TRATAMIENTOS BIOLGICOS PARA LA REMOCIN DEL COLORANTE NDIGO

UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMON

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGIA CENTRO DE AGUAS Y SANEAMIENTO AMBIENTAL

Nombre: Urquidi Portillo Jessica Claudia Materia: Laboratorio de Investigacin Docente: Henry Antezana Gestin: II / 2011

COCHABAMBA BOLIVIA

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NDICE

1. INTRODUCCIN Introduccin..... 1 2. FUNDAMENTO TERICO Colorantes 2 Las aguas residuales de la industria textil ... 2 Los colorantes reactivos empleados en la industria textil y eliminados en el agua residual .... 3 Tratamiento de efluentes. 4 Mtodos Biolgicos 4 Tratamientos bacterianos.... 7 Mecanismos de remocin de color empleados por bacterias anaerobias.... 8 3. OBJETIVOS Objetivo General... 10 Objetivos Especficos.... 10 4. METODOLOGA Reactivacin de cepas... 10 Seleccin de cepas para la evaluacin .. 10 Seleccin de longitud de onda de mayor absorcin para el colorante. . 11 5. RESULTADOS Seleccin de longitud de onda de mayor absorcin para el colorante azul .. 11 Reactivacin de cepas... 13 Seleccin de cepas para la evaluacin .. 13 Calculo de la constante cintica para muestra de agua residual textil .. 18 6. CONCLUSIONES Conclusiones. 18 7 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Referencias bibliogrfica 20

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1. INTRODUCCIN

Una de las necesidades ms importantes del ser humano es la vestimenta, necesidad que a travs de los aos ha sido la causa del enorme desarrollo de la industria textil. Los procesos productivos comprendidos en este tipo de industria corresponden a una cadena de operaciones demandantes de grandes cantidades de agua, la cual proviene generalmente de pozos y que por su calidad servira para el consumo humano, cra de animales y riego.2 Los vertimientos de sustancias toxicas al medio ambiente, ha sido una problemtica que desde hace algunas dcadas ha llamado la atencin de organismos gubernamentales. Numerosas tcnicas se han empleado con el fin de minimizar el impacto que estas causan a los ecosistemas.7 Con el fin de realizar procesos beneficiosos para el medio ambiente, se han implementado soluciones que implican el uso de microorganismos como bacterias, hongos y algas, los cuales tienen la capacidad de atrapar y/o degradar estas sustancias algunas veces hasta su mineralizacin.7 El empleo de grandes volmenes de agua por la industria textil ha originado un severo problema ambiental a nivel mundial: el desecho de aguas residuales altamente contaminadas. Los contaminantes de mayor cuidado en el efluente residual textil son los colorantes y con ellos, los subproductos generados a partir de su ruptura molecular, algunos de ellos txicos y/o mutagnicos.7 Existen alrededor de cien mil colorantes disponibles en diversas industrias. Cada ao se producen setecientas mil toneladas mtricas de colorantes alrededor del mundo, que son desechados en gran medida en aguas residuales de industrias como la papelera y la textil.7 En tal sentido, se han desarrollado tecnologas fundamentadas en los procesos biolgicos como alternativas viables en la eliminacin parcial o total de diferentes compuestos orgnicos. Estos procesos utilizan principalmente bacterias que se encuentran en el mismo ambiente que se pretenda remediar, adems se adicionan los macro y micro nutrientes necesarios para el mantenimiento de las cepas bacterianas.4

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2. FUNDAMENTO TERICO

Colorantes La raza humana ha usado colorantes desde hace miles de aos y el primero en usarlos se cree que fue el hombre de Neandertal hace 180.000 aos. Sin embargo, el primer uso conocido de un colorante orgnico fue mucho despus, hace 4.000 aos, cuando el colorante azul ndigo se encontr en una tumba egipcia. A finales del siglo XIX, todos los colorantes en su mayora eran naturales los cuales usaban materias primas como plantas, insectos y moluscos, los cuales eran generalmente preparados en pequeas escalas.1 Los colorantes son sustancias orgnicas fluorescentes o de color intenso que imparten color a una sustancia incolora, o bien, a un sustrato por medio de una absorcin selectiva de luz. Sus molculas estn constituidas por tres grupos funcionales, el cromforo, que es el grupo responsable de la absorcin de luz, dndole la propiedad de color a la molcula; los auxcromos, que le dan afinidad por la fibra e intensifican el color; y por ltimo el solubilizador que le da la afinidad a solventes diversos y esta dado por la presencia de iones.1 De los colorantes producidos en el mundo, una gran cantidad son desechados en el ambiente a travs de los efluentes, un dos porciento es descargado directamente a los efluentes por las operaciones de manufactura, y el diez por ciento es descargado por la industrias que consumen colorantes.1

Las aguas residuales de la industria textil El proceso de produccin de la industria textil, requiere del uso de grandes volmenes de agua en cada una de sus fases. En el Ecuador una empresa textil puede ocupar en promedio 70 m3 por tonelada de tela. En Espaa, Estados Unidos, Francia y Alemania, se utilizan 125 m3, 125-170 m3, 100-150 m3, 120 m3 por cada tonelada de tela producida respectivamente (Pey, 2008), que posteriormente se convierten en aguas residuales cargada de cantidades importantes de colorantes no fijados en el proceso de tinturacin (Bock y Rott, 2003).2 Las aguas residuales de tipo textil provienen de la descarga correspondiente a los procesos de: desengomado (15%), descrude y mercerizado (20%) y del blanqueo, teido y lavado (65%) (Mansilla et al., 2001). La composicin del agua residual depende de los compuestos

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orgnicos y qumicos utilizados, as como tambin de los colorantes empleados. En general, se caracterizan por ser alcalinas y tener elevados niveles de DBO (entre 700 y 2000 mg/L) y DQO. Entre los contaminantes presentes estn los slidos en suspensin, aceites minerales, compuestos orgnicos como el fenol, sustancias orgnicas halogenadas por el uso de solventes, metales pesados (cromo, cobre, zinc, plomo, nquel) y restos de colorantes no fijados en la tela (IFC, 2007).2

Los colorantes reactivos empleados en la industria textil y eliminados en el agua residual Los colorantes reactivos se caracterizan por poseer un anillo cloro triaznico con grupos amino e hidroxilo. El anillo reactivo se conecta al cromforo mediante un enlace amino formando la molcula completa del colorante, la cual se fija a la celulosa por la reaccin con un grupo hidroxilo del anillo celulsico. Los colorantes reactivos se caracterizan por formar enlaces qumicos covalentes con las fibras, de alta solidez (Melnikov y Moriganor, 1982). De acuerdo a sus grupos reactivos se subdividen en: Monoclorotriaznicos, Diclorotriaznicos, Vinilsulfnicos, Tricloropirimidnicos,
2

Vinilsulfonamidinicos,

Vinilsulfnicos y Monocloro difluor pirimidnicos.

Los grupos reactivos se fijan a la celulosa y de acuerdo a la reaccin que establezcan con sta, se clasifican en dos grupos: 1) colorantes reactivos que forman steres de celulosa y 2) colorantes reactivos que forman teres de celulosa (figura 2.1).

Figura 2.1: Reaccin de esterificacin entre la celulosa y el colorante reactivo con anillo heterocclico (Cegarra, 1980).

Los que no tienen anillos en sus grupos reactivos (colorantes vinilsulfnicos y acriloilamdicos), reaccionan por adicin nucleoflica al doble enlace C = C, en medio alcalino (figura 2.2).

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*Col-: grupo cromforo Figura 2.2: Reaccin de formacin de teres de los colorantes vinilsulfnicos con celulosa (Cegarra, 1980). La mayora de colorantes utilizados en la industria textil son los de tipo azo (-N=N), aproximadamente el 70% de los colorantes textiles de los diez mil colorantes manofacturados. Los colores ms comunes de este tipo son el amarillo, el naranja y el rojo Los colorantes azo son generalmente recalcitrantes a la biodegradacin por sus estructuras complejas y de naturaleza xenobitica que requieren de 10 tratamientos anaerobios para su mineralizacin (Khalid et al., 2007). 2

Tratamiento de efluentes Por lo general, resulta bastante difcil tratar los efluentes textiles debido a que las industrias producen aguas residuales multicomponentes. Las aguas residuales coloridas contienen una gran cantidad de slidos suspendidos, una alta demanda qumica de oxgeno y el pH es fluctuante, lo cual hace que sean difciles de tratar. Adems, el colorante contenido en los efluentes puede variar diariamente e incluso cada hora, estas variaciones oscilan entre 10 y 200 mg/L. La investigacin de tratamientos eficaces y prcticos para la remocin de colorantes en las aguas residuales ha generado un creciente inters en los ltimos aos. En la Figura 1.3 se resumen las principales tecnologas utilizadas para la eliminacin de estos contaminantes. Varios autores reportan las caractersticas y aplicaciones de las tecnologas desarrolladas ms importantes. La mayora de estos autores las dividen en tres principales categoras: mtodos biolgicos, qumicos y fsicos.1

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Figura 2.3. Mtodos principales para la remocin de colorantes (Robinson y col., 2001)

Mtodos Biolgicos Existe una gran variedad de tratamientos biolgicos, los cuales son mtodos ms econmicos en comparacin con los procesos qumicos y fsicos. Los mtodos de biodegradacin como la degradacin microbiana, adsorcin por microorganismos vivos o

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muertos y sistemas de biorremediacin son aplicados para el tratamiento de efluentes industriales porque muchos microorganismos como las bacterias, levaduras, algas y hongos son capaces de acumular y degradar diferentes contaminantes. Sin embargo, la aplicacin de estos mtodos no es tan factible debido a sus limitaciones tcnicas. 1 Dentro del tratamiento biolgico con el uso de bacterias, tanto condiciones aerobias como anaerobias han sido estudiadas, principalmente en cuanto a la ruptura del doble enlace N=N- que caracteriza a los colorantes azoicos. La ruptura de este enlace requiere la presencia de agentes donadores de electrones, los cuales tomarn como aceptor final el enlace azo. En condiciones aerobias, el oxgeno compite con el colorante por los electrones convirtindose en el aceptor final. Los colorantes azo contienen sustituyentes de grupos nitro y sulfnicos recalcitrantes para las bacterias aerobias.2 Los microorganismos anaerobios a ms de generar electrones para la ruptura del enlace azo, permiten alcanzar un bajo potencial redox necesario para una decoloracin eficiente del agua. De ah que el tratamiento ms recomendable es el uso de bacterias anaerobias. Bajo condiciones anaerobias se desarrollan microorganismos que tiene la propiedad de tolerar bajas concentraciones de oxgeno, tal es el caso de algunas especies pertenecientes a los gneros Actynomices, Propionibacterium, Lactobacillus, Clostridium, entre otros. Cuando en el medio existen bajas concentraciones de oxgeno, se desarrollan las especies anaerobias aerotolerantes a condiciones especficas de pH; Lactobacillus por ejemplo, puede desarrollarse a un pH de 4. Pese al desarrollo de microorganismos aerobios mientras exista oxgeno disponible aquellos encargados de la remocin de color sern los anaerobios.2 La decoloracin por cultivos mixtos tanto como por cultivos puros, requiere generalmente de un sustrato alterno que constituya el donador de electrones para la ruptura del enlace azo; entre los posibles co-sustratos estn el extracto de levadura, peptona y la glucosa. En condiciones anxicas, la eficiencia de la glucosa como sustrato alterno depender del inculo. 2

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Tratamientos bacterianos El desarrollo de procesos de biotecnologa encaminados hacia la decoloracin de efluentes industriales, buscan obtener como meta principal, la remocin de un amplio espectro de colorantes, as como un alto porcentaje de degradacin y decoloracin. Algunos factores ambientales pueden influenciar en la decoloracin de las aguas residuales, tales como el pH, temperatura y cantidad de oxigeno disponible en el medio, ya que a ciertas condiciones, las molculas de los colorantes se pueden descomponer en compuestos de bajo peso molecular. De esta forma podemos encontrar biotransformacin de tipo aerobia o anaerobia.5

Figura 2.4 secuencia de eventos en un proceso de biotransformacin bacteriana. (Barragn 2004)

Durante el proceso de biotransformacin, las enzimas con poder reductor que se encuentran en clulas bacterianas, se unen con el compuesto qumico para formar un complejo, (1), (2), el cual al reaccionar (3) produce derivados que pueden ser liberados extracelularmente (4). Algunos procesos pueden influenciar en la velocidad de reaccin como la disponibilidad del compuesto (5). La capacidad enzimtica del microorganismo por cambios genticos (6) y el crecimiento de la poblacin bacteriana que lleva a cabo la biotransformacion (7) Barragan 2004.5

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Mecanismos de remocin de color empleados por bacterias anaerobias El proceso anaerbico de remocin de colorantes azo radica en la ruptura del doble enlace N=N- mediante un proceso que comprende la transferencia de cuatro electrones, equivalentes reductores que actan sobre el enlace. El proceso de ruptura se divide en dos fases, cada una implica la transferencia de dos electrones al enlace azo que es el aceptor final (figura 2.5).

Figura 2.5. Hiptesis de decoloracin por accin bacteriana (Yoo et al., 2001).

No se conoce con exactitud si se trata de un mecanismo de ruptura intra o extra celular. La hiptesis ms aceptada es que muchas bacterias posen enzimas citoplasmticas especficas que actan como azo reductasas y que bajo condiciones anaerobias transfieren electrones mediante flavinas solubles a los colorantes azo. Sin embargo, se cree que la ruptura del enlace azo es un proceso extracelular, ya que colorantes azo sulfonados de alta polaridad no pueden penetrar la membrana de la clula. Estas propuestas han sido corroboradas por investigaciones en las que se observa mayor eficiencia de remocin en extractos celulares en comparacin al uso de clulas completas.2 El mecanismo de ruptura requiere de la participacin de un co-sustrato, mediadores y el colorante azo. En cada paso se dan reacciones enzimticas encargadas de la reduccin. En primer lugar, el co-sustrato en estado reducido que se oxida por accin enzimtica. Estas

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enzimas que actan oxidando el sustrato, reducen a los mediadores que se encuentran en estado oxidado. Los mediadores pueden ser compuestos de flavina como son la Flavina Adenina Dinucletido, la Flavina Adenina Mononucletido y la riboflavina, as como compuestos quinnicos como son la antraquinona 2,6-disulfonada (AQDS), antraquinona2-sulfonada (AQS). Los mediadores son reducidos por enzimas no especficas convirtindose en el primer aceptor de electrones del co-sustrato que es el donador. Finalmente los electrones son qumicamente transferidos al colorante azo como aceptor terminal de electrones con la consecuente regeneracin del mediador.2 Un factor importante en los mecanismos de remocin de color, es el tipo de respiracin que llevan a cabo los microorganismos. Bajo condiciones anaerobias existen varios tipos de respiracin clasificados de acuerdo al aceptor final de electrones, entre los que se encuentran la acetognesis, desnitrificacin y reduccin del sulfato. Cada uno de estos procesos, tolera la presencia de diferentes concentraciones de oxgeno; tal es el caso de la nitrificacin y la sulfato reduccin, cuyos microorganismos pueden sobrevivir y desarrollarse en condiciones anxicas. Las bacterias metanognicas por el contrario, necesitan condiciones de anaerobiosis ms estrictas para su supervivencia.2 Bacterias anaerobias facultativas en bajas concentraciones de oxgeno y una fuente de carbono fcilmente biodegradable como la glucosa, reducen el nitrato a nitrgeno gaseoso o a xido nitroso (N2O) y el xido ntrico (NO) por un + proceso de desnitrificacin en el que intervienen enzimas nitratoreductazas presentes en bacterias anaerobias facultativas. Cuando los sulfatos son los aceptores de electrones, se lleva a cabo un proceso de respiracin que comienza con la adenilacin del sulfato para formar adenosina 5fosfosulfato (APS), el cual es reducido por una enzima APS reductaza a sulfito (SO3 -2). En presencia de una fuente de carbono donadora de electrones el ATP requerido es proporcionado por la fermentacin del sustrato de carbono. En el proceso, los electrones son transportados de las enzimas hidrogenasas a las enzimas APS reductasas que conjuntamente con la sulfito reductasa concluyen la reduccin del sulfato a sulfuro de hidrgeno (H2S).2

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3. OBJETIVOS

Objetivo General Evaluar la capacidad de degradacin de los colorantes textiles eliminados en aguas residuales empleando cepas bacterianas.

Objetivos Especficos Identificar el crecimiento de cepas bacterianas en un medio colorante reportado por Barragn (2004) Seleccionar microorganismos capaces de remover el colorante ndigo. Comparar la capacidad en la degradacin de los colorantes por las diferentes cepas a usar.

4. METODOLOGA

Reactivacin de cepas Para la reactivacin de las cepas se usar el medio colorante reportado por Barragn (2004) cuyos componentes son 20g/L de agar-agar, 5g/L de colorante, 0.007g/L de NaCl, 0.004g de CaCl2*2H2O, 0.002g/L de MgSO4*7H2O, 0.028g/L de K2HPO4, 0.028g/L de KH2PO4.

Seleccin de cepas para la evaluacin Para la seleccin de cepas bacterianas, se evaluar el crecimiento de todas las cepas en un medio mineral estril. Se evaluar una concentracin de colorante de 200ppm. Para dicha concentracin de 200ppm de colorante la composicin del medio ser: 20g/L de agar-agar, 0.007g/L de NaCl, 0.004g de CaCl2*2H2O, 0.002g/L de MgSO4*7H2O, 0.028 g/L de K2HPO4, 0.028 g/L KH2PO4, 10g/L de extracto y 5g/L de peptona. Una vez preparado el medio se proceder a eliminar cualquier microorganismo que pueda contaminar el medio (autoclavar). Seguidamente se realizar la siembra por estras de las cepas a usar. Se incubar a una temperatura de 35C y se evaluar el crecimiento de forma cualitativa durante 5 das.

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Para la seleccin de las mejores cepas, se comparar el crecimiento, teniendo como control positivo el crecimiento de las cepas en los medios usados para reactivacin. Una vez seleccionadas las mejores cepas se proceder a sembrar estas en el medio colorante reportado por Barragn 2004 modificado. La composicin de medio a usar ser: 0.007g/L de NaCl, 0.004g de CaCl2*2H2O, 0.002g/L de MgSO4*7H2O, 0.028g/L de K2HPO4, 0.028g/L de KH2PO4, 10g/L de extracto, 5g/L de peptona y los 0.2g/L de colorante. Esta muestra se mantendr en agitacin constante de 200 rpm y 35C durante 72 horas tiempo en el cual se dar lectura a su respectiva absorbancia.

Seleccin de longitud de onda de mayor absorcin para el colorante. Para conocer la longitud de onda mxima para el colorante, se prepararn soluciones de colorante a diferentes concentraciones de 4 a 40 ppm. Se realizara un barrido completo de longitudes de onda para identificar el mximo de absorcin. Una vez obtenido el de mayor absorcin para el colorante, se medir a esa longitud de onda diferentes concentraciones de colorante, por duplicado, permitiendo obtener una ecuacin de la lnea recta para calcular la concentracin en ppm presentes en la muestra determinada.

5. RESULTADOS

Seleccin de longitud de onda de mayor absorcin para el colorante azul. Se determinaron los espectros de absorcin y las curvas de calibracin para el colorante y la muestra textil con el fin de determinar la concentracin residual del colorante durante la cintica de remocin. La figura 5.1 muestra el espectro de absorcin completo para el colorante azul en el cual se escogi el pico ms alto pues en este hay mayor susceptibilidad.

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7 6 5 4 3 2 1 0 666381536367491302381666361497288664468546372485301

absorbancia

longitud de onda

Figura 5.1Espectro de absorcin completo para el colorante azul

Se determin la longitud de onda mxima a la cual se realizaron las lecturas de la absorbancia. Para la muestra de colorante azul se escogi 590nm y para la muestra textil se eligi 650nm. Calculo de la curva de calibracin para el colorante azul Haciendo variar la concentracin de colorante se pudo obtener la curva de calibracin.

1,4

Concentracin Absorbancia (ppm) (nm) 40 1.193 30 0.969 20 0.655 10 0.324 4 0.139

concentracion (ppm)

1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 10 20 30 Absorbancia (nm) 40 50

A=0.03497560976 B=0.02985694184 r=0.9976180722

Abs = 0.035 + 0.030*concentracin(C)

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Reactivacin de cepas Se trabaj con 22 cepas bacterianas extradas de las lagunas facultativas de Albarrancho y en filtros contaminados con pesticidas, para la reactivacin de estas cepas se uso medio colorante reportado por Barragn 2004.

Seleccin de cepas para la evaluacin Se sembraron las 22 cepas en cajas petri y se evalu cualitativamente el crecimiento de estas en el medio usado Barragn 2004. La tabla 5.1 describe si hubo o no crecimiento de los diferentes microorganismos.

Cepa 2A2 3A2* A21 B31 1L2-1 B32 X-219 F31 4L-21` 6L3`-1 A24-1

Crecimiento poco no poco no poco poco no no no poco poco

Cepa 3A2 6L3` 1B 6L3-X 2A1-1 3A21 3A1-22 4L-XX B12 6L3`` 624-1

Crecimiento no poco poco poco poco no poco poco no poco no

Tabla 5.1 evaluacin del crecimiento de las 22 cepas en medio colorante Barragn 2004

De las 22 cepas que se evaluaron solo crecieron algunas, se pudo observar que unas crecieron mas que otras pero sin degradar ptimamente el color. Primeramente se evalu una concentracin de 5g/L de colorante como lo reporta el medio Barragn 2004 como no se observo un notable crecimiento de microorganismos debido a la alta concentracin del colorante se probo con una concentracin de 200ppm. De las 22 cepas sembradas se escogi aquellas que presentaron el mayor crecimiento y se las sembr en el medio colorante Barragn 2004 usando la concentracin de 200ppm.

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Solo algunas cepas mostraron un crecimiento considerable en el medio con la nueva concentracin de 200ppm y las cepas seleccionadas fueron: 2A1-1 (extrada de las lagunas facultativas de Albarrancho) 3A1-22 (extrada de los filtros contaminados con pesticidas) B32 (extrada de las lagunas facultativas de Albarrancho)

A)

B)

C)

Figura 5.2 crecimiento de microorganismos en medio colorante con concentracin de 200ppm a los 5 das. A) B32; B) 2A1-1; C) 3A1-22.

Como se puede observar en la figura 5.2 el crecimiento de los microorganismos es notable como tambin la remocin del color. La cepa B32 creci en forma cremosa agrupndose en un solo lado del medio y presentaba un color beige. La cepa 2A1-1 creci en gran parte del medio de forma cremosa y presento un color beige La cepa 3A1-22 mostro un crecimiento efectivo ya que se extendi por casi todo el medio adems de adoptar un color beige. Se usaron las tres cepas para evaluar su eficiencia en la remocin del colorante de concentracin igual a 200ppm usando el medio reportado por Barragn 2004 modificado.

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La tabla 5.2 muestra los resultados de remocin de colorante obtenidos por biodegradacin posterior a las 72 horas de evaluacin, 200 rpm, 35C.

Tratamiento usado 2A1-1 B32 3A1-22

Concentracin Inicial(ppm) 29.5 26.4 26.9

Concentracin Final (ppm) 9.47 10.83 7.33

Porcentaje de remocin (%) 67.9 58.98 72.75

Tabla 5.2 resultados usando los 3 tratamientos

Las muestras que se obtuvieron a las 72 horas fueros centrifugadas durante 5 minutos y 10000 rpm para leer su absorbancia ya que estas tenan presencia de biomasa colorida precipitada como tambin biomasa en suspensin. La siguiente figura muestra el equipo que se uso para lograr que las muestras estn a 35C y 200rpm

Figura5.3 montaje experimental

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Luego de haber transcurrido ms de 4 das las muestras obtuvieron un color amarillento (fig.5.4), perdiendo por completo el color azul que posean inicialmente. En estas muestras se pudo percibir un olor desagradable como tambin un cambio en el color de la biomasa precipitada ya que de un color azul paso a un amarillo mas consistente.

3A 1-22 2A1-1

B32

Figura5.4 comparacin de las 3 muestras

El tratamiento con la cepa 2A1-1 tardo ms tiempo en cambiar su color sin embargo su color fue ms claro que el obtenido en el tratamiento con la cepa B32. A continuacin se hizo una comparacin entre las cepas 2A1-1 y 3A1-22.

2A1-1

3A1-22

Figura5.5 comparacin muestras con cepas 2A1-1 y 3A1-22

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De acuerdo a la figura 5.5 se observ que la cepa 3A1-22 fue la que removi el color a un tono mas claro comparado con los dems tratamientos. Por lo tanto se realizo el mismo ensayo usando la biomasa obtenida por el tratamiento con esta cepa para observar su comportamiento en la degradacin de aguas residuales textiles. Se uso el mismo medio Barragn 2004 pero con algunas variaciones: 0.007g/L de NaCl, 0.004g de CaCl2*2H2O, 0.002g/L de MgSO4*7H2O, 0.028g/L de K2HPO4, 0.028g/L de KH2PO4, 5g/L de extracto. Y se procedi de la misma manera se sembr dicha biomasa se dejo a 35C y 200rpm. Se dio lectura a la absorbancia a 650nm a las 72h. A las 72 horas la muestra presento una notable variacin en cuanto a su color ya que este se torno un azul menos intenso adems que se precipitaron partculas coloreadas tal como se observa en la figura 5.6 Pasado el tiempo de observacin luego de cortar la agitacin y dejndolo a temperatura ambiente la muestra de agua textil tom un color mas verduzco adems de tener mas biomasa precipitadas de un color azul. La figura 5.7 muestra la variacin del color a las 72h y pasado ese tiempo.

72

135

Figura 5.6 muestra textil pasadas las 72h. las 72h y 135 h

fig5.7 muestras a

Al emplear el tratamiento con la cepa 3A1-22 a la muestra coloreada se precipito cierta cantidad de biomasa coloreada que presentaba mayor consistencia pero al usar el

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tratamiento en la muestra de agua residual textil se formo biomasa precipitada en mayor cantidad e inconsistente. Calculo de la constante cintica para muestra de agua residual textil

Tiempo (h) 0 72 135

Absorbancia (nm) 1.735 1.420 1.380

lnAbs/Abs0 0 -0.2004 -0.2289

0 0 -0,05 lnAbs/Abs0 50 100 150

-0,1
-0,15 -0,2 -0,25 y = -0,001x - 0,024 R = 0,868

-0,3

tiempo (h)

Suponiendo que la cintica es de primer orden

-k=B

la constante cintica es k= 0.001 horas-1

6. CONCLUSIONES

El presente trabajo de investigacin tuvo como objetivo seleccionar cepas bacterianas con capacidad de remover el colorante textil ndigo. Para alcanzar el objetivo, se sembraron cepas bacterianas extradas de suelos contaminados con pesticidas, de estas cepas se escogieron las que mostraron un aumento en su poblacin en el medio reportado por

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Barragn 2004. De las muestras cuya capacidad de remocin de color fue evaluada mediante ensayos. La cepa con mayor capacidad de remocin de los colorantes en estudio, fue seleccionada.

El mtodo biolgico ms efectivo para la remocin del colorante ndigo fue realizado con la cepa 3A1-22 con una remocin de color de 72.5%.

En los resultados obtenidos en los diferentes tratamientos puede notarse como la remocion varia de acuerdo al tratamiento dado y tambien se aprecia que ninguno de los tratamientos es del todo efectivo con el colorante como tambien con la muestra de agua residual textil (tabla 5.3).

Dado que durante el primer ensayo solo se adiciono el colorante como fuente de carbono y nitrgeno puede que el metabolismo se halla visto inhibido o retrasado, impidiendo la observacin de decoloracin del medio en el periodo evaluado.

La suplementacin nutricional con una fuente de carbono adicional como la peptona fue necesaria para inducir la remocin del colorante por accin enzimtica de los microorganismos, ya que en ausencia de este compuesto no se pudo observar crecimiento alguno por lo tanto no hubo variacin en el color.

La cepa 3A1-22 fue la que mostro mayor capacidad de remocin del colorante esta cepa fue extrada de filtros contaminados con pesticidas, la remocin variara de acuerdo a la capacidad que estos posean para producir o no enzimas capaces de degradarlos as como de la resistencia que tengan, ya que estas sustancias son toxicas para la mayora de las clulas.

Las constantes de remocion permiten evaluar de forma directa el tiempo que tardara el microorganismo en retirar el colorante del medio, asi como permite determinar que tratamiento es mas eficiente en cuanto a velocidad de remocin. La constante cintica obtenida para la muestra de agua residual textil fue 0.001 horas-1 Barragn y colaboradores (2007) reportan constantes de degradacin de valores de 0.0075 dias-1 al usar como

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tratamiento una cepa de Pseudomonas sp., y 0.0037 dias-1 con Morganella sp., estos valores son inferiores a los encontrados durante el experimento con 3A1-22 estos valores variaran de acuerdo a las sustancia a degradar, su complejidad, la disponibilidad para el microorganismo, incluso variaran de acuerdo a los sustituyentes que esten presentes en los anillos fenolicos, que componen los colorantes.

7 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. http://148.206.53.231/UAMI14885.pdf 2. http://www3.espe.edu.ec:8700/bitstream/21000/895/1/T-ESPE-029600.pdf 3. http://remocion/.20-13 cap pdf 4. 5. http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/08/08_1030_Q.pdf http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis217.pdf

6. http://www.revistavirtualpro.com/files/inmovilizacion.pdf 7. Barragn, B., 2004, degradacin de colorantes textiles por cultivos bacterianos, tesis de maestra. Universidad de Salamanca Espaa. 8. Bock D y Rott U. (2003). Co-fermentation of Colored Concentrates from the Textile Processing Industry. Journal of Environmental Science and Health, 18891901. 9. Coughlin M. K. B. (1999). Degradation of azo dyes containing aminonaphthol by Sphingomonas sp strain 1CX. Journal of Industrail Microbiology & Biotechnology, 341-346. 10. Dos Santos, A., Bisschops I., Cervantes, F. y Van Lier, J. (2004). Effect of different redox mediators during thermophilic azo dye reduction by anaerobic granular sludge and comparative study between mesophilic (30C) and thermophilic (55C) treatments for decolourisation of textile