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RESUMO
O Sistema de secreo tipo III (T3SS) um mecanismo bacteriano
que media interaes elaboradas com seus hospedeiros. Este sistema
essencial para a virulncia de bactrias Gram-negativas, atuando na
exportao de protenas durante a interao destas com seus hospedeiros.
Estas protenas podem atuar principalmente em alteraes na via de
sinalizao celular e no estmulo patognese e respostas imunes. O T3SS
pode ser explorado para fins benficos, como o desenvolvimento de
estratgias para neutralizar interaes nocivas entre fitobactrias e plantas
hospedeiras, bem como no desenvolvimento de vacinas, terapias anti-cncer
e estudos evolutivos.
SUMMARY
SECRETION TYPE III
The Type III Secretion System (T3SS) is a mechanism that mediates
bacterial interactions with their hosts. This system is essential for the
virulence of Gram-negative bacteria, acting in the export of proteins during
their interactions with hosts. These proteins can act mainly through
alterations in cell signalization and pathogenesis and stimulations of immune
responses. The T3SS can be exploited for beneficial purposes, such as
developing strategies to neutralize harmful interactions between
phytobacteria and host plants, as well as the development of vaccines, anticancer therapies, and evolutionary studies.
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INTRODUO
Bactrias patognicas a animais e a plantas esto constantemente
desenvolvendo sofisticadas estratgias para infectar seus hospedeiros. A
colonizao bacteriana de um hospedeiro muitas vezes depende de protenas
extracelulares, o que torna a investigao dos sistemas de secreo dessas
protenas um importante foco da pesquisa microbiolgica.
Secreo geralmente definida como o transporte ativo da protena
atravs da membrana citoplasmtica bacteriana, enquanto a translocao
refere-se ao transporte das protenas atravs da membrana celular do
hospedeiro. At o momento, seis sistemas de secreo de protenas foram
identificados: tipo I, II, III, IV, V e VI (Thanassi & Hultgren, 2000) (Figura
1), sendo o sistema de secreo tipo III o alvo da presente reviso.
As protenas bacterianas secretadas possuem diversas funes,
dentre elas, aderir e degradar a parede celular das plantas a fim de suprimir
suas respostas de defesa e, levar DNA e protenas at o citoplasma de clulas
vegetais (Arnold et al., 2009).
O Sistema de secreo tipo I consiste de 3 elementos: uma protena
ABC (ATP-binding cassette); uma protena de fuso de membrana, que
forma uma ponte entre as membranas externa e interna; e uma protena do
canal de poros da membrana externa (Schmitt & Tamp, 2002). O sistema de
secreo tipo I permite a secreo em uma nica etapa de uma ampla gama
de substratos do citoplasma para o espao extracelular, sem um intermedirio
periplsmico (Gerlach & Hensel, 2007). As protenas bacterianas conhecidas
por serem exportadas pelo sistema ABC so predominantemente proteases,
lipases e haemolisinas (Preston et al., 2005). Pseudomonas syringae pv.
tomato possui 15 ABC com especificidades para arabinose, xilose, ribose e
outros aucares derivados de plantas, alm de proteo osmtica (Buell et al.,
2003). Pseudomonas syringae pv. syringae secreta protena anticongelamento e P. syringae pv. phaseolicola as toxinas phaseolotoxina e
siringomicina (Feil et al., 2005).
O sistema de secreo tipo II est envolvido na exportao de vrias
protenas, enzimas, toxinas e fatores de virulncia de uma ampla variedade de
bactrias Gram-negativas. O sistema um processo de dois estgios onde as
protenas para serem secretadas so primeiramente translocadas (ou
exportadas) atravs da membrana citoplasmtica por uma translocase (Sec ou
Tat) e ento transportadas atravs da membrana externa. Cerca de 12 a 15
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2. COMPONENTES DO T3SS
Os componentes dos sistemas de secreo do tipo III so em geral
codificados por genes fisicamente ligados e, normalmente, cerca de 20 a 35
genes so necessrios para uma secreo do tipo III e/ou translocao
funcional (Hueck, 1998).
O T3SS foi primeiramente descoberto em Yersinia, bactria
patognica de mamferos, e desde ento tem sido encontrado em diversas
bactrias Gram-negativas patognicas a plantas e a mamferos (He, 1998;
Buttner & Bonas, 2002). Yersinia spp. secretam via T3SS pelo menos 14
protenas Yop (Yersinia outer proteins) diferentes. Os genes que codificam
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Yops, bem como aqueles que codificam o sistema de secreo tipo III (genes
ysc), esto localizados em um plasmdeo de virulncia ativado em baixas
concentraes de ons de clcio e na temperatura de 37 C (Yother et al.,
1986) (Fig. 3).
Macrfago
Translocao
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contato fsico entre a bactria e a clula hospedeira parece ser um prrequisito para a translocao de protenas (Fig 4).
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3. T3SS E PATOGNESE
Protenas translocadas atravs das membranas lipdicas, conhecidas
por protenas efetoras, so injetadas diretamente no citoplasma de clulas
hospedeiras eucariticas. Dentro do citoplasma da clula eucaritica, os
efetores burlam a sinalizao da clula hospedeira em benefcio da bactria,
no caso de patgenos, ou de ambos, no caso de simbiontes (Hueck, 1998;
Cornelis & Van Gijsegem, 2000; Ghosh, 2004; Mota et al., 2005).
A habilidade de isolados de Pseudomonas syringae se
multiplicarem no apoplasto da planta e causar doena dependente do
sistema de secreo do tipo III e de protenas efetoras secretadas atravs
desse sistema (Lindgren, 1997; He, 1998), que iro alterar processos
celulares do hospedeiro e promover o desenvolvimento da doena. Em adio
ao T3SS, isolados de P. syringae podem possuir determinantes adicionais de
virulncia, tais como fitotoxinas capazes de aumentar sua agressividade
(Bender et al., 1999; Katagiri et al., 2002; Jin et al., 2003).
Vrias molculas efetoras foram identificadas com base na sua
atividade de avirulncia, onde os genes Avr so transcritos e seus produtos
gnicos reconhecidos pelas protenas R (gene R), que intervm no processo
de virulncia do patgeno (Lucas, 1998; Bent & Mackey, 2007). Entretanto,
quando o produto do gene Avr interage com plantas suscetveis (ausentes
gene R), inicia-se a patognese.
A identificao de mutantes bacterianos hrp em Pseudomonas
syringae pv. phaseolicola ajudou a esclarecer este processo (Lindgren et al.,
1986; Alfano & Collmer, 2004). A resposta de hipersensibilidade (HR) uma
defesa freqentemente associada ao gene R em plantas resistentes,
acarretando na morte de clulas vegetais no stio de infeco (Heath, 2000).
Mutantes hrp perderam a habilidade de causar HR em plantas resistentes,
mas por outro lado mantiveram a patognese em plantas suscetveis,
provando a evidencia da atividade de avirulncia e virulncia das molculas
efetoras.
Assim, pode-se inferir que os genes Avr possuem funes essenciais para a
virulncia do patgeno (Saito et al., 1987; Harrison, 2002; Bent & Mackey,
2007).
Recentemente foram identificadas molculas efetoras relacionadas
aos genes Hop. Estes genes codificam para protenas hrp externas, que
podem ter atividade Avr em alguns hospedeiros (Alfano & Collmer, 2004;
Bent & Mackey, 2007). O nmero de molculas efetoras que o patgeno
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introduz nas clulas hospedeiras pelo sistema de secreo tipo III pode variar
de 20 a 100 (Cunnac et al., 2004; Lindeberg et al., 2006; Bent & Mackey,
2007).
Pesquisas revelaram que molculas efetoras possuem capacidade de
suprimir as respostas de defesa induzidas por MAMPs (padres moleculares
associados a micrbios). A inibio do sinal ativado pelos MAMPs de
extrema importncia para a virulncia bacteriana. Assim, bactrias que
produzem molculas efetoras no adaptadas ou que no so capazes de
introduz-las nos hospedeiros no so patognicas, pelo menos em parte, pois
no conseguem inibir a sinalizao do MAMP (Bent & Mackey, 2007).
Vrias efetoras do T3SS inibem a morte celular causada pela HR.
Uma molcula efetora do T3SS pode inibir HR previamente ativada
por outro efetor reconhecido por determinada protena R. Por exemplo,
AvrPphC impede uma HR induzida pelo AvrPphF/protena R nas principais
cultivares de feijo (Jackson et al., 1999). Da mesma forma, AvrRpt2
bloqueia especificamente a HR induzida pela RPM1 (protena R) em
Arabdopsis (Nurnberger & Scheel, 2001). (Axtell & Staskawicz, 2003;
Mackey et al., 2003). Algumas destas molculas so inibidores generalizados
da morte programada de clulas, cujos efeitos so observados em clulas de
leveduras (Abramovitch et al., 2003; Jamir et al., 2004).
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Pseudomonas spp. (Kim et al., 2005; Grlebeck et al., 2006; Kay & Bonas,
2009). Como exemplo, espcies de Xanthomonas spp. sintetizam as protenas
efetoras XopD e AvrBs3 que esto envolvidas no processo de patognse e
sinalizao para a resposta de defesa (Kay e Bonas, 2009). A protena efetora
XopD de X. vesicatoria induz o crescimento e retarda o incio da clorose e
necrose foliar, promovendo a infeco tardia em plantas de tomate,
presumivelmente para sustentar a populao bacteriana no tecido infectado
(Kim et al., 2008). No entanto, a protena de importao e complexa-se a
AvrBs3 sinalizando para a transcrio de genes de defesa presentes no ncleo
(Grlebeck et al., 2006; Kim et al., 2008). Notadamente, a protena de
importao desempenha o papel das protenas-guardas reconhecendo
diretamente a protena efetora AvrBs3 e sinalizando para a protena de
importao se ligar ao complexo mediando-o para dentro do ncleo (Fig 7).
Assim, desencadeada a cascata de defesa que culmina em diversas reaes,
como a reao de hipersensibilidade (HR) e hipertrofia (Grlebeck et al.,
2006).
Outro sistema de defesa importante modulado pelo T3SS est
relacionado P. syringae pv. tomato (Martin et al., 2003; Wu et al., 2004;
Mucyn et al., 2006). No apoplasto a fitobactria estabelece contato com uma
clula do hospedeiro e dispara via T3SS as protenas efetoras AvrPto e
AvrPtoB (Barinaga, 1996; Galan & Collmer, 1999; Hammond-Kosack &
Jones, 2002; Mucyn et al., 2006; Lin & Martin, 2007). Em seguida, a
protena Pto interage fisicamente com as molculas efetoras, mas no sinaliza
para o incio da resposta de defesa. Isso ocorre porque a protena Pto
dependente da protena Prf para iniciar o domin de eventos que resultam na
morte da fitobactria. Notadamente a Prf a protena-guarda responsvel por
ancorar ao complexo AvrPto-Pto ou AvrPtoB-Pto sinalizando para a
transcrio de genes de defesa (Fig 8).
No caso da defesa de Arabidopsis thaliana a P. syringae o T3SS
libera as trs protenas efetoras AvrB, AvrRpm1 e AvrRpt2 no citoplasma
celular da planta (De Wit, 2002; Mackey et al., 2003; Innes, 2004). O alvo
dessas molculas efetoras a protena do hospedeiro RIN4, que interage
fisicamente com a protena RPM1 (Mackey et al., 2002; Axtell &
Staskawicz, 2003; Mackey et al., 2003). Esta, por sua vez, desempenha o
importante papel no reconhecimento da interao AvrB-RIN4 ou AvrRpm1RIN4, iniciando o disparo da resposta de defesa contra a ao da fitobactria
(Innes, 2004). Assim, de acordo com o sistema guarda, RPM1 seria a
protena-guarda e RIN4 o alvo das protenas efetoras do T3SS (Fig 9) (De
Wit, 2002; Mackey et al., 2002; Mackey et al., 2003; Belkhadir et al., 2004).
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Figura 8. Modelo proposto por Martin et al. (2003) e modificado por Lanna
Filho e Resende (2009) mostrando a potencial rota de sinalizao
da resistncia em plantas de tomate contra Pseudomonas syringae
pv. tomato iniciada pela injeo da protena efetora no citoplasma
via T3SS. A protena-guarda Prf est envolvida no reconhecimento
do complexo AvrPto-Pto, para que haja o incio da resposta de
defesa envolvendo a ativao dos fatores de transcrio (Pti4, Pti5
e Pti6) e da protena Pti1. Assim, ocorre a expresso de protenas
relacionadas patognese (PRPs).
5. PERSPECTIVAS
A elucidao do funcionamento do sistema de secreo tipo III
(T3SS) um importante fator, pois contribui para o desenvolvimento de
estratgias de controle de doenas. Alm do que, estudos visando ao controle
de bactrias patognicas a mamferos podem ser extrapolados para plantas,
dado que o sistema de secreo semelhante.
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LITERATURA CITADA
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