AO DE LA CONSOLIDACIN ECONMICA Y SOCIAL DEL PER UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERA PESQUERA CURSO TEMA ALUMNO DOCENTE : : -Informes de prcticas de laboratorio. : : - Patricia Glvez. - Wilder Quiroz Mena. - Biologa General.

INTRODUCCION

PRACTICA N 01 BIOSGURIDAD Y MICROSCOPIA OBJETIVOS Tener precaucin en el uso de instrumentos y equipos de laboratorio siguiendo las reglas dadas Manejar correctamente el microscopio y reconocer sus partes, as como observar preparados en fresco y en seco.

MATERIALES Y EQUIPOS Microscopio compuesto. Instrumentos de medicin de masa. Instrumentos de medicin de volumen. Instrumentos para mediciones aproximadas.

FUNDAMENTO TERICO

I.- BIOSEGURIDAD Conjunto de medidas que deben de tomarse en cuenta para evitar futuros accidentes. Para esto seguimos los siguientes niveles: NIVEL DE BIOSEGURIDAD 01 En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mnimo para el personal de laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el trabajo se realiza por lo general en mesas estndar de laboratorio, no se requiere un equipo especial ni tampoco un diseo especifico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico con entrenamiento en microbiologa.

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 02 Es similar al nivel 01 y en el se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel 01 en las siguientes caractersticas: 1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes patgenos. 2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se esta realizando algn trabajo. 3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzocortantes contaminados. 4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en gabinetes de trabajo biolgico.

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 03 En este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clnicos, de diagnstico, algunos laboratorios universitarios y tambin de investigacin, en el cual se realizan trabajos con agentes exticos o que pueden causar un dao serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos, por ejemplo el ntrax. El laboratorio cuenta con un diseo y con caractersticas especiales y todos los materiales so manipulados utilizan do vestimenta y equipo de proteccin. Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las normas recomendadas para este nivel de bioseguridad. En estas circunstancias, es aceptable el realizar las siguientes prcticas para poder seguir operando de una manera segura: 1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior.

2. La ventilacin de laboratorio se tiene que hacer con un flujo de aire direccional controlado. 3. El acceso al laboratorio est restringido. 4. Seguir el estndar de prcticas microbiolgicas y equipamiento de seguridad impuesto para el nivel de bioseguridad 02.

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 04 En este nivel es el que se utiliza para trabajar en agentes biolgicos que representan un alto riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que tienen un cierto parecido con los antgenos de los agentes conocidos que operan en el nivel 04, son confinados a este nivel hasta que se tiene suficiente informacin para confirmar que pertenecen a este nivel o bien pasarlos a un nivel adecuado. El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento especfico extensivo en el manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y controlado de los mismos.

Por lo regular los cientficos que trabajan aqu, utilizan trajes especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que adems tienen una leve sobrepresin para evitar que entren partculas infecciosas al mismo si este llega a desgarrarse. En estos laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente.

NORMAS DE BIOSEGURIDAD Uso de guardapolvo para protegernos de salpicaduras de algn qumico. No comer en el laboratorio. Tener uas cortas. Cabello recogido. Evitar pipetear sustancias toxicas. Lavarse las manos antes y despus de manipular las muestras. Si el grupo de trabajo del laboratorio rompi algn material lo reponen. El material de vidrio (laminas y laminillas) deben colocarse en leja o hipoclorito despus de haber sido utilizadas, esto se coloca cuando se a procesado sustancias clnicas.

Las pipetas una ves utilizas deben sumergirse en mezcla sulfocromica.

II. MATERIAL DE LABORATORIO 1. Placa petri: sirve para colocar los medios de cultivo. Las hay de diversos tamaos. 2. Pipetas: material empleado para medir o trasvasar volmenes de lquidos en trabajos de anlisis. Son tubos cilndricos de dimetro pequeo, abierto por ambos extremos y ms ancho en su parte central. Su extremo inferior termina en punta, se introduce en el lquido y al succionar por el extremo superior con ayudad de una propipeta, el liquido asciende por la pipeta. Pipeta de transferencia o volumtrica.- diseada para medir y verter un volumen determinado. Las ms usadas son de: 5, 10, 25, 100 ml. La parte superior e este tipo de pipeta tiene graduada un anillo que fija el volumen que debe medirse. Pipeta graduada o de medida.- pipeta marcada con una escala en pequeas fracciones de su volumen total, se emplean para medir cantidades variables de lquidos. Las ms usadas son de: 1, 2, 5, 10 ml.

3. Probeta: son tubos cilndricos graduados de dimetro variable, con base plana y ancha que les permite posarse verticalmente; en la parte superior lleva un pico para verter con mayor facilidad los lquidos. Hay de diferentes capacidades. Su uso se limita a la medicin de lquidos de poca exactitud. 4. Mortero: sirve para triturar.

5. Laminas y laminillas: 6. Tubos de ensayo: son tubos de vidrio de dimetro pequeo con abertura en un extremo y el fondo cerrado generalmente redondeados, los hay con borde o sin borde, pero lo ms importante es su capacidad termo resistente. 7. Vaso de precipitacin: es un vaso de forma cilndrica graduado, con una hendidura en el borde a manera de pico que permite verter fcilmente un lquido. Hay de diferentes capacidades: 50, 100, 250 ml., etc. Se asume que en ellos, el volumen indicado por el fabricante se consigue si se llenas casi hasta el borde superior. Se usan para calentar lquidos, para evaporizar, hacer un bao mara, etc. 8. Autoclave: sirve para esterilizar el material de vidrio. T 121C x 15 /15lb de presin. 9. Estufa: equipo elctrico que se emplea para sacar muestras o materiales. Opera a temperaturas aproximadamente hasta de 300C. 10. Gradilla: generalmente de madera, sirve para contener los tubos de ensayo en forma vertical.

III. MICROSCOPIA Etimolgicamente la palabra microscopio deriva de dos voces griegas: mikros = pequeo y scopium = ver u observar. S le define pues como un instrumento de ptica, que se utiliza para la observacin de cuerpos pequeos que a simple vista no se alcanzan a distinguir. El origen y el sucesivo perfeccionamiento del microscopio, es difcil de conocer exactamente; parece ser que las primeras aplicaciones de lentes como medio de ampliar las imgenes y algunas de las propiedades pticas de las superficies curvas, fueron conocidas por Tolomeo (S. IV de J.C.). Como lentes de aumento utilizaron en un principio balones llenos de agua, peo ms tarde la fabricacin de vidrios para uso ptico, permiti reemplazar estos primitivos por lentes macizos, aunque de poder amplificador escaso, pero de resultados satisfactorios. En 1850 el holands Sacharas, llamado Jansen, combino dos lentes y obtuvo de esta manera un perfeccionamiento en la observacin de pequeos objetos, estableciendo de esta manera los principios del microscopio compuesto y el telescopio. Antn Van Leeuwenhoek, un comerciante holands, construyo microscopios simples con solo una lente que aumentaba los objetos 200 veces. Con ellos, observ clulas sanguneas, bacterias y organismos simples (protozoarios) que nadaban en una gota de agua. El desarrollo de la microscopia en los ltimos tres siglos, ha permitido ampliar el campo delas investigaciones biolgicas y se a convertido en el instrumento bsico para abrir nuevas fronteras en las biologa. Se han construido microscopios altamente especializados para una gran variedad de usos. Estos microscopios comprenden: el simple (una sola lente), el compuesto convencional (campo claro), el binocular o de diseccin, el de campo oscuro, el de contraste de fases, el metalogrfico y el electrnico.

DESCRIPCIN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO El microscopio tiene dos partes una ptica y otra mecnica, las cuales sern reconocidas en el desarrollo de la prctica: PARTE PTICA

1. Ocular.- denominado as porque va cerca del ojo del observador, consta de un sistema de dos lentes planos convexos, dispuestos en un tubo cilndrico de metal, con diafragma intermedio; ambas lente presentan las caras planas hacia el ojo del observador y las convexas hacia el objeto. La lente que va cerca del ojo del observador se denomina ocular propiamente dicho y la lente inferior se le conoce con el nombre de lente de campo. El la parte lateral o superior del tubo cilndrico lleva una numeracin 5x, 10x, 15x, que indica el nmero de aumentos propios del ocular. El ocular da la imagen virtual y derecha y se forma a la altura del diafragma. 2. Objetivos.- denominados as porque va cerca del objeto para observar. Un objetivo esta constituido por un tubo metlico cilndrico-cnico, lleva en su interior un sistema de lentes destinados a dar la imagen real e invertida del objeto. La lente de la parte inferior se denomina lente frontal. En la parte lateral del tubo metlico, lleva inscrita una numeracin 4x, 10x, 20x, 40x, 60x, 100x, etc. Que indica el nmero de aumentos propios del objetivo. Clases de objetivos a. Objetivos a seco. Son aquellos que se emplean generalmente para observar preparados en fresco, aunque tambin pueden utilizarse para observar preparados en seco; no se utiliza ningn tipo de sustancia refractante para realizar la observacin. Por el nmero de aumentos son de tres clases: 1.- de pequeo aumento = mayor de 0x y menor de 10x. 2.- de mediano aumento = mayor de 10x y menor de 30x. 3.- de gran aumento = mayor de 30x y menor de 90x. b. Objetivos de inmersin. Son aquellos que entre la lente frontal y el preparado a observar, se interpone una sustancia lquida, comnmente el aceite de cedro, cuyo ndice de refraccin es de 1,5. Se utiliza solo para observaciones de preparados en seco. Caractersticas: 1.- Es el de mayor aumento (100x, 150x) 2.- La lente frontal es ms pequea. 3.- Lleva inscrita una fraccin: 1/2; un decimal: 1,20; 1,30 o la palabra ol inmersin.

4.- De acuerdo a la procedencia lleva una franja o una raya negra para facilitar su identificacin. Distancia focal Es la distancia que media entre la parte inferior de la lente frontal y el objeto a observar, cuando se tiene un enfoque perfecto. Estas distancias focales para los diferentes objeticos son: Pequeo aumento = entre 0,5 y 3 cm. Mediano aumento = entre 3mm y 5mm. Gran aumento = entre 1mm y 3mm. Inmersin = entre 0,8mm y 1,20mm.

3. Sistema de iluminacin Se encuentra ubicado en la parte inferior de la platina y comprende: a. Espejo o lmpara de iluminacin. Es de forma circular presenta dos caras una plana y otra cncava, sujeto por medio de un eje giratorio. Se utiliza para enviar los rayos de luz hacia el preparado. Para trabajo con poco aumento puede utilizarse la superficie plana, mientras que para el trabajo con gran aumento es necesario utilizar la parte cncava. b. Diafragma. Es un dispositivo constituido por laminillas metlicas dispuestas concntricamente, de tal forma que permite cerrar y abrir, regulando de esta manera la entrada de luz emitida por el espejo. c. Condensador. Esta constituido por un sistema de dos o ms lentes (ABBE), montados dentro de u cilindro cnico truncado de metal. Esta situado por debajo de la platina. Sirve para concentrar o condensar los rayos luminosos emitidos por el espejo y funcin accionado por un tornillo. d. Porta filtro. Es un dispositivo que permite colocar filtro de diferentes colores, con la finalidad de facilitar la observacin. PARTE MECNICA

Tiene por misin sostener la parte ptica y permite los desplazamientos necesarios para el enfoque e iluminacin del objeto por observar, esta constituido por: 1. El pie Sostiene el microscopio asegurando una perfecta estabilidad del aparato en posicin vertical, inclinado u horizontal. Presenta diferentes formas, siendo la ms comn de herradura. 2. La columna o brazo Es la parte articulada al pie por medio de una bisagra llamada charnela, sostiene a la platina, a la subplatina, al tubo ptico, lleva los tornillos macromtrico y micromtrico. Generalmente tiene la forma de un arco, que es por donde se toma para su traslado y manejo. 3. Platina Es una plancha metlica colocada en posicin horizontal, presenta un orificio en la parte central que permite el paso de la luz proveniente del sistema de iluminacin. En los modelos perfeccionados, esta platina puede desplazarse por los tornillos macro y micromtrico, hacia arriba y hacia abajo. Adems lleva adherida un par de pinzas que sirven para sujetar a la lamina porta-objeto, u carro mvil (charriot) para el desplazamiento del preparado durante la observacin. 4. Tubo ptico Es metlico y de forma cilndrica, ennegrecido interiormente para evitar la reflexin de la luz. En el extremo superior del tubo se inserta el ocular y extremo inferior el objetivo, directamente o por intermedio de un dispositivo llamado revolver. La longitud del tubo puede modificarse en los modelos perfeccionados por medio de un mecanismo que divide al tubo en dos partes; una inferior fija y otra superior que se introduce o se saca de la anterior. 5. Revolver Es un dispositivo metlico de forma circular, entornillado en la parte inferior del tubo ptico, gira sobre su eje central. Presenta varios orificios en los que van atornillados los objetivos. Este dispositivo permite realizar el cambio de objetivos durante la observacin. 6. Tornillo macromtrico Se encuentra ubicado en la parte superior o inferior de la columna, permite grandes desplazamientos del tubo ptico.

7. Tornillo micromtrico Se encuentra ubicado en la parte superior o inferior de la columna, por debajo del macromtrico superpuestos l, accionados por un solo tornillo. Permite desplazamientos en trminos de micras. ILUMINACIN Y ENFOQUE La iluminacin y enfoque son dos condiciones principales para realizar una buena observacin microscpica. La iluminacin se consigue utilizando fuentes luminosas adecuadas, que pueden ser natural o artificial. Los rayos de luz son reflejados por el espejo o por la lmpara de iluminacin, hacia el objeto o preparado. Cuando se examina con grandes aumentos, la luz debe ser intensa, en cambio cuando se hace con aumentos menores, la luz debe ser menos intensa, lo que se consigue desplazando en sentido vertical (arriba o abajo) el condensador y graduando la abertura del diafragma. Obtenida la iluminacin conveniente, se efecta el enfoque del preparado, utilizando primero el macromtrico hasta encontrar la imgen (enfoque aproximado), y luego accionando en micromtrico permite el enfoque perfecto (visualizacin de la imgen).

DISCUCIN 1. Cul es la diferencia entre un microscopio ptico y un microscopio electrnico? Un microscopio ptico es un microscopio basado lentes pticas. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. El microscopio ptico tiene un limite resolucin de cerca de 200 nm (0.2 m). Este limite se debe a la longitud de onda de la luz (0.4-0.7 m). Las clulas observadas bajo el microscopio ptico pueden estar vivas o fijadas y teidas. El microscopio normal u ptico est formado por dos lentes. El objeto que se quiere estudiar se estudiar se coloca en la platina. La luz procedente del objeto penetra en el microscopio por el objetivo, que desempea la funcin de una lupa; es decir, produce una imagen muy ampliada del objeto. sta imagen se modifica mediante otro sistema de lentes, el ocular. El aumento final conseguido es igual al producto de los aumentos del objetivo por los del ocular. En el microscopio ptico este aumento tiene un lmite, que se denomina "poder de resolucin" y que es aproximadamente de 1200 aumentos. 10 de julio del 2006. Ambos pueden utilizarse para el examen microscpico de microorganismos. Para la mayora de los anlisis de rutina se usa el microscopio ptico, mientras que para el exmen de las estructuras intracelulares se utiliza el electrnico como un complemento. Todos los microscopios utilizan lentes para aumentar la imagen del tamao de las estructuras y poder ver los detalles, pero la resolucin (ver dos puntos adyacentes como unidades distintas) es 100 veces mayor en el microscopio electrnico que en el ptico. "Microscopios pticos": *de campo claro: formado por dos series de lente (objetivo y ocular) que funcionan conjuntamente para producir la imagen, aqu la muestra se visualiza por contraste entre ella y el medio que la rodea. Se utilizan tinciones para favorecer el contraste. Se utilizan colorantes con cargados positivamente porque se combinan con los componentes celulares que estn cargados negativamente. *de contraste de fases: aumenta el contraste, no hace falta teir la clula

porque se basa en los distintos ndices de refraccin entre la clula y el medio desviando los rayos de luz; formndose una imagen oscura con un fondo brillante. *campo oscuro: en este la luz incide sobre la muestra slo desde los lados, la luz al ser dispersada por la muestra entra en el objetivo, observndose la muestra brillante sobre el fondo oscuro. "Microscopio electrnico": *de transmisin: se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la funcin de las lentes la realizan electro magnetos, operndose al vaco. Tiene alta resolucin, pero los haces electrolitos poseen bajo poder de penetracin por eso se utilizan tcnicas de cortes ultrafinos. Para aumentar el contraste se preparan las muestras con compuestos como el cido smico, permanganato, uranio, lantano o plomo porque desvan adecuadamente los electrones. *de barrido: la muestra se recubre con una fina capa de un metal pesado, como el oro. el haz de electrones barre la superficie de la muestra, los electrones desviados por la capa de metal son recogidos y proyectados sobre una pantalla para producir una imagen. "Todos los microscopios electrnicos incorporan cmaras que permiten fotografiar las muestras". Fuente (s): Microbiologa de Brok

2. Por qu se utiliza el aceite de cedro en la observacin con los objetivos de inmersin?

Es una tcnica de observacin que no compete a la preparacin misma de la placa, sino a la correccin de un problema de difraccin de la luz en el microscopio. Para ello se utiliza en aceite de cedro o de inmersin, una gota del cual debe ir colocado entre el objeto y el objetivo de 100x, necesitando estos, estar en contacto directo. Sabemos que el aire tiene tambin un ndice de difraccin de la luz aunque no muy considerable. En el microscopio, la luz que sale de la fuente y atraviesa el condensador, llega al objeto al cual debe iluminarlo a trasluz, para luego recorrer una columna de aire hasta llegar al lente objetivo. Este ltimo tiene un ndice de difraccin de la luz equivalente a 1.1515, muy superior al de la columna de aire, lo cual produce una alteracin en la visualizacin del objeto. El aceite de cedro que tiene un ndice muy parecido al del objetivo, es colocado desplazando a la columna de aire y resolviendo este problema en forma aceptable. Slo debe usarse, sin embargo, con el objetivo de inmersin.

CONCLUSIONES

La bioseguridad pretende asegurar la integridad del personal del laboratorio y para el ambiente. La microscopia es la mejor manera de producir imgenes visibles de estructuras o detalles demasiados pequeos para poder ser percibidos a simple vista. En la microscopia evidenciamos los grandes aportes que la fsica a hecho a la biologa.