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CALIBRAES EM ESPECTROFOTOMETRIA NO IPQ

O. Pellegrino, L. Eusbio Departamento de Metrologia, Instituto Portugus da Qualidade
RESUMO

Atravs de exemplos das calibraes dos filtros em transmisso de opacmetros, cujo Controlo Metrolgico da competncia do IPQ, e de espectrofotmetros, de grande importncia nos laboratrios de anlises qumicas e bioqumicas e, por outro lado, das calibraes em comprimento de onda destes espectrofotmetros, este texto apresenta as actividades em calibraes desenvolvidas no Laboratrio de Fotometria, Radiometria e Radiofrequncias (LFR), no Laboratrio Central de Metrologia do IPQ no domnio da Espectrofotometria. As ofertas e capacidades do LFR, para responder s procuras dos laboratrios nacionais de anlise qumica e de equipamentos pticos so tambm apresentadas. Os balanos de incertezas associadas ao factor de transmisso, largura de banda espectral e aos comprimentos de onda para as respectivas calibraes so avaliados igualmente.
ABSTRACT

Through the examples of the calibrations of transmittance filters of opacimeters, the Metrological Control of whom is under the competence of the IPQ, and the spectrophotometers transmittance scale, instruments that are of great use in chemical and biological analyses laboratories, on one hand and the calibration in wavelengths of spectrophotometers, on the other hand, this paper displays the calibration activities performed at the Laboratory of Photometry, Radiometry and Radiofrequencies (LFR), at the IPQs Laboratrio Central de Metrologia in the field of Spectrophotometry. The LFRs offers and capacities to meet the demands of the national laboratories in chemical analysis and in optical instruments are displayed too. The uncertainties budgets associated to the calibrations of the transmittance, the spectral bandwidth and the wavelength are evaluated as well.

1. Espectrofotometria
Uma maneira de caracterizar qumica e estruturalmente uma amostra a submeter ao fluxo duma radiao electromagntica de comprimento de onda , i() e analisar o fluxo transmitido atravs dela ou reflectida por ela. A espectrofotometria consiste em medir os fluxos transmitidos e reflectidos dessa amostra, t() e r(), respectivamente, a fim de apresentar os respectivos factores de transmisso e reflexo: T = r()/i() e R = r()/i(), cuja anlise, em funo de , caracterizar a amostra. Portanto necessrio calibrar os espectrofotmetros primeiro, i.e. necessrio determinar a relao entre a leitura de e ou verdadeiro e determinar a relao entre a leitura de T (ou R) e o verdadeiro T (ou R). Essas relaes so determinadas aps estudo e controlo dos parmetros de funcionamento do instrumento de medio, de condicionamento da amostra em medio e de mtodo de aquisio e tratamento dos dados experimentais. Neste trabalho, os parmetros do espectrofotmetro, do condicionamento da amostra e da obteno e do tratamento dos dados experimentais dizem unicamente respeito s medies de factores de transmisso de amostras apresentando uma transmisso difusa e uma retoreflexo desprezadas. Por um lado, o tipo de calibrao destas

configuraes dos espectrofotmetros corresponde a uma quantidade importante de utilizaes efectuadas com estes instrumentos de medio. Por outro lado, a simples configurao dos espectrofotmetros considerada aqui permite evidenciar mais facilmente os parmetros envolvidos nas suas calibraes. As calibraes apresentadas neste trabalho interessam para os instrumentos de anlise da Qumica ou da Biologia, com aplicaes em domnios to diferentes como a Sade ou o Ambiente. Por exemplo, as amostras podem ser diludas em solues numa clula para medio e anlise do factor de transmisso. Para anlise quantitativa, por exemplo, para determinar a concentrao das amostras, c, necessrio conhecer o percurso percorrido pela radiao na clula, L, sendo c proporcional ao coeficiente de absoro, 1 T K = ln( ) (1), L 100 onde T o factor de transmisso (lei Beer Lambert), expressa em percentagem do fluxo incidente. A amostra contida na clula pode tambm ser um gs. Por exemplo, o opacmetro determina a quantidade de fumo presente no escape de veculos com motores a gasleo a partir da medio de K. Tais instrumentos so calibrados com filtros neutros de factor de transmisso cuja calibrao apresentamos neste trabalho. Apresentamos tambm a calibrao de

padres para diferentes comprimentos de onda e de padres para o factor de transmisso. A partir dos certificados de calibrao destes padres, efectuamse correces necessrias aplicando as incertezas associadas ao resultado da medio com o espectrofotmetro a calibrar.

2. Dispositivo Experimental
Os espectrofotmetros do Laboratrio Central de Metrologia (LCM) no Instituto Portugus da Qualidade so constitudos por uma fonte de radiao, um sistema dispersivo da radiao, um compartimento onde est colocada a amostra e um outro compartimento onde se encontra(m) o(s) detector(es). Os resultados apresentados neste texto foram obtidos com o espectrofotmetro Lambda 950 da PerkinElmer, cujos elementos constitutivos so apresentados na Figura 1.

com um fotodetector de PbS, arrefecido por efeito Peltier. A incertezapadro relativa associada exactido fotomtrica inferior a 0,40 % do valor de T. Para os valores de T apresentados neste trabalho, a incertezapadro relativa associada no linearidade do detector, na banda do UV-visvel, inferior a 0,07 % do valor de T, e, na banda do NIR, inferior a 0,10 % do valor de T. A incertezapadro associada ao factor de transmisso devido luz parasita, para a gama de comprimentos de onda -4 considerada, inferior a 1,4410 %. O espectrofotmetro tem uma configurao de duplo feixe, i.e. sada do monocromador, o feixe dirigido alternativamente, antes de ser detectado, para a amostra, sendo designado por feixe amostra, ou para uma zona do compartimento amostra onde no se encontra a amostra, constituindo um feixe de referncia. Aps a sua aquisio, os espectros experimentais so divididos por uma linha de base, medida antes de cada srie de medies, permitindo reduzir os desvios da fonte de radiao e do detector. Para reduzir as diferenas entre as eficcias das pticas dos dois feixes, cada medio na amostra, Ta*, corresponde sequncia seguinte: medio com feixe tapado, Te, medio sem amostra, T0,1, medio com amostra, Ta, e medio sem amostra, T0,2 [1]: Ta* = 100 {Ta Te} / {(T0,1 + T0,2)/2 Te} (2). Da relao (2) e dos desvios-padro de cada medio Ti, deduz-se o desviopadro associado a Ta* [2], que constituir a avaliao pelo mtodo de tipo A da incertezapadro combinada associada a Ta* [3]. Cada sequncia de medies constituda de 3 ciclos de medies. O programa informtico de aquisio e de tratamento dos dados do espectrofotmetro, o UVWinLab da PerkinElmer, permite obter o valor de T ou numa gama de comprimentos de onda, , ou em valores de seleccionados. esta opo que utilizada para a calibrao de factores de transmisso.

Figura 1 Esquema do Espectrofotmetro Lambda 950 da Perkin Elmer instalado no Laboratrio de Espectrofotometria do LCM - IPQ.

Este instrumento possui como fonte de radiao uma lmpada de quartz tungstnio com halognio, para emitir radiaes da banda do visvel e do infravermelho prximo (NIR) e uma lmpada de deutrio para a emisso de radiaes na banda dos ultravioletas (UV) do espectro. O sistema dispersivo um duplo monocromador de rede hologrfica, a montagem do tipo Littrow, com 1 440 linhas por mm na gama UV-visvel e 360 linhas por mm na gama do NIR, correspondendo a disperses recprocas lineares prximas de 1 nm/mm e 4 nm/mm, respectivamente. Portanto, na gama UV/visvel, a largura efectiva de banda, , quase igual largura da fenda, w, e, na gama NIR, ~ 4 w. A incerteza padro associada resoluo em comprimento de onda de 0,01 nm, na banda UV/visvel e de 0,06 nm, na banda do NIR. As incertezas padro associadas exactido so de 0,06 nm e de 0,23 nm, respectivamente. As incertezas padro de reprodutibilidade em comprimento de onda so respectivamente de 0,01 nm e 0,02 nm. A anlise da radiao UV e visvel efectuada com um fotomultiplicador de multialcali quartz R6872 da Hamamatsu, enquanto a radiao NIR analisada

3. Calibrao em comprimentos de onda

Esta calibrao a primeira etapa da calibrao dum espectrofotmetro. Os equipamentos comerciais de qualidade elevada possuem uma lmpada de descarga a gs cuja posio das linhas de emisso so utilizadas para a calibrao em comprimento de onda, . No Laboratrio de Fotometria, Radiometria e Radiofrequncias (LFR) do IPQ, com a sua lmpada de descarga de deutrio, o Lambda 950 da PerkinElmer contm uma opo que efectua uma tal calibrao entre 0 nm e a linha situada a 656,1 nm, na parte UV/visvel e entre 0 nm e a linha a 1 312,2 nm, no NIR. Os equipamentos sem lmpada de descarga tm de utilizar padres de comprimentos de onda que podem ser solues ou slidos, com picos de absoro resolvidos a posies conhecidas. Devido sua comodidade de utilizao, o LFR possui padres de comprimentos slidos. Trata-se de monocristais de granada de trio e alumnio (YAG) 3+ dopados em ies Nd , fabricado pela McCrone Scientific Ltd, com certificado de calibrao do

National Physical Laboratory (NPL). Estas amostras apresentam uma superfcie de 33 mm 10 mm, montadas num quadro de (56 mm 12 mm 12 mm), com uma abertura efectiva de (23 mm 7 mm). Para a determinao dos picos de absoro dos padres, efectuam-se espectros volta das posies esperadas com a largura de fenda indicada no certificado de calibrao, i.e. w = 0,5 nm. Para estimar a influncia da quantidade de ciclos de medies sobre as posies dos picos de absoro, a Tabela 1 compara estas posies para espectros adquiridos com 3 ciclos de medio, s com 1 ciclo de medio e s do certificado de calibrao original, certif.
Tabela 1: Influncia dos nmeros de ciclos sobre a posio dos picos de absoro 3 ciclos / certif 1 ciclo 3 ciclos 1 ciclo / (nm) (nm) (nm) (% certif) (% certif) 253,6 254,9 353,92 481,45 588,45 253,68 255,04 354,04 481,53 588,63 253,62 254,99 354,01 481,5 588,63 0,03 0,05 0,03 0,02 0,03 0,01 0,04 0,03 0,01 0,03

4. Calibrao fotomtrica
Uma vez determinadas ou conhecidas as componentes de incertezas associadas ao comprimento de onda, luz parasita, no linearidade dos detectores, exactido fotomtrica e ao comprimento de onda, as componentes avaliadas pelo mtodo tipo B da incertezapadro fotomtrica pode ser expressa como incertezapadro combinada desses diferentes termos. Por serem de manuseamento e armazenamento prticos, os padres fotomtricos do LFR so materiais slidos, filtros de vidro de densidade ptica neutra, i.e. cujo valor de factor de transmisso, T, independente de , com uma boa estabilidade em temperatura e no tempo. Essas amostras, com a mesma dimenso que os padres para comprimento de onda, foram fornecidos e calibrados pelo NPL. Para estimar a influncia da limpeza das amostras sobre o valor do factor de transmisso, a Tabela 3 compara estes valores para espectros adquiridos antes e aps a limpeza da amostra, com sempre o mesmo procedimento de limpeza por jacto de N2 gasoso. A amostra um padro apresentando um valor de factor de transmisso mdio.
Tabela 3: Influncia da limpeza da amostra sobre o factor de transmisso. Ts/N2 uA(Tc/N2) Tc/N2 uA(Ts/N2) (nm) (%) (%) (%) (%) 400 500 600 700 57,00 58,84 57,40 59,58 0,012 0,013 0,009 0,011 57,18 58,84 57,32 59,47 0,007 0,005 0,007 0,006

Uma sequncia de medio para a determinao dos picos de absoro necessita portanto de 3 ciclos de medio. Daqui para adiante, os resultados apresentados correspondem a espectros com 3 ciclos de medio. Para estimar a influncia da limpeza das amostras sobre a posio dos picos de absoro, so comparadas estas posies para espectros adquiridos antes e aps a limpeza da amostra. A limpeza consiste em passar a amostra, antes da sua introduo no compartimento de medio do espectro-fotmetro por um jacto de N2 gasoso, com nveis de O2, H2O e outros gases, com concentraes inferiores a 1 ppm,. Por exemplo, para o pico de absoro situado em 748,20 nm, a limpeza da amostra reduz o erro relativo de 0,040 % para 0,036 %. Como a influncia do nmero de ciclos de medio, a da limpeza da amostra diminui os erros absolutos da ordem de grandeza da incertezapadro indicada no certificado de calibrao do padro. A Tabela 2 apresenta o resultado da calibrao em comprimento de onda para um padro mais recentemente adquirido, em 2006, com o resultado do certificado de calibrao correspondente e as incertezas expandidas (k = 2).
Tabela 2: Resultado da calibrao do mais recente padro de comprimento de onda do LFR. LFR (nm) ULFR (nm) Certif (nm) 253,70 254,95 354,01 481,56 588,66 748,46 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 253,62 254,98 354,00 481,46 588,62 748,45

Verifica-se que a limpeza da amostra modifica o valor do factor de transmisso, T, e reduz a componente tipo A da incertezapadro associada, uA, pelo que se efectua sistematicamente a limpeza das amostras antes da medio de T.

u A (T ) =
2 2

10 { 2 ( )+ 2 uA T a (T 100 T 0)
2

(3)

T T (100 ) u 2A (T 100) + (1 + (100 ) ) u 2A (T 0)}

Devido data da ltima calibrao das amostras, necessrio procurar uma influncia dos parmetros do espectrofotmetro sobre os valores da componente uA de incertezapadro de T, no sentido de serem optimizados. Assim, na Tabela 4a, apresenta-se uma comparao dos valores da componente uA obtidos por diferentes valores da largura w, para um tempo de resposta do detector fixo e igual a 0,8 s.

Tabela 4a: Componente tipo A, uA, da incerteza do factor de transmisso em funo da largura de fenda w, para um tempo de resposta do detector t = 0,8 s. uA(T) (%); uA(T) (%); uA(T) (%); w = 5 nm w = 2 nm w = 1 nm (nm) 400 500 600 700 0,007 0,005 0,007 0,006 0,005 0,003 0,008 0,004 0,005 0,004 0,002 0,006

Portaria, pode ler-se que o valor mais baixo para o -1 EMA de 0,15 m . A Tabela 6 apresenta o resultado da calibrao fotomtrica de um filtro de opacmetro, de comprimento de percurso ptico efectivo L = 0,43 m, com as correspondentes incertezas expandidas ao nvel de k = 2. Essas incertezas foram deduzidas da relao (1) dando origem relao:

Na Tabela 4b, apresenta-se tambm uma comparao dos valores de uA para diferentes valores do tempo de resposta do detector, t, para uma largura fixa e igual a 5 nm.
Tabela 4b: Componente tipo A, uA, da incerteza do factor de transmisso em funo do tempo de resposta do detector t, para uma largura de fenda w = 5 nm. uA(T) (%); uA(T) (%); uA(T) (%); (nm) t = 0,8 s t = 1,4 s t = 2,2 s 400 500 600 700 0,007 0,005 0,007 0,006 0,004 0,005 0,004 0,004 0,038 0,029 0,019 0,022

U (K ) =

U (T ) K U (T ) = LK T
(nm) 400 500 600 700 T (%) 64,95 64,58 64,37 64,41 U (%) 0,01 0,01 0,03 0,02 K (m-1) 1,004 1,017 1,025 1,023 U(K) (m-1) 0,001 0,000 0,001 0,001

(4)

Tabela 6: Resultado da calibrao de filtro de opacmetro.

Esta Tabela apresenta portanto a adequao das capacidades do LFR e do IPQ para as operaes do Controlo Metrolgico dos filtros de opacmetros.
REFERNCIAS

Estas Tabelas demonstram uma mais forte dependncia de uA com o tempo de resposta do detector do que com a largura da fenda. Tendo em conta o facto de que os valores de T aumentam com os valores de w, os valores optimizados dos parmetros do espectro-fotmetro correspondem a w = 5 nm e t = 0,8 s. A Tabela 5 apresenta o resultado da calibrao fotomtrica para os padres designados por 1, 2, 3 e 4, correspondentes a diferentes valores de factor de transmisso e as incertezas expandidas ao nvel de k = 2.
Tabela 5a: Resultado da calibrao dos padres fotomtricos 1 e 2 do LFR.
(nm) 400 500 600 700 T1 (%) 70,51 71,72 70,63 71,98 U1 (%) 0,02 0,02 0,02 0,02 T2 (%) 29,06 31,22 30,26 38,41 U2 (%) 0,01 0,01 0,01 0,01

[1] J. Basti, B. Tubiana, A. Janest Etude de solutions talons pour le contrle des spectrophotomtres, Bulletin BNM, octobre 1980. [2] Guia para a expresso da incerteza de medio nos Laboratrios de Calibrao, 2 Ed., IPQ, 2005. [3] O. D. D. Soares, J. L. Costa Spectrophotometers intercomparison for spectrocolorimetric scale harmonization, Review of Scientific Instruments, Vol. 70, N12, 4471, 1999.

Tabela 5b: Resultado da calibrao dos padres fotomtricos 3 e 4 do LFR.

(nm) 400 500 600 700 T3 (%) 9,712 11,09 10,41 16,57 U3 (%) 0,004 0,003 0,008 0,009 T4 (%) 2,062 3,412 3,429 7,827 U4 (%) 0,002 0,001 0,005 0,006

5. Calibrao de Filtro de Opacmetro

A Portaria n 797/97 de 1 de Setembro, definindo o Regulamento do Controlo Metrolgico de Opacmetros, cuja competncia atribuda ao IPQ, define os valores de erros mximos admissveis (EMA) do coeficiente de absoro dos filtros. Nessa