ARMACODINAMICA

Mecanismos de ao dos frmacos e relao entre sua concentrao e seu efeito

Elliott M. Ross e Terry P. Kenakin

este capitulo oferecemos uma introduo ao conceilo de recep tores, famitias estruturais e funcionais de receptores e interrelao entre as diversas vias de sinalizao ativadas pela ocupao dos receptores. Esses conceitos introdutrios so ampliados nos capitulos subseqiientes. detalhando a estrutura e a funo dos re ceptores para grupos especifwos de frmacos. Na ultima pane deste capi'tulo, apresentamos meios de quantificar a ativao dos recep tores pelos agonistas e o bloqueio pelos antagonistas. A relevncia funcioiial dos agonistas parciais e antagonistas inversos tambm descrita como preldio para o desenvolvimento intencionai defrmacos com inecnicas diferentes mediante estratgias combinatrias clssicas ou novas. A farmacodinmica pode ser definida como o esiudo dos efeitos bioqumicos e fisiolgicos dos frmacos e de seus mecanismos de ao. Os objetivos da anlise da ao dos frmacos so os de delinear as interaes qumicas ou fsicas enire o frmaco e a clulaalvo e caraclerizar toda a seqncia e abrangncia das aes de cada frmaco. Uma anlise lo completa fornece as bases lanto para a utilizao leraputica racional do frmaco, como para projetar novos e melhores agentes terapuiicos. A pesquisa bsica em farmacodinmica tambm proporciona uma compreenso fundamental da regulao bioqumica e fisiolgica. MECANISMOS DE AO DOS FRMACOS Os efeiios da maioria dos frmacos resultam de sua interao com os componenies macromoleculares do organismo. Tais interaes alteram a funo do componente pertinenle. iniciando assim as alteraes bioqumicas e fisiolgicas caractersticas da resposta ao frmaco. O termo receptor se refere ao componente do organismo com o qual o agente quimico presumivelmente interagiria. A afirmao de que o receptor de um frmaco pode ser qualquer compo nente macromolecular funcional do organismo tern vrios corolrios fundamentais. Um que um frmaco potencialmente capaz de alterar a velocidade de qualquer funo corporal. Outro que os frmacos no criam efeitos. mas em vez disso modulam funes fisiolgicas intrnsecas.

o de outros constituintes celulares tambm podem ser exploradas. Desse modo, os cidos nuclicos so importantes receptores de frmacos. especialmente para os quimioterpicos antineopisicos. Um grupo particularmente importante de receptores de frmacos so as proteinas que normalmente servem como receptores de ligandos reguladores endgenos (p. ex., hormnios. neurotransmissores). Muitos frmacos agem nesses receptores fisiolgicos e muitas vezes so particularmente seletivos, porque os receptores fisiolgicos so especializados em reconheeer e responder a molculas isoladas de sinaiizao com grande seletividade. Os frmacos que se ligam aos receptores fisiolgicos e mimetizam os efeitos reguladores dos compostos endgenos de sinalizao so denominados agonistas. Outros frmacos se ligam aos receptores sem efeito regulador, porm sua ligao bloqueia a ligao dos agonistas endgenos. Ainda assim esses compostos podem exercer efeitos teis pela inibio da ao de um agonista (p. ex., pela competio com os agonistas pelos locais de ligao) e so denominados antagonistas. Os agentes apenas parcialmente eficazes como agonistas so denominados agonistas parciais e aqueles que estabilizam o receptor em sua conformao inativa so denominados agonistas inversos (ver adiante, "Quantificao das interaes frmaco-receptor e efeito produzido"). A ligao dos frmacos aos receptores pode envolver todos os tipos conhecidos de interaes inicas, pontes de hidrognio, hidrofbicas. de van der Waals e covalente. Na maioria das interaes entre os frmacos e os receptores provvel que ligaes de vrios tipos sejam importantes. Se a ligao for covalente. a durao da ao do frmaco costuma ser. porm no necessariamente. prolongada. As interaes no-covalentes de alta afinidade tambm podem parecer fundamentalmente irreversiveis. Relaes entre estrutura e atividade e planejamento de frmacos. Tanto a afinidade de um frmaco pelo seu receptor como a sua atividade intrnseca so determinadas pela sua estrutura quimica, relao freqiientemente bastante adstrita. Modificaes relativamente menores na molcula do fmiaco podem levar a grandes alteraes das propriedades farmacologicas. A explorao das relaes entre a estrutura e a atividade em muitas ocasies levou sntese de valiosos agentes teraputicos. Como as alteraes na configurao molecular no precisam alterar igualmente todas as aes e efeitos de um frmaco. s vezes possvel desenvolver um congnere com uma relao mais favorvel entre os efeitos teraputicos e txicos, ou caracten'siicas secundrias mais aceitveis que as do frmaco originrio. Foram desenvolvidos anta gonistas de hormnios ou neurotransmissores com utilidade leraputica por modificaes qumicas da estrutura do agonisia fisiolgico. Pequenas modificaes da estrutura tambm podem produzir efeitos profundos nas propriedades farmacocinticas dos frmacos. 25

Receptores dos frmacos Ao menos do ponto de vista numrico, as proteinas formam a classe mais importante de receptores de frmacos. Os exemplos so os receptores de hormnios, fatores de crescimento e neurotransmissores. as enzimas das vias fundamentais metablicas e reguladoras (p. ex., diidrofolato redutase. acetilcolinesterase). proteinas envolvidas nos processos de transporte (p. ex.. Na+. K+-ATPase). ou protei nas estruturais (p. ex., tubulina). As propriedades especificas de liga-

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Dadus informacs adequadas sobrc as eslruturas molcculares e as aiivi dadcs farmacolgicas de um grupo rclalivamcnie dc congneres, dcve ser possvel idenlificar as propriedades qumicas necessrias para unia ao lima no receptor lamanho. forma, posio e orieniao dos grupos com carga on dos doadores de ponies de hidrognio clc. Os avanos na qumica compulacional. na anlisc cslrulural de compostos orgnicos e nas medidas bioqumicas das aes primrias dos frmacos em scus rcceplores enriqueceram a quamificao das alividades enire a cstrutura e a alividade e scu uso na concepo de frmacos (Kuniz. 1992; Schreiber, 1992). A importncia das intcracs especficas enirc o frmaco e o receptor pode ainda scr avaliada pcla aniise da responsividade dos receptores que sofreram mutacs seletivas em resfduos de aminocidos isolados. Tal informao cst pcrmitindo cada vez mais a otimizao ou o projeto de agentes qumicos qnc podem se ligar a um receptor com alividade. scletividade ou efeito regulador aprimorados. Abordagcns semelhantes baseadas na estrumra tambm so utilizadas para mclhorar as propriedades farmacocinticas dos frmacos ( w Cap. I). O conhccimcnto das eslruturas dos rcccptores e dos complexos frmaco-receptor detcrminados cm resoluo atmica por cristalografia com raios X ou espcctroscopia por ressonncia magntiea nuclear (RMN) ainda mais til na concepo dc ligando. Ironicamentc. os avanos em biologia molecular que contriburam para o planejamento de frmacos inspirados na estrulura tambm geraram fortes buscas, porm inteiramentc aleatrias. por novos frmacos. Ncssa abordagem, enormes bibliotecas de agentes qumicos sintetizados aleatoriamente so gcradas por mcio de sntesc qufmica ou microrganismos manipulados por cngcnharia gcntica. Pesquisa-sc ento essa bibliotcca em busca de agentes farmacologicamcnte alivos utilizando clulas de mamtfcros ou mi crorganismos manipulados por engenharia gentica para exprcssar o receptor dc interesse teraputico e a maquinaria bioqumica associada necessria para a deieco da resposla do receptor. Os compostos ativos inicialmente descobertos por essas buscas alealrias podem ento ser modificados c aprimora dos pelo conhecimento de suas relaes enlre a estrutura e a funo. Locate celularcs de ao dos frmacos. Como os frmacos agem alternando as alividades de seus receptores, os locais nos quais um frmaco age e a extensao dc sua ao so dctcrminados pela localizao e pela capacidadc funcional de seus receptores. A localizao seletiva da ao do frmaco no interior do organismo no depende portanto necessariamente da distribuio seletiva do frmaco. Se um frmaco age em um receptor que apresenta funes comuns maioria das clulas, seus efcitos scro disseminados. Se a funo for vital, o uso do frmaco pode scr particularmente dificil ou arriscado. Apesardisso, um frmaco assim pode scrclinicamentc importante. Os glicosidcos digitlicos. importantcs para o tratamento da insuficincia cardaca, so poderosos inibidorcs de um transporte de processo inico vital para a maioria das cclulas. Como tal. podem causar toxicidadc disseminada c sua margem dc scgurana perigosamente baixa. Outros exemplos poderiam scrcitados. particularmente na readaquimioterapiaantincoplsica. Se um frmaco interage com receptores exclusivos de apenas alguns tipos de clulas diferenciadas. seus efeitos so mais especificos. Teoricamcnte, o frmaco ideal promoveria seu efeito terapulico por esse tipo de ao. Os efeitos colaterais seriam minimizados, mas a toxicidade podcria no ser. Se a funcSo difcrenciada for vital, esse tipo dc frmaco tambm podcria ser muito perigoso. Alguns dos agentes quimicos mais Ictais conhecidos (p. ex., a toxina botulinica) mostram tal especificidade. Deve-se observar tambm que. mesmo que a ao primria do frmaco seja localizada. seus efeitos fisiolgicos conseqentcs podem ser disseminados. Receptores p a r a molculas reguladoras fsiolgicas

Sfo I

rRINCPlOS GKRA1S

ligao de ligandos e um dominio efetor. A estrutura e a funo desses domfnios muitas vezes podem ser deduzidas pela alia resoluo das estruturas das proteinas do receptor e/ou pela anlise do comportamento de receptores intencionalmente modificados. Cada vez mais tambm se pode aprender o mecanismo de acoplamento iniramolecular da ligao do ligando com ativao funcional. A importncia biolgica desses dominios funcionais ainda indicada pela evoluo tanto de diferentes receptores para diversos ligandos que agem por meio de mecanismos bioquimicos semelhanies, como dc miiltiplos receptores para um unico ligando que age por mecanis mos no-relacionados. As aes reguladoras de um receptor podem ser exercidas diretamente em seus alvos celulares, as proteinas efetoras, ou podem scr conduzidas por molculas intermedirias de sinalizao denominadas transdutores. O receptor, seu alvo celular e quaisquer molculas intermedirias so denominados sistema receptor-efetor ou via de transduo de sinal. Freqiientemente. a proteina efetora ce lular proximal no 6 o alvo fisiolgico final, mas em vez disso uma enzima ou uma proteina transportadora que cria, move ou degrada um pequcno metablito ou ion conhecidos como segundo mensageiro. Os segundos mensageiros podem se difundir atravs da clula c conduzir informaes para uma ampla variedade de alvos, que po dem respondcr simullaneamente ao estimulo de um iinico receptor. Os receptores e suas proteinas efetoras e transdutoras associadas tambm agem como integradores de informaes medida que coordenam sinais de vrios ligandos entre si e com as alividades mctablicas das clulas (ver adiante). Essa funo integrativa particularmente evidente quando se considcra que diferentes recep tores para grandes quantidades de ligandos quimicos no-relacionados utilizam relativamente poucos mecanismos bioquimicos para excrcer suas funes reguladoras e que mesmo essas poucas vias podem partilhar molculas comuns dc sinalizao. Uma propriedade importante dos receptores fisiolgicos, que tambm os torna excelentes alvos para os frmacos, que eles podem agir de modo catalitico, sendo por conseguinte ampliftcadores de sinais bioquimicos. A natureza catalitica dos receptores evidente quando o prprio receptor uma enzima. porm todos os receptores fisiolgicos conhecidos so fonnalmente catalisadores. Porexemplo. quando uma nica molcula agonista se liga a um receptor que um canal inico, muitos ions passam atravs do canal. De modo semeIhante. uma nica molcula de hormnio estcride se liga ao seu receptor e inicia a transcrio de muitas cpias de mRNA especifi cos, que por sua vez produzem vrias cpias de uma nica proteina. Estrutura para considerar a alividade dos agonistas. Se dois frmacos se ligam ao mesmo receptor no mesmo local, por que um pode ser agonisla e o outro antagonisla? Colocada dc modo mais amplo. essa questo lambm fundamental para a compreenso da dinmica da estrutura da proteina e das inleraes proleina-ligando. Em dctalhc, as inieraes atmieas que permilcm um ligando ligado alterar a eslrutura da proteina qual se liga so cada vez mais bem comprcendidas. Estruturas de alia resoluo de proteinas com e sen) ligandos. associadas a estruturas de modelos lericos c estudos funcionais dc proteinas mutanics cada vez mais prccisos, esto esclarccendo como podemos pensar sobre altcraes conformacionais indu/.idas. No cntanto, de uma perspecliva funcional, a questo da ao agonista pode ser formulada da seguinte maneira: como um receptor uliliza a cnergia livrc da ligao do ligando para alterar sua conformaeo para o estado ativo'.' Um receptor, por definio, existc em pelo menos dois estados conformacio nais, ativo (a) c inativo (i).

O termo receptor tem sido usado de modo operacional para designar qualqtter macromolcula celular qual um frmaco se liga para iniciar sens efeitos. Entre os receptores de frmacos mais im portantcs esto as protenas celulares, cuja funo normal a de agir como receptores de ligandos reguladores endgenos particular mente hormnios, fatores de crescimento e neurotransmissores. A funo desses receptores fisiolgicos consiste na ligao do ligando apropriado e, em resposta, na propagao de seu sinal regulador na clula-alvo. A identificao das duas funes de um receptor, ligao do ligando e propagao da mensagem, sugere corretamente a existncia de dominios funcionais no interior do receptor: um dominio de

Ri^

^ ft,

1
v

D R,

~* D Rs

FARMACODINMICA

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Agonista total
T|=

Agonista parcial A Antagonista

AR

Afla

A g o n i s t a inverso Log [frmaco]

ARj-

= Ra

Fig. 2.1 Regulao da atividade de um receptor por frmacos de seletividade conformacional A ordenada a atividade rcguladora do receptor produzida por Ra, a conformao aiiva como mostrada no esqueina 1. Se um frmaco A se tiga selelivamenle a Ra, ir deslocar o cquilbrio cm direo ao acmulo dc R, e produzir uma rcsposla. Se o fnnaco A tcm igual afinidade por R, c Ra. no ir perturbar o equilbro entre elas. e no tcr cfcilos na atividade. Se o frmaco sc ligar selclivamente a R|. ento a quantidade de Ra ir diminuir. Se houver R., suficiente para produzir uma resposta basal elevada na auscncia dc ligando (atividade constitutiva independente de antagonista), a atividade cnlao ser inibida; o frmaco A sera um agonista inverso.

concentraes saturadas. Um farmaco que exibe tal eficincia intermediria 6 denominado agonista parcial. Deve-se observar que. em sentido absoluto. todos os agonistas so parciais; a seletividade maior Ra para que para R\ no podc scr total. Um farmaco que se liga com a mesma afinidade a qualquer conformao no ira alterar o equilbrio de ativao e ir agir como um antagonista competitivo. Por fim. um farmaco com afinidade preferencial por R\ ir na verdade produzir um efeito oposto ao dc um agonista; dc fato existem exemplos de tais agonistas inversos (ver Caps. 11 e 17). Se o equilfbrio preexistente de receptores scm ligandos repousar mais na direo de R\. pode ser diffcil observar o antagonismo negativo e diferencid-lo do simples antagonismo competitivo. Estudos bioqumicos rigorosos sobrc intcraes reccptor-frmaco, acoplados com a anlise de receptores nos quais o equilfbrio RJRX foi alterado por mutao, corroboraram esse modelo geral de ao dos frmacos. O modclo rapidamente aplicvcl aos dados experimentais pelo uso de anlise computadorizada. sendo frcqiientemente utilizado como um guia para a comprecnso da ao dos frmacos. Receptores fisiolgicos: famlias estruturais e funcionais. As duas ultimas dcadas assistiram exploso de nossa avaliao do nmero de receptores fisiolgicos e, paralelamente. ao desenvolvimento de nosso conheciniento dos padres estruturais e mecanismos bioquimicos fundamenlais que os caracterizam. A clonagem molecular identiftcou tanto receptores toialmente novos (e seus ligandos reguladores) como numerosas isoformas de receptores j conhecidos. Existem atual mente bases de dados exclusivamente dedicadas a receptores de uma classe. Membros de vrias classes de receptores. transdutores e proteinas efetoras, foram purificados e seus mecanismos de ao so conhe cidos em considervel detalhe bioquimico. Receptores. transdutores e efetores podem ser expressos por meio de estratgias de gentica mo lecular e estudados em clulas de cultura. Alternativamente. podem ser expressos em grandes quantidades nas clulas mais convenientes (bactrias, leveduras etc.) para facilitar sua purificao. Os receptores de molculas reguladoras fisiolgicas podem ser atribuidos a relativamente poucas fami'lias funcionais cujos mem bros compartilham tanto mecanismos de ao comuns como estruturas moleculares semelhantes (Fig. 2.2). Para cada familia de re ceptores h atualmente pelo menos um conhecimento rudimentar Fig. 2.2 Pudres estruturais de receptores fisiolgicos e suas relaes com as vias de sinalizao. Esquema da divcrsidade dos mecanismos dc controle da funo celular por receptores de agentes endgenos agindo atravs da superficie celular ou no niiclco.

Tais conformaes poderiam corresponder aos estados aberto e fechado de um canal inico, aos estados ativo e inativo de uma proteina tirosinocinase ou s conformaes de um receptor para o acoplamento de protenas G. Se esses estados estiverem em equilbrio e o estado inativo predominar na ausncia do frmaco, ento o estmulo da sinalizao basal ser baixo. A extenso cm que o cquilfbrio alterado cm direo ao estado ativo determinada pela afinidade relaiiva do farmaco pelas duas conformaes (Fig. 2.1). Um frmaco com maior afinidade pela conformao ativa que pela conformao inativa ir dirigir o equilfbrio para o estado ativo e assim ativar o receptor. Tal frmaco ser um agonista. Um agonista total suficientcmentc scletivo para a conformao ativa que, em concentrao saturada, ir dirigir o receptor fundamcntalmente de modo integral para o estado ativo {ver Fig. 2.1). Se um composto diferenle, mas talvcz cstruturalmcntc scmelliante. se ligar ao mesmo local em R mas com uma afinidade apenas moderadamente maior por Ra do quc por R seu cfcito sera menor. mesmo cm

Enzimas c o m o R nicotlnico da acetilcolina receptores:

ligao R ao glutamato R do GABAA R da glicina R 5HT3 da serotonina

Sistemas d e receptores a c o p l a d o s proteina G

Receptores acoplados a proteina G

Superficie da clula Canais inicos c o m acesso para ligandos c o m mltiplas subunidades

catlise Atividades cataliticas: tirosinocinases tirosinofosfatases C i t o p l a s m a serina/treoninocinases guanililoelase Protenas G: Dellmdas por composio da suounidade u Efetores Regutados por subunidades Ga: t t t adenllilclclase adenilitciclase .2 correntes de Ca*' tosfolipase cp Catalisador de Iroca de Rho GTP Reguiados pelas subunidades G|iYSubunlts: Relllicador das correntes de K* para o interior adenllilcJclase loslolipase C|i lostatidilinosltot-3-cinase

GTP

GDP

as ai ao

a?3
Receptor ctoslico

Niicleo Regulao da transcrio esterides retlntdes hormnlo tireideo

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das estruturas dos dominios de ligao de ligandos e dos dominios efetores e de como a ligao dos agonistas influencia a atividade reguladora do receptor. Esse nmero relativamente pequeno de mecanismos bioquimicos e formas estruturais utilizado para a sinalizao cclular fundamental para as vias atravs das quais as clulasalvo intcgram os sinais de vrios receptores para produzir respostas aditivas, sinrgicas ou reciprocamente inibitrias. A Fig. 2.1 fomece um diagrama esquemtico das vrias famlias de receptores e seus transdutores e molculas efetoras. Receptores como enzimas: proteinocinases receptoras. O maior grupo dc receptores com atividade enzimtica intrnseca so as proteinocinases da superficie celular, que excrcem seus efeitos reguladores pcla fosforilao dc vrias protenas efetoras na face interna da membrana plasmatica. A fosforilao pode alterar as atividades bioquimicas de um cfetor ou suas interacs com outras protcinas. A maioria das proteinocinases receptoras tern como alvo os residuos de tirosina em seus substratos. que inclucm receptores dc insulina, muitas citocinas e diversos peptdios. alm de proteinas que dirigem o crescimento ou a difercnciao. Algumas proteinocinases receptoras lambm fosforilam residuos de serina ou treonina. As proteinocinases receptoras esiruturalmentc mais simples so compostas de um dominio de ligao de agonistas na superficie cxtracclular da membrana plasmatica. um nico elemento C|uc atravessa a membrana e um dominio da proteinocinasc na face interna da membrana. H diversas variaes desse piano bsico. incluindo a oligomerizao obrigatria e o acrscimo de vrios dominios reguladores ou de ligao de proteina ao dominio intracelular da proteinocinasc. Omra familia dc receptores que so funcionalmentc proteinocinases conlm uma modificao da estnnura descrita antcriormente. Os receptores associados a proteinocinases no possuem o dominio enzimlico intracelu lar. mas em resposta aos agonistas se ligam c/ou ativam diferentes proteino cinases na face citoplasmtica da membrana plasmtica. Os receptores desse grupo inclucm vrios receptores de peplidios neurotrficos c os receptores de aniigenos com vrias subunidades nos linfcitos T e B. Os receptores de antgenos lambm envolvem prolcinas lirosinofosfatases em sua alividade reguladora celular, sendo plausivel que oulros receptores que aparentementc no possucm dominios efetores citoplasmticos possam recrular outras pro teinas efetoras. Receptores com outras atividades enzimticas. A estrutura de dominio descrita para as proteinocinases da superficie celular variada em outros receptores para utilizar outros estimulos de sinalizao. A familia das protei nas lirosinofosfatases possui dominios extracelularcs com uma seqncia remancsccnte dc molculas de adeso celular. Embora os ligandos extracelulares de muilas dessas fosfatases ainda no scjam conhecidos, a hnportncia dc sua atividade enzimatiea foi demonstrada por meio dc experincias genticas e bioquimicas em vrios tipos de clulas. Nos receptores do peptidio airial nairiurtico e do peptidio guanilina. o dominio inlracclular no uma proteinocinase mas sn uma guanililaciclasc. que sinleliza um segundo mensagciro. o GMP ciclico. Os receptores com alividade da guanililaciclase lambm servem como receptores de fcromnios nos invenebrados. Pode haver outras variaes ncssa topologia transmembrana. Canais inicos. Os receplores dc diversos neurotransmissores formam na membrana plasmtica canais seletivos para ions regulados por agonistas. denominados canais inicos com acesso para ligandos. que conduzem seus sinais alterando o potencial da membrana cclular ou a composio iniea. Esse grupo inclui o receptor colinrgico nicotnico. o receptor GABA,\ do cido Y-aminobulirico e os receplores de gluiamato, aspartato e glicina (ver Caps. 9, 12 e 17). Todos so proienas com divcrsas subunidades. sendo previslo que cada subunidade atravesse vrias vezes a membrana plasmatica. A associao simtrica das subunidades permile que cada qual forme um segmento da parede do canal e controlc dc modo cooperativo a abertura e o fechamento do canal. Receptores acoplados proteina G. Uma grande familia de receptores uliliza diferentes proteinas helcroirimricas reguladoras de ligao ao GTP. conhecidas como proteinas G, como transdutores para conduzir sinais para suas protcinas efetoras. Os receptores acoplados proteina G inclucm os de muitas aminas biolgicas, cicosanides e outras molculas lipidicas de sinali/.ao, assim como numerosos peplidios e ligandos de protcinas. Os efeto res regulados pcla proteina G so as enzimas. como a adenililciclase c a fosfolipase C. e os canais inicos seletivos da membrana plasmatica para C a ^ e K+ (Fig. 2.2). Devido a seu niimero e sua imporincia fisiolgica. os

SeSo I PRINCPIOS GERMS

receptores acoplados proteina G so amplamente utilizados como alvos para os frmacos; foi estimado que cerca de metade dos larmacos prescritos. excetuando os anlibiticos. 6 direcionada para esses receptores. Os receptores acoplados proteina G atravessam a membrana plasmlica como um feixe de scte a-hlices. Os agonistas se ligam a uma fenda na superficie exlracclular do feixe. ou a um dominio globular de ligao de ligando enconlrado as vezes no terminal amina. As proteinas G se ligam superficie ciloplasmtiea dos receptores. Os receptores desta familia respondem aos agonistas promovendo a ligao dc GTP proteina G. O GTP ativa a proieina G e permite que esta. por sua vez. alive a proteina efetora. A proteina G permanece aliva at hidrolisar o GTP ligado para GDP. que no aliva. As proteinas G so compostas por uma subunidade a de ligao do GTP. que confere o rcconhccimcnto especifico pelo receptor, e por um dimcro associado dc subunidades p e y. A ativao da subunidade Get pelo GTP permite que cla regulc uma proteina efetora e conduza a libcrao das subunidades GPy, que podem regular seu prprio grupo dc efetores. Uma clula pode exprcssar at 20 receptores acoplados proteina G. cada qual com especificidade difercnle para uma ou vrias de sua meia-diizia de proteinas G. Cada Got pode regular um ou mais efetores. Os receptores de mltiplos ligandos podem assim integrar seus sinais atravs de uma linica proteina G. Um receptor tambm pode gerar vrios sinais pcla ativao de mais dc uma espcic de proteina G. De modo semelhante, a subunidade Ga pode regular as atividades de mais de um efelor. Desse modo. os sislemas efetores de receptores de proteina G so redes complexas de interacs convcrgentes e divergenies que permilem uma regulao extraordinariamente verstil da funo celular (Ross. 1992). Fatores de transcrio. Os receptores de hormnios estcridcs. hormnio lircideo. vitamina D e retinides so protcinas solveis de ligao ao DNA que rcgulam a transcrio de genes especificos (Mangclsdorf et ah, 1994). Eles fazem pane de uma familia maior de fatores de transcrio, cujos membros podem scr regulados por fosforilao, associao a outras protei nas celulares ou pcla ligao com mctablitos ou ligandos reguladores celulares. Esses receptores agem como dimeros alguns como homodimeros c alguns como heterodimeros com proteinas celulares homlogas, mas podem ser regulados por oligomerizao de ordem mais alta com outras molculas reguladoras. Eles fornccem exemplos impressionantes da conscrvao da estrutura e do mecanismo, em pane porque esto montados como trs dominios amplamente independentes. A regio mais prxima do termi nal carboxila liga hormnios c desempenha um papcl de regulao negativa, ou seja. a remoo desse dominio deixa um fragmento conslitucionalmcnie ativo que pode ser quase tSo eficaz na regulao da Iranscrio quanto o receptor dc ligao de hormnio intaclo. A ligao de hormnios presumivelmente lambm libcra essa restrio inibitria. A rcgifio central do receptor medeia a ligao a locais especificos no DNA nuclear para alivar ou inibir a transcrio do gene proximo. Esses locais reguladores no DNA so igualmcnle receptores especificos: a seqncia de um "elemento responsivo a glicocorticide", com apenas uma ligcira variao. est associada a cada gene responsivo a glicocorticide. A funo da regifio terminal amina do receptor 6 menos bem definida, mas a sua perda reduz a atividade reguladora do receptor. A atividade de cada dominio 6 amplamente independenlc, fenmeno mais bem demonstrado pela conslruo dc receptores quimricos refletindo a ligao de hormnios ou a alividade reguladora lipica do DNA do receptor originrio que contribui naqucle dominio. S e g u n d o s m e n s a g e i r o s citoplasmticos. AMP ciclico. Os si nais fisiolgicos tambm so integrados no interior da clula como resultado de interaes entre vias de segundos mensageiros. Comparado ao nmero de receptores e proteinas dc sinalizao citoslica. h relativamenle poucos segundos mensageiros citoslicos reconhecidos. No entanto, sua sntese ou liberao e degradao ou excreo refletem as atividades de muitas vias. Os segundo mensa geiros bem estudados so A M P ciclico. G M P ciclico. Ca 2 + , fosfatos dc inositol. diacilglicerol e xido ntrico; nossa lista desse diverso grupo de molculas ainda est crescendo. Os segundos mensageiros se influenciam uns aos outros diretamente, alterando o metabolismo do outro. e indiretamente. compartilhando alvos intracelulares. Esse padro superficialmente confuso de vias reguladoras permite que a clula responda aos agonistas, individualmente ou em associao. com uma ordem integrada de segundos mensageiros citoplasmti-

2 IARMACODINMICA

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A libcrao de Ca para o citoplasma e mediada por vrios canais: canais da membrana plasmtica regulados por proteinas G, potencial dc membrana. K* ou o proprio Ca 2+ e os canais nas regics cspecializadas do reticulo cndoplasmtico que respondem ao segundo mensageiro trifosfato dc inositol (IP3) ou. no msculo. despolarizao da clula. O Ca2+ removido tanto por extrusSo como por recaptao pelo reticulo endoplasmtico. O Ca2+ propaga scus sinais atravs dc uma gama muito maior dc proteinas que o AMP ciclico. incluindo enzimas metablicas. proteinocinases e proteinas reguladoras de ligao ao Ca 2+ que rcgulam ainda outros efetores finais e intermcdirios. Regulao dos receptores Os receptores no apenas iniciam a regulao da funo fisiolgica e bioquimica. como tambm so eles prprios sujeitos a muitos controles reguladores e homeostticos. que incluem a regulao da sntese e da degradao do receptor por diversos mecanismos, a modificao covalente. a associao a outras proteinas reguladoras c/ou a relocalizao no interior da clula. As proteinas transdutoras e efetoras so reguladas do mesmo modo. Os estimulos moduladores podem vir de outros receptores. direta ou indiretamente, e os receptores so quasc sempre sujeitos a regulao por retroalimentao por seus prprios estimulos de sinalizao. A estimulao contnua das cclulas pclos agonistas gcralmente leva a um estado dc dessensibizao (lambm denominado estado refratrio ou modulao negaiiva). de modo que o cfcito que se segue exposio contnua ou subseqente a uma mesma concenlrao de frmacos c reduzido (Fig. 2.3). Esse fcnmeno muito importantc nas situaes teraputicas; um exempio a resposta mais fraca ao uso repelido de agonistas pVadrenrgicos. como os broncodilatorcs no tratamento da asma (ver Cap. 10). A inibio por retroalimcntao da sinalizao pode se limitar ao estimulo de apenas um receptor estimulado. situao conhecida como dessensibilizao homloga. A alenuao lambm pode estender-se para a ao de todos os receptores que participam da via de sinalizao comum, dessensibilizao heterloga (Fig. 2.3). A dessensibilizao homloga indica retroali2+

cos e respostas. 0 AMP cclico. o prottipo do segundo mensageiro, pennanece inn bom exempio para a compreensao da regulao e da funo da maioria dos segundos mensageiros. Ele sintetizado pela adenililciclase sob o conlrole de muitos receptores acoplados prolena G; o estmulo mediado pela G s e a inibio, pela G,. H pelo menos 10 isoenzimas da adenililciclase especificas para os lecidos. cada qual com seu padro exclusivo de respostas reguladoras. Vrias isoenzimas da adenililciclase so estimuladas ou inibidas pelas subunidades Pyda proteina G. o que permile a proteinas G diferenles da G s modularcm a alividade da ciclasc. Algumas isoenzimas so estimuladas por Ca2+ ou por complcxos Ca2t-calmodulina. Cada uma das isoenzimas tern o seu prfjprio padro de aumento ou decrscimo atravs da fosforilao ou de oulras influcncias reguladoras. fornccendo uma ampla disposio de manifcstaes reguladoras a cada clula-alvo. O AMP cclico eliminado por uma associao de hidrlisc. catalisado por fosfodicsterases dc nuclcoti'dcos cclicos e extruso por varias protenas de transporle da membrana plasmtica. As fosfodiesterases formam ainda outra famflia de importantes proteinas de sinalizao. cujas atividades so reguladas por transcrio controlada. assim eomo por segundos mensageiros (nuclcoti'dcos cfclicos e Ca2+) e intcracs com outras proteinas de sinalizao. Na maioria dos casos. o AMP ciclico funciona pela ativao das protcinocinases dependentes de AMP ciclico. urn grupo relativamente pequeno de proteinas estreitamente relacionadas. No entanto. essas proteinocinases fosIbrilam tanto os alvos fisiolgicos finais (enzimas metablicas ou proteinas de transporle). como numerosas proteinocinases e outras proteinas regulado ras. O ultimo grupo inclui os fatores de Iranscrio que permitem ao AMP ciclico regular a expresso genctica, alcm dc eventos cclularcs mais agudos. Alm de ativar uma proteinocinase, o AMP ciclico lambm regula diretamente a alividade dos canais de cations da membrana plasmitica, particularmente importantes nos neurnios olfatrios. Os sinais do AMP ciclico se propagam ento atravs de todo o comportamento bioquimico da elula-alvo. Clcio. O Ca 2+ intracelular. outro segundo mensageiro particularmeme bem estudado. oferece vrias comparaes interessanies com o AMP ciclico.

r\

Rosposta inicial

Dessonsibilizao

Recuporao

tr
Agonista Agonisla Agonista

Tempo Fig. 2.3 Dessensibizao em resposta a um agonisla. A. Em resposta a um agonista. a resposia inicial geralmerue atinge o m.1ximo e a seguir diminui para se aproximar de alguin nivel tnico, elevado. porm abaixo do mximo. Sc o frmaco for rcmovido durantc um periodo breve, o estado de desscnsibizio se niantm, de modo que um segundo acrscimo do agonista lambm provoca uma resposta rcduzida. A remoo do frmaco durantc pcriodos mais longos permite que a clula "reajuste" sua capacidade de resposia, e a recuperao da resposta cosluma ser total. B c C . A dcssensibilizao pode ser homaloga (B). altcrando rcsposias produzidas apenas pelo receptor estimulado. ou heterloga (C), agindo em vrios recepiores ou em uma via comum a muitos receptores. O agonisla a age no receptor a. c o agonisla b. no receptor b. A dcsscnsibilizao homloga pode rcflclir o rctroalimcntao dc um transdutor (ou efetor) exclusivo da via do receptor (X |) ou de um componcnte extcrno via (K) sensivel ao estado de ativao do receptor. A dcsscnsibilizao hclcrloga iniciada por iransdutores ou efetores comuns a vrias vias de sinalizao de receptores (Y ou Z).

Ml mcntao dirigida para a prpria molcula do receptor (fosforilao. protelise, diminuio da snlese etc.), enquanto a dessensibilizao hctcrloga pode envolver inibio ou perda de uma ou mais proteinas a jusante que participam na sinalizao de outros receptores. Os mecanismos envolvidos na dessensibilizao homloga e heterloga de receptores especficos e vias de scnsibilizao sao discutidos em maiores detalhes nos capitulos adiante relacionados com cada familia de receptores. Previsivelmente. a hiperscnsibilidadc aos agonistas tambm segue com frcqiicncia a reduo crnica da esiimulao do receptor. Tais casos podem rcsultar. por exempio, da administrao prolongada de antagonistas P-adrcnrgicos como o propranolol (ver Cap. 10). Doenas rcsultantes do mau funcionamento dos receptores. Alm da variabilidade entre os individuos em suas respostas aos frmacos (ver Cap. 3), diversas doenas definveis se originam de distrbios nos receptores ou nos sistcmas rcccptor-efctor. A perda de um receptor em um sistema de sinalizao allamente especializado pode provocar um distrbio fcnotpico relativamente Iimitado, como a deficincia gentica de receptor andrognico na sindromc de fcminilizao testicular (Griffin el al., 1995). As deficincias de sistcmas de sinalizaao mais amplamente utilizados tern um espcctro mais amplo de efeitos, como observado na miastenia gravis ou em algumas formas de diabetes mclito resislente insulina, que resultam da depleo auto-imune dos receptores colinrgicos nicotnicos (ver Cap. 9) ou de recep tores insulinicos (ver Cap. 61), respectivamente. A lcsodc umcomponcntc de uma via de sinalizao utilizada por muitos receptores pode causar uma endocrinopatia generalizada. A deficincia heterozigtica de Gs, a proteina G que ativa a adenililcicla.se em todas as clulas, causa diversos disturbios cndocrinos (Spiegel e Weinstein, 1995). A deficincia homozigtica da Gs presumivclmcnte fatal. A expresso de receptores, efetores ou proteinas de acoplamento aberrantes ou ectpicos tern o potencial de ocasionar hipersensibilidade, subsensibilidade ou outras respostas adversas. Entre os eventos mais interessantes e significativos est o aparecimento de receptores abcrrantes como produtos de oncogcnes. que transformam clulas normais em clulas malignas. Praticamentc qualquer tipo de sistema de sinalizao pode tcr potencial oncognico. O produto do oncogenc erbA uma forma alterada de um receptor de hormnio lireideo, constitutivamenle ativo devido perda de seu dominio de ligaao de ligando (Mangelsdorf ei al., 1994). Os produtos dos oncogenes ros e erbB so formas ativadas e descontroladas de receptores de insulina e fator de crescimento epidcrmico. respectivamente, ambos sabidamente aumemando a proliferao celular (Yarden e Ulrich, 1988). O produto do oncogenc mas (Young el al., 1986) um receptor acoplado proteina G, provavelmente o receptor de um peptidio hormonal. A ativao constitutiva de receptores acoplados proteina G por discretas mutaes na estrutura do receptor demonstrou dar origem a retinite pigmentar, puberdade precoce e hiperlircoidismo maligno (revislo em Clapham, 1993). As prprias proteinas G podem ser oncognicas quando superexpressas ou constitutivamente ati vadas por mutao (Lyons el al., 1990). As mutaes dos receptores podem alterar a resposta aguda ao tratamento farmacolgico ou a manuteno de sua eficcia. Por exempio, a mutao dos receptores p-adrenrgicos, que mcdeiam o relaxamcnto da musculatura lisa das vias rcspiratrias e o fluxo brnquico, acelera a dessensibilizao aos agonistas P-adrcnrgicos utilizados para o tratamcnto da asma (Turki el al., 1995; verCap. 28). A mcdida que as mutacs que medeiam essas patologias so descobcrtas, podem ser reproduzidas atravs de genes clonados, de modo a pcrmitir o descnvolvimento de frmacos apropriados a agirem especificamente nelas. Classificao dos receptores e efeitos dos frmacos Tradicionalmente, os receptores dos frmacos foram identificados e classificados primariamente com base no efeito e na potncia relativa dos agonistas e antagonistas seletivos. Por exempio, os efeitos da acetilcolina mimetizados pelo alcaloide muscarina e seletivamente antagonizados pela atropina so denominados efeitos muscarnicos. Outros efeitos da acetilcolina mimetizados pela nicotina so descritos como efeitos nicotinicos. Por extenso, diz-se que esses dois tipos de efeitos colinrgicos so mediados por receptores muscarinicos ou nicotinicos. Embora isso freqiieniemente contribua pouco para a determinao do mecanismo de ao do frmaco. tal classificao fornece uma base conveniente para resumir os efeitos

StfBo I I'RINClPIOS CF.RAIS

dos frmacos. A afirmao de que um frmaco ativa determinado tipo de receptor um resumo sucinto de seu espectro de efeitos c dos agentes que iro regul-lo. No entanto, a exatido dessa afirmao pode ser alterada quando novos receptores ou subtipos de recep tores so identificados ou outros tipos de mecanismos de frmacos ou efeitos colaterais so revelados. Signiflcado dos subtipos de receptores. medida que a diversidade e a selctividadc dos frmacos aumentaram, tornou-se claro que existem vrios subtipos de receptores cm muitas classes de receptores anteriormente definidas. A clonagem molecular acelerou ainda mais a descoberta de novos subtipos de receptores, e sua expresso como proteinas recombinantes facilitou a descoberta de frmacos com seletividade para os subtipos. Receptores diferentes porm relacionados podem. mas no necessitam, aprescntar difcrcntcs padres de seletividade entre os ligandos agonistas ou antagonistas. Quando os ligandos seletivos no so conhecidos. os receptores so mais comumentc denominados de isoformas, em vez de subtipos. Os subtipos de receptores podem exibir diferentes mecanismos de cmisso de sinal. Por exempio, os receptores muscarinicos M| e Mj ativam a Gq para iniciar a sinalizao Ca2+, e os receptores muscarinicos M2 e Mj ativam a Gj para ativar outras vias de sinalizao. A diferenciao entre as classes e os subtipos de receptores , no entanto. freqiieniemente arbitrria e/ou histrica. Os receptores ot|, a 2 e P-adrenrgicos diferem enire si tamo na seletividade entre os frmacos como em sua escolha dos transdutorcs da proteina G (Gj, G q e Gs, respectivamente), no entanto a e P so consideradas classes de receptores e ct| e a 2 so considerados subtipos. As isoformas dos receptores ct|A- CX|B e a>(; pouco diferem em suas propriedades bioquimicas; o mesmo quase verdadeiro para os subtipos Pi, P2 e P3. As diferenas farmacolgicas entre os subtipos de receptores so exploradas tcrapeuticamcntc mediante o desenvolvimenlo e o uso de frmacos seletivos para os receptores. Esses frmacos podem ser utilizados para produzir diferentes respostas em um unico tecido quando os subtipos de recep tores iniciam diferentes sinais intracelulares, ou podem servir para modular diferencialmente tipos distintos de clulas ou tecidos que expressam um ou outro subtipo de receptor. Aumentar a seletividade de um frmaco entre os tecidos ou as respostas produzidas cm um unico tecido pode dctcrminar sc os beneficios lerapcuticos do frmaco sobrepujam seus efeitos indesejados. A pesquisa de novos receptores pela biologia molecular foi muito alm da busca de isoformas de receptores conhecidos. at a descoberta de centenas de genes de receptores humanos completamente novos. Muitos desses recep tores podem ser atribuidos a familias conhecidas com base na sua seqncia. e suas funes podem ser confirmadas por ligandos apropriados. No entanto, muitos so "rfos". designao dada aos receptores cujos ligandos so desconhecidos. A descoberta dos ligandos endgenos e das funcs fisiolgicas de receptores rfos altamente espcrada para levar a novos frmacos que possam modular estados patolgicos atualmentc intratveis. A descoberta de numerosas isoformas de receptores levanta a questo de sua importncia no organismo. particularmente quando seus mecanismos de sinalizao e sua especificidade para ligandos endgenos so indiferenciveis. Talvez essa multiplicidade de ge nes facilite a expresso independente, especifica para determinadas clulas e controlada no tempo de receptores. segundo o desenvolvimento de necessidades do organismo. Independentemente de suas implicaes mecnicas (ou ausncia delas), a descoberta de isofor mas seletivas de ligandos pode melhorar consideravelmente nosso direcionamento para um alvo dos frmacos teraputicos. Aes de frmacos no mediadas por receptores Se restringirmos a definio de receptores a macromolculas, ento pode-se dizer que diversos frmacos no atuam propriamente em receptores. Alguns frmacos se ligam especificamente a pequenas molculas ou ions encontrados normal ou anormalmente no corpo. Um exempio a neutralizacao teraputica do cido gstrico por uma base (anticido). Outro exempio o uso de mesna. um radical livre removedor rapidamente eliminado pelos rins, para se ligar a metablitos reativos associados a alguns quimioterpicos antineoplsicos, minimizando assim seus efeitos indesejveis no

2 FARMACODINMICA

n
Em geral. os frmacos podem fazer duas coisas com os recepto res: (1) se ligar a eles e (2) possi velmente alterar seu comportamento com relao ao sistema da clula hospedeira. A primeira funo governada pela propriedade quimica de afinidade. regida pelas foras qumicas que promovcm a associao do frmaco com o recep tor. A segunda 6 governada por uma quantidade denominada eficdcia. A eficcia a informao codiftcada na estrutura quimica de um frmaco que promove a alterao do receptor quando o frmaco est ligado. Historicamente. a eftcacia tern sido tratada operacionalmente como uma constante proporcional que quantifica a extenso das alteraes funcionais transmitidas ao receptor pela ligao do frmaco. Teoria clssica dos receptores. A teoria de ocupaco dos receptores, na qual admite-sc que a resposta sc origina de um receptor ocupado por um frmaco, se baseia na lei de ao das massas, com o acrscimo dc constantes dc modificao para acomodar os achados experimentais. O agonismo foi descrito pela modificao desse modelo por Ariens (1954), Slcphenson (1956) c Furchgott (1966). Stephenson introduziu outro conccito importanlc. o de estimulo, que 6 o efeito initial de um frmaco sobre o prprio receptor: o estimulo 6 cnto processado pelo sistema para rcsultar na resposta observvel. O antagonismo serviu de modelo para Gaddum (1937, 1957) e Schild (1957) para detcrminar a afinidade dos antagonistas. Os componentcs bsicos da resposta ao frmaco mediada por receptores sSo mostrados na Fig. 2.5. A afinidade 6 medida pela constante de dissociao do equilibrio do complexo frmaco-rcccptor (denominada A',|): a Irao de receptores ocupados pelo frmaco determinada pela concentrao do frmaco c pela fa, como mostrado (ver Fig. 2.5). A eficcia tnm'nseca c uma constante de proporcionalidade (denominada e) que define o poder dc induo de resposta do frmaco. O produto da ocupao. cficcia intrnseca e nmero de receptores resulta no nmcro total de estimulos mediados pelos receptores dados pelo sistema. O estimulo 6 conduzido aos cfctorcs biolgicos atravs de reaes bioqumicas para produzir a resposta. Deve-se obscrvar que a eficcia uma funo da ocupao e da funo de estimulo-rcsposta (abrangendo lodas as rcaes bioqumicas que ocorrem para traduzir a ligao do agonista em resposta) c amplifica o estimulo. Desse modo, a localizao das curvas de dose-resposta para a resposta c desviada esquerda

iralo urinrio (ver Cap. 52). Outros agentes agem de acordo com efeitos coligativos sem a necessidade de uma estrutura qumica aliamentc especfica. Por exemplo, alguns compostos relativamenle benignos, como o manitol. podem ser administrados em quanlidades suficientes para aumeniar a osmolaridade de vros lquidos corporais e assim causar alteraes apropriadas na distribuio da gua (ver Cap. 29). Dependendo do agente e da via de adminisirao, esse efeito pode ser explorado para promovcr diurese, caiarse, expanso do volume circulanie no comparlimenio vascular ou reduo do edema cerebral. Alguns frmacos que so anlogos estruturais de qumicos biolgicos normais podcm scr incorporados pelos componentes celulares e desse modo alierar sua funo. propriedade denominada "mecanismo de incorporao falsa", que tern sido particularmente til com os anlogos de pirimidinas e purinas que podem ser incorporados aos cidos nuclicos; esses frmacos tm utilidade clnica no tratamenio antiviral e na quimioterapia antineoplsica (yer Caps. 50 e 52). QUANTIFICAO DAS INTERAES FRMACO-RECEPTOR E EFEITO PRODUZIDO Farmacologia dos receptores O principal objetivo da farmacologia dos receptores o de compreender e quanlificar os efcitos dos agentes qumicos (farmacos) nos sistemas biolgicos. Isso importante no quadro teraputico porque os frmacos so quase sempre utilizados terapeuticamente em sistemas diferentes daqueles nos quais foram descobertos e testados. Os sistemas biolgicos interpretam os efeilos dos frmacos dc modos diferentes, e as interpretaes podem ser confusas. O que necessrio uma escala padronizada da atividade dos frmacos, que transcenda os sistemas biolgicos e possa ser ulilizada para prever os efeitos do frmaco e m todos os sistemas. A farmacologia dos receptores tenta fornecer as ferramentas para alcanar esse ob jetivo. O uso bsico da farmacologia dos receptores a curva de doseresposta. uma ilustrao do efeito observado de um frmaco em funo de sua concentrao no compartimento receptor. A Fig. 2.44 mostra uma curva ti'pica de dose resposta; ela alcana um valor assinttico mximo quando o frmaco ocupa todos os locais de receptores. A faixa de concentraes necessria para ilustrar totalmente a relao dose-resposta costuma ser muito larga para ser til no formato mostrado na Fig. 2.4/4. A maioria das curvas de doseresposta ento colocada em grfico com o logaritmo da concentrao no eixo x (ver Fig. 2.4B). As curvas de dose-resposta possuem irs propriedades bsicas: limiar, inclinao e assntota maxima, parmetros que caracterizam e quantificam a atividade do frmaco.

teoria classics da ocupao dos receptores Resposta

Eliccia |R| x Nmerodi fecept< e:.

E ro 100-

10050-

50-

Log [A]
[Al

tog [A]

Fig. 2.5 Teoria cMssica da ocupao dos receptores.

O frmaco A se liga ao receptor R para formar um complexo AR. o sinal proximal a partir do qual processado pela clula para produzir uma resposta observvcl. A ocupao do receptor c dada pelo isoiermo dc adsoro dc Langmuir: | A | / ( | A | + Ka). A amplitude do sinal para cada receptor ligado dclcrminada pela cficia e, que multiplicada pela conccntrao dc receptor |/f| para produzir o estimulo total mediado pelo receptor. Uma cascata dc eventos bioquimicos na cclula proccssa esse estimulo para produzir a resposta. A ligao fracionria ao receptor e a resposta final fracionria so mostradas cm f'uni;5o da conccntrao dc frmaco. \A\.

Fig. 2.4 RespOStas graduadas (eixo y como perceniual de resposta maxi ma) expressas em funo da eoncemrao do frmaco A presenle no receptor. A forma liipcrblica da curva na pane A da figura se lorna sigrnide ao scr colocada cm um grfico com scmilogariimos. como na pane B da figura. A concentrao dc frmaco que produz 50% da resposta maxima quantifica a atividade do frmaco. sendo denominada CE50 (concentrao cficaz para 50% dc resposta).

32
da curva de ocupao do receptor (Fig. 2.5). Antes de discutir a quantificao dos efeitos da interao frmaco-receplor, vale a pena considerar melhor esse proccsso dc amplificao porquc cle podc controlar a rcsposia observada a um frmaco. Transmisso do estmulo receptor pelo tccido-alvo. A ativao de um receptor por um frmaco podc ser concebida com um sinal inicial que a seguir amplificado pela clula. Diferentes clulas tm difercntes propriedades de amplificao; desse modo, um sinal fraco de um receptor podc no produzir rcspostas visiveis cm um tipo de clula e um sinal poderoso em outro. As propriedades de ainplificao da clula (denominadas Capaciddde de esllmulo-resposla) controlam o resultado observado da interao frmaco-receptor, como mostrado na Fig. 2.6 para trs frmacos hipotticos e trs lipos diferentes dc clulas. Na clula I, que amplifica o estimulo de modo relalivamcntc fraco. o frmaco A produz uma resposla lecidual total e seria classificado como agonista total. O frmaco B produz uma resposta tecidual parcial (submxima) e seria um agonista parcial. O frmaco C no produz resposta. mas no entanto ocupa o receptor c, por conseguinte. faria antagonismo aos efeitos do frmaco A ou B; seria denominado antagonista. Quando os mesmos frmacos so tcstados na clula II, que possui um mecanismo de csti'mulo-resposta com um acoplamento mais eficiente. o frmaco A permanece como agonista total, o frmaco B se torna um agonista total, e o frmaco C. que apresenlava eficcia insufciente para causar uma resposta fisiolgica na clula I, agora um agonista parcial. As propriedades dos frmacos no foram alteradas; apenas a cficincia do sistema de sinalizao mudou. Desse modo, a classificao dos frmacos tambm muda. O frmaco B vai dc

Seol

PRINClPlOS GERAIS

agonista parcial para agonista total e o frmaco C vai de antagonista para agonista parcial. Tal cvoluo continua quando esses frmacos so testados na clula III, que tern um mecanismo dc sinalizao ainda mais eficiente. Agora todos os frmacos agem como agonistas totais (Fig. 2.6). Esse exemplo ilustra a falcia potencial de classificar os frmacos com base no que fazem cm vez de no que so. O que os frmacos fazem depende do receptor c de suas protenas de sinalizao associadas; a classificao pcla amplitude do efeito fisiolgico podc scr seriamente cquivocada quando os frmacos so tcstados em uma forma celular para uso tcraputico cm outra, A altcrnativa classificar os frmacos de acordo com a amplitude de suas duas proprieda des moleculares: afinidade pelo receptor e eficcia quando ligados. Pela quamificao dessas propriedades indcpcndcntcmente dos sistemas, a atividade do frmaco pode ser prevista em todos os sistemas, contanto que se conhca a identidade do receptor. Quantificando o agonismo. Os frmacos possuem duas propriedades observveis nos sistemas biolgicos: potncia e amplitude de efeito (ao produzir uma resposta biolgica). A potencia controlada por quatro fatores: dois relacionados com o sistema biolgico que contm os rcccptores (densidadc do receptor e cficincia dos mecanismos de estimulo-resposta do tecido) e dois relacionados com a interao do frmaco com seu receptor (afini dade c cficacia). Quando a potencia relativa de dois agonistas de igual eficcia medida no mesmo sistema biolgico, os efeitos de sinalizao a jusante so cancelados c a comparao produz uma medida relativa da afinidade e da eficcia dos 2 agonistas (yet Fig. 2.1A). Desse modo, a medida das razcs da potencia dos agonistas 6 um mtodo dc medir a capacidade de Clula I Acoplamento ineficienle 100 -i 8060-

1
D

4020-

0Log [frmaco]

100-1

100-1

8060 40 20Log [frmaco]

Acoplamento altamente eficiente

Estfmulo Fig. 2.6 Diferentes eficincias no processamento celular de estimulo-resposta niveis de respostas para trs agonistas com efiedcias diferentes. Consultar o lexto para mais detalhcs. podem produzir diferentes

Log [frmaco]

FARMACODINMICA

33
p 100806040200U

Potncia relativa

Potncia relativa A

/^t
B

Log [agonista]

Log [agonista]

Fig. 2.7 DM.S maneiras de quantificar 0 agonismo. A. A potcncia rclaliva de dois agonistas, quando obtida nos mesmos tecidos, uina funo cle suas afinidadcs rclativas e eficcias intrnsecas. B. Nos sistcmas nos quais os dois frniacos no produzem ambos as mesmas rcspostas mximas caraclcrsiicas do tccido. a rcsposta maxima observada 6 uma funo no-lincar dc suas cficcias inlrlnsccas rclativas.

Ncsses casos, o lecido se comporta como se houvesse um agonista prcscntc. e um antagonista compelitivo convencional no exerce efeito algum. No entanto, como os agonistas invcrsos se ligam seletivamenle a forma inativa do receptor e desviam o equilibrio conformacional em direo ao cstado inativo. esles agenles so capazes de inibir a sinalizao independente de agonistas ou constitutiva. Nos sistemas quc no so constitutivamente ativos. os agonistas inversos se comportarao exatamente como antagonists competitivos, o que explica em pane porquc as propriedades dos agonistas inversos e os nmeros desses agentes descritos previamente como antagonistas compctitivos no foram aprcciados at rcccntemente.

Competitivo A B

Antagonismo competitivo

difercntcs agonistas de induzir uma rcsposta em um sistema de testc c de prevcr uma alividade comparvel em outro. Outro mtodo dc avaliar a alividade agonista comparar as assntoias mximas em sistemas nos quais os agonistas no procluzcm uma resposta maxima do sistema (Fig. 2.7B). A vantagem de utilizar a maxima quc essa propricdadc s depcnde da eficcia, enquanto a potncia uma funo mista da afinidade e da eficcia. Quantificando o antagonismo. Os padres caractersticos do antagonismo esto associados a certos mecanismos de bloqueio dos receptores. Um o antagonismo competitive simples, no qual um frmaco sem eficcia intrinseca mas com afinidade compete com o agonista pelo local de ligao. O padro caracteristico de tal antagonismo a produo dependente da concenlrao de um desvio paralelo para a direita da curva de dosc-resposla do agonistas, scm altcrao da resposta assinttica maxima (Fig. 2.8/1). A magnitude do desvio direila da curva depende apenas da concentrao do antagonista c dc sua afinidade pelo receptor. A afinidade dc um antagonista compelitivo pelo seu receptor pode ento ser determinada de acordo com sua capacidade dependente da concentrao de desviar direita a curva de dose-resposta de um antagonista, como observado pela primeira ve/. por Schild (1957). Deve-se notar que um agonista parcial pode competir de modo semelhante com um agonista "total" pcla ligao ao receptor. No entanto. concentraes crescentes de um agonista parcial iro inibir a resposta em nivel finito caracteristico da eficcia inlrnseca do frmaco; um antagonista compctitivo ir rcduzir a rcsposta a zero. Os agonistas parciais podem assim ser utilizados terapeuticamente para (amponar uma resposta pela inibio da cstimulao indescjada scm abolir completamente o estimulo do receptor. Um antagonista pode se dissociar to lentamenle do receptor a ponto dc apresentar uma ao csscncialmcnte irreversivel. Em tais circunstncias, a rcsposta maxima ao agonista ser deprimida em algumas concentraes do antagonista (Fig. 2.8/i). De modo operacional, isso se refere ao antagonismo no-compeiiiivo, embora o mecanismo de ao molecular no possa na verdade ser incquivocamente inferido a partir do efeito. Um antagonista irreversivel competindo pelo mesmo local de ligao que o agonista tambm pode produzir o padro de antagonismo mostrado na Fig. 2.8B. O antagonismo no-competitivo pode ser produzido por outro tipo de frmaco, denominado antagonism alostrico. Esse tipo de frmaco produz seu efeito se ligando a um local no receptor diferenle do local do agonista primrio, altcrando assim a afinidade do receptor pelo agonista (ve/Fig. 2.8). No caso de um antagonista alostrico, a afinidade do receptor pelo agonista 6 diminuida pelo antagonista (ver Fig. 2.8C). Em contrastc, alguns efeitos alostricos potencializam os efeitos dos agonistas (Fig. 2-8D). Deste modo, nos casos cm que a patologia possa envolver um sistema agonista falho (i. e.. miastenia grains, doena de Alzheimer), um potencializador alostdrico da resposta endogena fortaleceria o sinal e, o mais importante. prcscrvaria o padro da resposta natural. Ao pcrmitir tanto a hipercxprcsso de receptores dc lipo selvagem como a criao (e a descoberla) de receptores mulantes constitutivamente ativos, a tccnologia da gentica molecular facilitou o estudo de uma nova classe de antagonistas funcionais, os agonistas invcrsos. Como j foi dito, os recepto res podem adotar espontaneamente conformaes ativas que produzem uma resposta celular. A frao dc receptores no ocupados na confomiao ativa geralmenie muito baixa para permitir a observao de sua alividade independente do agonista. mas essa atividade pode ser rapidamente observada quando o receptor expresso de modo heterlogo em altos niveis ou quando a mutao desvia o equilibrio conformacional em direo forma ativa.

Log [A]

Pseudo-irreversivel A

Antagonismo no-competitivo

Log [A] Antagonismo

Alostrico A

Log [A]

Fig. 2.8 Mecanismos de antagonismo nos receptores. A. O amagonismo compelilivo ocorre quando o agonista A e o antagonista B compelem pelo mesmo local de ligao no receptor. As curvas de resposta para o agonisla se desviam para a dircila, de mancira relacionada com a concentrao, pelo antagonista de modo que a CE50 do agonista aumenta de modo linear com a concenlrao do anlagonista. B. Se o antagonista se liga no mesmo local que o agonisla. mas o faz de modo irreversivel ou pseudo-irreversivel (dissociao lenta sem gao covalenle), causa um desvio da curva dose-resposla para a direila, com rcduo da resposta maxima. Os cfeilos alostrcos ocorrem quando o ligando B sc liga a um local difcrcntc no receptor ou para inibir a resposta (ver C) ou para potencializar a resposta (ver D). Esse efeito salurvel; a inibio alcana um valor liinitc quando o local alostrico csl inteiramente ocupado.

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No se sabe at que ponto a alividade constitutiva do receptor um fenmcno de importncia patolgica e portanto no est claro atc quc ponto o agonismo inverso uma propriedade de relevncia terapuliea. No entanto, em alguns casos, a prefcrncia de um agonista inversp sobrc um antagonista compctilivo evidente. Por exemplo. o herpesvrus humano KSHV codifica um receptor de quimiocina consliiutivamente ativo que gera um scgundo mcnsagciro e dirige o crescimento celular c a replicao viral (Arvanitakis ei/., 1997). Scm dvida, nesse caso um antagonista convencional no seria til, j que o agonista da quimiocina no cst envolvido, c um agonista inverso seria a nica imervcno vivel. PERSPECTIVAS

Seo / PRINClPlOS ERAIS

A continuao da identificao e a expanso das fami'lias molecu lares para receptores, especialmente com o advento da era do genoma humano, acoplada com o enorme potencial de gerar novas tnolculas com estratgias de qumica combinatria ou DNA rccombinante, prenunciam uma nova era de diversidade e especificidade nas intervenes terapuiicas.

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