ENZIMAS

Leonardo Morera Umaa

Resumen
El anlisis enzimtico en diferentes organismos biolgicos permiti identificar varios de estos catalizadores contenidos en ciertas muestras de tejidos orgnicos. Principalmente se lograron observar las oxidasas presentes en algunos vegetales sometidos a ambientes qumicamente diferentes. Por su parte las catalasas se identificaron al aadir perxido de hidrgeno a un vegetal, junto con la extraccin de la enzima heptica a una porcin de hgado de res, lo cual tambin puso en evidencia la descomposicin del perxido por agentes aerbicos promovido por la accin de diferentes deshidrogenasas. Adems los experimentos realizados en la accin de la amilasa salival demostraron el efecto de ciertos fenmenos qumicos y externos, que afectan en forma gradual los procesos catalizadores, as como su proceso de desnaturalizacin. Las pruebas cualitativas efectuadas con los reactivos de Lugol y Benedict permitieron confirmar, a travs de un cambio en el color de las disoluciones preparadas, la presencia de la amilasa presente en la saliva. Palabras Claves: amilasa salival, deshidrogenasas, catalasas, oxidasas, agentes aerbicos.

Introduccin
Las enzimas son biocatalizadoras proteicas encargadas de acelerar muchos de los procesos metablicos de los seres vivos (1) (5). Esa actividad cataltica se debe a las cadenas ppticas que hay en su conformacin estructural (1). Adems participan en muchos procesos reguladores que permiten la adaptacin de un determinado metabolismo ante diferentes situaciones (5). Entre los aspectos ms importantes dentro de las funciones enzimticas se puede mencionar: mayores velocidades de reaccin, condiciones de reaccin, especifidad de reaccin y capacidad de regulacin (6). Un concepto muy importante respecto a la especifidad, es el sitio activo que existe en la enzima, pues slo puede encajar con ciertas clases de sustratos (1). Viene a ser como una llave, porque en el momento que este entre en contacto con la enzima, comienza a desarrollarse una actividad cintica muy grande, y por consiguiente se da la activacin (6). Segn el tipo de funcin que cumplan las enzimas, pueden ser clasificadas en: - Oxidorreductasas: catalizan la transferencia de equivalentes reductores en sistemas redox (5). - Transferasas: catalizan la transferencia de grupos qumicos a travs de las clulas.

- Hidrolasas: transfieren grupos a molculas de agua (5). - Liasas: catalizan la ruptura o formacin de uniones qumicas (5). -Isomerasas: catalizan las diferentes formas isomricas de las molculas (1). - Ligasas: catalizan las uniones qumicas dependientes de la energa (5). En la identificacin de las enzimas ms importantes, es necesario conocer su comportamiento ante ciertos factores qumicos y externos a los que se someten. Las oxidasas, presentes en frutas y vegetales, tienden a ennegrecerse al contacto con el oxgeno (6). Principalmente lo que hacen es transportar radicales de oxigeno a travs de las tejidos, con el fin de oxigenar y mantener la estabilidad metablica (2). Las catalasas, otro tipo de enzimas muy comn, fisiolgicamente estn encargadas de neutralizar agentes oxidantes como los perxidos, un recurso muy til para evitar la acumulacin indebida de esta sustancia en el tejido (1). Estos procesos generalmente son inducidos por diferentes deshidrogenasas anaerbicas (1). El comportamiento antes descrito se puede observar con solo agregar un poco de perxido de hidrogeno a una fragmento de tejido vivo, pues se

observa un burbujeo por la liberacin de oxigeno al darse la neutralizacin (2). Este mtodo tambin suele ser efectivo para establecer las propiedades enzimticas en un aislamiento bacteriano (2). La modificacin enzimtica tienen como explicacin muchos factores que en la vida cotidiana se perciben (3). El pH, la temperatura y la concentracin relativa entre enzima y sustrato afectan el funcionamiento cataltico (4). Muchas enzimas trabajan dentro del rango de temperatura corporal en el caso de los humanos, que es entre los 30 C y 40 C, pero hay excepciones en donde existen enzimas tolerantes al calor y pueden funcionar perfectamente a 70 C o ms (4). Con el pH sucede algo parecido, las enzimas humanas trabajan en un rango de pH 6-8, lejos de este intervalo dejan de funcionar o disminuyen su actividad cintica (4). Aunque la enzima peptina, presente en el tracto digestivo estomacal, trabaja mejor a un pH de 2 (4). Por aparte, la tripsina que reside en el sistema digestivo del intestino, funciona en medios alcalino, con un pH alrededor de 8, se desnaturalizara en el estmago (4). El siguiente diagrama muestra la relacin de temperatura y pH con respecto a la variacin en los parmetros establecidos de condicin, que adems evidencia muchos comportamientos en las enzimas humanas:

Procedimiento Experimental
I Parte. Identificacin de Oxidasas Vegetales Se tomaron varios pedazos de banano, manzana, camote y papa para someterlos en disoluciones con diferentes pH, los cuales son: -Aire -Agua - cido Ntrico pH = 2 - cido Actico pH = 3

II Parte. Prueba de la Catalasa De los pedazos de vegetales puestos al aire se partieron en dos, y a uno de ellos se le agreg 2 gotas de perxido de hidrogeno al 3%. III Parte. Extraccin de la Catalasa Heptica Se molieron 10 g de hgado de res, 2 g de arena y 10 mL de agua. La mezcla molida se pes a travs de una gasa y se deposit en un beaker de 150 mL. Posterior a esto se le aadi un volumen igual de etanol 95%, dejndolo reposar por 10 minutos. Se puso a centrifugar durante 3 minutos y el lquido sobrenadante fue decantado. A 10 ml lquido decantado se le agregaron 2 gotas de perxido de hidrogeno 3%. IV Parte. Efecto del pH sobre la accin de la amilasa salival. En esta parte se diluyeron 2 mL de saliva hasta 50 mL con agua destilada. En cuatro tubos de ensayo se prepararon las siguientes disoluciones: - 2 mL de 0,4%

- 2 mL de cido Lctico 0,1% - 2 mL de Agua - 2 mL de 3%

Fig. 1 Diagrama del efecto que provoca los factores ambientales en procesos enzimticos (Tomado del libro Biologa por Neil A. Campbell)

A cada tubo se le agregaron 2 mL de almidn 1% y 2 mL saliva diluida. Despus de agitarlos se calentaron a 37 C por 15 minutos, se le neutraliz el pH a cada uno y por ltimo se realizaron las pruebas de Jones y Benedict. V Parte. Efecto de la Temperatura sobre la accin de la amilasa salival En esta parte se prepararon 4 baos de mara con temperaturas de 10 C, 37C, 45C y 80C. A cada uno de los tubos de ensayo se le agregaron 2 mL

de almidn 1% y 2 mL de saliva diluida. Cada uno se coloc en los baos por 15 minutos y por ltimo se realizaron tambin las pruebas de Jones y Benedict.

Anlisis y Discusin de Resultados

Las enzimas encontradas en los vegetales normalmente funcionan bajo ciertas condiciones externas. Al sumergir los trozos de frutas y vegetales en disoluciones con diferentes pH, no pudo distinguirse algn cambio significativo, lo que nos puede decir que ante la presencia de estas sustancias las enzimas pueden trabajar bastante bien. Sin embargo con solo dejarlas al aire, las oxidasas presentes se manifestaron con el ennegrecimiento de los vegetales. La funcin principal de las oxidasas es participar en las vas de transporte metablicas, en este caso interactuar con el oxigeno y posteriormente a oxidarse. Por lo general en tejidos vegetales las oxidasas tienden a cambiar un poco su composicin qumica ante la presencia de oxigeno, tal como se observ en el experimento. Por su parte las catalasas presentes en tejidos tanto animales como vegetales tienden a reaccionar de manera caracterstica ante el contacto con un perxido. La reaccin tal como se describe a continuacin:

Resultados Obtenidos
Cuadro 1. Identificacin de las oxidasas vegetales Aire
Se oxid

Agua
Sin cambio Sin cambio Sin cambio Sin cambio

cido Ctrico
Sin Cambio Sin Cambio Sin Cambio Sin Cambio

cido Actico
Sin cambio Sin cambio Sin cambio Sin cambio

Manzana
Se oxid

Banano
Se oxid

Papa
Se oxid

Camote

Cuadro 2. Identificacin de las catalasas enzimticas Enzima Catalasa Observaciones Se distingui un burbujeo sobre el vegetal al agregar perxido de hidrogeno Despus de aislarla de hgado se observ un burbujeo con la adicin de perxido

Catalasa Heptica

indica que los perxidos al hacer contacto se forma agua y se libera oxigeno. Justamente la catalasa funciona como inhibidor de la accin oxidativa del perxido, promovida por deshidrogenasas anaerbicas. Es por esta razn que cuando se agreg perxido de hidrogeno a uno de los vegetales y a una porcin de hgado de res, se observ inmediatamente un burbujeo sobre el tejido, esto justamente por la accin de la catalasa para neutralizar el perxido; el burbujeo corresponda a la liberacin de oxigeno. Con respecto a la catalasa heptica la situacin no cambio, una vez que se aisl del hgado de res, se comprob si cumpla la misma funcin neutralizadora. Por supuesto, tambin se vio el mismo comportamiento que en la primera prueba, un burbujeo en la disolucin que contena la enzima. El pH puede variar la actividad cintica de las enzimas, segn aumente o disminuya tambin lo har su funcionamiento. Generalmente se sabe que al mayora de las enzimas trabajan en un pequeo rango de pH, por el rea de neutralidad. Muy por abajo, en un medio cido o muy por arriba, en un medio bsico pasan a un estado inactivo. Esta

Cuadro 3.Comportamientos observados en la variacin de temperatura y pH para la accin de la amilasa salival. Temperatura Accin de la amilasa saliva
10 C: Se conserv 37C: Se conserv 45 C: desnaturalizada 80C:desnaturalizada

pH
pH 1: desnaturalizada pH 5: desnaturalizada pH 7: no se desnaturaliz pH 9 : desnaturalizada

caracterstica concuerda con lo que pasa bioqumicamente en nuestro cuerpo; los cidos estomacales segregados matan o inhiben el funcionamiento en las enzimas encargadas de acelerar la digestin, al igual que pasa con muchas otras cuando hacen contacto con cidos. En este caso los resultados observados sustentan esta teora, tanto el HCl como el inactivaron la amilasa salival, pues respectivamente aportaron un pH de 1 y 9, estado en el que se inhiben las funciones de la amilasa. Con el cido lctico y el agua la enzima se mantuvo activa, esto porque la mayora de enzimas trabajan con agua, y para el cido lctico que contiene la leche tambin hay enzimas junto a l. Este hecho justifica el comportamiento que se pudo observar para ste experimento con la accin de la amilasa. Por ltimo, la parte de la prctica respecto al efecto de la temperatura permiti analizar unos hechos que siempre estn presentes en las funciones enzimticas. La amilasa sometida a esas diferentes temperaturas mostr que por debajo de 37 C, las enzimas funcionan perfectamente bien, pero para arriba de ese valor, estas enzimas se desnaturalizan y la actividad decrece. Todo eso tiene sentido, normalmente nuestra temperatura corporal ronda por los 37 C, por lo que todas las enzimas que al menos trabajan en nuestro cuerpo no varan su funcionalidad. Las pruebas de Jones y Benedict confirmaron esas suposiciones, pues solo reaccionaron las muestras que estaban en las temperaturas de 10 C y 37 C.

Bibliografa
(1) Calvo. M.; Carballo. A. F.; Villegas. L.; Vargas. X.; Borbn. H. Manual de Prcticas de Procesos Qumico-Biolgicos, UNA, 2011. p 39, 40, 41, 43. (2) Forbes. B. A. Bailey & Scott: Diagnostico Microbiolgico, 12th Edicin, Editorial Mdico Panamericana, 2007. p 110. (3) Fuentes. X.; Castieiras. F.; Queralt. J. Bioqumica Clnica y Patologa Celular, Vol. 1, Editorial Revert, 1998. p 450. (4) Campbell. N. A.; Recce. J.; Molles. M.; Urry. L.; Heyden. R. Biologa 7 Edicin, Education Pearson, 2005. p 154. (5) Koolman. J.; Rhm. K. H. Bioqumica: texto y atlas 3 Edicin, Editorial Mdica Panamericana, 2003, p 88. (6) Voet. D.; Voet. J. G. Bioqumica 3 Edicin, Editorial Medica Panamericana, 2004. p 473