordera (DIDMOAD), etc. Asimismo, existen sndromes que presentan grandes deleciones en el mtDNA que se trasmiten de forma autosmica dominante o recesiva. Esta forma de herencia sugiere la existencia de genes nucleares que pueden afectar a la estructura del mtDNA. Entre ellos cabe mencionar una oftalmoplegia externa progresiva crnica autosmico dominante [47]. Deleciones mltiples en el mtDNA. Como se ha mencionado anteriormente, se han encontrado familias con PEO que presentan deleciones mltiples de herencia autosmico dominante [46,47,56] o recesiva [57], as como otros casos de diversa sintomatologa (mioglobinuria recurrente, encefalopata gastrointestinal mitocondrial, miositis con cuerpos de inclusin) aunque alguno de ellos puede presentar una herencia materna. El modelo de herencia autosmico dominante sugiere la existencia de mutaciones en genes nucleares implicados en la biognesis mitocondrial y mantenimiento del mtDNA que pueden causar mutaciones en este genoma, es pues un defecto en la comunicacin ncleo-mitocondria. Se ha encontrado que adPEO puede estar causado por un gen localizado en el cromosoma 10q en una familia finlandesa y en el 3p en familias italianas [58,59], pero todava no se han encontrado los genes o factores especficos que las producen.

Deplecin del mtDNA. La deplecin es una disminucin en los niveles de mtDNA. Como el caso anterior, es un trastorno de herencia mendeliana que afecta a la coordinacin ncleo-mitocondria, y que parece ser autos mico recesivo. El defecto puede ser debido a mutaciones en genes nucleares que controlan el nmero de copias del mtDNA. Se desconoce por el momento cual puede ser el gen responsable pero se ha encontrado que pacientes con deplecin tenan tambin bajos niveles del factor de transcripcin mtTFA [60,61]. El origen nuclear del defecto se ha confirmado al introducir mitocondrias de un paciente en clulas r0 carentes de mtDNA. El nuevo entorno nuclear restauraba los niveles de mtDNA [62]. El espectro clnico que produce la deplecin de mtDNA puede ser muy variado. Los casos descritos hasta ahora son fundamentalmente de nios con combinaciones variables de miopata, nefropata o hepatopata, miopata infantil fatal por fallo respiratorio y algn otro con implicacin multisistmica. Asimismo, parece ser la causa de una miopata mitocondrial que aparece en pacientes de SIDA despus de tratamiento prolongado con AZT. El diagnstico se realiza por el mtodo de hibridacin Southern comparando los niveles de mtDNA con los de DNA nuclear.

EL GENOMA MITOCONDRIAL
Las mitocondrias son orgnulos que se encuentran en todos los seres eucariotas aerbicos; contienen las enzimas para la mayora de las reacciones oxidativas que generan energa para las funciones celulares. Estas enzimas incluyen a la piruvato-deshidrogenasa, a las involucradas en el transporte de electrones, en la fosforilacin oxidativa, en el ciclo del cido ctrico, y en la oxidacin de cidos grasos. Actualmente se conocen las secuencias completas del ADN de varios genomas mitocondriales. Al ADN mitocondrial se lo conoce como ADNmt (mtDNA). Nuestros 23 pares de cromosomas nucleares suman unas secuencias con un total de 6.000 millones de pares de bases (G) uanina-(C) citosina y (A) denina-(T) imina, de modo que el tamao medio del ADN lineal que constituye un cromosoma humano es de unos 130 millones de pares de bases y, tambin por trmino medio, a cada par de cromosomas homlogos le corresponderan entre 1500 y 2000 genes.

Imagen tridimensional mitocondria

de

una

Corte transversal de mitocondria (MET)

El genoma mitocondrial es el material gentico de la mitocondria. El material gentico que forma el genoma mitocondrial es similar en estructura al de las clulas procariotas. Est formado por una nica molcula circular de ADN, helicoidal, con doble hebra, y supercondensada, su tamao es pequeo. Sin embargo, mientras que una clula solo posee una copia del ADN de un determinado cromosoma individual, una mitocondria puede tener varias del ADN mitocondrial y en una clula suelen haber varios cientos de mitocondrias. Ello significa que el nmero de copias del ADN circular mitocondrial en cada clula es de varios miles, adems este genoma es de un tamao de 16569 pares de bases, conteniendo un pequeo nmero de genes, distribuidos entre la cadena H y la cadena L. Estos genes mitocondriales son: Genes de ARNts Genes de ARNrs Genes de ARNms, codificando para diversas protenas El nmero de genes en el ADN mitocondrial es de 37, frente a los 20.000 - 25.000 genes del ADN cromosmico nuclear humano. En las clulas eucariotas la mayor parte de la informacin gentica est contenida en el ncleo. Sin embargo, en estas clulas hay dos tipos de organelas que tienen su propio genoma. Estas organelas son las mitocondrias (centrales energticas de la clula) y los cloroplastos (presentes solo en eucariotas fotosintticos). El genoma codifica 13 protenas, 2 ARN ribosomal (ARNr) y 22 ARN de transferencia (ARNt). El cdigo gentico que utiliza es degenerado, es decir, ciertos codones en la mitocondria corresponden a aminocidos diferentes de los utilizados por el genoma nuclear. Sin embargo, depende de muchas protenas nucleares para poder replicarse y, a su vez, muchas protenas presentes en las mitocondrias son codificadas por el genoma nuclear. En mamferos, cada mitocondria contiene entre 5 y 10 molculas idnticas de ADN, cada una de aproximadamente 16.000 nucletidos. Dado que una clula puede tener cientos de mitocondrias, el genoma mitocondrial representa casi el 1% del genoma total. Este genoma es de suma utilidad en el estudio de ciertas enfermedades hereditarias, debido a que las mitocondrias se heredan solamente por la lnea materna (ya que las mitocondrias del espermatozoide no ingresan al vulo). Todos los hermanos nacidos de una misma madre (sean varones o mujeres) pueden ser identificados como tales analizando ciertos marcadores mitocondriales. De hecho, estos marcadores deberan ser iguales entre los hermanos de la madre los tos, los primos hijos de hermanas mujeres de la madre, y as sucesivamente, siguiendo siempre la lnea materna.

Genoma nuclear o DNA de los 46 cromosomas nucleares. Los cromosomas son molculas lineales de DNA, y entre todos suman un tamao total de 6.000 millones de pares de bases (GC y AT) constituyendo la fraccin del genoma mayoritaria. De tal forma que el tamao medio de los cromosomas humanos es de unos 130 millones de pares de bases. El genoma humano tiene un nmero aproximado de 30.000 a 40.000 genes. Genoma mitocondrial humano. Constituido por un solo cromosoma, que es una molcula circular de DNA de un tamao de 16569 pares de bases (8000 veces menor que el cromosoma medio). Este tamao de 16569 bp corresponde al primer DNA que se secuenci y es el DNA "secuencia Cambridge". Otras variantes tienen distinto tamao; as el DNA mitocondrial "secuencia africana" tiene 16559, mientras la "secuencia sueca" tiene 16570 bp. En cuanto a su nmero, hay que precisar que la mayora de las clulas tienen varios cientos de mitocondrias. Adems cada mitocondria tiene varias molculas de DNA, con lo que el nmero de copias del cromosoma circular en cada clula es de varios miles.

En el siguiente dibujo podemos ver el Mitomapa; es decir, el mapa gentico del DNA mitocondrial humano. Observamos que tiene 37 genes, que podemos agrupar por sus productos: - 13 genes que codifican para (RNAs mensajeros), y por lo tanto para 13 protenas. - 22 genes que codifican para los 22 tRNAs (RNAs de transferencia, que se representan simblicamente como hojas de trbol, por denominarse la estructura secundaria de " hoja de trbol ). - 2 genes que codifican para los dos rRNAs mitocondriales (RNAs ribosmicos)

En la molcula de DNA circular de mitocondria las dos cadenas complementarias tienen una proporcin de C y G muy dispar, y por ello tienen un peso molecular muy distinto. Para distinguirlas hablamos de cadena H o pesada (heavy) y cadena L o ligera (light). Cadena L Composicin en bases (total bases: 16569): 5122 A; 5180 C; 2171 G; 4096 T Peso molecular: 5.060.609 daltons. Cadena H Composicin en bases (total bases: 16569): 4096 A; 2171 C; 5180 G; 5122 T Peso molecular: 5.168.726 daltons

La cadena que por convenio se representa y sobre la que se realiza la numeracin del genoma mitocondrial es la cadena L. La numeracin se realiza de 1 a 16569 no existiendo, al contrario de lo que ocurre en los genes nucleares, valores negativos. Estos genes no se encuentran todos sobre la misma cadena codificadora, sino que existen genes localizados sobre ambas cadenas (H y L). La mayor parte de los genes mitocondriales son transcritos utilizando como molde la cadena H. Por lo tanto el RNA ser el transcrito de la cadena H (cadena molde ), mientras que la cadena codificadora de stos genes ser la cadena L. Esto lo vemos en el esquema superior. Cada cadena tiene su propio origen de replicacin y de transcripcin. Cada cadena se transcribe " en una sola pieza " ; es decir, se produce una sola molcula de RNA al que se denomina transcrito primario de esa cadena.

El promotor de la trascripcin de la cadena H se encuentra entre las posiciones 531 y 568. Este promotor dirige la formacin del complejo de trascripcin que formar la burbuja donde se sintetiza el RNA denominado transcripto primario de la cadena H.

El transcripto primario de cada cadena sufre un proceso de corte por accin de nucleasas (RNAsas) muy especficas, que producen una coleccin de RNAs. Estos RNAs reciben el nombre de " precursores ", y no son funcionalmente activos. Para ser funcionales deban sufrir un proceso de maduracin.

Estos RNAs "precursores" sufrirn procesos de maduracin consistentes en transformaciones catalizadas enzimticamente, y originarn las formas maduras de los tRNAs, mRNAs, rRNAs y RNA-7s. El genoma mitocondrial, conocido desde 1981, posee 16569 nucletidos, correspondientes a 37 genes codificantes (no existen regiones no codificantes, otra semejanza con procariotas). Una caracterstica muy interesante es que, en las mitocondrias, el cdigo gentico est ligeramente alterado: UGA, que sera el codn de terminacin, lo leen como triptfano las mitocondrias de mamferos, hongos y protozoos., pero es una seal de "stop" en plantas; el codn AGG, que normalmente codifica arginina, codifica "parada" en mitocondrias de mamferos y serina en las de Drosophila. Por qu esta excepcin al cdigo gentico universal? Probablemente sea porque las mitocondrias codifican tan pocas protenas que un cambio ocasional en un codn raro sea tolerable, mientras que un cambio de este tipo en un gran genoma puede alterara la funcin de muchas protenas y destruir la clula.

Se conocen tambin algunos pocos casos de genomas mitocondriales de forma lineal. En muchos casos, el contenido de GC (guanina-citosina) del ADNmt difiere en gran medida del ADN nuclear, y esto permite separar el ADNmt del nuclear por centrifugacin en un l gradiente de cloruro de cesio. No existen histonas u otras protenas semejantes asociadas al ADNmt. Existen muchas copias del genoma mitocondrial en cada mitocondria, las que se ubican en ciertas regiones llamadas nucleoides. En muchos animales, las dos hebras que componen el ADNmt difieren en densidad porque las bases nitrogenadas no estn distribuidas de forma equilibrada en ambas hebras. Esto hace que una hebra sea ms "pesada" y otra ms "liviana". En el ADNmt. El contenido de genes de genomas mitocondriales de distintas especies es bastante similar tanto en nmero como en cantidad de funciones distintas. Sin embargo, el tamao vara enormemente entre distintos organismos. Los genes del ADN mitocondrial se distribuyen entre sus dos cadenas. Cuenta con un total de 37 genes de los que la mayor parte han de usarse para la maquinaria de sntesis de protenas: 22 para ARN de transferencia, activadores de los aminocidos que se han de ensamblar como protenas y 2 para los ARN ribosomales. Por tanto, solo restan 13 genes que sirven para codificar ARN mensajeros y, por tanto, a 13 protenas. Estas protenas suelen ser subunidades de enzimas o de componentes proteicos mitocondriales de gran importancia, como son varias subunidades de la enzima NADH deshidrogenasa (esencial para que transcurra el proceso redox en el inicio de la cadena respiratoria); molculas de citocromo b, componente primordial de la parte media de esa cadena; diversas subunidades de citocromo oxidasa (porcin final de la cadena respiratoria) y dos subunidades de la enzima ATPasa, responsable de la obtencin de la energa metablica ATP.

ADN Mitocondrial (mltiples puntos amarillos) y ADN Nuclear (rojo) teidos con colorantes fluorescentes. Clula de Euglena gracilis. Imagen tomada de Alberts et al.

En los animales, el genoma mitocondrial generalmente es menor a 20 kb (kilobases); por ejemplo en el hombre el ADNmt tiene 16.569 bp (pares de bases). Por su parte, el ADNmt de una levadura contiene cerca de 80.000 bp (80 kb), mientras que en las plantas vara entre 100 y 2.000 kb. La mayor diferencia entre animales, hongos y plantas es que en los animales el ADNmt codifica algn producto en casi toda su extensin, mientras que en el genoma mitocondrial de hongos y plantas existen largas secuencias de DNA que no codifican productos. Los genes del ADNmt y su transcripcin

En general, el ADNmt contiene informacin para la sntesis de una cantidad de componentes de las mitocondrias, como ser: distintos ARNt y ARNr, algunos de los polipptidos que constituyen las enzimas citocromo-oxidasas, NADH-deshidrogenasa, y ATPasas. Otros componentes de las mitocondrias estn codificados por genes nucleares y luego son introducidos a las mitocondrias. Estos componentes incluyen a la ADN-polimerasa y otras protenas necesarias para la replicacin del ADNmt; tambin la ARN-polimerasa y otras protenas de la transcripcin, o protenas ribosomales para la formacin de los ribosomas mitocondriales, factores de transcripcin proteicos, y algunas otras subunidades peptdicas para la integracin de las enzimas citocromo-oxidasas, NADH-deshidrogenasa, y ATPasas.

Genoma mitocondrial humano (Imagen tomada de Brown. Genomes 2) Este genoma es pequeo y compacto, con escasos espacios huecos, tanto que los genes ATP6 y ATP8 se solapan. Abreviaciones: ATP6, ATP8, genes para la subunidad 6 y 8 de ATPasa; COI, COII, COIII: genes para las subunidades I, II y III de la citochromo c oxidasa; Cytb: gen para la apocytochromo b; ND1-ND6: genes para la subunidad 1-6 de la NADH hidrogenasa. Ribosomal RNA y transferir RNA son dos tipos de RNA no-codificante.

Mapa del ADNmt humano. El ciclo externo muestra los genes que se transcriben de la hebra pesada (H strand), y el crculo interno muestra los genes de la hebra liviana (L strand). Se indican los orgenes y las direcciones de la replicacin de la hebra H y de la hebra L (ori). Tambin se indican con flechas las direcciones de transcripcin de cada una de las hebras. Los genes para los ARNr (16S y 12S) estn indicados en azul. Los genes para los ARNt estn indicados en prpura y se los identifica por los aminocidos que transportan (Val, Pro, Trp, Arg, Leu, Ser etc.). Los genes que codifican protenas estn indicados en amarillo. ATPasas 6 y 8: componentes del complejo enzimtico mitocondrial ATPasa. COI, COII y COIII: genes para las subunidades de la oxidasa del citocromo c. cyt b: gene para el citocromo b. NAD1 6: genes para los componentes 1 a 6 de la deshidrogenasa del NADH. Los genes mitocondriales que codifican protenas se pueden encontrar en cualquiera de las dos hebras del ADNmt. Los ARN mensajeros (ARNm) que se sintetizan a partir de genes en el ADNmt permanecen dentro de la mitocondria y son traducidos por ribosomas propios de la mitocondria. Los ribosomas mitocondriales consisten de dos subunidades como sucede con los ribosomas del citoplasma. En clulas humanas, el ribosoma mitocondrial completo es una unidad de 60S que consiste en una subunidad de 45S y otra de 35S. Existen solamente dos molculas de ARNr en el ribosoma mitocondrial de muchos organismos: una molcula de ARNr de 16S en la subunidad mayor y otra 12S en la subunidad menor del ribosoma animal. Generalmente existe solo un gen en el genoma mitocondrial para cada una de estas dos molculas de ARN Las protenas que constituyen los ribosomas mitocondriales estn codificadas en genes nucleares, se traducen en ribosomas citoplsmicos y luego se introducen en las mitocondrias para integrar los ribosomas mitocondriales. En algunos organismos, sin embargo, una o algunas protenas del ribosoma mitocondrial estn codificadas por genes del genoma mitocondrial. La transcripcin en el ADNmt de los mamferos es bastante particular: tiene un solo lugar de inicio y se transcribe en forma continua formando un solo transcripto, inusualmente largo. Este transcripto es procesado luego para producir distintas molculas de ARNt y de ARNr, adems de molculas maduras de ARNm para la produccin de cadenas polipeptdicas. Para eso es interesante observar

que los genes que codifican ARNr o ARNm estn separados por genes que codifican ARNt. En el largo transcripto original, las molculas de ARNt son identificadas por enzimas que cortan el transcripto y separan los ARNt, dejando libres a los ARNm y ARNr. Estos transcriptos as procesados luego son modificados para producir ARNr maduros. El proceso de modificacin incluye tambin el agregado de la cola de poliadenina al extremo 3' de los ARNm y la secuencia CCA en el extremo 3' de los ARNt. Los ARNm de las mitocondrias no tienen la cpsula caracterstica del extremo 5' que se agrega en los ARNm del genoma nuclear de los eucariotas. En los genomas mitocondriales de los hongos y las plantas, que son mucho ms grandes, los genes de ARNt no son separadores de los otros genes, ya que existen secuencias no codificantes bastante grandes entre genes. En estos sistemas, el final de la transcripcin est indicado por otro tipo de secuencias en el ADNmt. No existen intrones en el genoma mitocondrial de animales, pero existen en el genoma mitocondrial de las plantas.

Uso del ARNmt para determinacin de parentesco

Gracias a que en el genoma mitocondrial humano existe una regin de aproximadamente 400 pares de bases que es altamente polimrfica, y al hecho que las mitocondrias se heredan a travs del citoplasma materno (el del vulo), se puede decir que ese ADN se mantiene inalterable a travs de la lnea materna. Esto permite analizar parentescos por medio de estudios de PCR del ADN mitocondrial, porque el ADNmt de cada individuo es idntico al ADNmt de su madre. El ADNmt puede ser obtenido de muestras de sangre u otros tejidos, pero tambin de los huesos, por lo que es posible usar esta tcnica incluyendo a individuos que hayan muerto hace muchos aos. El anlisis del ADNmt est siendo usado para estudios de relaciones filogenticas no solo en humanos sino tambin en muchos otros organismos. Por ejemplo, este sistema puede ser usado para estimar la variabilidad gentica existente en poblaciones naturales. Estos estudios pueden ser de mucha utilidad en polticas de conservacin de especies, particularmente de aquellas bajo amenaza de extincin.

ANEXOS
ENFERMADADES CONSECUTIVAS A LA FUNCIN ANORMAL En 1962, Rolf Luft de la universidad Estocolmo en suecia public un estudio sobre mitocondrias aisladas de una mujer que haba sufrido fatiga y debilidad muscular por un periodo prolongado y que adems tena una tasa metablica y temperatura corporal elevadas. Las mitocondrias de esta

paciente mostraban cierta libertad del control respiratorio normal. En condiciones normales, cuando los niveles de ADP son bajos, las mitocondrias aisladas suspenden la oxidacin de sustrato. En contraste, las mitocondrias de esta paciente continuaban la oxidacin del sustrato a gran velocidad, incluso en ausencia de ADP para fosforilar, lo que produca calor en lugar de un trabajo mecnico. Desde ese informe inicial se han descrito diversos trastornos cuyo origen se rastrea hasta anormalidades en la estructura y funcin mitocondriales. Los tejidos muscular y nervioso tienden a sufrir un impacto mayor en estos trastornos porque son los tejidos con mayor demanda de ATP. Segn sean las circunstancias descritas mas adelante, la gravedad de estos padecimientos vara desde enfermedades que causan la muerte durante la lactancia, trastornos que producen convulsiones, ceguera, sordera o episodios parecidos a apopleja, hasta alteraciones leves caracterizadas por intolerancia al ejercicio o espermatozoides inmviles. Los pacientes con alteraciones graves casi siempre tienen fibras musculares esquelticas anormales que contiene grandes agregados perifricos de mitocondrias. El examen masa detenido de las mitocondrias revela grandes cantidades de inclusiones anormales que podran hacer que las mitocondrias parecieran un estacionamiento. Ms del 95% de los polipptidos de la cadena respiratoria se codifica en genes que residen en el ncleo, por lo que se esperara que muchos trastornos mitocondriales pudieran rastrearse hasta mutaciones nucleares. Aun as, no fue sino hasta 1995 que se public un informe sobre la primera de estas mutaciones causantes de enfermedad. La mutacin se produjo en el gen que codifica la subunidad flavoprotena de la enzima deshidrogenasa de succinato del ciclo del cido carboxlico. Desde entonces, otras mutaciones nucleares se ha vinculado con las enfermedades mitocondriales, pero muchas ms se han seguido hasta mutaciones en el DNA mitocondrial (mtDNA). Los trastornos ms graves casi siempre se originan de mutaciones (o deleciones) que afectan genes que codifican RNA de transferencia mitoconrial, el cual es necesario para sntesis de los 113 polipptidos producidos en las mitocondrias humanas. Como todos lo genes que estn en el mtDNA codifican protenas necesarias para la fosforilacin oxidativa, se esperara que todos los tipos de mutaciones en el mtDNA ocasionaron un fenotipo clnico similar. Est claro que no es as. La herencia de los trastornos mitocondriales contrasta en varias formas con la herencia mendeliana de los genes nucleares. Las mitocondrias presentes en las clulas de un embrin humano provienen exclusivamente de las mitocondrias que estaban en el vulo al momento de la concepcin, sin contribucin alguna del espermatozoide que lo fecund. Por consiguiente los trastornos mitocondriales se heredan por lnea materna. Adems es posible que las de una clula contengan una mezcla de mtDNA normal (tipo nativo) y mutante, un trastorno conocido como heteroplasma. El nivel de mtDNA mutante vara de un rgano a otro en una misma persona y los sntomas suelen aparecer slo cuando en un tejido particular predominan las mitocondrias con la informacin gentica defectuosa. A causa de esta variabilidad, los miembros de la misma familia portadora de la misma mutacin en el DNA mitocondrial puede tener sntomas muy diferentes. Se presume que los individuos que tienen un mayor porcentaje de mitocondrias mutantes sufren una enfermedad ms grave. Otra diferencia entre el DNA nuclear y mitocondrial es que le primero est protegido contra daos por varios sistemas de reparacin de DNA, casi siempre ausentes en las mitocondrias. El DNA mitocondrial tambin puede estar sujeto a niveles altos de radicales de oxgeno mutgeno. Por estas razones, el DNA mitocondrial tiene un ndice de mutaciones de 10 veces mayor que el DNA nuclear. De hecho, las clulas tomadas de personas mayores tienen una mayor cantidad de mutaciones en el mtDNA que en las mismas clulas de personas ms jvenes. Algunos han sugerido que estas mutaciones podran causar anormalidades en la funcin mitocondrial que a su vez podran causar ciertos trastornos de inicio tardo o incluso el proceso de envejecimiento mismo.

Existe una probabilidad particular de que haya mutaciones mitocondriales en las clulas que permanecen en el cuerpo por ms tiempo, como la de los tejidos nervioso y muscular. Varias afecciones neurolgicas comunes de inicio en el adulto, en particular la enfermedad de Parkinson, podran ser consecuencia de cambios degenerativos de la funcin mitocondrial. Al principio esta probabilidad surgi a la luz por primera vez a principios del decenio de 1980, cuando varios drogadictos llegaron a los hospitales con inicio sbito de temblores musculares intensos caractersticos de la enfermedad de Parkinson avanzada en ancianos. Se descubri que estos sujetos se haban inyectado una herona sinttica por va intravenosa que estaba contaminad con un compuesto llamado MPTP. Los estudios ulteriores revelaron que el MPTP causa dao en el complejo I de la cadena respiratoria mitocondrial, lo que condujo a la muerte de clulas nerviosas en la misma regin del cerebro (la sustancia negra) que se afecta en pacientes con enfermedad de Parkinson. Cuando se estudiaron luego las clulas de la sustancia negra de las personas con esta enfermedad tambin se encontr que mostraban una disminucin marcada y selectiva de la actividad del complejo I. En fechas ms recientes, las investigaciones han referido la exposicin a ciertos pesticidas, en especial rotenona, un inhibidor del complejo I, como factores de riesgo ambientales para el desarrollo de enfermedad de parkinson. La administracin de rotenona a ratas causa destruccin de las neuronas productoras de dopamina, algo caracterstico de la enfermedad de seres humanos. El posible vnculo entre la rotenona y la enfermedad de parkinson est en estudio EXISTEN ENFERMEDADES POR DEFICIENCIA MITOCONDRIAL Existen varias enfermedades debido a las disfunciones mitocondriales, descritas en la literatura griega mdica. Sern mencionados dos ejemplos. El primero es las enfermedades de Luft, caracterizada por un aumento cuantitativo de las mitocondrias musculares en pacientes con metabolismo basal elevado, simulando un hipertiroidismo. El anlisis bioqumico de las mitocondrias de esos enfermos mostr que la oxidacin fosforilativa est parcialmente desacoplada, explicando la sintomaloga observada. Las alteraciones o deficiencias que se producen en el ADN mitocondrial constituyen la fuente de ciertas enfermedades degenerativas, a menudo graves, que afectan en especial al cerebro y a los msculos. En este fragmento se recogen los primeros estudios sobre el ADN de las mitocondrias y la posible vinculacin con enfermedades humanas. Fragmento de Funcin normal y patolgica del ADN mitocondrial. De Douglas C. Wallace. El chico, a sus cinco aos recin cumplidos, rebosaba salud. Pero empez a perder odo y qued sordo del todo antes de los 18. En su historia se lea ya que era hiperactivo y haba sufrido ataques espordicos. A los 23 aos tena la visin bastante deteriorada, con cataratas, glaucoma y degradacin progresiva de la retina. Los ataques adquirieron despus mayor gravedad y comenzaron a fallarle los riones. La afeccin renal complicada con una infeccin sistmica se lo llev a la tumba a los 28 aos de edad. En la raz de todos esos trastornos se encontraba una imperfeccin diminuta de sus genes, aunque no de los genes habituales, los que residen en las hebras cromosmicas de ADN del ncleo celular. Su muerte se debi a una alteracin de los lazos sutiles del ADN que se aloja en las mitocondrias. Son stas los orgnulos donde se genera la energa que la clula consume. Y cada lazo de ADN contiene la informacin para la sntesis de 37 de las molculas que la mitocondria necesita para producir energa.

Aunque se saba desde 1963 que las mitocondrias de los tejidos animales albergan sus propios genes, hasta 1988 no qued patente la vinculacin de los yerros de stos con enfermedades humanas. En el laboratorio de la Universidad de Emory, se descubri, en el marco de un estudio realizado con varias familias la relacin existente entre una forma de ceguera que afecta a jvenes y adultos (neuropata ptica hereditaria de Leber) y una pequea mutacin heredada en un gen mitocondrial. Por las mismas fechas, Ian J. Holt, Anita E. Harding y John A. Morgan-Hughes, del Instituto de Neurologa de Londres, asociaron la delecin de segmentos extensos de la molcula de ADN mitocondrial con patologas musculares de carcter progresivo. Hoy se sabe que las alteraciones experimentadas por el ADN mitocondrial causan, o al menos contribuyen a la aparicin de un amplio repertorio de enfermedades, algunas con perfiles borrosos aunque potencialmente catastrficas. De inters quiz ms general: la mutacin de este ADN podra estar detrs de muchos casos de diabetes e infartos. Por no hablar de la documentacin creciente que avala la tesis segn la cual los daos sufridos por genes de las mitocondrias desempearan un papel destacado en el proceso de envejecimiento y en los procesos degenerativos y crnicos habituales en edades provectas (enfermedad de Alzheimer y alteraciones motoras). El ADN mitocondrial ha recabado tambin la atencin por su incidencia en otros campos. Por ejemplo, en las migraciones humanas. Al comparar las secuencias de los pares de bases del ADN mitocondrial de diferentes poblaciones se observan pautas muy interesantes acerca de la evolucin y las migraciones del hombre moderno. (Los pares de bases cotejadas son los peldaos o unidades de codificacin de la escalera de ADN.) Por su parte, los mdicos forenses han empezado a sacar partido de las comparaciones a pequea escala entre secuencias de ADN en la identificacin de restos de soldados desaparecidos en combate (o de otros desaparecidos antao) y en la determinacin de si un imputado es o no responsable de los hechos que se le atribuyen. Resulta llamativo que se haya tardado tanto en abordar las posibilidades que ofrece el ADN mitocondrial. Sin duda, se podran haber sospechado antes las consecuencias patolgicas de las mutaciones genticas mitocondriales. Las mitocondrias aportan el 90 por ciento de la energa que las clulas y, por ende, tejidos, rganos y el organismo en su conjunto necesitan para desenvolverse. Las mitocondrias generan energa a travs de un proceso que requiere el flujo de electrones a travs de una serie de complejos proteicos (la as llamada cadena respiratoria). Este flujo capacita indirectamente a otro complejo (la ATP sintasa) para sintetizar ATP (trifosfato de adenosina), la molcula portadora de energa de las clulas. Desde muy pronto se adivin que cualquier cosa capaz de comprometer la produccin de ATP en la mitocondria podra daar, si no matar, las clulas con el consiguiente desarrollo de alteraciones funcionales en los tejidos y aparicin de los sntomas. De hecho, el grupo encabezado por Rolf Luft, del Instituto Karolinska y la Universidad de Estocolmo, publicaba en 1962 que cierto fallo en la generacin de energa mitocondrial provocaba un trastorno debilitante. Con los aos, acab averigundose que los tejidos y rganos que antes se resienten de la cada de produccin energtica son, en orden decreciente, el sistema nervioso central, msculo cardaco y esqueltico, riones y tejidos productores de hormonas. Desde el principio se busc explicacin a las alteraciones mitocondriales en mutaciones de genes nucleares, algunos de los cuales dan lugar a componentes de las mitocondrias. Llegados los aos ochenta, sin embargo, se vio que el ADN mitocondrial portaba la informacin de un nmero notable de molculas: no slo especificaba la estructura de 13 protenas (cadenas de aminocidos) que eran subunidades de la ATP sintasa y de los complejos de la cadena respiratoria, sino que

determinaba tambin otras 24 molculas de ARN que intervenan en la sntesis de esas subunidades en las mitocondrias. Se infera de esas observaciones que las mutaciones del ADN mitocondrial podran redundar en las protenas mitocondriales o en el ARN y, de ese modo, minar la capacidad productora de energa de las mitocondrias, lo que, a su vez, sera causa de enfermedades. A esa posibilidad se aluda ya en las publicaciones de 1988. Fuente: Wallace, Douglas C. Funcin normal y patolgica del ADN mitocondrial. Investigacin y Ciencia. Barcelona: Prensa Cientfica, octubre, 1997. TRANSFERENCIA OOPLASMICA Varias fuentes informan estos das sobre el nacimiento en los ltimos aos de 30 nios modificados genticamente, 15 de ellos como consecuencia de tratamientos de fertilidad revolucionarios en un instituto medico en USA ( New Jersey's Institute for Reproductive Medicine and Science of St. Barnabas ). El Dr. Jacques Cohen, director cientfico de la mencionada institucin ha afirmado que en la misma han nacido 15 nios bajo este tratamiento ( el mayor va a cumplir los cuatro aos dentro de un mes, pero que en otros lugares han nacido otros 15 nios en similares condiciones. Que significa esto ? La tcnica conlleva la inyeccin del contenido de un vulo de una donadora frtil en el vulo de una mujer infrtil. Ello significa que la transferencia del ooplasma (citoplasma) de un vulo a otro es acompaado de la transferencia de mitocondrias desde la donadora. Esto se ha comprobado en dos de los 15 casos de New Jersey. Ello significa que el nio nacer con genes de tres progenitores, puesto que tendr mitocondrias de la madre infrtil y de la mujer donadora, y por lo tanto el DNA mitocondrial de las dos mujeres. Esto hace posible evitar enfermedades genticas mitocondriales que se transmiten por mutaciones en el DNA mitocondrial (obviamente de la madre ). Cohen ha escrito en el British Journal of Human Reproduction que este es el primer caso de modificacin gentica en la lnea germinal del que resulta un nacimiento normal. Obviamente las nias que han recibido DNA mitocondrial de las mujeres donadoras son capaces ahora de transmitir dicho DNA adquirido artificialmente a sus descendientes de una forma normal.

Investigacin reciente sobre la mitocondria.

Las mitocondrias se utilizan para buscar los ancestros de organismos que contienen clulas eucariticas. Entre los mamferos, las mitocondrias tienden a seguir una pauta de herencia materna.

Cuando una clula se divide, las mitocondrias se reproducen con independencia del ncleo. Las dos clulas hijas formadas despus de la divisin reciben cada una la mitad de las mitocondrias. Cuando el espermatozoide fecunda al vulo, sus mitocondrias quedan fuera del huevo. El cigoto fecundado hereda slo las mitocondrias de la madre. Esta herencia materna crea un rbol familiar que no se ve afectado por la recombinacin de genes que tiene lugar entre el padre y la madre. Una comparacin reciente de muestras de mDNA humano sugiere que la humanidad desciende de una mujer que vivi en frica hace entre 140.000 y 290.000 aos. Muestras genticas tomadas de grupos tnicos africanos, asiticos, australianos, europeos y de Nueva Guinea han revelado un nmero especfico de tipos de mDNA. La comparacin de estos tipos ha permitido a los cientficos construir un rbol genealgico que sugiere que los distintos grupos empezaron probablemente a evolucionar por separado. En este rbol, el mDNA africano ocupa la rama ms larga y antigua y de ella brotan los dems grupos tnicos. Probablemente haba muchas otras mujeres vivas en la poca de la llamada Eva mitocondrial, pero sus lneas de herencia materna se han extinguido. Esto ocurre habitualmente cuando una generacin de una familia no produce ninguna hija. El anlisis de mDNA se aplica tambin en investigacin forense. Recientemente se ha establecido la identidad de unos esqueletos atribuidos a Nicols II, ltimo zar de Rusia, y a su familia utilizando mDNA. El obtenido de un pariente vivo de la familia del zar result ser idntico al encontrado en los restos de Alejandra de Rusia, esposa de Nicols, y en tres de sus hijos. Como el mDNA se hereda por lnea materna, el del esqueleto del zar no coincida con el hallado en los restos de la zarina y de sus hijos. Segn investigaciones recientes, unas pocas enfermedades heredadas por lnea materna son imputables a defectos del mDNA, entre ellas algunas patologas neuromusculares y ciertas formas de diabetes mellitus.

Referencias Bibliogrficas
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