UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAB DEL CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS, FSICAS, MATEMTICAS, INFORMTICA Y FARMACIA Y BIOQUMICA.

Practica n 09 Extraccin e identificacin de Estricnina

Por

EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE ESTRICNINA I. OBJETIVOS. II. Extraer estricnina de una muestra biolgica (Jugo gstrico, vsceras o muestra sospechosa) Determinar e identificar su presencia par M mtodo de cromatografa en capa fina.

FUNDAMENTO TERICO.

Las intoxicaciones por estricnina se originan a travs de preparaciones farmacuticas, (actualmente en desuso) o comerciales empleados con cebos o comidas para matar ratas, perros, gatos, etc. La facilidad de disponer la droga lo hace muy peligroso, motivo por el cual se ha presentado casos de envenenamiento suicida y criminales con cierta frecuencia. Es un alcaloide que se obtiene de la nuez vmica, semilla desecada de Strychnosnux vmica y Strychnos ignatt. , las semillas contienen aproximadamente 2.5 % de alcaloide, su estructura qumica es algo compleja con ncleo ndolico y formula emprica C21H22N202. En su estado de base presenta las siguientes caractersticas: polvo blanco cristalino, incoloro e inodoro, de sabor muy amargo, soluble en ter, cloroformo, bencina y alcohol amlico y casi insoluble en agua. La estricnina se absorbe muy bien por via digestiva y parenteral, una vez en sangre se distribuye por todo el organismo, teniendo predileccin por el sistema nervioso central, se excreta en su mayora sin modificar por la orina la dosis mortal media es alrededor de 100 mg por via oral.

La estricnina es fundamentalmente un estimulante del sistema nervioso central, con efectos predominantes sobre la mdula espinal, Un estado de intoxicacin por estricnina atraviesa por tres periodos: Periodo de hperreflexia: donde se producen respuestas exageradas a los estmulos Periodo convulsivo: Donde cualquier estimulo lleva a la contraccin de los msculos, se pierde la coordinacin y se presenta una convulsin tnica y tetnica. Periodo de parlisis: Se aumentan tos fenmenos depresivos y desaparicin de las convulsiones. En el hombre la muerte sobreviene en e! segundo periodo y es producida por asfixia, debido a la contractura de los msculos respiratorios y por parlisis del centro respiratorio. III. PARTE EXPERIMENTAL.

Determinacin de estricnina por el mtodo de cromatografa en capa fina. Materiales. 05 Placa con silicagel. 02 Pipetas de 5 ml y 10 ml 03 Matraces de 100 ml 04 Vaso precipitado de 250 ml Papel indicador rango de pH 1 a 14 02 Frasco roceador Cubeta de vidrio para cromatografa. 05 punteras o capilares. Cocinilla Regla.

Equipos. Estufa. Aspersor. 3.3. Reactivos.

Para la extraccin: Cloroformo. Fase Mvil: Cloroformo Acetona Amoniaco Soporte: Revelador

4 ml 2 ml 0.5 ml

Gel de slice. Reactivo de Dragendorff Acido sulfrico al 1%

Estndar: Tomar 100 mg de sustancia pura y disolver en 2 mide cloroformo o ter etlico Muestra: IV. 50 gr de hgado de polio o 50 rr de gaseosa contaminado con estricnina.

TCNICA OPERATORIA.

Extraccin. Vsceras: Calentar 20 ml de agua destilada, agregar 20 gr de vsceras, previamente picadas, adicionar 1 gr de tungstato de sodio, llevar a un pH bsico de 0 con la ayuda de Hidrxido de amonio, dejar hervir por una hora, a fin desproteinizar y dejar enfriar. Seguidamente esta solucin extraer con cloroformo ter etlico en la proporcin de 1:1, mezclar bien por 5 min, separar en fabos de ensaco y centrifugar de 5 a 7 min a 3000 revoluciones. Separar la fase orgnica (clorofrmica) desecar y evaporar disolver el residuo con 1 ml de cloroformo.

Lquido: 20 ml de la muestra llevar a un pH bsico de 9 con la ayuda de Hidrxido de amonio, extraer con cloroformo o ter etlico en te proporcin de 1:1, mezclar bien por 5 min, separar en tubos de ensayo y centrifugar de 5 a7 min a 3000 revoluciones. Separar la fase orgnica (clorofrmica) desecar y evaporar, disolver el residuo con 1 ml de cloroformo. Identificacin. Dividir en dos la placa previamente preparadas, en un extremo sembramos la muestra extrada y en otro la solucin estndar a 1 cm del borde de la placa, luego colocar en la cuba que contiene la fase movil y dejar que corra hasta que la fase mvil llegue a 1 cm del borde superior de la placa, dejar secar y aspersar el revelador en forma uniforme y dejar secar en estufa, para intensificar las manchas aspersar con solucin de cido sulfrico al 1%. Interpretacin: De acuerdo al revelador utilizado el resultado es positivo si presenta las siguientes coloraciones. Dragendorff (se intensifica manchas con cido sulfrico). Manchas naranjas. V. PARTE OPERATORIA:

Preparar la fase mvil, cloroformo, acetona, amoniaco (4:2:0,5)

La estricnina en capsula sacarla y ponerla en una luna de reloj para su separacin.

Seleccionamos y una parte de del polvo y lo diluimos en 5 ml de agua destilada, es envasada y etiquetada.

Seleccionamos las placas a utilizar, sembramos y colocamos en el vaso precipitado con la fase mvil.

Secamos las placas, revelamos con reactivo de Dragendorff y obtenemos los resultados.

VI.

CONCLUSIONES.

Se obtuvo una placa sin manchas aparentes de color naranja, lo que nos lleva al resultado negativo para estricnina, lo cual nos induce que la capsula no contena el alcaloide estricnina como indicaba en la etiqueta de rotulado. La practica nos ensea los diferentes pasos que debe de seguir el analista toxicolgico en la obtencin de resultados por cromatografa en capa fina del alcaloide estricnina. Los pasos necesarios y los cuidados que debemos de tener ante un alcaloide altamente toxico, sino mortal, que se ultilizaba antes para tratamientos mdicos, pero con alto efectos secundarios y que en la actualidad solo se utiliza como veneno de roedores y animales mayores. En la criminalstica este tipo de alcaloides es poco utilizado por su fcil deteccin por sus caractersticas organolpticas, pero nunca se debe descartar el anlisis de este veneno pues es de fcil acceso por su venta libre en veterinarias.

CUESTIONARIO 1. Farmacocintica y farmacodinamia de la estricnina. Farmacodinamia: La estricnina es un antagonista del aminocido glicina, neurotransmisor de las clulas de Renshaw. Al evitar la inhibicin sobre las motoneuronas por parte de las clulas de Renshaw, la estricnina produce hipercontraccin muscular. Al inmovilizar el msculo del diafragma el individuo muere por asfixia. Farmacocintica La estricnina es de uso oral. Su absorcin es rpida, por lo que el perodo de latencia de la intoxicacin es breve: 30-45 minutos en la mayora de los casos, pudiendo extenderse hasta 2 horas segn la dosis ingerida y el estado de replecin gstrica. La estricnina es metabolizada en el hgado; se elimina por orina una cantidad significativa de la sustancia originalmente ingerida. 2. Caractersticas del cuadro de intoxicacin por estricnina. La intoxicacin se inicia con un aura aprensiva, observndose luego hipertona muscular, que se manifiesta en retraccin de las comisuras labiales y ereccin de las orejas; se detecta rigidez de la musculatura cervical, torcica y abdominal, al igual que dificultad para flectar articulaciones (codo, rodilla), con marcha rgida. Aparece hipersensibilidad a estmulos tctiles,auditivos y visuales, que causan violentos sobresaltos; este fenmeno se agudiza hasta la aparicin de crisis de convulsiones tnicas, en las que se observa cuello extendido, opisttono y extensin de las extremidades, ya que los msculos extensores son ms potentes que los flexores

("postura de caballete"). La tetania afecta tambin a la musculatura respiratoria, aprecindose disnea y cianosis; el paciente puede morir por apnea en una de tales crisis, en las que se mantiene la conciencia. Las crisis convulsivas tnicas, que duran ordinariamente pocos segundos, son seguidas por convulsiones tnico-clnicas, en las que ocurren movimientos mandibulares y pedaleo; suele observarse intensa polipnea en estas circunstancias. Las crisis reducen su intensidad progresivamente hasta llegar a la calma total durante algunos minutos; sin embargo, estmulos diversos desencadenan nuevamente la fase de convulsiones tnicas, la cual puede tambin ocurrir espontneamente. Al progresar la afeccin, las crisis se suceden con mayor frecuencia y son de mayor duracin, reducindose el perodo de reposo. La acentuada actividad muscular eleva la temperatura rectal hasta 41 C y hay acidosis metablica. Desde su inicio al trmino mortal, el cuadro tpico suele durar entre 30 minutos a 2 horas. En la necropsia destaca la rapidez con que se instala el rigor mortis y la permanencia del fenmeno hasta por 12 horas; no hay lesiones de significacin diagnstica, limitndose a la presentacin de hemorragias agonales. Cierto porcentaje de perros muertos por intoxicacin con estricnina presentan hemorragias pancreticas, pero se duda que ello sea causado por el txico. Para el diagnstico debe considerarse que en la intoxicacin por estricnina no hay diarrea ni emisin frecuente de orina, dada la hipertona de los esfnteres que produce el txico; ello lo diferencia de intoxicaciones con otras drogas convulsivantes. Es posible la ocurrencia de vmito, aunque este es un fenmeno raro en esta intoxicacin. Se puede utilizar el contenido gstrico, material vomitado y orina para identificar estricnina.

3. Tratamiento por intoxicacin por estricnina. El tratamiento de la intoxicacin por estricnina persigue: A. Evacuar el estmago mediante lavado gstrico o induccin de vmito, si se est todava dentro del lapso adecuado para tales efectos. El lavado puede realizarse con solucin de permanganato de potasio 1/1000 para oxidar la estricnina, o de cido tnico 2% para precipitarla. El vmito puede inducirse en perros con apomorfina (0,04 mg/kg IV ,o bien 0,08 mg/kg SC o 1-2 gotas de la solucin inyectable en el saco conjuntival) o acepromazina (0,01 mg/kg por va subcunea), y con xilazina en gatos en dosis de 0,44 mg/kg; este medicamente es menos efectivo en caninos, en los cuales se utiliza en dosis de 1-2 mg/kg por va intramuscular. No debe inducirse vmito en perodos de convulsiones. Tras el vmito o lavado gstrico es ideal administrar carbn activado, en dosis de 1-2 g/kg de peso, suspendiendo cada gramo en 3- 5 ml de agua o suero fisiolgico. B. Controlar las convulsiones, idealmente con anestesia barbitrica. Si las condiciones no lo permitiesen, debe utilizarse para tales efectos el diazepam por va endovenosa (0,5-1 mg/kg). C. Facilitar la excrecin renal del txico mediante diuresis forzada con furosemida, o bien administrar manitol 5% en suero fisiolgico. La excrecin mejora en orina cida, utilizndose cloruro de amonio por va oral en dosis de 100 mg/kg para caninos y 20 mg/kg para felinos. D. Atender a la hidratacin orgnica y controlar la acidosis metablica, recurrindose para ello al suero Ringer lactato 1/3 o 1/6 M, slo o combinado con suero glucosalino.

E. Mantencin del paciente abrigado, en ambiente oscuro y sin ruido al menos durante 48 horas. 4. Fundamento del reactivo de Dragendorff

PRUEBAS DE IDENTIFICACIN PARA ESTRICNINA I. OBJETIVOS.

Identificar la estricnina en sustancias sospechosas puras, con pruebas directas. Distinguir la estricnina, de sustancias con caractersticas organolpticas parecidas. REACCIONES DE OXIDACIN EN MEDIO SULFRICO. Parte experimental. Materiales. 01 Luna de reloj. 01 gotero. 01 Varilla de vidrio. Reactivos. Dicromato de potasio. Acido sulfrico concentrado. Muestra. Pequea cantidad de estricnina pura o muestra sospechosa.

TCNICA OPERATORIA. Identificacin.

Colocar una pequea cantidad de la sustancia sospechosa o estricnina pura, en el centro de la luna de reloj.

Aadir unas gotas de cido sulfrico y depositar unos cristales de bicromato potsico, desplazando por la luna con la ayuda de una varilla.

Interpretacin. S se producen estras violetas de poca duracin que viran luego a rojo cereza y amarillo, finalizando por desaparecer, el resultado es positivo Nota: El bicromato potsico puede sustituirse por otros oxidantes como el bixido de manganeso, plomo u xido de ceo con iguales resultados. REACCIONES DE HIDROESTRICNINA DE DENIGES. Materiales. 01 Vaso de precipitado pirex de 50 mi. 01 pinza metlica

 01 Varilla de vidrio. Papel filtro Goteros Reactivos. Cloroformo. Zinc en polvo. Nitrito sdico al 0.01 % Muestra: Pequea cantidad de residuo seco de extraccin clorofrmica de estricnina. TCNICA OPERATORIA. Identificacin: Disolver el residuo seco de la extraccin clorofrmica, en gotas de cloroformo concentrado, aadir zinc en polvo y calentar hasta ebullicin. Luego de obtener la reaccin tetrahidroestricnina y estricnidina por el hidrgeno naciente, se empapa el lquido en un papel filtro, evitando recoger polvo de zinc, luego sobre la parte humedecida del papel agregar nitrito sdico al 0.01%. Nota: Las sustancias que interfieren en la reaccin son los preparados fenotiaznicos, en especial la clorpromacina, la coloracin foja es menos persistente. Interpretacin. La formacin de un color rojo violceo, es resultado positivo. La reaccin es sensible hasta 0.01 g de estricnina. REACCIN DE MANDELEIN. Materiales.

01 Tubo de ensayo. 01 pinza metlica 01 Varilla de Vidrio. Goteros

Reactivos. Vanadato de amonio Acido sulfrico cc. Muestra: Pequea cantidad de estricnina pura o sustancia sospechosa.

TCNICA OPERATORIA. Identificacin. Una pequea porcin de muestra sospechosa o estricnina, aplicar con unas gotas del reactivo de Mandelein. Interpretacin. La formacin de un color azul fugaz, que pasa al violeta intenso y color rojo claro al aadir agua, es resultado positivo. La reaccin es sensible hasta 0.01 g de estricnina. II. COMENTARIOS Y CONCLUSIONES.

Las pruebas para identificacin de estricnina, la oxidacin con acido sulfrico y bicromato de potasio dio resultado negativo, por ende la muestra no es estricnina. Las dems pruebas no se realizaron a falta de reactivos en el laboratorio, por lo que su revisin ser bibliogrfica.

Bibliografa Gisbert Calabuig, Juan A. (2005) Medicina Legal y Toxicologa. BarcelonaEspaa: Salvat Editores S.A. Hospital Universitario 12 de Octubre (1994) Manual de Toxicologa Clnica. Madrid