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Intercorrncia entre leucose enzotica e brucelose em bfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produo extensivo1
ABSTRACT. - Chaves N.P., Bezerra D.C., Santos L.S., S J.S., Santos H.P. & Pereira H.M. 2012. [Intercurrence of enzootic leucosis and brucellosis in buffaloes (Bubalus bubalis) in extensive production system.] Intercorrncia entre leucose enzotica e brucelose em bfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produo externsivo. Pesquisa Veterinria Brasileira 32(2):131-134. Laboratrio de Diagnstico de Doenas Infecciosas, Universidade Estadual do Maranho, Cidade Universitria Paulo VI, Cx. Postal 9, Tirical, So Lus, MA 65055-970, Brazil. E-mail: nancylenichaves@hotmail.com This study was carried out to evaluate the intercurrence of brucellosis and enzootic leucosis in buffaloes in extensive production system by establishing the prevalence of reagent buffaloes for specific diagnostic tests. We analyzed 232 animals serologically by the technique of double immunodiffusion in agarose gel (AGID) for diagnostic of leucosis and the tampon acidified antigen (TAA) test, followed by confirmatory tests of 2-mercaptoethanol (2-ME) and slow serum agglutination (SSA) in tubes for diagnostic of brucellosis. The prevalence of buffaloes that were positive for leucosis and brucellosis tests were 4.21% (10/232) and 5.18%(12/232) respectively. The results of this investigation indicated that the diseases occur in the population studied, however, with low prevalence and without depending on the occurrence of both.
INDEX TERMS: Brucella abortus, VLEB, bubalines , Maranho.

Nancyleni P. Chaves2*, Danilo C. Bezerra2, Larissa S. dos Santos2, Janaira S. S2, Hamilton P. Santos2 e Hlder de M. Pereira2

Recebido em 10 de setembro de 2011. Aceito para publicao em 11 de outubro de 2011. 2 Laboratrio de Diagnstico de Doenas Infecciosas, Universidade Estadual do Maranho (UEMA), Cidade Universitria Paulo VI, Cx. Postal 9, Tirical, So Lus, MA 65055-970, Brasil. *Autor para correspondncia: nancylenichaves@hotmail.com
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RESUMO.- Objetivou-se com este estudo avaliar a intercorrncia entre leucose enzotica e brucelose em bfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produo extensivo, pelo estabelecimento da prevalncia de bubalinos reagentes s provas diagnsticas especficas. Foram analisados sorologicamente 232 animais, pela tcnica de imunodifuso dupla em gel de agarose para diagnstico de leucose enzotica e o teste do antgeno acidificado tamponado, seguida pelos testes confirmatrios 2-mercaptoetanol e soroaglutinao lenta em tubos para diagnstico de brucelose. As prevalncias de bfalos que apresentaram positividade para leucose e brucelose foram 4,21% (10/232) e 5,18% (12/232), respectivamente. Os resultados obtidos nesta pesquisa permitiram concluir que as infeces estudadas encontram-se presentes na populao avaliada, entretanto, com baixa prevalncia e sem dependncia de ocorrncia entre ambas.

TERMOS DE INDEXAO: Brucella abortus, VLEB, bubalinos, Maranho.

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A leucose enzotica e a brucelose so doenas infecto-contagiosas cosmopolitas, caracterizadas pela evoluo crnica e por grandes prejuzos que determinam pecuria bovina nacional ao comprometerem a performance produtiva dos rebanhos, reduzindo a produo, estabelecendo sucessivas condenaes de carcaas em matadouros e restringindo o comrcio de animais, alm do aumento dos custos com servios veterinrios (Paulin & Neto 2003, Silva et al. 2008, Barros Filho et al. 2010). A hiptese da intercorrncia da leucose com doenas bacterianas vem sendo postulada (Melo et al. 2000, Mendes et al. 2011) sob a fundamentao de dois fatores que podem interferir de forma interdependente e associada na etiopatogenia das doenas envolvidas, como: manejo sanitrio a que so submetidos os rebanhos e as caractersticas imunolgicas do Vrus da Leucose Enzotica Bovina (VLEB) (Mendes et al. 2011). O papel do VLEB no desencadeamento de bacterioses oportunistas de importncia clnico-epidemiolgica e em

INTRODUO

sade pblica, como a brucelose, desconhecido. Admite-se, entretanto, que o comprometimento da integridade do sistema imunolgico pela ao imunodepressora do VLEB, que penetra e incorpora-se no genoma linfcitrio por tempo indeterminado (Castro et al. 1988), associado a evidncias imunocitolgicas de que infecta moncitos circulantes (Heeney et al. 1992) aumenta a susceptibilidade do hospedeiro a outras infeces (Burny & Mammerickx 1987). Adicionalmente, estresse do hospedeiro advindo da vida produtiva (lactao e maximizao de ganho de peso) e, principalmente, de doenas intercorrentes, desempenha, provavelmente, importante papel no desencadeamento da replicao dos retrovrus no organismo infectado, condio clnico-imunitria que inclui o VLEB e sua ampla disseminao nos rebanhos bovinos (Wyers 1975, Mendes et al. 2011). Nesse contexto potencialmente crtico, em que infeco e doena representam praticamente o mesmo risco na cadeia epidemiolgica, uma realidade cada vez mais presente nos rebanhos o alastramento do vrus e a iminncia da instalao de um estado de enzootia da brucelose. preciso, pois, a implementao sistemtica de medidas sanitrias que visem o diagnstico e o controle dessas enfermidades (Mendes et al. 2011). Diante do exposto, enfatizando a importncia do conhecimento dessas enfermidades, realizou-se este estudo com o objetivo de avaliar a intercorrncia entre leucose enzotica e brucelose em rebanhos bubalinos da Baixada Maranhense.

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As propriedades de explorao pecuria envolvidas neste estudo encontravam-se submetidas a prticas de manejos semelhantes, onde os rebanhos eram criados de forma extensiva. As propriedades apresentavam limitados recursos tcnicos e baixa rotatividade de animais. Para a determinao do nmero de amostras bubalinas a ser examinada foi estabelecido 16,0% como a prevalncia mnima estimada da infeco por vrus da leucose enzotica bovina (Tenrio 2003), admitindo-se uma margem de erro de 20%, depositando-se nesse resultado um grau de confiana de 95%, desta forma, obteve-se 232 como nmero mnimo de amostras a serem testadas.

Colheita das amostras de sangue As amostras foram colhidas no perodo de julho a dezembro de 2010, por meio de venopuno da jugular, aps antisepsia e com auxlio de agulha descartvel 40 x 12 mm, sendo acondicionadas em tubos de ensaio estreis que permaneceram inclinados e em repouso para facilitar a retrao do cogulo at o processamento laboratorial. Foram centrifugadas durante 15 minutos com fora real de centrifugao igual a 2000G e o soro obtido foi transferido para tubos plsticos e armazenado -20 C. Durante a coleta das amostras foi aplicado questionrio epidemiolgico para obteno de informaes referentes s propriedades, aos animais estudados e ao manejo sanitrio. Testes diagnsticos As anlises sorolgicas foram realizadas no Laboratrio de Diagnstico de Doenas Infecciosas do Curso de Medicina Veterinria da Universidade Estadual do Maranho (UEMA). Leucose enzotica bovina (LEB). As amostras sricas foram examinadas pela Imunodifuso Radial Dupla de Ouchterlony-IDGA-LEB (Birgel 1982), reconhecida mundialmente para deteco de anticorpos sricos especficos anti-VLEB, por meio de um substrato de difuso gelatinoso utilizando-se antgeno glicoproteico (gp 51), extrado do envelope do vrus da leucose enzotica bovina e produzido pelo Instituto de Tecnologia do Paran - TECPAR . A leitura foi realizada 72 horas aps a montagem do sistema. Brucelose. O Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) foi realizado como teste de triagem para deteco de anticorpos anti-Brucella utilizando antgeno produzido pelo TECPAR. As amostras reagentes no AAT foram submetidas simultaneamente ao 2-Mercaptoetanol (2-ME) e Soroaglutinao Lenta em Tubos (SAL) utilizando antgeno produzido pelo TECPAR. A interpretao dos resultados foi realizada mediante a legislao em vigor (Brasil 2004).

rea de estudo O estudo foi realizado em rebanhos bubalinos criados na Baixada Maranhense. Esta regio est localizada na poro noroeste do Estado do Maranho (100- 400S e 4421 - 4521W), abrange extensas reas sujeitas a inundaes e, apresenta tenso ecolgica entre as formaes de cocais ao Sul; cerrados a Leste; floresta Amaznia a Oeste e sistemas marinhos a Norte (Santos 2004). A economia da baixada Maranhense baseada em atividades agropecurias, onde predomina a tradicional pecuria extensiva de gado de corte, concentrada em mdios e grandes produtores, e a dinmica e expansiva pecuria leiteira, concentrada em pequenos e mdios produtores. Esta regio detm o maior rebanho bubalino do estado do Maranho com um efetivo de 48.305 animais e confere ao estado do Maranho o segundo lugar no cenrio nacional na produo desta espcie animal (Maranho 2010). Animais A populao estudada foi constituda por fmeas bubalinas com aptido para corte, mestias da raa Murrah, no imunizadas contra brucelose, com idade superior a 24 meses (Brasil 2001, 2004, 2006). Delineamento amostral O tamanho da amostra foi estabelecido em funo de alguns critrios epidemiolgicos como, tipo de explorao, categoria animal e a rea geogrfica, utilizando-se a tcnica de amostragem preconizada pelo Centro Panamericano de Zoonoses (1988) e pelo Centro Panamericano de Febre Aftosa (Astudillo 1979), relacionados ao estudo de prevalncia das enfermidades crnicas infecciosas.
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MATERIAL E MTODOS

Das 232 amostras de bfalos (Bubalus bubalis) avaliadas no estudo para diagnstico de leucose enzotica 4,31% (10/232) foram positivas. Em relao brucelose, a prevalncia de bfalos reagentes ao teste do Antgeno Acidificado Tamponado foi de

Anlise de dados. Os resultados obtidos foram analisados atravs do programa Instat 2.0 verso 2003, considerando um nvel de significncia de 5% (P 0,05). Inicialmente foi procedida a anlise de contigncia usando-se o teste de Fischer para verificar a existncia de dependncia entre as variveis Leucose Enzotica e Brucelose. Neste caso, quando o valor de P fosse inferior a 5% rejeitar-se-ia a hiptese de independncia, indicando existncia de relao (associao) entre essas duas variveis.

RESULTADOS

Este o primeiro relato de anticorpos anti-VLEB em bfalos (Bubalus bubalis) no Estado do Maranho. Os critrios preconizados por Shettigara (1986) permitiram avaliar que a populao avaliada apresentou prevalncia classificada como de baixa intensidade e, que a leucose enzotica mantm-se em ndices baixos em bubalinos da Baixada Maranhense, entretanto, estes resultados evidenciam que o VLEB est circulando na populao estudada. A baixa frequncia observada nesta pesquisa pode estar associada, possivelmente, aos fatores clssicos de influncia relacionados ao manejo, a gnese da doena e a sua dinmica clnico-epidemiolgica (DiGiacomo 1992, Mendes et al. 2011). De um modo geral, a baixa prevalncia pode ter ocorrido tambm em funo do refinamento racial ou do grau de mestiagem dos rebanhos, uma vez que os animais avaliados eram na totalidade mestios da raa Murrah. A raa um atributo que interage em condies naturais, de forma indissocivel, com as normas de criao. Classicamente, tm-se estabelecido que a doena ocorra com mais frequncia no rebanho leiteiro refinado (raas leiteiras) por ser manejado de forma mais intensiva quando comparado aos rebanhos criados de forma extensiva. O sistema de criao intensivo origina lotao exagerada das criaes, alm de ser submetido a manipulaes tecnolgicas, que mal aplicadas facilitam a transmisso horizontal (principalmente as formas iatrognicas) ou vertical (transplacentria) do VLEB (Mendes et al. 2011). Neste estudo, os resultados obtidos, demonstraram que a baixa disseminao do vrus nos animais estudados, considerando a semelhana do manejo implementado, ocorreu, provavelmente, pelo baixo fluxo de animais nas propriedades, bem como pela baixa introduo de animais importados de outros estados e pases. Moraes et al. (1996) sugerem que a introduo da infeco pelo VLB no rebanho brasileiro est associada importao de animais positivos de outros pases. Foi observado desconhecimento dos produtores sobre leucose, assistncia mdico-veterinria deficiente, alm da ausncia de um programa de sanidade animal que contemple a erradicao desta enfermidade que interfere de forma negativa na produtividade dos rebanhos. Os resultados demonstram que a brucelose encontra-se em baixos ndices nos rebanhos bubalinos avaliados. Esse valor foi equivalente aos dados oficiais que indicam a prevalncia de animais soropositivos para brucelose entre 4 e 5% (Brasil 2006), bem como levantamentos anteriores realizados no Maranho para bovinos (Santos et al. 2007).

5,18% (12/232). As amostras positivas neste teste foram submetidas aos testes confirmatrios (2-mercaptoetanol e soroaglutinao lenta em tubos) e, todas reagiram positivamente, com ttulos de anticorpos que variaram de 1:100 a 1:200, confirmando a infeco nestes animais. Na populao estudada, a prevalncia de bfalos reagentes simultaneamente aos testes IDGA e sorolgico para brucelose foi 0,87% (2/232). A anlise de contigncia por meio do teste exato de Fischer demonstrou independncia na ocorrncia entre as duas enfermidades (P>0.05).

Intercorrncia entre leucose enzotica e brucelose em bfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produo extensivo

DISCUSSO

Astudillo V.M. 1979. Encuesta por muestra para estudios epidemiologicos en populaciones animales. Serie de Manuales Didticos n. 12, Centro Panamericano de Febre Aftosa, Rio de Janeiro.60p.

Os resultados obtidos nesta pesquisa, considerando a anlise e interpretao dos aspectos sanitrios da leucose e da brucelose nos rebanhos bubalinos examinados, permitiram concluir que a prevalncia encontrada para ambas as enfermidades foi baixa. Entretanto, a presena de anticorpos anti-VLEB e anti-Brucella abortus indica que os agentes etiolgicos esto circulando na populao bubalina da Baixada Maranhense e representam alerta aos servios de vigilncia veterinria pelo risco iminente de comprometimento da sade dos rebanhos bubalinos e, pelo carter zoontico da brucelose. A infeco simultnea de poucos animais sugere que o VLB desempenha pouca influncia no desencadeamento da brucelose bubalina.

A baixa frequncia para anticorpos anti-Brucella abortus identificada no estudo deve-se aos efeitos de um conjunto de aes sanitrias oficiais conduzidas ao longo das ltimas dcadas em praticamente todas as regies do pas. Positividade simultnea aos testes IDGA e sorolgico para brucelose indica presena de bubalinos potencialmente infectados e fontes naturais do VLB e/ou de Brucella abortus nos rebanhos, entretanto, no foi verificada associao entre essas duas variveis (P>0,05), o que refora a hiptese de independncia destas enfermidades no rebanho estudado. Infeco e doena representam mesmo risco na cadeia epidemiolgica da LEB e brucelose, logo, os bubalinos, portadores inaparentes de infeco, so elementos precursores da gnese das duas doenas na populao examinada, sendo seu reconhecimento indispensvel para projeo do problema, possibilitando o mapeamento de focos e a antecipao de medidas mais efetivas de combate por meio de programas sanitrios oficiais (Mendes et al. 2011). Os animais infectados podem apresentar diminuio da produtividade, representar condenaes de carcaas em matadouros, restries comerciais e aumento dos custos com servios veterinrios. Alm disso, considerando o carter irreversvel da infeco pelo VLEB e Brucella abortus associado ao carter zoontico da brucelose, para o saneamento de rebanhos, os bubalinos reagentes devem ser sacrificados, o que implica em prejuzos para os produtores. A presena de anticorpos anti-VLEB e anti-Brucella abortus representa deteriorao das condies de sade dos animais examinados, pertencentes basicamente a pequenos produtores, os quais, ao recorrerem a mecanismos alternativos de ateno Mdico Veterinria ou tentarem obter ganhos comerciais, promovem o trnsito e trfico de bovinos infectados entre suas criaes, podem disseminar estes agentes no Estado do Maranho.

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CONCLUSES

REFERNCIAS

Barros Filho I.R., Guimares A.K., Sponchiado D., Krger E.R., Wammes E.V., Ollhoff R.D., Dornbusch P.T. & Biondo A.W. 2010. Soroprevalncia de anticorpos para o vrus da leucose enzotica em bovinos criados na

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