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Procedimento Operacional Padro FATORES REUMATIDES (FR)

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FR-PP
FUNDAMENTO O teste baseia-se na aglutinao das partculas de Ltex sensibilizadas com gama-globulina humana (antgeno), quando misturadas com soro de pacientes contendo fatores reumatides (FR). APLICAO CLNICA A quantificao dos Fatores Reumatides (FR) no soro importante para fazer o diagnstico diferencial entre artropatias soropositivas e soronegativas (sndrome de Reiter, artrite psorisica, artropatias enteropticas, espondilite anquilosante). Geralmente, os altos ttulos correlacionam com maior gravidade da doena. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro. Estabilidade e armazenamento da amostra No soro, o analito estvel por 2 dias entre 2-8C. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra No usar amostra hemolisada ou lipmica. Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO FR PP CAT. 454 FR PP CAT. 454K MS 80022230109 MS 80022230127

GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA CNPJ 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 Belo Horizonte MG Brasil Farmacutico Responsvel: Homero Jackson de Jesus Lopes

CRF MG - 2010

Componentes do kit Conservar entre 2-8C. 1- Ltex FR- Contm Suspenso de partculas de ltex sensibilizadas com gama-globulina humana e azida sdica 14,6 mmol/L. A sensibilidade do reativo ajustada para detectar 30 U/mL do Padro Internacional do soro artrtico da OMS. No congelar. Ver nota 4 do Mtodo Qualitativo. 2- Controle Positivo - Soro humano contendo mais de 30 UI/mL de FR. 3- Controle Negativo - Soro animal contendo menos de 30 UI/mL de FR. Estabilidade Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso. Sinais de Deteriorao dos Reagentes A presena de aglutinao no Ltex FR (1) e de material particulado nos Controles P e N indicam deteriorao dos reagentes.

Materiais auxiliares Placa de reao e palitos (FR PP Cat. 454).

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Precaues e Cuidados Especiais 1- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. 2- Recomendamos seguir as Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para execuo do teste e para conservao, manuseio e descarte dos materiais. 3- O Ltex FR contm azida sdica como conservante. Evitar contato com os olhos, pele e mucosa. No aspirar ou ingerir. Embora, o reagente contenha azida sdica como conservante, todo cuidado deve ser tomado para evitar contaminao bacteriana. 4- Todos os reagentes derivados do sangue humano foram testados para anticorpos anti- HCV, antiHIV e antgeno HBsAg e apresentaram resultados negativos. No entanto, devem ser tratados com precauo, como potencialmente infectantes. Manusear e descartar segundo as normas de biossegurana 5- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes. EQUIPAMENTOS Procedimento Tcnico Manual Tubos e pipetas; NaCl 0,9 %; Cronmetro; Agitador mecnico rotatrio de velocidade regulvel a 100 r.p.m; Controles positivo e negativo e materiais auxiliares. Ver nota a seguir. Nota O produto do Cat. 454K contm somente o reagente Ltex FR. O controle positivo e negativo e os materias auxiliares fazem parte somente da apresentao do produto FR PP Cat. 454. Para utilizao dos controles, adquirir o produto completo FR PP Cat. 454. Interferncias A lipemia (triglicrides at 500 mg/dL), a hemlise (hemoglobina at 500 mg/dL) e a bilirrubina at 15 mg/dL no interferem. Alguns medicamentos e substncias podem interferir. PROCEDIMENTO NOTAS 1- A sensibilidade do ensaio diminui em temperaturas baixas. Recomenda-se trabalhar acima de 10C. 2- Atrasos nas leituras podem ocasionar uma super valorizao da taxa de fatores reumatides (FR). 3- A intensidade da aglutinao no indicativa da concentrao de FR nas amostras analisadas. 4- A diluio do soro com soluo salina causa uma alterao na sensibilidade do teste de 30 UI/mL para 8 UI/mL devido ao forte efeito matriz da amostra n aglutinao do Ltex FR. 5- importante ensaiar os Controles P e N em cada srie de amostras testes para melhor interpretao da leitura dos ensaios e distino de uma possvel granulosidade do reativo da verdadeira aglutinao da reao. 6- A placa de reao dever ser lavada logo aps o uso com bastante gua deionizada. Se isto no for feito imediatamente, usar na lavagem gua com detergente neutro e enxaguar varias vezes com gua deionizada. Secar a placa de reao antes de usar novamente. Resduos de detergentes podem provocar resultados falsamente positivos. Tcnica de Anlise 1 60 testes 1- Antes da realizao do teste, deixar os reagentes e amostras atingirem a temperatura ambiente. 2- Em uma rea da placa de reao, colocar 50 L da amostra de soro a ser analisada. 3- Em outras reas colocar uma gota dos controles P e N. 4- Homogeneizar o Ltex-FR (antgeno) com suavidade antes do ensaio. Adicionar em cada rea,uma gota de Ltex-FR prxima os soros. 5- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda a superfcie interior do crculo. Empregar palitos distintos para cada amostra. 6- Agitar a placa a 100 rpm. durante 2 minutos (Nota 2) ou inclinar a lmina para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos. Imediatamente aps, verificar a presena

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ou no de aglutinao macroscpica, comparando o resultado da amostra com os padres obtidos com os controles. Tcnica de Anlise 2 120 Testes 1- Antes da realizao do teste, deixar os reagentes e amostras atingirem a temperatura ambiente. 2- Em uma rea da placa de reao, colocar 25 L da amostra de soro a ser analisada. 3- Em outras reas, pipetar 25L dos controles P e N. 4- Homogeneizar o Ltex-FR (antgeno) com suavidade antes do ensaio. Pipetar em cada rea, 25 L de Ltex FR prximo aos soros. 5- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda a superfcie interior do crculo. Empregar palitos distintos para cada amostra. 6- Agitar a placa a 100 rpm. durante 2 minutos (Nota 2) ou inclinar a lmina para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos. Imediatamente aps, verificar a presena ou no de aglutinao macroscpica, comparando o resultado da amostra com os padres obtidos com os controles. LEITURA DA REAO Examinar macroscopicamente a presena ou ausncia de aglutinao logo aps os 2 minutos (Nota 2). RESULTADOS Negativo Ausncia de aglutinao indicando um teor de FR inferior a 30 UI/mL. A suspenso homognea semelhante ao padro obtido com o Controle Negativo. Positivo Presena de aglutinao indicando um teor de FR igual ou superior a 30 UI/mL. Visualiza-se uma aglutinao macroscpica que varia desde a formao de grumos finos at grumos grosseiros. Ateno: Todo teste positivo dever ser titulado utilizando o Mtodo Semi-Quantitativo. MTODO SEMI-QUANTITATIVO Tcnica 1- Tomar 6 tubos 12 x 75 e colocar 0,2 mL de NaCI 0,9 g% em cada tubo. Adicionar ao primeiro tubo, 0,2 mL da amostra, que apresentou teste qualitativo positivo. Misturar, transferir 0,2 mL do 1 para o 2 tubo, misturar, transferir 0,2 mL do 2 tubo para o 3 tubo e assim sucessivamente at o 6 tubo. As diluies obtidas so 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 e 1/64, respectivamente. 2- Nas reas da placa, pipetar 50 L de cada diluio da amostra, previamente preparada como em 1. 3- Homogeneizar o Ltex-FR (Antgeno) com suavidade antes do ensaio. Adicionar a cada rea contendo as diluies da amostra, uma gota do Ltex-FR. 4- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda a superfcie interior da rea. Empregar bastes distintos para cada diluio. 5- Agitar a placa a 100 r.p.m durante 2 minutos ou inclina-l para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos. Imediatamente aps, verificar a presena ou no de aglutinao macroscpica. 6- Se a aglutinao estiver presente at 1/64, continuar as diluies a partir do 6 tubo e prosseguir com o teste. LEITURA DA REAO Examinar macroscopicamente a presena ou ausncia de aglutinao logo aps os 2 minutos. Ser considerado como ttulo da reao, a maior diluio que apresentou resultado positivo. RESULTADOS Multiplicar a taxa de sensibilidade do teste (8 UI/mL) pelo ttulo da maior diluio que apresentou resultado positivo. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Teste Negativo Expressar o resultado como inferior a 8 UI/mL. Teste Positivo Expressar o resultado em UI/mL. UI/mL = sensibilidade x recproca do ttulo encontrado no Mtodo Semi-Quantitativo.

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CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade : PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERNCIA Soro sem diluio: FR menor que 30 UI/mL Soro diludo : FR menor que 8 UI/mL SIGNIFICADO CLNICO Os fatores reumatides so um grupo de anticorpos do tipo IgM (apesar de que tambm j foi descrita a presena de IgA e IgG) que aparecem em pacientes com artrite reumatide, mas tambm em outras enfermidades do sistema autoimunolgico, inflamaes crnicas, hipergamaglobulinemia e fases agudas de doenas virais, bacterianas ou parasitrias. Os fatores reumatides humanos reagem com o determinante antignico localizado no domnio Fc da cadeia pesada das molculas IgG, embora exista uma forte controvrsia sobre sua especificidade, j que tem-se demonstrado uma unio multiespecfica, no s contra IgG humana mas tambm frente a antgenos nucleares e tambm frente a algumas IgG de origem animal. Mais da metade da populao maior de 65 anos sofre em algum grau de sndromes reumticas. Neste sentido, a determinao quantitativa dos FR altamente indicativa da extenso da enfermidade e permite ao mdico aliviar de forma adequada os sintomas desde as fases prematuras da mesma. A associao entre positividade em soro para FR com os estados inflamatrios crnicos surge porque os FR so induzidos por um processo de imunogenizao crnica. Assim o acompanhamento peridico dos nveis de FR presentes no soro, embora no relacionado diretamente com a resposta imunolgica original, muito valioso na hora de se avaliar o efeito da terapia, permitindo uma melhor adequao da mesma s condies particulares do paciente. SENSIBILIDADE ANALTICA A sensibilidade analtica igual a 30 UI/mL. Entretanto, devido ao forte efeito matriz da amostra na aglutinao do ltex FR, a sensibilidade ser igual a 8 UI/mL quando a amostra for diluda com soluo salina. Efeitos de Altas Concentraes (Zona) Ausente at a concentrao de FR de 800 UI/mL. LIMITAES DO MTODO Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e outros procedimentos diagnsticos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1- Anderson S G et al. Bull Hlth Org 1970; 42:311-317 2- Ball J et al. Ann Rheum Dis 1963; 22:311-314 3- Jones W L et al. Amer J Clin Path 1973; 60:603-610 4- Kunkel H G. J Chron Dis 1959; 10: 418-427 5- Plotz C M et al. Am J Med 1956; 21: 893-896

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6- Singer J M et al. Am J Med 1956; 21:888-982 7- Waaler M et al. Arthrtis Rheum 1961; 4:47-54 8- FR-PP, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias
Reviso 02/11 Liberado Fernanda

Assinatura

Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

Destino