Ghid de Biosiguranta 2005

MINISTERUL SNTII
GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE
2005
Ghid naional de biosiguran pentru laboratoarele medicale reprezint traducerea i adaptarea n limba romn a lucrrii Laboratory biosafety manual ediia a III-a, Organizaia Mondial a Sntii, Geneva, 2004, completat cu Clasicarea agenilor biologici care reprezint traducerea Anexei III a Directivei 2000/54 a Parlamentului European i Consiliului din data de 18 Septembrie 2000, referitoare la protejarea lucrtorilor mpotriva riscurilor presupuse de expunerea la ageni biologici la locul de munc. Responsabilitatea pentru ediia n limba romn revine grupului de lucru. Lucrarea n limba romn a fost realizat cu asistena tehnic din partea Uniunii Europene prin urmtoarele proiecte Phare: - RO-2002/000-586.04.11.01 Restructurarea Reelei de Centre Regionale HIV/SIDA cu scopul de a mbunti activitile de prevenire i accesul la ngrijiri al persoanelor infectate HIV - RO 0107.14 Creterea ecienei sistemului romnesc de supraveghere epidemiologic i control ale bolilor transmisibile Grup de lucru (n ordine alfabetic) Daniela Bdescu - Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie i Imunologie Cantacuzino Dana Brehar Cioec - Institutul de Sntate Public Timioara Dan Butur - Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie i Imunologie Cantacuzino Andrei Aubert-Combiescu - Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie i Imunologie Cantacuzino Elena Crucerescu - Institutul de Sntate Public Iai Lenua Filipa - Direcia de Sntate Public Dolj Silvia Filipiuc - Direcia de Sntate Public Suceava Maria Hncu - Direcia de Sntate Public Galai Carmen Hura - Institutul de Sntate Public Iai Luminia Smaranda Iancu - Institutul de Sntate Public Iai Gabriel Ionescu - Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie i Imunologie Cantacuzino tefan Maximencu - Institutul de Sntate Public Cluj Mihaela Mihailov - Direcia de Sntate Public Bacu Eugenia Negu - Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie i Imunologie Cantacuzino Daniela Piigoi Universitatea de Medicin i Farmacie Carol Davila Bucureti Elena Schiopu - Direcia de Sntate Public Sibiu Mariana Solomon - Direcia de Sntate Public Hunedoara Ecaterina Texe - Direcia de Sntate Public Bihor Olivia Vizitiu - Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie i Imunologie Cantacuzino Coordonatorul ediiei: Gabriel Ionescu Alese mulumiri coordonatorilor de proiecte: Marc Lejars, Rob Stevens, Barbara Pearcy Ghid naional de biosiguran pentru laboratoarele medicale Ministerul Sntii, Romnia, 2005 ISBN 973-99-893-7-3 Tiprit n 700 exemplare
MINISTERUL SNTII
2005
Descrierea CIP a Bibliotecii Naionale a Romniei Ghid naional de biosiguran pentru laboratoarele medicale Ediia a I-a, Bucureti, Editura Medical 2006 Coordonatorul ediiei: Gabriel Ionescu format: 210x297mm, copert laminat, 166 pagini, 700 exemplare ISBN 973-99-893-7-3 Traducere dup Laboratory biosafety manual ediia a III-a, Organizaia Mondial a Sntii, Geneva, 2004,
Cuvnt nainte la ediia n limba romn

Ghidul naional de biosiguran pentru laboratoarele medicale este traducerea n limba romn a celei de a treia ediii a publicaiei OMS Laboratory Biosafety Manual aprute n anul 2004, completat cu unele prevederi coninute n Directiva Comisiei Europeene nr. 2000/54. Realizarea i tiprirea acestui ghid a fcut parte din obiectivele a dou proiecte desfurate sub egida Ministerului Sntii i nanate din programul PHARE i anume: - RO-2002/000-586.04.11.01 Restructurarea Reelei de Centre Regionale HIV/SIDA cu scopul de a mbunti activitile de prevenire i accesul la ngrijiri al persoanelor infectate HIV i - RO 0107.14 Creterea ecienei sistemului romnesc de supraveghere epidemiologic i control ale bolilor transmisibile. Dat ind c prezentul ghid a fost redactat sub egida Ministerului Sntii, cu contribuia unor specialiti care lucreaz n laboratoare de diagnostic i sntate public din domeniul medicinii umane, el se dorete n primul rnd un ndreptar pentru aceast categorie de instituii. Menionm totui c riscurile de accidente care cad sub incidena preocuprilor de biosiguran i biosecuritate se ntlnesc i n laboratoarele din domeniul veterinar, tosanitar, din laboratoarele care controleaz ecacitatea substanelor bactericide i bacteriostatice i, n unele situaii, n laboratoarele care fac controlul apei i alimentelor etc. Reamintim c n anul 1996 a aprut, ca un numr special al revistei Studii i cercetri de Virusologie, un Manual pentru Bioprotecie n Laborator, care coninea traducerea n limba romn a celei de a doua ediii a aceluiai manual publicat de OMS n anul 1993. Aceast publicaie a avut la acea vreme un rol important de informare i documentare a specialitilor din ara noastr asupra problematicii respective, ntr-un moment n care lipseau aproape cu desvrire texte romneti n materie. Apariia acestei noi ediii, aduse la zi, se impunea avnd n vedere c n prezent toate laboratoarele care manipuleaz microorganisme potenial patogene nu pot autorizate dac nu posed i nu aplic manuale proprii de biosiguran, pentru a cror elaborare prezentul ghid este practic indispensabil. Problema terminologiei romneti n acest domeniu a constituit o dicultate major ntmpinat de toi specialitii care au tradus i adaptat textele respective. Autorii versiunii de fa s-au strduit s adopte i s contribuie la ncetenirea unor termeni care s corespund ct mai del ca neles cu cei utilizai la ora actual n documentaia internaional, evitnd n msura posibilului introducerea de neologisme nc neintrate n limba romn curent. Este ns evident c n orice disciplin tehnic exist n toate limbile un jargon adoptat prin consens de toi specialitii. De acest lucru au fost contieni i traductorii respectivi, care au convenit asupra unor termeni tehnici care s e ct mai apropiai de sensul curent al termenului respectiv n limba romn, dar care s nsemne acelai lucru cu cei din textul englez de origine. n cele ce urmeaz ne vom opri asupra ctorva exemple mai relevante n aceast privin. Lucrarea a fost denumit Ghid i nu Manual, ntruct aceast lucrare este gndit s serveasc drept ndrumar pentru ca instituiile n care funcioneaz laboratoare biomedicale s i alctuiasc propriile lor Manuale de biosiguran. S-au adoptat termenii Biosiguran i, respectiv, Biosecuritate pentru traducerea termenilor anglo-saxoni Biosafety i, respectiv, Biosecurity, renunndu-se la termenul Bioprotecie utilizat n textele anterioare. Motivul este c, prin consens internaional, termenul Bioprotection are o sfer mai larg de cuprindere. Alegerea de mai sus s-a fcut chiar dac n limbajul curent termenii de siguran i securitate sunt cvasi-sinonimi n limba romn. Termenii respectivi sunt denii adecvat la locul potrivit n text; menionm aici c biosigurana se refer la prevenirea accidentelor iar biosecuritatea la prevenirea incidentelor generate de utilizarea cu rea intenie a unor ageni infecioi. I
Aceast difereniere a aprut n ultima ediie a manualului OMS, ind generat de evoluia evenimentelor din societatea uman n ultimul deceniu, care au impus ateniei omenirii problema riscurilor bioteroriste. O dicultate deosebit a fost ntlnit pentru traducerea del i corect n limba romn a termenului anglo-saxon Containment (tradus n textele franceze de specialitate prin Connement). Iniial, acest termen fusese tradus prin interdicie (vezi Manualul pentru bioprotecie n laborator publicat n 1996 n revista Studii i Cercetri de Virusologie). Au mai fost de asemenea avute n vedere ca variante posibile termeni ca ngrdire, restricie, izolare, dar s-a considerat c nici unul nu acoper integral sensul n care este folosit termenul de containment (respectiv connement) n textele de specialitate pentru a indica pstrarea, manipularea i transportul n condiii de securitate pentru lucrtori i pentru mediul nconjurtor a microorganismelor cu risc patogen. Am convenit prin consens s adoptm n acest scop termenul de securizare (respectiv adjectivul securizat) pentru a evita utilizarea unor locuiuni mai mult sau mai puin lungi. A fost preferat termenul de hot de lucru, respectiv hot de siguran biologic sau hot de protecie chimic pentru traducerea termenului anglo-saxon cabinet (v. biological safety cabinet) n locul variantelor incint sau ni utilizate n alte texte, considernd c hota a intrat mai degrab n limba romn cu nelesul cel mai apropiat de cel desemnat de englezescul cabinet folosit n acest context. Suntem convini c s-ar putut gsi n numeroase locuri din Ghid formulri mai potrivite i ateptm sugestiile cititorilor pentru a ameliora textul n vederea publicrii unor ediii viitoare. Aceste sugestii i critici pot adresate Dr. Gabriel Ionescu, I.N.C.D.M.I. Cantacuzino, Splaiul Independenei 103, Bucureti, fax 021 3184414, email: gionescu@cantacuzino.ro. Considerm c datele cuprinse n Ghidul de biosiguran ar trebui s fac parte i ele, ca i cele din cadrul capitolului mare al demersului de calitate, din curricula formrii profesionale a cadrelor superioare, medii i ajuttoare care se dedic lucrului n laboratoare biomedicale. Bineneles c aceste noiuni vor trebui prezentate, mprosptate i actualizate cu ocazia instructajelor iniiale i a celor periodice din cadrul ecrui laborator. Pornind de la toate considerentele de mai sus, considerm c Ghidul naional de biosiguran pentru laboratoarele medicale va constitui un ndreptar indispensabil pentru activitatea tuturor laboratoarelor biomedicale din Romnia. Prof. Dr. Andrei Aubert-Combiescu Prof. Dr. Marian Negu
II
Cuvnt nainte
Organizaia Mondial a Sntii (OMS) a recunoscut de mult timp c sigurana i, n particular, sigurana biologic reprezint probleme importante pe plan internaional. OMS a publicat prima ediie a Manualului de biosiguran n laborator n anul 1993. Acest manual a ncurajat statele s accepte i s implementeze noiunile de baz privind sigurana biologic i s elaboreze coduri naionale de practic pentru manipularea n condiii de siguran a microorganismelor patogene n laboratoarele aate pe teritoriile lor. Din anul 1983, multe ri au urmat ndrumrile din acest manual pentru a elabora astfel de coduri de practic. A doua ediie a manualului a fost publicat n 1993. OMS continu s dein un rol coordonator n probleme legate de biosiguran la nivel internaional prin aceast a III-a ediie a manualului n care sunt abordate sigurana i securitatea biologic cu care ne confruntm n acest mileniu. Cea de-a III-a ediie subliniaz importana responsabilitii personale. Au fost adugate noi capitole privind evaluarea riscului, utilizarea n siguran a tehnologiei ADN recombinant i transportul materialelor infecioase. Recentele evenimente pe plan mondial au dezvluit noi ameninri pentru sntatea public prin utilizarea ru intenionat i eliberarea n mediul nconjurtor de ageni microbieni i toxine. De aceea, cea de-a III-a ediie introduce conceptele privind biosecuritatea protejarea materialului microbiologic mpotriva furtului, pierderii sau al diversiunii, care pot conduce la utilizarea neadecvat a acestor ageni i la afectarea sntii publice. Aceast ediie include i informaii privind sigurana cuprinse n publicaia OMS din 1997 Sigurana n laboratoarele din unitile sanitare (1). A III-a ediie a Manualului OMS de biosiguran n laborator constituie un preios material de referin i un ghid pentru naiunile care sunt contiente de necesitatea de a elabora i stabili coduri naionale de practic pentru securizarea materialului microbiologic, asigurnd n plus disponibilitatea acestuia pentru scopuri clinice, de cercetare i epidemiologice. Dr. A. Asamoa-Baah Assistant Director-General Communicable Diseases World Health Organization Geneva, Switzerland
III
Mulumiri
Elaborarea acestei a III-a ediii a Manualului de biosiguran n laborator a fost posibil prin contribuia deosebit a urmtorilor : Dr W. Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD, USA Dr Murray L. Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA (pensionat) Dr Ingegerd Kallings, Swedish Institute of Infectious Disease Control, Stockholm, Sweden Ms Mary Ellen Kennedy, Consultant in Biosafety, Ashton, Ontario, Canada Ms Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne, Australia (pensionat) Dr Richard Knudsen, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA Dr Nicoletta Previsani, Biosafety programme, World Health Organization, Geneva, Switzerland Dr Jonathan Richmond, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA (pensionat) Dr Syed A. Sattar, Faculty of Medicine, University of Ottawa, Ottawa, Ontario, Canada Dr Deborah E. Wilson, Division of Occupational Health and Safety, Ofce of Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, Washington, DC, USA Dr Riccardo Wittek, Institute of Animal Biology, University of Lausanne, Lausanne, Switzerland Asistena urmtorilor specialiti este, de asemenea, apreciat: Ms Maureen Best, Ofce of Laboratory Security, Health Canada, Ottawa, Canada Dr Mike Catton, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne, Australia Dr Shanna Nesby, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA Dr Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health, Winnipeg, Canada Autorii i referenii doresc s mulumeasc, de asemenea, pentru contribuiile originale ale numeroilor specialiti a cror munc a fost inclus n prima i a doua ediie a Manualului de biosiguran n laborator precum i n publicaia Sigurana n laboratoarele din unitile de ngrijire a sntii, OMS, 1997.
IV
CUPRINS
Cuvnt nainte la ediia n limba romn Cuvnt nainte Mulumiri Cuprins 1. Principii generale 2. Evaluarea riscului microbiologic 3. Laboratoarele de baz Nivelele de Biosiguran 1 i 2 4. Laboratorul securizat Nivelul de Biosiguran 3 5. Laboratorul nalt securizat Nivelul de Biosiguran 4 6. Biobazele 7. Recomandri pentru calicarea laboratorului/facilitilor acestuia 8. Recomandri pentru certicarea laboratorului/facilitilor acestuia 9. Conceptul de biosecuritate n laborator 10. Hotele de siguran biologic 11. Echipamente de siguran 12. Practici microbiologice corecte. Tehnici de laborator 13. Planuri pentru intervenii n caz de accidente i msuri de urgen 14. Dezinfecia i sterilizarea 15. Noiuni introductive privind transportul materialelor infecioase 16. Biosigurana i tehnologia ADN recombinant 17. Substane chimice periculoase 18. Pericole adiionale n laborator 19. Responsabilul cu biosigurana i comitetul de biosiguran 20. Reguli de siguran pentru personalul auxiliar 21. Programele de instruire 22. List-chestionar Anexa 1 - Primul-ajutor Anexa 2 - Imunizarea personalului Anexa 3 - Centre colaboratoare ale OMS n domeniul biosiguranei Anexa 4 - Sigurana microbiologic a echipamentelor Anexa 5 - Substanele chimice: pericole i precauii Anexa 6 - Clasicarea agenilor biologici Bibliograe V I III IV V 1 5 7 17 21 25 31 33 45 47 57 63 71 75 85 89 93 97 103 105 107 109 115 117 119 121 125 151 163
1. PRINCIPII GENERALE
1. Principii generale
Introducere Prezentul ghid se refer la pericolul infecios implicat de manipularea diferitelor microorganisme, lund n considerare grupurile de risc crora le aparin (Grupurile de Risc OMS 1, 2, 3 i 4, vezi Anexa 6). Aceast clasicare a grupurilor de risc este valabil doar pentru activitatea de laborator. Tabelul 1 descrie grupurile de risc. Tabel 1. Clasicarea microorganismelor infecioase pe grupuri de risc Grup de risc 1 (risc infecios individual sau comunitar sczut sau absent) Microorganisme cu probabilitate minim de a provoca mbolnvire la om sau animal Grup de risc 2 (risc individual moderat, risc comunitar sczut) Ageni patogeni care pot provoca mbolnvire la om sau animal, dar este puin probabil s reprezinte un pericol sever pentru personalul de laborator, comunitate, faun sau mediu. Expunerile n laborator pot cauza infecii severe dar pentru care exist tratament ecace i msuri prolactice, iar riscul de rspndire al infeciei este limitat. Grup de risc 3 (risc individual ridicat, risc comunitar sczut) Ageni patogeni care n mod obinuit provoac mbolnvire sever la om sau animal, dar, de regul, nu se rspndesc de la un individ infectat la altul. Exist tratament ecace i msuri prolactice. Grup de risc 4 (risc individual i comunitar ridicat) Ageni patogeni care provoac, de regul, mbolnvire sever la om sau animal i care se pot transmite spontan de la un individ la altul, direct sau indirect. Nu exist, n general, tratament ecace i msuri prolactice.
Din punctul de vedere al biosiguranei, laboratoarele se clasic astfel : - de baz - Nivel de biosiguran 1 - de baz - Nivel de biosiguran 2 - securizat - Nivel de biosiguran 3 - nalt securizat - Nivel de biosiguran 4 Aceast clasicare are la baz un complex de caracteristici ce se refer la proiectarea i construcia laboratorului, nivelul de securizare, dotarea cu echipamente, practicile i procedurile operaionale pe care le implic manipularea microorganismelor din diferite grupuri de risc. Fr a exhaustiv, Tabelul 2 prezint corespondena dintre grupul de risc n care se ncadreaz microorganismul i nivelul de biosiguran al laboratorului n care acesta se manipuleaz.
Tabel 2. Relaia dintre grupurile de risc i nivelele de biosiguran Grup de risc 1 Nivel de biosiguran Tip de laborator Practici de laborator GMT Echipamente de protecie Nici un fel; suprafa de lucru deschis Suprafa de lucru deschis plus HSB pentru producerea eventual de aerosoli HSB i/sau alte dispozitive primare pentru toate activitile HSB clasa a III-a sau costum cu presiune pozitiv combinat cu HSB clasa a II-a, autoclav cu dou ci de acces (transmural), aer ltrat
De baz - Nivel de nvmnt, biosiguran 1 cercetare
GMT plus Servicii de asisten De baz - Nivel de mbrcminte de primar; diagnostic, biosiguran 2 protecie i semn de cercetare pericol biologic Securizat Nivel de biosiguran 3 Servicii speciale de diagnostic, cercetare Similar cu nivelul 2 plus mbrcminte special, acces controlat, ux de aer direcionat
nalt securizat - Nivel de biosiguran 4
Similar cu nivelul 3 plus intrare etan, Uniti pentru ageni du la ieire, patogeni periculoi eliminare special a deeurilor
GMT = Good Microbiological Techniques (practici microbiologice corecte) HSB = Hot de siguran biologic OMS recomand elaborarea la nivel naional sau regional a unei clasicri a microorganismelor, pe baza grupurilor de risc, lund n considerare urmtoarele : 1. Patogenicitatea microorganismului. 2. Modul de transmitere i tipul de gazd caracteristice microorganismului, elemente ce pot inuenate de nivelul de imunitate al populaiei, densitatea i mobilitatea populaiei gazd, prezena vectorilor i de nivelul de igien a mediului. 3. Posibilitile locale de aplicare a unor msuri preventive ecace. Acestea pot include : prolaxia prin imunizare activ (vaccinare) sau pasiv (administrare de antiseruri / imunoglobuline specice); aplicarea de msuri sanitare, ca de exemplu cele privind igiena alimentelor i a apei; controlul rezervorului animal sau al vectorilor reprezentai de artropode. 4. Posibilitile de administrare a unor tratamente ecace. Acestea pot include: imunizarea pasiv, vaccinrile postexpunere, folosirea de antibiotice, antivirale i ageni chimioterapici, lund n considerare i posibilitatea emergenei de tulpini rezistente la acestea. n Anexa 6 este prezentat clasicarea agenilor biologici conform Anexei III a Directivei 2000/54/ CE a Parlamentului European i Consiliului, din data de 18 Septembrie 2000, referitoare la protejarea lucrtorilor mpotriva riscurilor pe care le implic expunerea la ageni biologici la locul de munc. Desemnarea nivelului de biosiguran pentru lucrul n laborator trebuie s se bazeze pe evaluarea riscului. Pentru stabilirea nivelului corect de biosiguran, evaluarea va lua n considerare grupul 2
1. PRINCIPII GENERALE
de risc cruia i aparine microorganismul, dar i ali factori ce pot interveni. Pentru exemplicare, un microorganism aparinnd grupului de risc 2 necesit n general localuri i utiliti, echipamente, practici i proceduri pentru desfurarea n siguran a activitilor caracteristice Nivelului de biosiguran 2. Dac totui anumite experimente sunt generatoare de aerosoli n concentraii mari, Nivelul de biosiguran 3 este mai indicat, asigurnd un grad superior de limitare a aerosolilor la spaiul de lucru al laboratorului. Aprecierea nivelului de biosiguran necesar desfurrii unei anumite activiti este ghidat de judecata profesional bazat pe evaluarea riscului, i nu doar pe desemnarea mecanic a unui nivel de biosiguran a laboratorului dupa grupul de risc cruia i aparine microorganismul patogen care urmeaz a manipulat (vezi Capitolul 2). Tabelul 3 prezint principalele cerine pentru ecare nivel de biosiguran. Tabel 3. Rezumat al cerinelor nivelelor de biosiguran 1 Nu Nu Nu Nu Nu Nu Nu Nu Nu Nu Nu Da Nu Nu Nu Nu Nivel de biosiguran 2 3 Nu Da Nu Da De dorit De dorit Nu Nu Nu Nu Nu Nu Nu Da Nu Nu De dorit Nu Da Da Da / Nu(b) Da Nu Nu Da Da / Nu(d) Da / Nu(d) Da De dorit De dorit Da De dorit 4 Da Da Da Da Da Da Da Da Da Nu Da Da Da Da Da Da
Izolarea(a) laboratorului ncpere etanabil pentru decontaminare Ventilaia: - ux de aer direcionat spre interior - sistem de ventilaie controlat - evacuarea aerului prin ltre HEPA Intrare cu u dubl Sas (c) Sas cu du Anticamer Anticamer cu du Tratarea euenilor Autoclav: - n institutie/cldire - n laborator - cu acces dublu (transmural) Hote de siguran biologic: Capacitate de monitorizare a siguranei personalului (e)
(a) Izolarea zic i funcional a laboratorului de circulaia general a personalului. (b) Depinde de locul de evacuare (vezi Capitolul 4). (c) Sas - Incint prevzut cu dou sau mai multe ui interpus ntre dou sau mai multe ncperi (de exemplu cu presiuni diferite), pentru a controla uxul de aer ntre acestea. Un sas poate proiectat i utilizat, e pentru personal, e pentru materiale sau probe. (d) Depinde de agenii microbieni manipulai n laborator. (e) De exemplu, fereastr de vizualizare, sistem de supraveghere video, dou ci de comunicare n consecin, stabilirea nivelului de biosiguran ia n consideraie microorganismul (agentul patogen) folosit, facilitile disponibile, echipamentele i procedurile necesare desfurrii activitii de laborator n condiii de siguran. 3
2. EVALUAREA RISCULUI MICROBIOLOGIC
2. Evaluarea riscului microbiologic
Coloana vertebral a practicilor de biosiguran este evaluarea riscului. Dei exist o multitudine de instrumente destinate a ajuta evaluarea riscului pentru o procedur sau pentru un experiment, cel mai important component este reprezentat de evaluarea (judecata) profesional. Evaluarea riscului ar trebui realizat de ctre specialitii cei mai familiarizai cu caracteristicile specice ale microorganismelor ce vor utilizate, cu procedurile i echipamentele, cu animalele ce pot folosite ca model i cu echipamentele i facilitile disponibile pentru o manipulare securizat. eful laboratorului sau investigatorul principal sunt rspunztori pentru evaluarea adecvat i la timp, precum i pentru conlucrarea strns cu colectivul de protecia muncii i personalul de biosiguran n vederea asigurrii echipamentului i facilitilor necesare desfurrii activitii pentru care s-a fcut evaluarea. Dupa evaluarea iniial a riscului, acesta se reevalueaz periodic i se revizuiete dac se consider necesar, lund n considerare acumularea de noi date corelate cu problema gradului de risc i informaiile din literatura de specialitate. Unul din cele mai utile instrumente pentru evaluarea riscului microbiologic este listarea grupurilor de risc pentru agenii microbiologici (vezi Capitolul 1). Simpla referire la grupurile de risc pentru un anumit agent microbian este insucient pentru evaluarea riscului. Ali factori ce vor trebui luai n considerare sunt urmtorii: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Patogenitatea agentului infecios i doza infectant Consecinele posibile ale expunerii Calea natural de infectare Alte ci de transmitere, rezultate n urma manipulrii n laborator (parenteral, aerian, ingerare) Stabilitatea agentului infecios n mediul extern Concentraia agentului infecios i volumul de material concentrat ce se manipuleaz Disponibilitatea unei gazde adecvate/susceptibile (umane sau animale) Informaii disponibile din studii pe animale, raportri privind infecii dobndite n laborator (profesionale) sau raportri de cazuri clinice Intenia de a utiliza anumite tehnici in laborator (ultrasonarea, aerosolizarea, centrifugarea, etc) Orice manipulare genetic a microorganismului care poate duce la extinderea gamei de gazde susceptibile sau poate modica sensibilitatea acestuia la terapiile considerate ecace Accesul efectiv la msuri prolactice sau terapeutice ecace.
Pe baza informaiilor obinute prin evaluarea riscului, se stabilete nivelul de siguran biologic necesar desfurrii activitii planicate, se selecteaz echipamentul corespunztor proteciei personalului i procedurile operaionale standard (POS) ce vor include aspecte de siguran a muncii, cu scopul desfurrii activitii n modul cel mai sigur posibil.
Probe despre care exist informaii limitate Procedurile de evaluare a riscului descrise mai sus se aplic cu succes atunci cnd dispunem de suciente informaii. Sunt ns situaii cnd informaiile existente sunt insuciente pentru a permite o evaluare corect a riscului, cum este cazul probelor clinice sau al celor epidemiologice colectate pe teren. n aceste situaii este prudent s se adopte o atitudine precaut n manipularea probelor. 1. Precauiile standard (3) trebuie respectate ntotdeauna i se vor folosi barierele de protecie (mnui, halate, protecie ocular), ori de cte ori probele provin de la pacieni. 2. Aplicarea practicilor i procedurilor pentru Nivelul de biosiguran 2 trebuie s reprezinte cerina minim pentru manipularea probelor. 3. Transportul probelor trebuie s respecte regulile i reglementrile naionale i/sau internaionale. Anumite informaii pot de mare ajutor pentru a uura determinarea riscului de manipulare a acestor probe : 1. Datele medicale privind pacientul 2. Datele epidemiologice (date de morbiditate i mortalitate, calea de transmitere suspectat, alte date privind investigarea focarului) 3. Informaii privind originea geograc a probei. n cazul unor episoade epidemice de origine necunoscut, se pot elabora ad hoc ghiduri adecvate, care s e difuzate/publicate de autoritile naionale competente i/sau OMS prin World Wide Web (aa cum s-a procedat n anul 2003, n condiiile emergenei sindromului respirator acut sever (SARS)), ghiduri care s indice modalitatea de transport a probelor i nivelul de biosiguran ce se impune n procesul de analiz a acestora. Evaluarea riscului i microorganismele modicate genetic O discuie detaliat privind evaluarea riscului n cazul microorganismelor modicate genetic (genetically modied organisms = GMOs) este prezentat n Capitolul 16.
3. LABORATOARELE DE BAZ NIVELELE DE BIOSIGURAN 1 I 2
3. Laboratoarele de baz Nivelele de Biosiguran 1 i 2
Acest ghid prezint cerinele minime pentru laboratoare clasicate pe toate nivelele de biosiguran, care manipuleaz microorganisme din Grupurile de risc 1-4. Dei unele precauii pentru anumite microorganisme din Grupul de risc 1 pot prea mai puin justicate, se recomand aplicarea lor cu scopul nsuirii i promovrii practicilor microbiologice corecte. Toate laboratoarele medicale (de sntate public sau de diagnostic clinic n ambulatorii, spitale, etc) trebuie concepute conform unui Nivel de biosiguran 2 sau peste. Deoarece nici un laborator nu are un control complet asupra probelor pe care le primete, personalul din laborator poate expus la microorganisme din grupuri de risc superioare celor anticipate. Aceast posibilitate trebuie luat n considerare cnd se elaboreaz planurile i politicile de biosiguran. De regul, precauiile standard trebuie adoptate i aplicate ntotdeauna. Regulile pentru laboratoarele de baz Nivel de biosiguran 1 i 2, prezentate n acest manual, sunt cuprinztoare i detaliate, ele ind fundamentale pentru toate laboratoarele, indiferent de nivelul de biosiguran. Recomandrile pentru laboratoarele securizate Nivel de biosiguran 3 i nalt securizate Nivel de biosiguran 4, care urmeaz (Capitolele 4 i 5), constituie de fapt modicri i suplimentri ale acestor reguli, destinate lucrului cu ageni patogeni mai periculoi. 3.1. Codul de practici Acest cod este o list a celor mai importante practici i proceduri de laborator care stau la baza practicilor microbiologice corecte (good microbiological techniques = GMT). n multe laboratoare i programe naionale n care acestea particip, acest cod se poate utiliza pentru elaborarea de reguli i proceduri scrise pentru efectuarea n siguran a operaiunilor n laborator. Fiecare laborator trebuie s adopte un manual de siguran sau de operaiuni care s identice pericolele cunoscute sau poteniale precum i procedurile i practicile specice pentru eliminarea sau reducerea la minimum a acestor pericole. GMT sunt fundamentale pentru sigurana activitilor de laborator. Echipamentul special de laborator este un element suplimentar, care nu va putea ns niciodat s nlocuiasc aplicarea procedurilor corecte. Cele mai importante concepte sunt enumerate mai jos. 3.1.1. Accesul 1. Sigla internaional de avertizare i inscripia Pericol biologic (Figura 1) trebuie s e aate pe uile ncperilor unde sunt manipulate microorganisme aparinnd grupului de risc 2 sau mai mare. 2. Numai persoanele autorizate vor lsate s intre n zonele de lucru ale laboratorului. 3. Uile laboratorului trebuie s stea nchise. 4. Copiii nu trebuie autorizai sau lsai s intre n zonele de lucru ale laboratorului. 5. Accesul n biobaze trebuie s se fac numai pe baza unei autorizaii speciale. 6. Nu se admite accesul altor animale n afara celor folosite pentru activitile de laborator
Figura 1. Sigla de pericol biologic 3.1.2. Protecia individual a personalului 1. Salopetele de laborator, halatele sau uniformele trebuie purtate tot timpul ct se lucreaz n laborator. 2. Mnui corespunztoare de protecie trebuie purtate n timpul tuturor procedurilor care pot implica contactul direct sau accidental cu snge, cu alte umori sau uide ale organismului, cu alte materiale potenial infecioase sau cu animale infectate. Dup utilizare, mnuile se scot aseptic i se spal minile. 3. Personalul trebuie s se spele pe mini dup manipularea materialelor infecioase i a animalelor infectate i nainte de prsirea zonei de lucru a laboratorului. 4. Ochelarii de protecie, ecranele de protecie facial sau alte dispozitive de protecie trebuie purtate ori de cte ori este necesar protecia ochilor i a feei de stropi, obiecte impactante i surse articiale de radiaii ultraviolete. 5. Este interzis purtarea mbrcminii protectoare de laborator n afara laboratorului, de exemplu n cantine, camere de ociu, biblioteci, toalete, etc. 6. nclmintea decupat n partea din fa (sandale) este improprie purtrii n laborator. 7. Consumul de alimente, buturi, machiajul i manipularea lentilelor de contact sunt interzise n zonele de lucru ale laboratorului. 8. Depozitarea de alimente sau buturi oriunde n zona de lucru a laboratorului este interzis. 9. mbrcmintea i nclmintea de protecie ce a fost utilizat n laborator nu trebuie s e depozitat n aceleai dulapuri cu mbrcmintea i nclmintea de strad. 3.1.3. Procedurile 1. Pipetarea cu gura este strict interzis. 2. Nici un material nu trebuie dus la gur. Etichetele nu trebuie umectate cu limba nainte de lipire. 8
3. Toate procedurile tehnice trebuie efectuate ntr-un mod care s reduc la minimum formarea de aerosoli i picturi. 4. Folosirea acelor i seringilor hipodermice trebuie limitat. Ele nu trebuie folosite ca substituente ale dispozitivelor de pipetare sau pentru oricare alt manoper ce nu reprezint injecii parenterale sau aspirarea de uide de la animalele de laborator. 5. Toate stropirile accidentale i expunerile evidente sau posibile cu material infecios trebuie raportate responsabilului laboratorului. Se va pstra o eviden scris a acestor accidente i incidente. 6. Se va elabora i aplica o procedur scris pentru curarea-inactivarea substanelor vrsate. 7. Lichidele contaminate trebuie decontaminate (chimic sau zic) naintea evacurii lor n reeaua de canalizare. n funcie de riscul evaluat se poate dezvolta un sistem de tratare a acestor lichide. 8. Documentele ce urmeaz a scoase din laborator trebuie s e protejate pe toat perioada ct se a n laborator, pentru a nu contaminate. 3.1.4. Zonele de lucru ale laboratorului 1. n laborator trebuie pstrat curenia i ordinea, eliminndu-se toate materialele care nu sunt necesare pentru munca desfurat n laborator. 2. Suprafeele de lucru trebuie decontaminate dup ecare vrsare de materiale potenial periculoase precum i la sfritul zilei de lucru. 3. Toate materialele contaminate, probele i culturile, trebuie decontaminate nainte de a ndeprtate sau curate pentru refolosire. 4. Ambalarea i transportul trebuie s respecte reglementrile naionale i/sau internaionale n vigoare. 5. Ferestrele ce pot deschise trebuie prevzute cu plase/ecrane pentru insecte. 3.1.5. Managementul biosiguranei 1. eful de laborator (persoana care poart n mod direct responsabilitatea laboratorului) are obligaia s asigure elaborarea i adoptarea unui plan de management al biosiguranei i ale unui manual de siguran i operaiuni. 2. Responsabilul cu activitatea laboratorului (subordonat efului laboratorului) trebuie s asigure instruirea periodic a personalului laboratorului n domeniul siguranei. 3. Personalul trebuie avertizat asupra pericolelor speciale i are obligaia s citeasc manualul de siguran i operaiuni i s respecte procedurile i practicile standard. Responsabilul laboratorului trebuie s se asigure c toi membrii personalului i-au nsuit aceste reguli. O copie a manualului de siguran i operaiuni trebuie s existe permanent n laborator pentru a putea consultat n orice moment. 4. Trebuie s existe un program de dezinsecie i deratizare. 5. Trebuie asigurate, n caz de necesitate, pentru toi membrii personalului, o evaluare medical adecvat, supraveghere i tratament, i trebuie inute evidene medicale adecvate. 3.2. Conceperea structurii i facilitilor laboratorului n proiectarea laboratorului i stabilirea efecturii anumitor activiti n spaiul acestuia, se va acorda o atenie deosebit situaiilor despre care se tie c ridic probleme de siguran. Acestea sunt: 1. Formarea de aerosoli 2. Manipularea de volume mari i/sau de concentraii ridicate de microorganisme 3. Supraaglomerarea spaiului de lucru sau acumularea de prea multe echipamente 4. Infestarea cu roztoare i insecte 5. Accesul neautorizat 6. Circuit de lucru: folosirea anumitor probe sau a unor reactivi specici. 9
Exemple de design pentru laboratoare cu Nivel de biosiguran 1 i 2 sunt prezentate n Figura 2 i, respectiv, 3.
Figura 2. Laborator cu nivel de biosiguran 1 (prin amabilitatea CUH2A, Princeton, NJ, USA). 3.2.1. Caracteristici de proiectare: 1. Trebuie asigurat un spaiu sucient pentru desfurarea n siguran a muncii de laborator i pentru curenie i ntreinere 2. Pereii, tavanele i pavimentele trebuie s e netede, uor de curat, impermeabile la lichide i rezistente la substanele chimice i dezinfectantele folosite uzual n laborator. Pavimentele nu trebuie s e alunecoase. 3. Suprafaa meselor de lucru trebuie s e impermeabil la ap, rezistent la dezinfectante, acizi, baze, solveni organici i la cldur. 4. Iluminatul trebuie s e adecvat pentru desfurarea tuturor activitilor. Reexiile i strlucirile nedorite trebuie evitate. 5. Mobilierul de laborator trebuie s e rezistent. Spaiile deschise ntre i sub mese, hote i echipamente trebuie s e accesibile pentru curenie. 6. Trebuie prevzute spaii de depozitare adecvate pentru materialele de folosin imediat, prevenind astfel aglomerarea acestora pe mesele de lucru i n spaiile libere dintre acestea. Trebuie, de asemenea, prevzute spaii suplimentare pentru depozitarea pe termen lung, localizate corespunztor n afara zonelor de lucru. 7. Trebuie asigurate spaii i faciliti adecvate pentru manipularea i depozitarea n siguran a solvenilor, materialelor radioactive, a gazelor comprimate i licheate. 10
Figura 3. Laborator cu nivel de biosiguran 2 (prin amabilitatea CUH2A, Princeton, NJ, USA). Procedurile care genereaz aerosoli se execut n Hota de siguran biologic. Uile sunt meninute nchise i marcate cu semne de pericol adecvate. Deeurile potenial contaminate sunt colectate separat de restul deeurilor. 8. Spaiile pentru pstrarea mbrcminii i nclmintei de strad i a obiectelor personale trebuie asigurate n afara zonelor de lucru. 9. Spaiile pentru mncat, but i odihn trebuie asigurate n afara zonelor de lucru. 10. Chiuvete cu ap curent pentru splarea minilor trebuie s existe n ecare ncpere a laboratorului, preferabil lng ua de ieire. 11. Uile trebuie s aib geamuri sau vizoare, s e conforme cu normele de protecie contra incendiilor i, de preferat, s se nchid singure. 12. Pentru Nivelul de biosiguran 2 trebuie ca un autoclav sau alte mijloace de decontaminare s e accesibile n imediata apropiere a laboratorului. 13. Sistemele de securitate trebuie s cuprind protecia mpotriva focului, urgenelor electrice, s prevad duuri de urgen i faciliti pentru splarea ochilor. 14. Trebuie s existe zone sau camere de prim ajutor echipate adecvat i accesibile (vezi Anexa 1). 15. La proiectarea de faciliti noi, trebuie luat n considerare asigurarea de sisteme mecanice de ventilaie, care s asigure un ux de aer direcionat spre interior, fr recirculare. Dac nu exist ventilaie mecanic, ferestrele trebuie s se poat deschide i trebuie prevzute cu plase mpotriva ptrunderii insectelor. 16. Aprovizionarea cu ap curent de bun calitate este esenial. Nu trebuie s existe interconectri ale surselor de ap ale laboratorului cu cele de aprovizionare cu ap potabil. Un dispozitiv anti-reux trebuie s protejeze sistemul public de aprovizionare cu ap. 11
17. Trebuie s existe o surs sigur i adecvat de curent electric i un sistem de iluminare pentru situaiile de urgen care s faciliteze ieirea din laborator. Un generator de rezerv este de dorit pentru susinerea echipamentelor eseniale (incubatoare, hote de biosiguran, congelatoare, etc.) i pentru ventilarea cutilor cu animale. 18. Trebuie s existe o surs sigur i adecvat de gaz. Buna ntreinere a instalaiei este obligatorie. 19. Laboratoarele i cldirile biobazelor sunt uneori inta vandalizrilor. Trebuie avute n vedere securitatea zic i mpotriva incendiilor. Uile solide, ferestrele protejate i eliberarea controlat a cheilor de acces sunt obligatorii. Alte msuri trebuie luate n considerare i aplicate dac este necesar pentru creterea siguranei. 3.3. Echipamentele de laborator mpreun cu procedurile i practicile corecte, utilizarea echipamentelor de siguran contribuie la reducerea riscului. Acest capitol trateaz principiile de baz legate de echipamentele utilizate n toate laboratoarele, indiferent de nivelul de biosiguran. Exigenele legate de echipamentul de laborator pentru nivelele superioare de biosiguran sunt tratate n capitolele respective. eful de laborator are obligaia ca, dup consultarea cu responsabilul cu biosigurana i colectivul de siguran, s asigure ca echipamentul adecvat s e procurat i folosit corespunztor. Echipamentul va ales lund n considerare cteva principii generale, de exemplu: 1. S e conceput astfel nct s previn sau s limiteze contactul dintre operator i materialul infecios. 2. S e confecionat din materiale impermeabile la lichide, rezistente la coroziune i corespunztoare ca structur. 3. S e confecionat astfel nct s nu aib asperiti, margini ascuite i pri mobile neprotejate. 4. S e proiectat, construit i instalat pentru a facilita operarea simpl i ntreinerea, curarea, decontaminarea i testarea n vederea certicrii; ori de cte ori este posibil, se va evita utilizarea sticlriei i a altor materiale casante. Este util s se consulte n detaliu documentaia privind performanele i specicaiile de construcie ale echipamentelor pentru a dobndi convingerea c prezint caracteristicile de siguran necesare (vezi Capitolele 10 i 11). 3.3.1. Echipamente eseniale pentru asigurarea biosiguranei 1. Dispozitive de pipetare, pentru a evita pipetarea cu gura. Sunt disponibile diverse modele. 2. Hotele de biosiguran, ce trebuie folosite ori de cte ori: - se manipuleaz materiale infecioase; aceste materiale pot centrifugate n spaiul deschis al laboratorului dac se folosesc cupe de centrifug cu dispozitiv de securizare i dac sunt introduse i descrcate ntr-o hot de biosiguran - exist risc crescut de infecii aerogene - se folosesc proceduri cu potenial ridicat de producere de aerosoli: centrifugarea, mojararea, secionarea, agitarea sau mixarea viguroas, dezintegrarea sonic, deschiderea containerelor cu material infecios cu presiune intern diferit de presiunea ambiant, inocularea intranazal a animalelor i recoltarea de esuturi infectate de la animale i ou, etc. 12
3. Anse de transfer de unic folosin din plastic. Alternativ, n scopul reducerii producerii de aerosoli, n interiorul hotei de biosiguran se pot folosi incineratoare electrice pentru anse de transfer. 4. Tuburi i acoane cu capace prevzute cu let. 5. Autoclave sau alte mijloace folosite pentru decontaminarea materialului infecios. 6. Pipete Pasteur de unic folosin din plastic, ori de cte ori este posibil, evitnd utilizarea celor din sticl. 7. Echipamentele precum autoclavele i hotele de biosiguran trebuie validate cu metode adecvate nainte de a introduse n uz. Acestea trebuie recerticate la intervale regulate de timp, n acord cu instruciunile productorului (vezi Capitolul 7). 3.4. Supravegherea strii de sntate a personalului Autoritatea angajatoare, prin eful de laborator, este responsabil de asigurarea unei supravegheri adecvate a strii de sntate a personalului laboratorului. Obiectivul acestei supravegheri este monitorizarea strii de sntate n relaie cu factorul ocupaional. Activitile ce trebuie desfurate pentru ndeplinirea acestor obiective sunt: 1. Imunizarea activ i pasiv ori de cte ori acest lucru este indicat (vezi Anexa 2). 2. Facilitarea depistrii precoce a infeciilor dobndite n laborator. 3. Excluderea indivizilor cu susceptibilitate crescut, ca de exemplu femeile nsrcinate sau persoanele imunodeprimate, din locurile sau activitile de laborator cu periculozitate crescut. 4. Asigurarea personalului cu echipamente de protecie i proceduri ecace. 3.4.1. Reguli pentru supravegherea personalului de laborator care manipuleaz microorganisme la Nivelul de biosiguran 1 Experiena activitii n acest tip de laboratoare arat c, n cazul manipulrii microorganismelor la acest nivel, este improbabil producerea de mbolnviri ale oamenilor sau de afeciuni ale animalelor cu importan sub raport veterinar. Se recomand, totui, efectuarea unui control medical nainte de angajare la tot personalul, cu nregistrarea antecedentelor medicale. Se recomand raportarea prompt a strilor de boal sau a accidentelor de laborator, iar ntreg personalul trebuie s e contient de importana respectrii practicilor corecte microbiologice. 3.4.2. Reguli pentru supravegherea personalului de laborator care manipuleaz microorganisme la Nivelul de biosiguran 2 1. Este necesar un control medical nainte de angajare. Ar trebui nregistrate antecedentele personale medicale i evaluat starea de sntate n relaie cu factorul ocupaional. 2. nregistrrile privind mbolnvirile i absenele ar trebui pstrate de ctre eful laboratorului. 3. Femeile de vrst fertil ar trebui informate cu privire la riscul expunerii ftului prin factor ocupaional la anumite microorganisme (ex. virusul rubeolic). Precauiile pentru protejarea ftului variaz n funcie de microorganismele la care pot expuse viitoarele mame. 3.5. Pregtirea personalului Erorile umane i tehnica decitar pot compromite i cele mai bune reguli i bariere de siguran menite a proteja personalul laboratorului. Pe de alt parte, un personal contient de exigenele impuse de regulile de siguran, bine informat pentru recunoaterea i stpnirea pericolelor din laborator, este 13
cheia prevenirii producerii acestor infecii, a incidentelor i accidentelor. n acest scop, instruirea continu la locul de munc privind msurile de siguran este esenial. Un program ecace de siguran ncepe cu conducerea laboratorului, care trebuie s se asigure c practicile i procedurile de siguran sunt integrate n instruirea de baz a salariailor. Instructajul n ceea ce privete msurile de siguran trebuie s e parte integrant a instruirii noilor salariai din laborator. Salariailor trebuie s li se prezinte codul de practici i reglementrile locale, inclusiv manualul de siguran i de operaiuni. Se vor lua msuri care s demonstreze c salariaii le-au citit i neles, spre exemplu, prin semntur. Responsabilii laboratorului joac un rol cheie n pregtirea personalului n ceea ce privete tehnicile corecte de laborator. Responsabilul cu biosigurana poate s sprijine procesul de instruire prin punerea la dispoziie a unei documentaii specice i a altor mijloace ajuttoare (vezi Capitolul 21). Instruirea personalului ar trebui s cuprind ntotdeauna informaii despre metodele sigure n cazul procedurilor cu risc crescut, cu care ntreg personalul laboratorului se ntlnete n mod curent i care implic : 1. Riscul de inhalare (ex. producerea de aerosoli) cu ocazia folosirii anselor, nsmnrii plcilor cu agar, pipetrii, etalrii frotiurilor, deschiderii recipientelor ce conin culturi, recoltrii de probe de snge / ser, centrifugrii, etc. 2. Riscul de ingerare, cu ocazia manipulrii probelor, frotiurilor i culturilor. 3. Riscul de expunere percutan, prin folosirea seringilor i acelor. 4. Mucturi i zgrieturi n cazul manipulrii animalelor. 5. Manipularea sngelui i a altor produse patologice potenial periculoase. 6. Decontaminarea i eliminarea materialelor infecioase. 3.6. Manipularea deeurilor Se consider deeuri toate materialele care se arunc. n laboratoare, n desfurarea activitii cotidiene, decontaminarea deeurilor i eliminarea nal a acestora sunt strns legate. Un numr foarte mic de materiale contaminate necesit ndeprtarea efectiv din laborator sau distrugerea. Majoritatea sticlriei, instrumentelor i articolelor de mbrcminte sunt refolosite sau reciclate. Principiul general ce trebuie s funcioneze este c toate materialele infecioase vor decontaminate, autoclavate sau incinerate n laborator. Principalele probleme care se pun, nainte de eliminarea oricriu obiect sau material din laboratoarele ce lucreaz cu microorganisme potenial infecioase sau esuturi de la animale, sunt: 1. Au fost obiectele sau materialele respective ecient decontaminate sau dezinfectate printr-o procedur autorizat? 2. Dac nu, au fost ele ambalate ntr-un mod autorizat pentru incinerare imediat la faa locului sau pentru transfer ntr-o alt locaie cu posibiliti de incinerare? 3. Aruncarea obiectelor sau materialelor decontaminate implic eventual alte pericole adiionale, biologice sau de alt tip, pentru cei care ndeplinesc procedurile de eliminare sau care ar putea veni n contact cu obiectele eliminate n afara perimetrului respectiv? 3.6.1. Decontaminarea Autoclavarea cu abur este metoda de elecie pentru toate procesele de decontaminare. Materialele care urmeaz s e decontaminate i eliminate vor puse n containere adecvate (ex. saci 14
din plastic autoclavabil, cu coduri de culori care indic destinatia coninutului acestora pentru autoclavare i/sau incinerare). Pot luate n consideraie i metode alternative doar dac acestea ndeprteaz i/sau omoar microorganismele (pentru mai multe detalii vezi Capitolul 14). 3.6.2. Procedurile de manipulare i eliminare a materialelor contaminate i a deeurilor Trebuie adoptat un sistem de identicare i de separare a materialelor infecioase i a containerelor respective. Vor obligatoriu respectate reglementrile naionale i internaionale n domeniu. Categoriile care se includ sunt urmtoarele: 1. Deeurile necontaminate (neinfecioase) care pot refolosite, reciclate sau eliminate ca deeuri generale sau menajere 2. Obiectele ascuite (tietoare-neptoare) contaminate (ex. ace hipodermice, bisturie, cuite i cioburi de sticl); acestea vor ntotdeauna colectate n containere rezistente la nepare-tiere, prevzute cu capace i vor tratate ca infecioase. 3. Materialul contaminat destinat decontaminrii prin autoclavare urmat de splare i refolosire sau reciclare. 4. Materialul contaminat destinat autoclavrii i eliminrii. 5. Materialul contaminat destinat incinerrii directe. Obiectele ascuite Dup utilizare, acele hipodermice nu trebuie reacoperite, tiate sau detaate din seringile de unic folosin. ntregul ansamblu trebuie plasat n containerul pentru obiecte ascuite. Seringile de unic folosin, folosite separat sau cu ace, trebuie plasate n containere i incinerate, cu autoclavare prealabil dac este necesar. Containerele pentru obiecte ascuite (tietoare-neptoare) trebuie s e rezistente la neparetiere i nu trebuie umplute la capacitatea maxim. Cnd sunt umplute pe , aceste containere trebuie plasate n containere pentru deeuri infecioase i incinerate, cu autoclavare prealabil dac practica laboratorului o necesit. Containerele pentru obiecte tietoare-neptoare nu trebuie aruncate n mediul nconjurtor. Materiale contaminate (potenial infecioase) destinate autoclavrii i refolosirii Se interzice curarea prealabil a oricrui material contaminat (potenial infecios) destinat autoclavrii i refolosirii. Orice curare sau reparaie trebuie fcut doar dup autoclavare sau dezinfecie. Materiale contaminate (potenial infecioase) destinate eliminrii n afar de obiectele tietoare-neptoare, care au fost tratate mai sus, toate materialele contaminate (potenial infecioase) trebuie autoclavate n containere etane, de exemplu saci de plastic autoclavabil, colorai conform unui cod de culori, nainte de a eliminate. Dup autoclavare, materialul poate plasat n containere de transfer ctre incinerator. Dac este posibil, materialele rezultate din activitile de asisten medical nu trebuie eliminate n mediul extern, la rampele de depozitare a deeurilor, nici dup decontaminare. Dac exist un incinerator disponibil la nivelul laboratorului, autoclavarea se poate omite: deeurile contaminate trebuie plasate n containere speciale (de exemplu, saci cu culori corespunztoare unui cod) i transportate direct la incinerator. Containerele de transfer refolosibile trebuie s nu prezinte scurgeri i s aib capace etane. 15
Recipiente de colectare, preferabil incasabile, trebuie plasate la ecare punct de lucru. Cnd se folosete un dezinfectant, deeurile materiale trebuie s rmn n contact direct cu acesta (ex. neprotejate de bule de aer) un interval de timp corespunztor, n conformitate cu instruciunile de folosire a dezinfectantului utilizat (vezi Capitolul 14). Containerele de colectare i transport vor decontaminate i splate nainte de refolosire. Incinerarea deeurilor contaminate trebuie s se fac n conformitate cu prevederile autoritilor de sntate public i de protecie a mediului, ca i cu normele de biosiguran din laborator (vezi seciunea despre incinerare n Capitolul 14). 3.7. Sigurana chimic, mpotriva incendiilor, electric, mpotriva radiaiilor i a echipamentelor O bre/discontinuitate n sistemul de securizare al microorganismelor patogene poate rezultatul indirect al unor accidente chimice, incendii, accidente electrice sau legate de radiaii. Este esenial meninerea unor standarde ridicate de siguran n aceste domenii, n orice laborator microbiologic. Reguli i regulamente de funcionare pentru toate aceste domenii trebuie elaborate de autoritatea naional sau local competent, al crei sprijin trebuie solicitat n caz de necesitate. Pericolele chimice, electrice, de incendiu i cele radioactive sunt tratate mai detaliat n Capitolele 15-17.
16
4. LABORATORUL SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 3
4. Laboratorul securizat Nivelul de Biosiguran 3
Laboratorul securizat - Nivel de biosiguran 3 este proiectat i echipat pentru lucrul cu microorganisme din Grupa de risc 3, i cu volume sau concentraii mari de microorganisme din Grupa de risc 2 care implic un risc de diseminare sub forma de aerosoli. Securizarea cu Nivel de biosiguran 3 necesit ntrirea programelor operaionale i de siguran peste cele descrise pentru laboratoarele de baz - Nivel de biosiguran 1 i 2 (vezi Capitolul 3). Regulile descrise n acest capitol sunt prezentate sub forma de suplimentri la cele pentru laboratoarele de baz - Nivel de biosiguran 1 si 2, care trebuie prin urmare aplicate naintea celor specice pentru laboratoarele securizate - Nivel de biosiguran 3. Principalele adugiri i modicri se refer la: 1. Codul de practici 2. Designul (concepia structural i funcional) i facilitile laboratorului 3. Supravegherea strii de sntate a personalului. Laboratoarele din aceast categorie trebuie nregistrate la autoritile naionale i regionale din domeniul sanitar. 4.1. Codul de practici Se aplic codul de practici pentru laboratoarele de baz - Nivel de biosiguran 1 si 2, excepie fcnd situaiile unde apar modicri dup cum urmeaz : 1. Sigla internaional de avertizare i inscripia Pericol biologic aate pe uile de acces, vor trebui s e nsoite de menionarea nivelului de biosiguran, de numele responsabilului din laborator ce controleaz accesul, i s precizeze condiiile de intrare n acest perimetru (ex. imunizarea prealabil). 2. mbrcmintea de protecie de laborator trebuie s e de tipul : halate care se nchid la spate sau care se ncheie prin nfurare, costume sau salopete, bonete, iar acolo unde este necesar huse protectoare pentru nclminte sau nclminte special. Nu sunt acceptate halatele de laborator cu nasturi n fa sau cu mneci scurte. mbrcmintea de laborator nu trebuie purtat n afara acestuia i trebuie decontaminat nainte de splare. Atunci cnd se lucreaz cu anumii ageni (ex. ageni zoonotici, patogeni vegetali), este obligatoriu s se nlocuiasc mbrcmintea de strad cu mbrcminte de laborator, destinat exclusiv acestui scop. 3. Manipularea deschis a tuturor materialelor potenial infecioase trebuie s se execute n hote de siguran biologic sau n orice alt incint de izolare primar (vezi Capitolul 10). 4. Echipamentul de protecie respiratorie este necesar pentru anumite proceduri de laborator sau n cazul lucrului cu animale infectate cu anumii patogeni (vezi Capitolul 11). 17
4.2. Designul i facilitile laboratorului Se aplic design-ul i facilitile laboratorului de baz - Nivel de biosiguran 1 i 2, cu urmtoarele modicri : 1. Laboratorul trebuie s e separat de zonele cu trac nerestricionat din cldire. O separare suplimentar se poate realiza prin plasarea laboratorului e la captul nchis al unui coridor e prin construirea unei separaii i a unei ui, sau accesul printr-o anticamer (ex. intrarea printr-o u dubl sau printr-un laborator de baz - Nivel de biosiguran 2), delimitnd o zon special proiectat pentru meninerea unei diferene de presiune ntre spaiul laboratorului i spaiile adiacente acestuia. Anticamera trebuie s aib faciliti de separare a mbrcminii curate de cea contaminat i, dac este necesar, un du. 2. Uile anticamerei trebuie s se blocheze alternativ (recomandabil automat), astfel nct o singur u s e deschis la un moment dat. Se poate asigura o ieire de siguran pentru situaiile de urgen, reprezentat de un panou de sticl ce se poate sparge la nevoie. 3. Suprafaa pereilor, a pardoselilor i tavanelor trebuie s e rezistent la ap i uor de curat. Deschiderile aprute n aceste suprafee (ex. de trecerea evilor instalaiilor), trebuie etaneizate pentru a facilita decontaminarea ncperilor respective. 4. Camera laboratorului trebuie s poat nchis etan pentru decontaminare. Sistemele de ventilaie trebuie construite astfel nct s permit decontaminarea gazoas. 5. Ferestrele trebuie s e nchise etan i incasabile. 6. Lng ecare u de ieire trebuie prevzut o chiuvet pentru splarea minilor, a crei surs de ap s nu e acionat cu mna. 7. Trebuie s existe un sistem de ventilaie care s menin un ux de aer direcionat ctre interiorul laboratorului. Trebuie s e instalat un sistem de monitorizare, cu sistem de atenionare vizual cu sau fr alarm, astfel nct personalul s se poat asigura c se menine direcionarea corect a uxului de aer spre interiorul laboratorului. 8. Sistemul de ventilaie al cldirii trebuie construit astfel nct aerul din laboratorul securizat - Nivel de biosiguran 3 s nu e recirculat spre alte zone ale cldirii. Aerul poate ltrat prin ltre HEPA (High Efciency Particulate Air), recondiionat i recirculat n interiorul laboratorului. Cnd aerul din laborator (altul dect cel din hotele de biosiguran) este eliminat n afara cldirii, acesta trebuie evacuat la distan de cldiri locuite sau de zonele de ventilaie. n funcie de agentul biologic manipulat, aerul poate eliminat prin ltre HEPA. Se recomand un sistem de control al nclzirii, ventilaiei i aerului condiionat (HVAC = heating, ventilation and air-conditioning), cu scopul prevenirii instalrii unei presiuni pozitive n laborator. Se recomand, de asemenea, instalaii de alarm sonor sau vizual care s atrag atenia personalul asupra defectrii sistemului HVAC. 9. Toate ltrele HEPA trebuie instalate astfel nct s permit decontaminarea gazoas i vericarea acestora. 10. Hotele de siguran biologic trebuie amplasate la distan de zona de circulaie i n afara zonei de intersectare a curenilor de aer formai ntre u i sistemul de ventilaie (vezi Capitolul 10). 11. Evacuarea aerului din hotele de biosiguran clasa I sau II (vezi Capitolul 10), trecut prin ltre HEPA, trebuie fcut astfel nct s se evite interferena cu uxul aerian al hotei sau al sistemului de ventilaie a cldirii. 12. Un autoclav pentru decontaminarea deeurilor contaminate trebuie s e disponibil n laboratorul securizat. Dac pentru decontaminare i eliminare deeurile infecioase trebuie transportate n afara laboratorului securizat, ele vor transportate n containere sigilate, incasabile i etane la scurgeri, n conformitate cu regulamentele naionale sau internaionale, dupa caz. 13. Sistemul de aprovizionare cu ap trebuie prevzut cu dispozitive anti-reux. 14. Design-ul facilitilor i procedurile operaionale pentru laboratoarele securizate Nivel de biosiguran 3 trebuie documentate (s constituie obiectul unor documente). 18
4. LABORATORUL SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 3
Un exemplu de design pentru laboratorul de Nivel de biosiguran 3 este prezentat n Figura 4.
Figura 4. Laborator cu Nivel de biosiguran 3. (prin amabilitatea CUH2A, Princeton, NJ, USA). Laboratorul este separat de tracul general i intrarea se face printr-o anticamer (intrare cu u dubl sau prin laboratorul cu nivel de biosiguran 2) sau printr-un sas. Un autoclav pentru decontaminarea deeurilor naintea eliminrii este disponibil n interiorul laboratorului. O chiuvet a crei surs de ap s nu e acionat cu mna este disponibil. Fluxul de aer este direcionat spre interiorul laboratorului i toate activitile cu materiale infecioase se desfoar n hot de siguran biologic. Dotarea cu echipamente a laboratorului Principiile pentru selectarea echipamentelor de laborator, inclusiv pentru hotele de siguran biologic (vezi Capitolul 10), sunt aceleai ca pentru laboratoarele de baz Nivel de biosiguran 2. n orice situaie, n cazul Nivelului de biosiguran 3, manipularea tuturor materialelor potenial infecioase trebuie s se fac ntr-o hot de biosiguran sau n alt incint de izolare primar. O atenie special trebuie s se acorde anumitor echipamente, precum centrifuga, care necesit accesorii adiionale, de exemplu cuve sau rotoare etane. Unele centrifugi sau alte tipuri de echipamente, cum ar instrumentele folosite la separarea celulelor infectate, pot necesita n plus, pentru o securizare ecace, o ventilaie proprie de evacuare cu ltru HEPA. 4.3. Supravegherea strii de sntate a personalului Obiectivul programelor de sntate i supraveghere a strii de sntate a personalului pentru laboratoarele de baz - Nivel de biosiguran 1 i 2 se aplic i n cazul laboratoarelor securizate - Nivel de biosiguran 3 i 4, cu urmtoarele modicri :
19
1. Examenul medical al ntregului personal care lucreaz n laboratorul securizat - Nivel de biosiguran 3 este obligatoriu. Acesta include nregistrarea detaliat a antecedentelor medicale i un examen medical intit asupra aspectelor legate de factorul ocupaional. 2. O prob de ser se recolteaz la angajare i se pstreaz ca referin pentru comparaii ulterioare. 3. Dup evaluarea clinic corespunztoare, salariatului examinat i se va nmna un card medical de noticare (ex. aa cum apare n Figura 5) care dovedete c acesta lucreaz ntr-un laborator securizat - Nivel de biosiguran 3. Cardul va cuprinde i o fotograe a posesorului cardului, va avea o mrime care s-i permit a purtat ntr-un portmoneu i se va aa n permanen n posesia acestuia.
A. Faa anterioar a cardului

CARD MEDICAL DE NOTIFICARE NUME_______________________________ ____________________________________ (Fotograa posesorului) .....................................
PENTRU ANGAJAT Pstrai acest card asupra Dvs. In caz de boal febril neexplicat, prezentai acest card medicului Dvs. i anuntai pe unul dintre cei de mai jos, n ordine. _______________________________________________________________________ Dr. Tel (serviciu): Tel (acas) _______________________________________________________________________ Dr. Tel (serviciu): Tel (acas)
B. Faa posterioar a cardului

PENTRU MEDIC Posesorul acestui card lucreaz la: _____________________________________________ ntr-o zon unde se manipuleaz virusuri patogene, rickettsii, bacterii, protozoare sau helmini. n eventualitatea unei boli febrile inexplicabile, v rugm contactai angajatorul pentru informaii asupra agenilor patogeni la care acest angajat ar putut expus. Denumirea laboratorului: ____________________________________________________ Adresa: __________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Tel: _____________________________________________________________________
Figura 5. Format recomandat pentru cardul medical de noticare
20
5. LABORATORUL NALT SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 4
5. Laboratorul nalt securizat Nivelul de Biosiguran 4
Laboratorul nalt securizat Nivel de biosiguran 4 este destinat lucrului cu microorganisme din Grupa de risc 4. nainte ca un asemenea laborator s e construit i pus n funciune, sunt necesare consultri cu instituiile care au experiena operrii cu laboratoare similare. Aceste laboratoare trebuie s e sub controlul autoritilor naionale sau a altor autoriti sanitare corespunztoare. Pentru informaii suplimentare, instituiile ce i propun dezvoltarea unui laborator cu Nivel de biosiguran 4, ar trebui s contacteze Programul O.M.S. de Biosiguran1. 5.1. Codul de practici Se aplic codul de practici al Nivelului de biosiguran 3, cu urmtoarele modicri: 1. Se aplic regula lucrului n doi, conform creia se interzice desfurarea activitii de ctre o singur persoan n incinta laboratorului nalt securizat. 2. Este necesar schimbarea complet a mbrcminii i nclmintei nainte de intrarea n i dup ieirea din laborator. 3. Personalul trebuie instruit pentru aplicarea procedurilor de scoatere de urgen din laborator a celor ce au suferit accidente sau sunt bolnavi. 4. Trebuie asigurate mijloace de comunicare de rutin i pentru situaii de urgen, ntre personalul ce lucreaz n laboratorul nalt securizat Nivel de biosiguran 4 i personalul ajuttor, aat n afara laboratorului. 5.2. Design-ul i facilitile laboratorului Caracteristicile laboratorului securizat - Nivel de biosiguran 3 se aplic i n cazul laboratorului nalt securizat - Nivel de biosiguran 4, cu urmtoarele adugiri: 1. Securizare primar. Trebuie s existe un sistem ecient de securizare primar reprezentat de unul sau o combinaie a urmtoarelor elemente: - Laboratorul cu hot de biosiguran clasa III. Este necesar trecerea prin minim dou ui nainte de a intra n camera ce conine hota (hotele) de siguran biologic clasa III (camera cu hote). n aceast conguraie a laboratorului, hota de siguran biologic clasa III asigur securizarea primar. Este de asemenea necesar existena unui du pentru personal, cu camere de schimbare a mbrcminii/nclmintei la intrare i ieire. Materialele i consumabilele ce nu sunt aduse n camera cu hote prin zona de trecere vor introduse printr-un autoclav cu dou ui sau printr-o camer cu fumigaie. Odat ce ua exterioar a fost nchis etan, personalul din laborator poate deschide ua interioar pentru a trece materialele. Uile autoclavului sau ale camerei de fumigaie sunt prevzute cu un sistem de blocare alternativ astfel nct ua exterioar s nu se poat deschide dect dac autoclavul a realizat un ciclu de sterilizare sau camera de fumigaie a realizat un ciclu de decontaminare (vezi Capitolul 10).
1
Biosafety programme, Department of Communicable Disease Surveillance and Response, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (http://www.who.int/csr/).
21
Laboratorul cu izolare n costum protector. Laboratorul cu izolare n costum protector cu sistem autonom de respiraie (tip scafandru), difer semnicativ ca design i faciliti de laboratorul de Nivel de Biosiguran 4 dotat cu hote de siguran biologic clasa III. Camerele laboratorului cu izolare n costum protector sunt astfel dispuse nct s direcioneze trecerea personalului prin zona de dezechipare-echipare i decontaminare, nainte de a intra n spaiul unde se manipuleaz material infecios. Accesul n laboratorul cu izolare n costum protector se face printr-un sas cu ui etane interblocante. Costumul de protecie tip scafandru este alctuit dintr-o singur pies, este presurizat pozitiv i alimentat cu aer printr-un ltru HEPA. Alimentarea cu aer a costumului se realizeaz printr-un sistem prevzut cu dou surse independente de aer, una ind destinat cazurilor de urgen. Trebuie s existe un du special pentru decontaminarea costumului de protecie, care s e folosit de personalul ce prsete zona securizat a laboratorului. De asemenea trebuie s existe un du separat pentru personal, intercalat ntre camera (box) de dezbrcare de hainele purtate n laborator i cea de mbrcare cu hainele purtate n spaiile din afara laboratorului. Trebuie s se asigure o modalitate de avertizare a personalului ce lucreaz n laboratorul cu izolare n costum protector pentru situaiile n care apar defeciuni n sistemul mecanic sau de alimentare cu aer (vezi Capitolul 10).
2. Accesul controlat. Laboratorul nalt securizat Nivel de Biosiguran 4 trebuie s e amplasat ntr-o cldire separat sau ntr-o zon clar delimitat dintr-o cldire cu acces controlat. Intrarea i ieirea personalului i a materialelor trebuie s se fac printr-un sas ce se nchide etan sau printr-un sistem special de acces. La intrare, personalul trebuie s i schimbe complet mbrcmintea, iar nainte de ieire trebuie s fac un du i abia dup aceea va mbrca hainele de strad. 3. Sistemul de control al aerului. n toate aceste incinte trebuie s se menin o presiune negativ. Att aerul introdus ct i cel evacuat trebuie ltrat printr-un ltru HEPA. Exist diferene semnicative ntre sistemele de ventilaie ale laboratoarelor cu hote de biosiguran clasa III i cele ale laboratoarelor cu izolare n costume protectoare: - Laboratorul cu hot de biosiguran clasa III. Alimentarea cu aer a hotei de siguran biologic clasa III trebuie s se fac cu aerul din camer dup ce acesta a fost ltrat n prealabil prin ltrul HEPA montat pe hot sau furnizat direct prin sistemul de asigurare cu aer. Aerul evacuat din hota de siguran biologic clasa III trebuie ltrat prin dou ltre HEPA nainte de a eliminat n afara laboratorului. Presiunea aerului din interiorul hotei va ntotdeauna inferioar celei din restul laboratorului. Laboratorul cu hote trebuie dotat cu un sistem de ventilaie propriu care s nu recircule aerul. - Laboratorul cu izolare n costum de protecie. Sunt necesare sisteme proprii de alimentare cu aer i evacuare a acestuia. Acestea sunt astfel echilibrate nct s genereze n spaiul laboratorului o circulaie direcionat a aerului, dinspre zona cu cel mai mic spre cea cu cel mai mare pericol potenial. Sistemul de evacuare a aerului trebuie s asigure meninerea unei presiuni negative permanente n toate incintele. Se monitorizeaz presiunile difereniale din interiorul laboratorului cu izolare n costum de protecie i dintre acesta i incintele adiacente. Se monitorizeaz circulaia aerului n componentele sistemului de ventilaie. De asemenea, va trebui s funcioneze un sistem de control pentru prevenirea creterii presiunii n laborator. n zona unde este necesar purtarea costumului, n zona duurilor de decontaminare, n sas-uri sau n camerele de decontaminare, aerul trebuie ltrat prin ltre HEPA. Aerul din laborator va ltrat printr-o serie de dou ltre HEPA nainte de a eliminat 22
5. LABORATORUL NALT SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 4
n spaiul din afara laboratorului. Alternativ, dup dubla ltrare prin ltre HEPA, aerul evacuat poate recirculat, dar numai n interiorul laboratorului. Aerul evacuat din laboratorul de Nivel de Biosiguran 4 cu izolare n costum protector nu va sub nici un motiv recirculat n alte zone de lucru din afara laboratorului. Dac se opteaz pentru recircularea aerului n laborator se impun precauii extreme. Se iau n considerare particularitile cercetrii desfurate, caracteristicile echipamentului, ale substanelor chimice i ale altor materiale folosite n acest tip de laborator, precum i speciile de animale folosite n timpul cercetrii. Toate ltrele HEPA trebuie s e testate i certicate anual. Locaurile ltrelor HEPA sunt astfel concepute nct s permit decontaminarea in situ a ltrelor nainte de ndeprtarea lor. Ca alternativ, ltrele pot ndeprtate n containere sigilate, impermeabile pentru circulaia aerului, urmnd ca ulterior s e decontaminate i/sau distruse prin incinerare. 4. Decontaminarea euenilor. Toi euenii din zona de utilizare a costumului protector, din camera i duul de decontaminare sau din hota de biosiguran clasa III trebuie s e decontaminai nainte de eliminarea nal. Metoda preferat este tratarea termic a acestora. Produsele reziduale pot necesita o corectare a pH-ului la neutru nainte de eliminare. Apa folosit pentru duul personalului i toalet poate evacuat direct n sistemul de canalizare, fr tratare prealabil. 5. Sterilizarea deeurilor i materialelor. Un autoclav cu dou ui trebuie s e accesibil din interiorul laboratorului. Trebuie s existe i alte metode de decontaminare pentru echipamentul i produsele ce nu suport sterilizare umed. 6. Ci de acces prevzute cu sas-uri trebuie asigurate de asemenea pentru probe, materiale i animale. 7. Trebuie s existe circuite electrice special destinate de alimentare din reea precum i o surs alternativ (generator) de energie electric. 8. Trebuie asigurate sisteme de canalizare securizate. Avnd n vedere complexitatea ridicat din punct de vedere al proiectrii, realizrii construciei i instalaiilor specice facilitilor pentru Nivelul de biosiguran 4, lucrarea de fa nu cuprinde o reprezentare schematic a acesteia. Datorit complexitii ridicate a activitii din laboratorul cu Nivel de biosiguran 4, trebuie elaborat i testat prin exerciii de instruire un ghid detaliat de lucru. Suplimentar trebuie s e conceput un program de aciune pentru situaiile de urgen (vezi Capitolul 13). Pentru pregtirea acestui program, trebuie stabilite cooperri active cu autoritile naionale i locale de sntate. Vor cooptate alte servicii de urgen, de exemplu pompieri, poliie i spitale special desemnate pentru primirea eventualelor urgene.
23
24
6. BIOBAZELE
6. Biobazele
Personalul laboratoarelor care folosesc animale n scopuri experimentale i de diagnostic are obligaia legal i moral de a evita producerea unor dureri sau suferine inutile animalelor. Animalelor trebuie s le e asigurat un adpost igienic i confortabil i s li se ofere sucient hran de calitate i ap. La sfritul experimentului, animalele trebuie s e tratate cu omenie. Din motive de biosiguran, biobaza trebuie s e o unitate separat i independent. Dac biobaza funcioneaz n aceeai cldire cu laboratorul, aceasta trebuie s e izolat de zona n care publicul are acces nerestricionat. De asemenea, biobaza trebuie s dispun de mijloace proprii i condiii adecvate pentru decontaminare i deparazitare. n funcie de grupul de risc al microorganismelor manipulate, Biobazele pot clasicate n 4 niveluri de biosiguran (Tabelul 4). Tabel 4. Nivelele de securizare ale biobazelor - rezumat al practicilor i echipamentelor de biosiguran Grupul de risc (microorganisme) 1 Nivel de securizare n biobaza 1 Practici i echipamente de siguran acces limitat mbrcminte de protecie i mnui
Practicile de la nivelul 1 plus : - semne de avertizare asupra pericolului - HSB clasa I sau II pentru activitile care genereaz aerosoli - decontaminarea reziduurilor i cutilor nainte de splare Practicile de la nivelul 2, plus : - acces controlat - HSB i haine de protecie speciale pentru toate activitile Practicile de la nivelul 3 plus : - acces strict limitat - schimbarea hainelor nainte de intrare - HSB clasa III sau costume de protecie cu presiune pozitiv - du la ieire - decontaminarea tuturor deeurilor naintea evacurii
HSB (BSC, Biological Safety Cabinet): Hot de siguran biologic n funcie de evaluarea riscului i de grupul de risc n care se ncadreaz agenii microbieni cu care se lucreaz, biobazele, ca i laboratoarele, pot clasicate n patru categorii: Biobaza cu nivel 1, 2, 3 i 4 de biosiguran. 25
n aceast clasicare, factorii care in de agenii microbieni investigai / utilizai i care trebuie luai n considerare sunt: 1. 2. 3. 4. Calea normal de transmitere Volumele i concentraiile de ageni microbieni utilizate Calea de inoculare Dac i pe ce cale sunt excretai aceti ageni Factorii care in de animalele utilizate n laborator i care trebuie luai n considerare sunt: 1. 2. 3. 4. Comportamentul natural al animalelor (de exemplu: agresivitatea, tendina de a muca i zgria). Ecto- i endoparaziii naturali ai animalelor Infeciile zoonotice la care sunt susceptibile Diseminarea posibil de alergeni. Ca i n cazul laboratoarelor, cerinele de proiectare, construcie, echipament i precauii cresc n exigen n funcie de Nivelul de biosiguran din biobaz. Acestea sunt descrise detaliat mai jos i prezentate rezumativ n Tabelul 4. Aceste cerine au un caracter aditiv, astfel nct ecare nivel superior incorporeaz i cerinele nivelurilor inferioare. 6.1. Biobaza cu nivel de biosiguran 1 Este destinat gzduirii i ntreinerii majoritii animalelor dup carantinare (cu excepia primatelor, n privina crora trebuie consultat legislaia naional n materie) i a celor inoculate deliberat cu ageni microbieni din grupul de risc 1. 1. Se impune ca activitatea s rspund cerinelor unor bune tehnici de microbiologie (GMT, Good Microbiological Techniques). 2. Responsabilul biobazei trebuie s stabileasc regulile, procedurile i protocoalele pentru toate operaiunile i pentru accesul la vivarium. 3. Trebuie instituit un program adecvat de supraveghere medical a personalului. 4. Trebuie redactat, aprobat i aplicat un manual de biosiguran. 6.2. Biobaza cu nivel de biosiguran 2 Este destinat lucrului cu animale inoculate cu microorganisme din grupul de risc 2. Se aplic urmtoarele precauii de siguran: 1. Trebuie s e ndeplinite toate cerinele de la nivelul de biosiguran 1. 2. Semnele de avertizare asupra pericolului biologic trebuie s e aate pe ui i alte locuri potrivite (cuti, recipiente, etc) cu precizarea agenilor infecioi folosii. 3. Biobaza trebuie astfel conceput nct s e uor de curit i ntreinut. 4. Uile trebuie s se deschid spre interior i s se nchid singure. 5. nclzirea, ventilarea i iluminatul trebuie s e corespunztoare. 6. Dac se instaleaz ventilaie mecanic, aerul trebuie s circule spre interior. Aerul evacuat trebuie scos n exterior i nu trebuie s e recirculat n nici o parte a cldirii. 7. Accesul va permis numai persoanelor autorizate. 8. n biobaz trebuie admise numai animalele destinate uzului experimental. 9. Trebuie s existe un program de supraveghere i combatere a insectelor i roztoarelor. 10. Dac exist ferestre, acestea trebuie s e asigurate, incasabile, iar dac se deschid, trebuie s e prevzute cu plase de protecie mpotriva artropodelor. 26
6. BIOBAZELE
11. Dup lucru, suprafeele de lucru trebuie decontaminate cu dezinfectante ecace (vezi Capitolul 14). 12. Vor prevzute cu HSB (clasele I i II) sau/i cuti izolatoare cu circuit separat de alimentare cu aer i evacuare prin ltre HEPA pentru activitile potenial generatoare de aerosoli. 13. Trebuie s existe un autoclav n biobaz sau n imediata ei apropiere. 14. Materialele din aternutul animalelor trebuie s e ndeprtate n aa fel nct s se reduc la minimum producerea de aerosoli i praf. 15. Toate dejectele, deeurile i aternutul animalelor trebuie decontaminate nainte de evacuare. 16. Folosirea instrumentelor neptoare/tietoare trebuie s e restricionat la minimum posibil. Obiectele ascuite trebuie colectate n containere rezistente, prevzute cu capace, etichetate i tratate ca infecioase. 17. Materialul destinat autoclavrii sau incinerrii trebuie s e transportat asigurat n containere nchise. 18. Dup folosire, cutile animalelor trebuie decontaminate. 19. Cadavrele animalelor trebuie incinerate. 20. n incinta biobazei trebuie purtate echipamente de protecie care nu vor purtate n afara acesteia. Se vor folosi mnui de protecie corespunztoare. 21. Trebuie asigurate condiii pentru splarea minilor. Personalul trebuie s se spele pe mini nainte de prsirea biobazei. 22. Toate rnirile, orict de mici, trebuie raportate i nregistrate. 23. Se interzice n incinta biobazei: consumul de alimente i buturi, fumatul i aplicarea de cosmetice. 24. Tot personalul trebuie instruit n mod corespunztor. 6.3. Biobaza cu nivel de biosiguran 3 Acest nivel de biosiguran se impune atunci cnd se lucreaz cu animale inoculate deliberat cu ageni din grupul de risc 3 i/sau atunci cnd o evaluare a riscului impune acest lucru. Toate sistemele, practicile i procedurile trebuie s e analizate i recerticate anual. Se aplic urmtoarele precauii de biosiguran: 1. Trebuie s e ndeplinite toate cerinele de la nivelurile de biosiguran 1 i 2 . 2. Accesul n biobaz trebuie s e controlat cu strictee. 3. Biobaza trebuie separat de alte zone ale laboratorului sau ale adpostului pentru animale printr-o camer cu dou ui (anticamer). 4. n anticamer trebuie s existe condiii pentru splarea minilor. 5. n anticamer trebuie s existe, de asemenea, duuri. 6. Trebuie s se prevad un sistem de ventilare mecanic pentru a asigura un ux continuu de aer prin toate camerele. Aerul evacuat trebuie s treac prin ltre HEPA nainte de a eliberat n atmosfer i nu va recirculat. Sistemul trebuie proiectat i realizat astfel nct s previn inversri ale uxului de aer i presurizri pozitive n oricare parte a biobazei. 7. Trebuie s existe un autoclav accesibil din zona securizat a biobazei. Deeurile contaminate microbian trebuie autoclavate nainte de transferarea lor n alte zone ale biobazei. 8. Biobaza trebuie dotat cu un incinerator propriu permanent accesibil sau trebuie stabilite mpreun cu autoritile modaliti alternative de evacuare a animalelor moarte n vederea incinerrii. 9. Animalele infectate cu microorganisme din grupul de risc 3 trebuie adpostite n cuti plasate n izolatoare sau n camere cu guri de ventilaie plasate n spatele cutilor. 10. Materialele utilizate pentru aternutul animalelor ar trebui, pe ct este posibil, s nu genereze praf. 11. mbrcmintea de protecie purtat n incinta biobazei trebuie decontaminat nainte de splare. 12. Ferestrele trebuie s e nchise etan i rezistente la spargere. 13. Personalul care lucreaz n biobaz trebuie s e imunizat corespunztor. 27
6.4. Biobaza cu nivel de biosiguran 4 n mod resc, activitatea n aceste biobaze este legat de cea din laboratoarele nalt securizate de nivel 4, iar reglementrile naionale i regulamentele locale trebuie armonizate i aplicate n ambele locaii unitar. Dac activitile trebuie s se desfoare n laboratoare cu izolare n costume speciale tip scafandru vor elaborate i aplicate practici i proceduri adiionale care vor suplimenta prevederile descrise n Capitolul 5. 1. Trebuie ndeplinite toate cerinele pentru biobazele cu nivelurile de biosiguran 1, 2 i 3. 2. Accesul trebuie s e strict controlat; numai personalul desemnat de eful biobazei poate avea acces. 3. Nu trebuie permis activitatea individual; trebuie aplicat regula accesului i lucrului n doi. 4. Personalul trebuie s e foarte bine instruit n domeniul microbiologic i s e avizat n privina pericolelor implicate de munca sa i a precauiilor necesare. 5. Sectoarele destinate adpostirii animalelor infectate cu microorganisme din grupul de risc 4 trebuie s respecte aceleai criterii de securizare descrise i aplicate pentru laboratoarele nalt securizate, nivel de biosiguran 4. 6. Intrarea din sectorul curat n aria cu acces restricionat ale biobazei se va face printr-o anticamer-sas dotat cu faciliti de schimbare a vestimentaiei i de du. 7. La nceputul zilei de lucru, personalul biobazei va schimba hainele de strad cu echipament special de protecie. La plecare, echipamentul de lucru va dezbrcat i autoclavat. Vestimentaia de strad va reluat dup efectuarea prealabil a unui du. 8. Biobaza cu nivel 4 de biosiguran trebuie ventilat printr-un sistem de exhaustare prevzut cu ltre HEPA care asigur o presiune negativ n aria / incintele de risc (uxul de aer este direcionat centripet, ctre ariile de risc maxim). 9. Sistemul de ventilaie trebuie proiectat astfel nct s previn inversrile de sens ale uxului de aer i presurizarea pozitiv n ariile de risc. 10. Schimbul de materiale dintre aria cu risc i restul facilitii se va face printr-un autoclav cu dublu acces (transmural) avnd extremitatea curat ntr-o camer din afara ariei restricionate. 11. Pentru transferul materialelor neautoclavabile, va prevzut o modalitate de acces cu sas avnd extremitatea curat ntr-o camer din afara ariei restricionate. Materialele contaminate nu vor prsi aria de risc dect dup un tratament adecvat de inactivare / sterilizare. 12. Toate manipulrile de animale infectate cu microorganisme din grupul de risc 4 se vor efectua n condiiile prevzute pentru laboratorul de nalt securizare - cu nivel de biosiguran 4. 13. Toate animalele vor adpostite n izolatoare. 14. Materialele provenite din aternutul animalelor i dejectele vor autoclavate nainte de a evacuate din biobaz. 15. Personalul biobazei va supravegheat medical. 6.5. Nevertebratele Ca i n cazul vertebratelor, nivelul de biosiguran al biobazei va determinat de grupul de risc al agenilor investigai sau de rezultatul unei evaluri a riscului. Nevertebratele folosite n scopuri experimentale n laboratoare sunt de obicei rezervoare sau vectori de patogeni, sau, aa cum se ntmpl n investigaiile ecologice i ambientale, pot infectate ntmpltor cu patogeni ingerai odat cu hrana. 28
6. BIOBAZELE
n cazul unor artropode, n special al insectelor zburtoare sunt necesare urmtoarele precauii suplimentare. 1. Trebuie s se asigure ncperi separate pentru nevertebratele infectate i pentru cele care nu sunt infectate. 2. ncperile trebuie s poat nchise etan atunci cnd se face dezinfecia prin fumigaie. 3. Trebuie s existe la ndemn spray-uri cu insecticide. 4. Trebuie s e asigurate instalaii de rcire, pentru a reduce, acolo unde este necesar, activitatea nevertebratelor. 5. Accesul n complex trebuie s se fac printr-o anticamer avnd uile prevzute cu capcane pentru insecte i ecrane de protecie mpotriva artropodelor. 6. Toate conductele de evacuare din sistemul de ventilaie i ferestrele care pot deschise trebuie s e prevzute cu ecrane de protecie contra artropodelor. 7. Sifoanele de la chiuvete i cele din pardoseal nu trebuie lsate niciodat s se usuce asigurnd obarier umed pentru a preveni evadarea nevertebratelor. 8. Toate deeurile trebuie decontaminate prin autoclavare, deoarece unele nevertebrate nu sunt omorte de dezinfectani. 9. Trebuie s e meninut o eviden strict a numrului de forme larvare i adulte de artropode zburtoare, trtoare i sritoare. 10. Containerele pentru cpue i acarieni trebuie plasate n tvi cu ulei. 11. Insectele zburtoare infectate sau potenial infectate trebuie s e nchise n cuti cu plas dubl. 12. Artropodele infectate sau potenial infectate trebuie s e manipulate pe platouri cu rcire (care le amoresc), plasate la rndul lor n hote de biosiguran sau n izolatoare. Pentru informaii suplimentare, consultai referinele bibliograce 3-6.
29
30
7. RECOMANDRI PENTRU CALIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA
7. Recomandri pentru calicarea laboratorului / facilitilor acestuia
Calicarea laboratorului/facilitilor acestuia poate denit ca un proces sistematic de examinare i documentare, ce demonstreaz c elementele de structur ale laboratorului, precum i ale sistemelor i/sau componentelor de sistem au fost instalate, inspectate i testate din punctul de vedere al funcionrii n concordan cu standardele naionale i internaionale. Laboratoarele concepute s corespund Nivelelor de biosiguran de la 1 la 4 au exigene de calicare diferite, cu nivel cresctor de complexitate. Condiiile geograce i climaterice, cum ar umiditatea sau temperaturile extreme, pot de asemenea inuena structura laboratorului, i prin aceasta exigenele de calicare ale acestuia. Odat cu ncheierea procesului de calicare, componentele semnicative de structur i sistemele anex vor fost supuse operrii n condiii variate inclusiv de lucru n condiii limit logic posibile, i abia dup aceea vor fost aprobate. Procesul de calicare i criteriile de acceptare vor trebui s e stabilite nc din faza de concepie a proiectului de construcie sau renovare. Prin cunoaterea de la bun nceput a exigenelor calicrii, arhitecii, inginerii, personalul nsrcinat cu sigurana i cu evaluarea sntii, precum i personalul laboratorului, vor putea nelege mai bine performanele ce trebuie atinse de laboratorul n cauz. Procesul de calicare furnizeaz instituiei i comunitii n cadrul creia funcioneaz, un grad mai mare de ncredere n faptul c elementele de structur, sistemele electrice, mecanice, de canalizare, sistemele de izolare i decontaminare precum i sistemele de securitate i alarm vor funciona dup cum au fost proiectate, asigurnd manipularea securizat n laborator sau n biobaz a oricrui microorganism potenial periculos. Activitile de calicare se realizeaz n general nc din faza de proiectare, continundu-se n timpul construciei i instalrii laboratorului i a facilitilor acestuia, precum i n perioada de garanie, care trebuie s acopere un an din momentul drii n folosin. Agentul ce realizeaz calicarea acioneaz ca un avocat pentru instituia ce construiete sau renoveaz laboratorul i trebuie considerat ca un membru al echipei de concepie, implicarea lui nc de la nceputul concepiei proiectului ind esenial. n unele situaii, instituia poate aciona ca propriul su agent de calicare. n cazul unor faciliti de laborator mai complexe (Nivel de biosiguran 3 sau 4), instituia poate apela la serviciile unui agent de calicare din afara instituiei, cu experien demonstrat n realizarea cu succes a calicrii laboratoarelor i biobazelor cu nivele complexe de biosiguran. Cnd se apeleaz la un agent independent de calicare, instituia continu s rmn i ea un membru al echipei de calicare. Se recomand ca pe lng agentul de calicare, din echip s fac parte i responsabilul cu sigurana de la nivelul instituiei, responsabilul de proiect, managerul programului i un reprezentant al serviciului tehnic de intreinere i intervenie. n continuare este prezentat o list a sistemelor laboratorului i a componentelor ce pot incluse n planul de calicare, pentru testarea funcionrii corelat cu gradul de securizare a facilitilor ce urmeaz a construite sau renovate. Lista nu este exhaustiv. n mod evident, planul efectiv de calicare trebuie s reecte complexitatea laboratorului vizat. 1. Sisteme de automatizare ce aparin cldirii, incluznd posibilitile de monitorizare i control de la distan 2. Sisteme electronice de supraveghere i detecie 31
3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42.
ncuietori electronice de securitate i dispozitive de recunoatere Sisteme de nclzire, ventilaie (alimentare i evacuare) i instalaii de aer condiionat Sisteme de ltrare HEPA Sisteme de decontaminare a ltrelor HEPA Sisteme de control ale nclzirii, ventilaiei, aerului condiionat, evacurii aerului i al sas-urilor Etaneitatea vanelor/robineilor de aer Sisteme de frig ale laboratorului Generatoare de abur i ap cald Sisteme de protecie i alarm contra incendiilor Sisteme de prevenire a refulrii apelor uzate Sisteme de tratare a apei (ex. revers-osmoza, distilarea apei) Sisteme de tratare i neutralizare a lichidelor rezultate din activiti specice Sisteme de canalizare Sisteme de decontaminare chimic Sistem de asigurare cu diverse gaze utilizate n laborator Sisteme de respiraie autonom Sisteme de aer tehnic (vid, aer comprimat etc.) Vericarea diferenelor de presiune n laboratoare i n zonele adiacente Reelele informatice locale i sistemele de date computerizate Asigurarea cu electricitate din reea Surse alternative de electricitate pentru situaii de avarie Surse nentreruptibile de electricitate (UPS) Sisteme de iluminare n caz de avarie/urgen Semnalizarea luminoas a ieirilor de urgen Sisteme de etanare acionate electric i mecanic Reeaua telefonic Sistemul de control al interblocrii uilor sas-urilor Etaneizarea uilor Etaneizarea ferestrelor i vizoarelor de siguran Ieiri de urgen prin penetrarea barierelor Vericarea integritii structurale a pavimentelor, pereilor i tavanelor Vericarea integritii straturilor protectoare ale pavimentelor, pereilor i tavanelor Funcionarea sistemelor de izolare i presurizare ale spaiilor ce nconjoar laboratorul nalt securizat - Nivel de biosiguran 4 Hote de biosiguran Autoclave Sisteme de azot lichid i alarmele aferente Sisteme de detectare a scurgerilor de ap (ex. n cazul inundrii zonelor securizate) Duuri de decontaminare i sisteme chimice adiionale Dispozitive de splare a cutilor animalelor i de neutralizare a euenilor Managementul deeurilor 32
8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA
8. Recomandri pentru certicarea laboratorului/facilitilor acestuia
Laboratoarele reprezint un mediu complex i dinamic. n zilele noastre, laboratoarele de cercetri biomedicale i laboratoarele de diagnostic medical i cele de sntate public trebuie s se adapteze cu rapiditate la continua cretere a necesitilor de sntate ale populaiei i presiunilor acesteia. Un exemplu n acest sens este reprezentat de necesitatea ajustrii prioritilor laboratoarelor astfel nct acestea s fac fa provocrilor reprezentate de bolile infecioase emergente i reemergente. Pentru a se asigura c acest proces de adaptare i meninere se realizeaz prompt i de o manier corespunztoare i sigur, att laboratoarele de cercetri ct i cele medicale trebuie certicate cu regularitate. Certicarea laboratoarelor ajut la garantarea faptului c: 1. Se exercit un control tehnic corespunztor iar funcionarea este n concordan cu caracteristicile proiectate 2. Exist i se aplic un control administrativ adecvat al spaiilor i protocoalelor specice 3. Echipamentul de protecie personal este corespunztor cu activitile desfurate 4. Decontaminarea reziduurilor i materialelor a fost conceput corespunztor i se aplic proceduri corecte de tratare i manipulare a deeurilor 5. Se aplic proceduri corecte pentru sigurana general a laboratorului, incluznd sigurana zic, electric i chimic. Certicarea laboratoarelor difer de activitile de calicare a laboratoarelor (Capitolul 7) n cteva direcii importante. Certicarea laboratoarelor este un proces sistematic de examinare a tuturor caracteristicilor i proceselor cu relevan pentru sigurana laboratorului (control tehnic, echipament de protecie individual i control administrativ). Sunt de asemenea examinate practicile i procedurile de biosiguran. Certicarea laboratorului este o activitate continu de meninere a calitii i siguranei, care se desfoar planicat. Activitile de certicare a laboratoarelor pot conduse de personal adecvat instruit i de ctre specialiti din domeniul sntii i biosiguranei. Instituiile pot angaja personal cu pregtire corespunztoare pentru efectuarea de audituri, activiti de supraveghere i inspecie (aceti termeni pot similari) asociate cu procesul de certicare. Instituiile pot lua n considerare sau li se poate solicita s angajeze teri care s furnizeze aceste servicii. Laboratoarele de cercetri biomedicale i cele medicale pot dezvolta instrumente de auditare, supraveghere sau inspecie pentru a asigura consistena procesului de certicare. Aceste instrumente trebuie s e sucient de exibile pentru a permite existena diferenelor zice i procedurale dintre laboratoare, rezultate din tipul de activitate pe care o desfoar ecare laborator, dar n acelai timp s ofere o abordare unitar n cadrul instituiei. Trebuie acordat atenie faptului ca aceste instrumente s e folosite numai de ctre un personal instruit corespunztor, precum i faptului c ele nu reprezint un substitut pentru evaluarea profesional a biosiguranei. Exemple ale unor asemenea instrumente sunt prezentate n Tabelele 5-7. Informaiile rezultate n urma auditului, supravegherii sau inspeciei trebuie discutate cu personalul laboratorului i cu conducerea. Se stabilesc responsabiliti individuale pentru a se garanta c se aplic aciuni corective pentru toate decienele identicate n procesul de audit. Certicarea laboratorului nu se va acorda i laboratorul nu va declarat funcional pn cnd nu vor fost tratate corespunztor toate decienele identicate. 33
Complexitatea operaiilor laboratorului cu Nivel de biosiguran 4 depete scopul acestui ghid. Pentru mai multe detalii i informaii, se poate consulta Programul O.M.S. de Biosiguran1 (vezi de asemenea Anexa 3).
WHO Biosafety programme, Department of Communicable Disease surveillance and Response, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva, Switzerland (http://www.who.int/csr/)
34
Tabel 5. Laboratorul de baz Nivel de Biosiguran 1. Chestionar pentru evaluarea biosiguranei Locaie laborator: ef Laborator: Element evaluat Laborator Semnalizare adecvat pentru sursele de UV, laser, surse de radioactivitate,etc Ghid de Biosiguran adecvat, accesibil i aplicat efectiv Inscripionare/marcare corect a echipamentelor: risc infecios, radioactivitate, toxicitate Proiectarea laboratorului Conceput pentru a uor de curat Comutator alternativ cu lumina pentru sursele de UV din ncperi, accesibil i din exterior Fixarea solid a tuturor etajerelor / rafturilor Blaturile meselor sunt impermeabile pentru ap i rezistente la acizi, baze, solveni organici i temperaturi ridicate Iluminare adecvat Existena unor spaii de depozitare adecvate i corect utilizate Cilindri cu gaze Toi cilindrii cu gaze sunt pstrai n condiii de siguran Cilindrii de rezerv sunt pstrai cu capacele de siguran montate Gazele asxiante i/sau periculoase sunt utilizate doar n incinte cu ventilaie suplimentar Prezena n laborator de cilindri cu gaze supranumerari fa de necesiti i/sau cilindri golii Substane chimice Substanele chimice inamabile sunt depozitate n ncperi special destinate acestora Substanele generatoare de peroxizi sunt inscripionate cu data intrrii i data deschiderii Substanele chimice sunt pstrate separat, pe categorii Da Nu NA Observaii Data:
35
Element evaluat Substanele chimice periculoase sunt depozitate la un nivel superior nivelului ochilor. Existena de substane chimice depozitate pe pardoseal Existena de containere cu substane chimice neacoperite Toate soluiile sunt etichetate corect ? Se folosesc termometre cu mercur ? Frigidere / congelatoare/ camere frigorice Sunt prezente n ele alimente pentru consum uman Materialele inamabile se a numai n uniti echipate anti-deagraie Prezena etichetelor externe de avertizare pe echipamentele care conin substane carcinogene, radioactive, toxice, i/sau elemente care implic pericol biologic. Camerele frigorice sunt prevzute cu dispozitive de siguran care s permit deschiderea uilor din interior Echipament electric Prezena de cabluri prelungitoare ntre echipament i priz Prize i aparate cu mpmntare i polaritate corecte Existena de conectri electrice n apropierea chiuvetelor, sub duuri, etc Existena de echipamente cu cabluri electrice care prezint semne de deteriorare Existena de prize sau conductori electrici suprasolicitai Existena de cabluri electrice montate pe pardoseal Existena de sigurane electrice adecvate n circuite Prizele electrice plasate lng surse de ap respect reglementrile naionale Existena de cabluri electrice cu mpmntare Existena de surse de nclzire electrice mobile n ncperi
Da
Nu
NA
Observaii
36
Element evaluat Echipament de protecie individual pentru personal Posibilitatea efecturii lavajului ocular n laborator Existena duurilor de siguran Echipament de protecie individual disponibil : mnui, halate, ochelari Purtarea corect a echipamentului de protecie (halate, oruri, bonet, etc) Echipamentul de protecie individual nu este purtat n afara laboratorului Existena echipamentului de protecie individual pentru activitatea de stocaj criogenic Managementul deeurilor Existena de indicii care probeaz depozitarea incorect a deeurilor Deeurile sunt sortate i depozitate n containere separate ? Existena de containere cu deeuri chimice etichetate, marcate, datate i pstrate nchise Containerele cu deeuri chimice sunt manipulate i depozitate corect ? Containerele pentru obiecte neptoare/ tietoare sunt utilizate i ndeprtate n mod corect ? Pardoseala nu prezint urme de deeuri Procedurile de ndeprtare a deeurilor sunt aate n laborator Programe de siguran i sntate ocupaional S-a fcut comunicarea riscului? Asigurarea proteciei cilor respiratorii Asigurarea proteciei auzului Monitorizarea formaldehidei Monitorizarea etilen dioxidului Monitorizarea gazelor anestezice Controale tehnice generale Fluxul de aer din laborator nu este orientat ctre celelalte sectoare de activitate, coridoare, ociu, vestiar, birouri Exist chiuvete i sifoane de pardoseal ce permit refularea aerului din canalizare ? Sunt disponibile chiuvete pentru splarea minilor oriunde trebuie ?
Da
Nu
NA
Observaii
37
Element evaluat Exist componente mobile neprotejate ale echipamentelor ? Instalaia de vid este prevzut cu ltre i dispozitive care impiedic rupturile de vid (capcane de vid) la nivelul meselor de lucru ? Exist pericol de reuare n reeaua de alimentare cu ap ? Existena unor echipamente de distilare a apei n bun stare de funcionare Program activ i efectiv de control al roztoarelor i artropodelor Practici i proceduri generale Se pstreaz alimente pentru consumul uman n aria laboratorului ? Cuptoarele cu microunde din laborator sunt n mod clar etichetate: Doar pentru uz de laborator. Este interzis prepararea alimentelor! Consumul de alimente i buturi, fumatul, aplicarea de cosmetice n incinta laboratorului Recipientele de sticl aate sub presiune sunt protejate Este interzis pipetarea cu gura Exist i sunt folosite dispozitive mecanice de pipetare mbrcmintea de protecie pentru laborator este pstrat separat de mbrcmintea de strad Gospodrirea general a laboratorului Existena unor recipiente de sticl pstrate pe pardoseal Se constat erori evidente potenial periculoase Existena unor materiale absorbante curate disponibile la posturile de lucru Cioburile de sticl sunt manipulate cu mijloace mecanice: perie, fra, pens Protecia mpotriva incendiilor Capetele de stropire (sprinklere) sunt libere i degajate Deschiderile din tavan, paviment, perei sunt lsate libere Exist cabluri sau tubulaturi care trec prin spaiul deschiderii uilor Lime minim de 1m a uilor laboratorului
Da
Nu
NA
Observaii
38
Element evaluat Depozitare de materiale peste conducte, hidrani sau instalaia de semnalizare luminoas Depozitarea n laborator a unor substane inamabile n exces Bi termostatate Existena unor sisteme de oprire automat n caz de nivel prea sczut al apei i/sau supranclzire Confecionate din materiale necombustibile
Da
Nu
NA
Observaii
Nume, prenume auditor .................................................................. Semntura ..................................................................
Data auditului:..........................
39
Tabelul 6. Laboratorul de baz Nivel de Biosiguran 2. Chestionar pentru evaluarea Biosiguranei Acest formular se folosete nsoit obligatoriu de formularul pentru evaluarea biosiguranei n Laboratorul de baz - Nivel de Biosiguran 1 (vezi Tabelul 5) Locaie laborator: ef Laborator: Data:
Element evaluat Hota de Biosiguran (HSB) Certicare n ultimele 12 luni Suprafaa HSB este curat cu un dezinfectant adecvat dup ecare utilizare Grila frontal i ltrele de exhaustare sunt lsate libere Se utilizeaz acr deschis n interiorul hotei Liniile de vacuum sunt echipate cu ltre n serie i cu capcane cu dezinfectant Performanele HSB sunt afectate de amplasarea hotei sau de cureni de aer HSB este utilizat ori de cte ori exist riscul potenial de formare a aerosolilor Laboratorul Acces limitat / restricionat. Permisiune de a intra doar pentru personalul laboratorului Acces limitat doar pentru personalul avizat asupra tuturor pericolelor poteniale Sigla de Pericol biologic este aat n mod corespunztor pe ua laboratorului - Sigla este nsoit de nscrierea unor informaii precise i actuale - Sigla i informaiile sunt lizibile i nedeteriorate Toate uile sunt meninute nchise Decontaminarea Decontaminanii utilizai sunt activi asupra agenilor microbieni manipulai n laborator Toate accidentele i mprtierile (stropiri, deversri) care implic material infecios sunt raportate efului de laborator Folosirea unor decontaminani adecvai pentru neutralizarea materialului infecios mprtiat Suprafeele de lucru sunt decontaminate nainte i dup ecare procedur, zilnic i dup ecare mprtiere accidental 40
Da
Nu
NA
Observaii Locaie: Marc: Tip: Serie Nr.:
Element evaluat Manipularea deeurilor contaminate Containerele pentru deeuri potenial infecioase sunt folosite corect Containerele pentru deeuri potenial infecioase nu sunt umplute pn la refuz Containerele pentru deeuri potenial infecioase sunt corect etichetate i nchise Culturile i deeurile obinuite sunt decontaminate corect nainte de evacuare Materialele care se decontamineaz n afara laboratorului sunt transportate n containere etane,nchise i rezistente, n concordan cu procedurile locale i reglementrile naionale Deeurile mixte sunt decontaminate din punct de vedere biologic nainte de a eliminate ca deeuri chimice i/sau radiologice Protecia personalului Personalul laboratorului este informat periodic asupra imunizrilor/testrilor corespunztoare agenilor microbieni manipulai Contactarea unor servicii medicale adecvate pentru examene de bilan periodic, supraveghere i tratament pentru expunerile profesionale Materialele i echipamentele contaminate biologic se manipuleaz cu mnui Protecia feei ori de cte ori se lucreaz cu material contaminat biologic n afara hotelor de biosiguran Splarea minilor : - dup ndeprtarea mnuilor - dup lucrul cu ageni infecioi - nainte de a prsi laboratorul Sunt disponibili ageni antimicrobieni pentru un prim ajutor prompt Practici Utilizarea HSB ori de cte ori exist riscul potenial de a generai aerosoli, respectiv mprtieri accidentale Existena unui ghid de biosiguran corect elaborat i aplicat Personalul citete, revede (cel puin anual) i aplic instruciunile privind practicile i procedurile de laborator, inclusiv pe cele cuprinse n ghidul de biosiguran Procedurile sunt aplicate n practic astfel nct s se reduc la minimum formarea de aerosoli i/sau de dispersii accidentale 41
Da
Nu
NA
Observaii
Element evaluat Pentru ageni infecioi se utilizeaz seringi de unic utilizare i/sau seringi cu ac nedetaabil Cupele i rotoarele de centrifug se deschid numai n HSB Probele biologice cu risc infecios sunt transportate n afara HSB n containere autorizate i n acord cu reglementrile de transport Faciliti Exist chiuvete pentru splarea minilor lng ieirea din laborator Nume, prenume auditor .................................................................. Semntura ..................................................................
Da
Nu
NA
Observaii
Data auditului :......................
42
Tabel 7. Laboratorul securizat Nivelul de Biosiguran 3. Chestionar pentru evaluarea biosiguranei Acest formular se foloseste nsoit obligatoriu de formularele pentru evaluarea biosiguranei n Laboratoarele de baz - Nivel de Biosiguran 1 i 2 (Vezi Tabelele 5 i 6) Locaie laborator: ef laborator Element evaluat Faciliti Laboratorul este separat de circulaia nerestricionat din restul cldirii Accesul controlat n laborator se face printr-o anticamer ale crei ui se nchid automat, ind interconectate (nu se poate deschide dect o singur u la un moment dat) Toate cile de acces n laborator se pot nchide etan pentru decontaminare Aerul exhaustat nu este recirculat i este evacuat n exterior la distan de spaii locuite Exist un sistem de ventilaie controlat pentru monitorizarea direcionrii uxului de aer Protecia personalului n laborator se poart halate nchise la spate Echipamentul individual de protecie este purtat doar n incinta laboratorului Sunt disponibile chiuvete cu robinete automate sau manevrabile cu ajutorul pedalei / cotului Protecia minilor Sunt purtate cte dou perechi de mnui atunci cnd se manipuleaz material contaminat biologic, echipament potenial contaminat i la curenia suprafeelor de lucru Protecia respiratorie Mijloace de protecie respiratorie sunt purtate de ntreg personalul atunci cnd aerosolii nu sunt reinui n siguran de HSB 43 Da Nu N/A Observaii Data:
Practici Asigurarea proteciei mucoaselor atunci cnd se lucreaz cu material infecios n afara HSB Personalul este instruit asupra pericolelor asociate cu manipularea anumitor ageni microbieni Personalului i se impune s citeasc i s urmeze toate instruciunile privitoare la practicile i procedurile din laborator, inclusiv cele din ghidul de biosiguran Personalul este instruit anual i ori de cte ori apar modicri ale procedurilor Toate deeurile contaminate microbian sunt autoclavate nainte de a ndeprtate
Nume, prenume auditor.............................................. Semntura...................................................................
Data auditului:..........................
44
9. CONCEPTUL DE BIOSECURITATE N LABORATOR
9. Conceptul de biosecuritate n laborator
Ghidurile privind biosigurana n laborator s-au concentrat n mod tradiional pe formularea de recomandri generale pentru protejarea celor care lucreaz n laborator. Aceste ghiduri subliniau rolul practicilor corecte microbiologice, al echipamentelor de securizare, al unor faciliti concepute, utilizate i ntreinute corespunztor, al msurilor administrative pentru reducerea riscului de accidente sau mbolnvirii personalului. Ca o consecin a acestui mod de abordare au fost neglijate riscurile pentru mediu i comunitate. n zilele noastre a aprut necesitatea extinderii conceptului tradiional de biosiguran, prin includerea msurilor de biosecuritate n laborator. Evenimentele produse la nivel mondial n trecutul recent subliniaz necesitatea protejriii laboratoarelor i a materialelor pe care acestea le dein, pentru a nu putea utilizate intenionat mpotriva sntii populaiei i a faunei, a agriculturii sau a mediului. nainte de a deni nevoile de biosecuritate ale laboratorului, este important s se neleag deosebirea dintre noiunile de biosiguran n laborator i biosecuritate n laborator. Conceptul de biosiguran n laborator se folosete pentru a descrie principiile de securizare, tehnologiile i regulile ce trebuie urmate pentru a preveni expunerea neintenionat la ageni patogeni i toxine sau eliberarea lor accidental n mediu. Conceptul de biosecuritate n laborator se refer la msuri de securitate luate la nivel instituional i personal cu scopul prevenirii diversiunilor/atentatelor sau a eliberrii intenionate de patogeni sau toxine precum i pentru prevenirea pierderii, furtului sau folosirii greite a acestora. Practicile ecace de biosiguran stau de fapt la baza msurilor de biosecuritate n laborator. Prin evaluarea riscului, realizat ca parte integrant a programului de biosiguran al instituiei, se obin informaii despre tipurile de microorganisme manipulate, localizarea lor zic, personalul care solicit acces la ele i se identic persoanele responsabile pentru pstrarea lor. Aceste informaii pot utilizate pentru a aprecia dac o instituie posed material biologic ce poate prezenta interes pentru cei ce doresc a-l utiliza n mod impropriu. Pentru ecare sector din laborator trebuie elaborat i aplicat un program specic de biosecuritate n acord cu caracteristicile facilitii respective, cu tipul de activitate desfurat i cu condiiile locale. n consecin, msurile de biosecuritate n laborator trebuie s e reprezentative pentru variatele necesiti ale instituiei i ar de dorit s cuprind i contribuii din partea directorului tiinic, a responsabilului cu biosigurana, a personalului tiinic al laboratorului, a personalului de intreinere, a personalului responsabil cu tehnologia informaiei i a consilierilor juridici i personalului de securitate, dac este cazul. Msurile de biosecuritate n laborator trebuie s se bazeze pe un program cuprinztor de inventariere a agenilor patogeni i a toxinelor, incluznd o eviden la zi ce va cuprinde i locul de stocare, identicarea personalului ce are acces la acestea, descrierea utilizrii lor, documentarea transferului intern (n i ntre diferitele sectoare ale laboratorului) i extern, precum i orice inactivare i/sau eliminare de materiale. De asemenea, trebuie stabilit la nivel instituional un protocol de biosecuritate n laborator pentru identicarea, raportarea, investigarea i remedierea breelor din sistemul de biosecuritate al laboratorului, incluznd i eventualele neconcordane rezultate din activitatea de inventariere. Implicarea, rolurile i responsabilitile autoritilor de sntate public i ale celor de securitate n cazul unei infraciuni de biosecuritate trebuie s e clar denite. ntregul personal trebuie instruit n domeniul biosecuritii n laborator, instruire distinct de cea din domeniul biosiguranei. Aceast instruire trebuie s ajute personalul s neleag necesitatea de protecie pentru astfel de materiale i raionamentul pe care se bazeaz msurile specice de biosecuritate i trebuie s includ o trecere n revist a standardelor naionale relevante i a procedurilor specice ale 45
instituiei. De asemenea, n cursul instruirii trebuie prezentate proceduri ce descriu rolul i responsabilitile personalului n cazul producerii unei infraciuni de biosecuritate. Un element central n cadrul msurilor ecace de biosecuritate n laborator, l constituie, de asemenea, compatibilitatea profesional i etic de a lucra cu patogeni periculoi a tuturor persoanelor autorizate a avea acces regulat la materialele cu regim special. n rezumat, precauiile de biosecuritate trebuie s devin parte a activitilor de rutin din laborator, chiar dac se aplic tehnici aseptice sau alte practici microbiologice sigure. Msurile de biosecuritate n laborator nu trebuie s stnjeneasc schimbul ecient de materiale de referin, probe clinice i epidemiologice i nici circulaia informaiilor adiacente necesare pentru bunul mers al investigaiilor clinice i de sntate public. Managementul competent al biosecuritii nu trebuie s interfere n mod nepotrivit cu activitatea de zi cu zi a personalului tiinic sau s e un impediment n desfurarea cercetrilor. Trebuie pstrat accesul legitim la materialele importante pentru cercetare i diagnostic. Evaluarea compatibilitii personalului, instruirea specic n materie de biosecuritate i respectarea procedurilor de protecie fa de ageni patogeni constituie mijloace de cretere a nivelului de biosecuritate a laboratorului. Toate aceste eforturi trebuie iniiate i meninute prin evaluri periodice ale riscurilor i ale ameninrilor i printr-o revizuire i actualizare regulat a procedurilor. Trebuie vericat corespondena acestor proceduri i instruciuni cu standardele naionale privind biosecuritatea laboratorului.
46
10. HOTELE DE SIGURAN BIOLOGIC
10. Hotele de siguran biologic1
Hotele de siguran biologic (HSB) sunt destinate a proteja operatorul, mediul din laborator i materialele de lucru fa de expunerea la aerosoli i picturi care se pot produce n cursul manipulrii materialelor coninnd ageni infecioi, cum ar culturile primare, tulpinile de colecie i probele de diagnostic. Aerosolii sunt produi de orice activitate care determin apariia de miniparticule sau stropi de material lichid sau semilichid, cum ar agitarea, turnarea, amestecarea sau picurarea unui lichid pe o suprafa sau ntr-un alt lichid. Activitile de laborator precum nsmnarea plcilor de agar prin efectuarea de striuri paralele, inocularea acoanelor de culturi de celule cu o pipet, folosirea unei pipete mono- sau multicanal pentru a distribui suspensii de ageni infecioi n plci de microcultur, efectuarea de diluii n tuburi sau plci, omogenizarea i agitarea prin producerea de vrtej a materialelor infecioase, centrifugarea lichidelor contaminate sau manipularea animalelor, pot genera aerosoli infecioi. Particulele de aerosoli cu diametrul sub 5 m i picturile mici, cu diametrul de 5-100 m nu sunt vizibile cu ochiul liber. Tehnicianul de laborator nu este, n general, avertizat asupra formrii acestor particule i asupra faptului c ele pot inhalate sau pot contamina suprafee i materiale. HSB, folosite corect, sunt foarte eciente n reducerea frecvenei infeciilor dobndite n laborator, evit contaminarea ncruciat a culturilor prin expunere la aerosoli i protejeaz mediul. Tabelul 8. Alegerea unei HSB n funcie de tipul de protecie dorit. TIP DE PROTECIE Protecia personalului fa de microorganisme din Grupurile de Risc 1-3 Protecia personalului fa de microorganisme din Grupul de Risc 4, manipulare din exterior, prin panou cu mnui Protecia personalului fa de microorganisme din Grupul de Risc 4, laborator cu izolare n costum protector (tip scafandru) Protecia produselor Protecia fa de radionuclizi volatili i protecie chimic, expunere de ordinul minutelor Protecie fa de radionuclizi volatili i protecie chimic HSB INDICAT Clasa I, Clasa II, Clasa III Clasa III Clasa I, Clasa II Clasa II, Clasa III cu ux laminar Clasa II B1, Clasa II A2 cu evacuare spre exterior Clasa I, Clasa II B2, Clasa III
De-a lungul anilor, concepia clasic a HSB a suferit numeroase modicri. O modicare major a constat n adugarea unui ltru de nalt ecien pentru particulele din aer (HEPA - High Efciency Particulate Air) la sistemul de evacuare. Filtrul HEPA reine 99,97% din particulele cu diametrul de 0,3 m i 99,99% din particulele cu dimensiuni mai mari sau mai mici. n acest fel, ltrul HEPA are capacitatea de a reine ecient toi agenii infecioi cunoscui i de a asigura evacuarea din hot a unui aer complet
1
Denumiri echivalente : cabinet (incint) de siguran biologic - BSC (BioSafety Cabinet) sau post de securitate microbiologic - PSM (poste de scurit microbiologique)
47
puricat de ori ce fel de microbi. A doua modicare de concepie a constat n direcionarea aerului ltrat prin HEPA ctre suprafaa de lucru, protejnd-o pe aceasta i materialele cu care se lucreaz. Aceast caracteristic este frecvent denumit protecia produsului. Aceste modicri au dus la apariia a trei clase de HSB. Tipul de protecie conferit de ecare dintre ele este specicat n Tabelul 8. Nota: Hotele cu ux de aer orizontal sau vertical (incinte de lucru cu aer puricat) nu sunt de fapt HSB i nu trebuie folosite n locul acestora. 10.1. HSB de Clasa I Figura 6 conine o prezentare schematic a HSB de Clasa I. Aerul din ncpere este preluat printr-o deschiztur frontal cu o vitez minim de 0,38m/s, trece pe deasupra suprafeei de lucru i este evacuat din hot prin conducta de evacuare. Fluxul de aer direcionat dinspre operator ctre conducta de evacuare ndeprteaz particulele de aerosoli care pot generate la nivelul suprafeei de lucru. Deschiztura frontal permite operatorului s ajung cu minile la suprafaa de lucru din interiorul hotei i, n acelai timp, el poate s vad aceast suprafa printr-un panou frontal transparent. Acest panou poate la rndul su ridicat complet pentru a permite accesul la suprafaa de lucru n scopul currii sau n alte scopuri. Aerul din hot este evacuat printr-un ltru HEPA: (a) n laborator i apoi n exterior prin sistemul de aerisire al cldirii; (b) ctre exterior prin sistemul de evacuare a aerului din cldire; sau (c) direct n exterior. Filtrul HEPA poate amplasat e n sistemul de evacuare al HSB e n cel al cldirii. Unele HSB de Clasa I sunt echipate cu un ventilator propriu de evacuare, n timp ce altele folosesc ventilatorul sistemului de evacuare a aerului din cldire. HSB de Clasa I a fost prima HSB recunoscut ca atare i, datorit concepiei sale constructive simple, este nc larg folosit n ntreaga lume. Ea prezint avantajul de a conferi protecie personalului i mediului, dar poate folosit i pentru lucrul cu radionuclizi i substante chimice toxice volatile. Deoarece aerul nesterilizat din ncpere ptrunde peste suprafaa de lucru prin deschiztura frontal, hota nu asigur protecia produsului.
A: deschiztura frontal; B: panou frontal transparent; C: ltru HEPA de evacuare; D: spaiul de evacuare.
Figura 6. Reprezentare schematic a HSB de Clasa I 48
10.2. HSB de Clasa II Pe msur ce s-a extins utilizarea culturilor de celule i esuturi n scopul cultivrii virusurilor sau pentru alte scopuri, s-a ajuns la concluzia c nu este admisibil ca aerul nesteril din ncpere s ajung pe suprafaa de lucru. HSB de Clasa II au fost concepute nu numai pentru a proteja personalul, ci i pentru a proteja materialele de pe suprafaa de lucru de aerul contaminat din ncpere. HSB de Clasa II, cu cele patru tipuri (A1, A2, B1 i B2), difer de cele de clasa I prin faptul c permit doar accesul unui aer steril, ltrat prin ltre HEPA, la nivelul suprafeei de lucru. HSB de clasa II poate utilizat atunci cnd se lucreaz cu ageni infecioi din Grupurile de Risc 2 i 3. HSB de Clasa II pot folosite n cazul lucrului cu ageni infecioi din Grupul de Risc 4 doar dac se folosesc costume de izolare cu presiune pozitiv (tip scafandru). HSB de Clasa II tipul A1 HSB de Clasa II tip A1 este prezentat n Fig. 7. Un ventilator intern absoarbe aer din ncpere (aer de alimentare) n interiorul hotei prin deschiztura frontal i apoi prin grilajul de captare frontal. Viteza de ptrundere a aerului trebuie s e de cel puin 0,38 m/s la nivelul deschizturii frontale. Apoi, aerul de alimentare trece printr-un ltru HEPA de alimentare, urmnd s e trimis n jos, ctre suprafaa de lucru. Pe msur ce coboar, uxul de aer se desparte la aproximativ 6-18 cm deasupra suprafeei de lucru, jumtate din ux trecnd prin grilajul frontal de evacuare i jumtate prin grilajul posterior de evacuare. Toate particulele de aerosoli generate la nivelul suprafeei de lucru sunt imediat captate de uxul descendent de aer, care trece apoi prin grilajele de evacuare frontal i posterior, oferindu-se astfel cel mai nalt nivel de protecie a produselor. Aerul este apoi descrcat prin conducta comun posterioar n spaiul dintre ltrele de alimentare i de evacuare, plasate n partea superioar a hotei. Datorit diferenei de mrime dintre aceste ltre, aproximativ 70% din uxul de aer este recirculat prin ltrul de alimentare, pentru a ajunge napoi n zona de lucru; restul de 30% trece prin ltrul de evacuare pentru a ajunge n ncperea de lucru sau la exterior. Aerul din HSB de Clasa II A1 poate recirculat ctre ncpere sau evacuat ctre exteriorul cldirii, prin conectare etan e la o conduct special destinat, e la sistemul general de evacuare a aerului din cldire. Recircularea aerului de evacuare n ncperea de lucru prezint avantajul reducerii costurilor de nclzire ale cldirii, deoarece aerul cald sau rece din ncpere nu trece n mediul extern. Conectarea la un sistem de conducte de evacuare permite, de asemenea, folosirea unor asemenea HSB n cazul lucrului cu radionuclizi volatili i cu substane chimice toxice volatile (Tabelul 8). HSB de Clasa II tip A2 ventilate la exterior, tip B1 i tip B2 HSB de Clasa II tip A2 ventilate ctre exterior, tip B1 (Fig.8) i tip B2 - sunt variante ale tipului IIA1, iar caracteristicile lor, precum i cele ale HSB de Clasa I i de Clasa III, sunt prezentate n Tabelul 9. Fiecare variant de HSB este adecvat utilizrii n scopuri specializate (vezi Tabelul 8). Aceste HSB difer ntre ele prin mai multe aspecte: - viteza de ptrundere a aerului prin deschiztura frontal; - cantitatea de aer recirculat la nivelul suprafeei de lucru i eliminat din hot; - sistemul de evacuare, care poate elimina aerul din hot ctre ncpere sau ctre exterior, printr-un sistem de evacuare special destinat sau prin sistemul general de evacuare a aerului din cldire; - caracteristicile de presiune (conductele contaminate biologic i spaiul de evacuare sunt e sub presiune negativ, e nconjurate de alte spaii i conducte sub presiune negativ).
49
A: deschiztura frontal; B: panou frontal transparent mobil; C: ltrul HEPA de evacuare; D: conducta comun posterioar; E: ltrul HEPA de alimentare; F: ventilator suant.
Figura 7. Reprezentare schematic a unei HSB de Clasa II A1
A=deschiderea frontal, B=panoul frontal transparent, C=ltrul HEPA de evacuare, D=ltrul HEPA de alimentare, E=spaiul de evacuare cu presiune negativ, F=ventilatoare, G=ltrul HEPA de alimentare. Este necesar conectarea evacurii HSB la sistemul general de evacuare a aerului din cldire.
Figura 8. Reprezentare schematic a unei HSB Clasa II tip B1
50
Descrierea complet a diferitelor HSB de Clasa II A i B poate obinut consultnd referinele bibliograce (7) i (8) precum i crile tehnice ale echipamentelor. Tabelul 9. Diferene ntre HSB de Clasa I, II si III HSB I* IIA1 IIA2 cu ventilare spre exterior * IIB1* IIB2* III* Viteza de intrare m/s 0,36 0,38 0,51 0,51 0,51 0,51 nu se aplic** % de aer recirculat 0 70 70 30 0 0 evacuat 100 30 30 70 100 100 Sistem de evacuare conduct rigid spre ncpere sau prin conduct special spre ncpere sau prin conduct special conduct rigid conduct rigid conduct rigid
* Toate conductele contaminate sunt sub presiune negativ sau sunt nconjurate de alte conducte sau spaii cu presiune negativ ** Panoul frontal cu mnui este xat n deschiztura frontal. 10.3. HSB de Clasa III Acest tip de hot (Fig.9) ofer cel mai nalt nivel de protecie a personalului i este folosit, n special, pentru lucrul cu ageni din Grupul de Risc 4. Orice comunicare ntre interiorul i exteriorul hotei este blocat n ambele sensuri, printr-un sistem etan. Aerul de alimentare este ltrat HEPA (devenind astfel steril), iar aerul evacuat trece prin dou ltre HEPA succesive pentru decontaminare. Fluxul de aer este meninut printr-un sistem de ventilaie special conceput, amplasat la exteriorul hotei, care menine interiorul hotei sub presiune negativ (de aproximativ 124,5 Pa). Accesul la suprafaa de lucru se face prin intermediul unor mnui de cauciuc foarte rezistente, care fac corp comun cu un panou frontal xat etan. HSB de Clasa III trebuie s aib ataat un compartiment de trecere, sterilizabil i echipat cu ltre HEPA de evacuare, prin care se scot obligatoriu toate materialele care s-au introdus i s-au gsit n hot n timpul lucrului n vederea sterilizrii lor. Hota poate conectat la un autoclav cu dou ui, pentru a decontamina toate materialele care sunt introduse sau scoase din hot. Panoul frontal poate prevzut cu mai multe perechi de mnui pentru a extinde suprafaa de lucru. HSB de Clasa III sunt recomandate pentru lucrul n laboratoarele cu Nivel de Biosiguran 3 i 4. 10.4. Conexiunile pentru evacuarea aerului din hota de siguran biologic. Hotele de siguran biologic de Clasa II tip A1 i tip A2 conectate ctre exterior sunt prevzute cu un tub exibil de tip manon sau cu un capion (ca tubul/conducta de evacuare de la hota de buctrie), n care este presiune negativ. Acesta este xat pe traiectul de evacuare al hotei i conduce aerul din hot, decontaminat prin ltrare HEPA, spre conductele generale de evacuare a aerului din cldire. ntre manon i traiectul de evacuare al hotei se pstreaz o mic fant de 2,5 cm diametru. Aceast mic deschiztur permite i absorbia aerului din ncpere ctre sistemul de evacuare a aerului din cldire. Capacitatea sistemului de evacuare a aerului din cldire trebuie s e sucient pentru eliminarea att a aerului din camer, ct i a aerului din HSB. Manonul de conexiune trebuie s e uor de scos sau s e conceput n aa fel nct s permit efectuarea testelor operaionale asupra hotei. 51
n general, funcionarea unei HSB conectate prin manon nu este inuenat prea mult de uctuaiile uxului de aer din cldire. HSB de Clasa II tip B1 i tip B2 sunt prevzute cu conducte de evacuare rigide, de tipul celor conectate etan, (fr nici o deschiztur), la sistemul de evacuare al aerului din cldire sau, mai bine, la un sistem de evacuare special destinat, cu presiune negativ. Sistemul de evacuare al aerului din cldire trebuie s e perfect adaptat la cerinele de ux specicate de productor, referitoare la volum, precum i la presiunea static. Certicarea unei HSB cu conduct rigid necesit mai mult timp de lucru dect cea a unei HSB care recircul aerul din ncpere sau care are conexiune prin manon deoarece trebuie validat i etaneizarea perfect.
A: guri pentru montarea de mnui de lungimea braelor; B: panou frontal transparent; C: ltre HEPA duble pentru evacuare; D: ltru HEPA de alimentare cu aer; E: autoclav cu dou intrri sau compartiment de trecere; F: container (tanc) pentru deeuri chimice. Se impune conectarea sistemului de evacuare al hotei la un sistem independent de cel de evacuare a aerului din cldire.
Figura 9. Reprezentare schematic a unei HSB de Clasa III (panou frontal cu mnui):
10.5. Alegerea unei hote de siguran biologic HSB trebuie aleas, n primul rnd, n funcie de tipul de protecie necesar: protecia produselor, protecia personalului fa de microorganisme din Grupurile de Risc 1-4 i fa de expunere la radionuclizi si substane chimice toxice/volatile sau o combinaie a acestora, precum i protecia mediului nconjurtor. Tabelul 8 arat care HSB este recomandat pentru ecare tip de protecie. 52
Substanele chimice toxice sau volatile nu trebuie manipulate n HSB care recircul aerul de evacuare prin ncpere, cum ar cele de Clasa I care nu au conducte de comunicare cu sistemul de evacuare al cldirii, sau cele de Clasa II tip A1 sau tip A2. HSB de Clasa II tip B1 sunt acceptabile pentru lucrul timp de cteva minute cu radionuclizi i substane toxice/volatile. Hotele de Clasa II tip B2, numite i hote cu evacuare complet, se impun atunci cnd se manipuleaz radionuclizi i substane chimice volatile n cantiti mari.
10.6. Folosirea HSB n laborator Amplasarea Viteza de intrare a uxului de aer prin deschiztura frontal n HSB este de aproximativ 0,45 m/s. La aceast vitez, uxul de aer direcionat i menine cu greu integritatea i poate ntrerupt de ctre curenii de aer generai de micrile persoanelor n jurul HSB, de ferestrele deschise, de sistemele de alimentare cu aer, de nchisul i deschisul uilor. HSB trebuie amplasate ntr-un loc ferit de trac i de cureni de aer potenial perturbatori. Oricnd este posibil, se va lsa un spaiu liber de 30 cm n spatele i n prile laterale ale hotei pentru a permite un acces uor pentru ntreinere. Este necesar pstrarea unui spaiu liber de 30-35 cm deasupra hotei, pentru a permite msurarea exact a vitezei aerului prin ltrul de evacuare i pentru a schimba ltrele. Operatorii Dac HSB nu sunt folosite corect, protecia oferit de ele poate mult diminuat. Operatorii trebuie s aib grij s menin integritatea uxului de aer care ptrunde prin deschiztura frontal, atunci cnd i mic braele spre interiorul sau exteriorul hotei, n timpul lucrului. Micrile braelor trebuie fcute lent, perpendicular pe deschiztura frontal. Materialele din hot vor manipulate dup un minut de la introducerea braelor, pentru a permite acomodarea i pentru a mtura cu aer steril suprafaa minilor i a braelor. Numrul micrilor fcute prin deschiztura frontal trebuie redus, plasnd n interiorul hotei toate materialele necesare nainte de nceperea lucrului. Plasarea materialelor Grila frontal de captare a aerului din HSB din clasa II nu trebuie s e blocat cu hrtie, echipamente sau alte obiecte. Suprafaa materialelor care vor plasate n hot trebuie decontaminat cu alcool de 70. Zona de lucru din hot se poate acoperi cu prosoape de hrtie absorbant, mbibate sau nu cu dezinfectant, pentru a reine eventuale scurgeri i stropi. Toate materialele trebuie plasate n hot spre marginea posterioar a suprafeei de lucru, ct mai n spate posibil, fr a bloca grilajul posterior. Echipamentele generatoare de aerosoli (de ex. mixere, centrifugi etc.) trebuie aezate spre partea posterioar a hotei. Deeurile colectate pe categorii n recipiente speciale (precum sacii de colectare pentru materialele contaminate, recipientele cu vrfuri de pipete folosite, recipientele cu probe, etc.) trebuie plasate ntr-o latur a hotei. Fluxul de operaii trebuie s se desfoare dinspre zona curat spre zona contaminat a suprafeei de lucru. Pungile de colectare pentru deeuri periculoase sau containerele i recipientele pentru colectarea deeurilor tietoare - neptoare ( ex. vrfuri de pipete ), care urmeaz s e autoclavate, nu trebuie plasate n afara hotei. Micrile repetate nuntru/n afar, fcute pentru utilizarea acestor containere, pot ntrerupe bariera de aer a hotei i pot compromite att protecia personalului, ct i pe cea a produselor.
53
Operare i ntreinere Majoritatea HSB sunt concepute pentru a utilizate non-stop, iar inspectorii consider c folosirea continu este util i pentru controlul nivelului particulelor de praf i al altor particule din laborator. HSB de Clasa II tip A1 i A2 cu evacuare spre ncpere sau cu conectare prin manon la o conduct proprie de evacuare pot oprite n perioadele n care nu sunt folosite. Alte tipuri, precum HSB de Clasa II-B1 i B2, prevzute cu instalaii cu conduct rigid, necesit un ux de aer permanent cu presiune negativ, pentru a menine echilibrul cu aerul din ncpere. Hotele trebuie pornite cu cel puin 5 minute nainte de a ncepe lucrul i oprite dup cel puin 5 minute de la terminarea lucrului, pentru a permite hotei s se curee, adic pentru a permite aerului contaminat s e evacuat din hot. Orice reparaie a HSB trebuie fcut de ctre un tehnician calicat (autorizat). Orice disfuncie n operare trebuie raportat i reparat nainte de a relua utilizarea HSB. nainte de orice reparaie sau control (inspecie), HSB trebuie s e dezinfectate. Radiaiile ultraviolete Folosirea radiaiilor ultraviolete n HSB nu este necesar. Dac se folosesc, lmpile UV trebuie curate sptmnal pentru a nltura praful care reduce efectul germicid al radiaiei. Intensitatea radiaiei UV trebuie vericat la ecare recerticare a hotei, pentru a vedea dac emisia de UV este corespunztoare. Lmpile UV trebuie nchise n timpul lucrului sau cnd exist persoane n ncpere, pentru protecia ochilor i a pielii de expuneri nedorite, dar pot lsate s funcioneze dac panoul frontal transparent este nchis. Flacra deschis Trebuie evitat folosirea crii deschise n mediul aproape steril din interiorul HSB. Aceasta poate modica traseul uxului de aer i poate periculoas atunci cnd se utilizeaza substane volatile sau inamabile. De asemenea, utilizarea crii deschise poate afecta ltrele HEPA. Pentru a steriliza ansele bacteriologice, exist micro-arztoare electrice sau cu gaz. Scurgerile / stropirile Instruciunile privind conduita de urmat n cazul producerii unor scurgeri sau stropiri cu lichide contaminate trebuie citite i nsuite de ntregul personal al laboratorului; un exemplar va aat la loc vizibil. n cazul n care are loc o scurgere de material contaminat n interiorul HSB, curarea trebuie nceput imediat, n timp ce hota continu s funcioneze. Se va folosi un dezinfectant ecace, care va aplicat n aa fel nct generarea de aerosoli s e ct mai redus. Toate materialele care au venit n contact cu substana vrsat trebuie dezinfectate i/sau autoclavate. Certicarea Funcionalitatea i integritatea ecrei HSB trebuie supus unui control de certicare dup standarde naionale i internaionale, att n momentul instalrii, ct i ulterior, n mod periodic, control fcut de tehnicieni calicai (autorizai), n conformitate cu instruciunile productorului. Evaluarea ecacitii hotei trebuie s cuprind : teste de integritate a hotei, a ltrelor HEPA, prolul vitezei uxului descendent de aer i cel al vitezei aerului care ptrunde, raportul presiune negativ/ventilaie, analiza cu fum a uxului de aer, vericarea sistemelor de alarm i de interblocare. Pot fcute i testri opionale pentru scurgeri de curent, intensitatea luminii, intensitatea radiaiilor UV, nivelul zgomotelor i vibraiilor. Aceste teste necesit echipamente i aptitudini speciale, de aceea este recomandat ca ele s e executate de personal calicat. 54
Curarea i dezinfecia Toate obiectele din interiorul HSB, inclusiv aparatura, trebuie decontaminate la suprafa i scoase din hot dup terminarea lucrului, deoarece resturile de medii de cultur favorizeaz creterea germenilor. Suprafeele interioare ale HSB trebuie decontaminate nainte i dup ecare utilizare. Suprafaa de lucru i pereii interiori trebuie terse cu un dezinfectant care s distrug toate microorganismele care s-ar putea aa n hot. La sfritul zilei de lucru, decontaminarea nal a suprafeelor trebuie s includ i pe cea a suprafeei de lucru, a prilor laterale i posterioare i a feei interioare a panoului frontal transparent. Se va folosi o soluie clorigen sau alcool de 70, dac sunt active pe microorganismele manipulate. Dac se folosete un dezinfectant coroziv, cum sunt soluiile clorigene, este necesar o cltire ulterioar cu ap steril. Se recomand ca HSB s e lsat n funciune. Dac nu, nainte de a oprit, trebuie lsat s funcioneze cel puin 5 minute pentru evacuarea aerului contaminat din interior. Decontaminarea HSB trebuie decontaminate nainte de operaiuni precum schimbarea ltrelor sau mutarea hotei. Cea mai utilizat metod de decontaminare este cea prin fumigaie cu formaldehid gazoas. Decontaminarea HSB trebuie realizat de ctre personal calicat. Echipamentul de protecie individual Echipamentele de protecie trebuie purtate ntotdeauna cnd se lucreaz la HSB. n laboratoarele cu Nivel de Biosiguran 1 i 2 se pot folosi halate obinuite. n laboratoarele cu Nivel de Biosiguran 3 i 4, se asigur o protecie bun cu halate cu faa din material rezistent, care se ncheie la spate (cu excepia laboratoarelor cu izolare n costum protector). Mnuile se vor purta peste mnecile halatului i nu sub ele. Pentru protecia ncheieturilor minii se recomand purtarea de halate cu manete elastice. Pentru unele tehnici este necesar portul mtii i al ochelarilor de protecie. Alarme HSB pot echipate cu unul sau dou tipuri de alarme. Alarma conectat cu panoul frontal transparent se gsete numai la HSB cu panou mobil. Alarma se declaneaz ori de cte ori operatorul a aezat panoul ntr-o poziie incorect. Aciunea corectiv const n poziionarea corect a panoului. Alarma acionat de uxul de aer semnaleaz perturbarea uxului normal de aer n hot, care poate reprezenta un pericol imediat pentru operator sau pentru produs. Cnd se declaneaz acest din urm tip de alarm, se oprete imediat lucrul i se anun responsabilul de laborator. Detalii suplimentare se gsesc n crile tehnice ale hotelor. Personalul trebuie instruit i asupra acestor aspecte. Informaii suplimentare Alegerea tipului adecvat de HSB, instalarea, folosirea corespunztoare i certicarea anual a operrii HSB sunt procese complexe. Se recomand ca aceste procese s se desfoare sub supravegherea unor specialiti bine instruii i cu experien n materie de biosiguran; acetia trebuie s e familiarizai cu literatura recomandat n capitolul de Bibliograe i trebuie s fost instruii asupra tuturor aspectelor privind HSB. Operatorii trebuie s urmat forme speciale de instruire pentru operarea i utilizarea HSB. 55
56
11. ECHIPAMENTE DE SIGURAN
11. Echipamente de siguran
Deoarece aerosolii reprezint o important surs de infecie, trebuie luate msuri pentru a reduce formarea i rspndirea acestora. Aerosoli periculoi pot aprea n cursul unor variate operaiuni de laborator, de ex: amestecare, triturare, agitare, ultrasonare, centrifugare de material infecios. Ca urmare, chiar dac se folosete echipament de siguran, se recomand ca aceste operaiuni s se efectueze, pe ct posibil, ntr-o HSB (Capitolul 7). Datele privind HSB, utilizarea i testarea acestora, sunt prezentate n Capitolul 10. Simpla utilizare a echipamentului de siguran confer protecie doar dac operatorul este bine instruit i folosete tehnici corecte. Echipamentul trebuie vericat cu regularitate pentru a garanta performane constante de protecie. Tabelul 10 conine o list a echipamentelor destinate eliminrii sau reducerii unor pericole i denete succint caracteristicile lor de siguran. Detalii suplimentare pentru multe din aceste echipamente sunt redate n paginile urmtoare. Alte informaii privind utilizarea corect a acestor echipamente se regsesc n Capitolul 12. Informaii referitoare la echipamentele i operaiunile care pot genera pericole sunt prezentate n Anexa 4. Tabel 10. Echipamente de biosiguran Echipament Hot de securitate biologic (HSB) Clasa I Clasa II Pericole vizate Aerosoli i stropi Aerosoli i stropi Caracteristici care confer siguran Flux minim de aer orientat spre interiorul hotei de la nivelul fantei de acces pentru lucru (vitez redus de acces frontal al aerului) Filtrare adecvat a aerului eliminat Nu asigura protecia produsului Flux minim de aer orientat spre interiorul hotei de la nivelul fantei de acces pentru lucru (viteza redus de acces frontal al aerului) Filtrare adecvat a aerului eliminat Asigur protecia produsului Nivel maxim de securizare Asigur protecia produsului dac este prevzut cu ux de aer laminar Nivel maxim de securizare Ecran ntre operator i aria de lucru Uor de folosit. Controlul contaminrii captului de suciune al pipetei, protejnd utilizatorul, dispozitivul de pipetare i instalaia de vacuum. Se poate steriliza. Evit scurgerile din pipet.
Clasa III Izolator din folie exibil cu presiune negativ Ecran de protecie Dispozitive de pipetare
Aerosoli i stropi Aerosoli i stropi Stropi de substane chimice Pipetarea cu gura, (ingestia de patogeni, inhalarea de aerosoli produi prin aspirarea cu pipeta, picurarea de lichid, contaminarea captului de suciune al pipetei )
57
Echipament Microarztoare pentru anse Anse de unic folosin Recipiente sigure pentru colectarea i transportul materialelor infecioase n vederea sterilizrii Containere pentru obiecte tietoare/ neptoare Containere de transport ntre laboratoare sau instituii. Autoclave manuale sau automate Recipiente cu capac nurubat Dispozitiv de protecie a instalaiei de vid
Pericole vizate Stropi din ansele de transfer
Aerosoli, mprtiere i scurgere
Caracteristici care confer siguran Arztorul cu gaz sau electric este introdus ntr-un tub de sticl sau ceramic, deschis la gur Ansele de unic folosin nu impun tratament termic Recipient impermeabil nchis cu capac Robustee mecanic Autoclavabil
Rni prin nepare. Contaminare accidental cu microorganisme. Materiale infecioase (decontaminare n vederea eliminrii sau reutilizrii) Aerosoli i scurgeri Contaminarea cu aerosoli sau lichide a sistemului de vacuum al laboratorului
Autoclavabil. Robust, rezistent la nepare/tiere Robust. Containere primare i secundare impermeabile pentru lichide Conin materiale absorbante pentru reinerea lichidelor vrsate. Model aprobat Sterilizare ecace prin cldur Securizare ecace Filtre tip cartu pentru a mpiedica trecerea de aerosoli (mrimea particulelor cu dimensiunea de 0,45 m). Recipiente cu dezinfectante adecvate, utilizate drept capcane de vid . Dispozitiv de cauciuc (supap) pentru a nchide automat vacuumul cnd recipientul este plin. ntreg dispozitivul este autoclavabil
11.1. Izolatoare din folie exibil cu presiune negativ Izolatorul din folie exibil cu presiune negativ este un dispozitiv de izolare primar de sine stttor, care confer protecie maxim mpotriva materialelor biologice periculoase. Poate montat pe un suport mobil. Spaiul de lucru este n ntregime nchis ntr-un nvelis din PVC transparent suspendat de un cadru de oel. n interiorul izolatorului se menine permanent o presiune inferioar celei atmosferice. Admisia aerului se face printr-un ltru HEPA i evacuarea prin 2 ltre HEPA, evitndu-se astfel necesitatea evacurii aerului n afara cldirii. Izolatorul poate dotat cu incubator, microscop i alte echipamente (centrifugi, cuti pentru animale, surse de cldur, etc). Materialele sunt introduse i scoase din izolator prin ci speciale de acces pentru materiale i probe, fr a compromite sigurana microbiologic. Manipularea n interiorul izolatorului se face prin intermediul unor mneci cu mnui prevzute la rndul lor cu mnui de unic folosin. Presiunea din interiorul izolatorului este monitorizat cu ajutorul unui manometru. Acest tip de izolator este folosit pentru lucrul cu microorganisme periculoase (Grupul de Risc 3 sau 4) pe teren, acolo unde nu exist posibilitatea instalrii i utilizrii unei HSB convenionale. 58
11.2. Dispozitive de pipetare Dispozitivul de pipetare trebuie folosit ntotdeauna atunci cnd se pipeteaz. Este strict interzis pipetarea cu gura. Importana dispozitivelor de pipetare nu trebuie subapreciat. Cele mai frecvente pericole asociate cu pipetarea sunt rezultatul aspirrii cu gura. Aspirarea i ingestia de materiale sunt cunoscute a cauza a numeroase infecii de laborator. Germeni patogeni mai pot transferai i prin degete contaminate puse pe captul de suciune al pipetei. Un risc mai puin cunoscut este inhalarea de aerosoli rezultai prin aspirare. Un dop de vat nu constituie un ltru microbian ecace la presiune negativ sau pozitiv i anumite particule pot trece prin el. Un dop de vat prea dens poate determina o pipetare violent, urmat de aspirarea dopului, a unor aerosoli i chiar a lichidului. Ingestia de patogeni este evitat prin folosirea dispozitivelor de pipetare. Aerosoli se mai pot forma i prin picurarea unui lichid din pipet pe suprafaa de lucru, prin aspirare i barbotare sau cnd se su ultima pictur din pipet. Inhalarea aerosolilor a cror producere nu poate evitat n cursul operaiunilor de pipetare poate ns prevenit prin lucrul ntr-o HSB. Dispozitivele pentru pipetare trebuie alese cu grij. Tipul utilizat nu trebuie s genereze riscuri suplimentare i trebuie s e uor de sterilizat i curat. Conuri de prelevare prevzute cu ltru trebuie folosite ori de cte ori se manipuleaz microorganisme i culturi celulare. Pipetele cu capetele de suciune ciobite sau rupte nu trebuie folosite deoarece deterioreaz lcaul dispozitivelor de pipetare i prin aceasta genereaz pericole. 11.3. Omogenizatoare, agitatoare, mixere i aparate de ultrasonare Mixerele de buctrie nu sunt etane i elibereaz aerosoli. Se vor folosi doar cele special concepute pentru uzul n laboratoare, care prin construcie reduc sau evit eliberarea de aerosoli. Omogenizatoarele nchise de tip stomacher disponibile n prezent pentru prelucrarea de volume mici sau mari, pot genera i ele aerosoli. Omogenizatoarele folosite pentru microorganisme din Grupul de Risc 3 vor ncrcate i deschise numai n HSB. Aparatele de ultrasonare pot genera, de asemenea, aerosoli. Ele trebuie manipulate n HSB sau acoperite/ecranate n timpul folosirii. Capacele i exteriorul aparatelor de ultrasonare trebuie decontaminate dup folosire. 11.4. Anse de unic folosin Avantajul anselor de unic folosin este c nu trebuie sterilizate i pot folosite n HSB unde becurile Bunsen i microarztoarele perturb uxul de aer. Dup folosire, ansele trebuie plasate n dezinfectant i evacuate ca orice material contaminat (vezi Capitolul 3). 11.5. Microarztoare Microarztoarele cu gaz sau electrice sunt prevzute cu ecrane de sticl borosilicat sau ceramice, ceea ce reduce formarea stropilor i dispersia materialului infecios n momentul sterilizrii anselor. Microarztoarele modic totui circuitul aerului i de aceea trebuie plasate n HSB ct mai n spate.
59
11.6. mbrcminte i echipament de protecie individual mbrcmintea i echipamentul de protecie individual constituie o barier care reduce riscul de expunere la aerosoli, stropiri i inoculri accidentale i vor alese n funcie de specicul activitii desfurate. mbrcmintea de protecie trebuie purtat ori de cte ori se lucreaz n laborator. La prsirea laboratorului, mbrcmintea de protecie se ndeprteaz i se spal minile. Tabelul 11 prezint cteva tipuri de echipamente de protecie individual folosite n laborator i protecia pe care o confer. Tabel 11. Echipament de protecie personal Echipament Halate, costume i salopete de laborator oruri de plastic nclminte Ochelari de protecie Ochelari de lucru Ecrane protectoare pentru fa Dispozitive de protecie respiratorie Mnui Pericole vizate Contaminarea hainelor Contaminarea hainelor Impact i stropire Impact i stropire Impact Impact i stropire Inhalare de aerosoli Caracteristici care confer siguran ncheiate la spate. S acopere hainele de strad Impermeabile pentru lichide Fr decupare n fa Lentile rezistente la impact (pot optic corectoare sau aplicate peste ochelari) Aprtori laterale Lentile rezistente la impact, optic corectoare Aprtori laterale S protejeze ntreaga fa S e uor de ndeprtat n caz de accident Modele variate: de unic folosin ; puricatoare de aer ce acoper jumtate sau ntreaga fa ; masc sau glug cu puricator de aer asistat mecanic; aparat de respiraie asistat De unic folosin, avizate pentru uz microbiologic, confecionate din latex, vinil sau nitril Protecia minii Plas metalic
Contact direct cu microorganismele Tiere
mbrcminte de laborator, halate, oruri Halatele de laborator ar trebui s se ncheie pn sus. Modelele de halate cu mnec lung, nchise la spate i salopetele confer o protecie mai bun dect halatele i bluzele obinuite i sunt de preferat n laboratoarele de microbiologie sau pentru lucrul la HSB. orurile purtate peste halate ofer o protecie suplimentar fa de stropirea cu substane chimice sau materiale biologice, cum ar snge sau culturi n mediu lichid. Trebuie prevzut o spltorie pentru echipamentul de lucru, situat n laborator sau n vecintatea acestuia. Ochelari de protecie, ochelari de lucru i ecrane protectoare pentru fa Alegerea echipamentului de protejare a ochilor sau a feei depinde de activitatea desfurat. Ochelarii de lucru cu sau fr dioptrii vor confecionai cu rame speciale n care lentilele se monteaz 60
numai dinspre partea anterioar; lentilele sunt confecionate din material incasabil ind curbate sau cu aprtori laterale. Ochelarii de protecie ar trebui purtai peste ochelarii de vedere sau peste lentilele de contact, care nu confer protecie mpotriva pericolelor biologice sau chimice. Ecranele pentru fa (vizoare) sunt confecionate din material plastic incasabil, protejeaz ntreaga fa i se xeaz pe cap cu o band sau bonet. Dispozitive de protecie respiratorie Protecia respiratorie este necesar cnd se execut proceduri cu mare periculozitate (ex. curarea unei deversri de material infecios). Alegerea tipului de dispozitiv depinde de tipul de pericol. Exist dispozitive la care se pot monta diferite tipuri de ltre : pentru protecie mpotriva diferitelor gaze, vapori, particule sau microorganisme. Este absolut necesar ca ltrul s e montat la dispozitivul de protecie respiratorie potrivit. Pentru a obine o protecie maxim, dispozitivul ar trebui adaptat pentru faa ecrei persoane i testat pentru ecacitate. Aparatele de asisten respiratorie cu containere proprii, cu butelie de aer, ofer protecie total. Mtile de tip chirurgical sunt utile numai pentru protecia pacientului, dar nu ofer protecie operatorului. Pentru protecia mpotriva agenilor biologici au fost concepute i dispozitive de unic folosin (ISO 13.340.30). Dispozitivele de protecie respiratorie nu trebuie purtate n afara spaiului laboratorului. Mnui
Minile pot contaminate n timpul lucrului n laborator. De asemenea pot rnite de obiecte ascuite. Pentru munca obinuit de laborator precum i pentru manipularea de ageni infecioi, snge i uide biologice, se folosesc mnui chirurgicale de unic folosin, avizate pentru uz microbiologic, confecionate din latex, vinil sau nitril. Pot folosite i mnui reutilizabile, dar trebuie acordat atenie splrii, scoaterii, currii i dezinfeciei lor corecte. Mnuile se scot i minile se spal bine dup manipularea de material infecios, dup lucrul la o HSB sau nainte de prsirea laboratorului. Mnuile de unic folosin utilizate se ndeprteaz odat cu deeurile infecioase. Au fost semnalate reacii alergice de tip dermatit i de hipersensibilitate imediat la personalul din laborator i la ali lucrtori care au purtat mnui din latex, mai ales din cele cu pudr. De aceea ar trebui s e disponibile i alte tipuri de mnui dect cele din latex cu pudr. Mnuile din plas de oel inoxidabil ar trebui folosite cnd exist o expunere potenial la instrumente tioase, ex. examinri postmortem. Astfel de mnui protejeaz mpotriva tierii, dar nu i a neprii. Mnuile nu trebuie purtate n afara spaiului laboratorului. Pentru alte informaii consultai indicaiile bibliograce 12, 17 i 18.
61
62
12. TEHNICI DE LABORATOR
12. Tehnici de laborator
Eroarea uman, tehnicile defectuoase de laborator i folosirea incorect a echipamentelor sunt cauzele majoritii accidentelor de laborator i infeciilor aprute la locul de munc. Acest capitol ofer un compendiu de metode tehnice care sunt indicate pentru a evita sau minimaliza problemele de aceast natur cel mai frecvent raportate. 12.1. Manipularea n siguran a probelor n laborator Recoltarea, transportul i manipularea necorespunztoare a probelor n laborator prezint risc de infecie pentru personalul implicat. Containerele pentru probe Containerele pentru probe pot din sticl sau preferabil din plastic. Ele trebuie s e rezistente i nu trebuie s permit scurgerea materialului din ele cnd capacul sau dopul este corect aplicat. Nimic din materialul recoltat nu trebuie s rmn n afara containerului. Containerele trebuie corect etichetate pentru o identicare uoar. Documentele de nsoire nu trebuie nfurate n jurul containerului, ci plasate separat, preferabil ntr-un nveli impermeabil. Transportul probelor n laborator Pentru evitarea scurgerilor accidentale sau a vrsrii probelor, trebuie utilizate containere secundare, cum sunt cutiile cu stative, astfel nct recipientele cu probe s rmn n picioare atunci cnd containerele sunt manipulate corect. Containerele secundare pot din metal sau plastic, trebuie s e autoclavabile sau s e rezistente la aciunea dezinfectanilor chimici, iar capacul ar trebui s e prevzut cu o garnitur. Ele trebuie decontaminate regulat. Primirea probelor Laboratorul care primete un mare numr de probe trebuie s aib o ncpere separat sau un spaiu special pentru acest scop. Deschiderea pachetelor Personalul care primete i despacheteaz probele trebuie s e contient de potenialul pericol asupra strii de sntate i trebuie instruit s adopte precauiile standard (2), n special cnd se confrunt cu spargerea sau vrsarea containerelor. Containerele primare cu probe ar trebui deschise ntr-o HSB. Trebuie s existe dezinfectante la ndemn. 12.2. Utilizarea pipetelor i a dispozitivelor de pipetare 1. Dispozitivul de pipetare trebuie utilizat ntotdeauna. Pipetarea cu gura este interzis. 2. Toate pipetele trebuie s aib ltru de vat pentru a reduce contaminarea dispozitivului de pipetare. 3. Nu trebuie suat niciodat ntr-un lichid care conine ageni infecioi. 4. Materialul infecios nu trebuie niciodat amestecat prin aspirare i expulzare alternant, prin pipet 5. Lichidele nu trebuie niciodat expulzate forat din pipete. 6. Pipetele gradate neterminal sunt preferabile altor tipuri de pipete deoarece nu necesit expulzarea ultimei picturi. 63
7. Pipetele contaminate vor imersate complet ntr-un dezinfectant adecvat, aat ntr-un container incasabil. Ele trebuie lsate n dezinfectant atta timp ct este necesar nainte de a scoase din laborator. 8. Containerul pentru pipete folosite trebuie plasat n interiorul HSB, nu n afara ei. 9. Seringile cu ace hipodermice nu trebuie utilizate pentru pipetare. 10. Trebuie utilizate dispozitive speciale pentru deschiderea acoanelor prevzute cu capsule cu septuri de cauciuc care s permit apoi utilizarea pipetelor, evitndu-se utilizarea n acest scop a acelor hipodermice i a seringilor. 11. Pentru a evita dispersia picturilor de material infecios din pipet, pe suprafaa de lucru va aezat un material absorbant ; dup utilizare acesta va evacuat ca material infecios. 12.3. Evitarea dispersiei materialului infecios 1. Pentru evitarea pierderii premature a ncrcturii sale, inelul ansei bacteriologice trebuie s aib un diametru de 2-3 mm i trebuie s e complet nchis. Firul ansei nu trebuie s e mai lung de 6 cm pentru a reduce vibraia. 2. Riscul stropirii cu material infecios cu ocazia sterilizrii ansei la acra becului Bunsen poate evitat prin utilizarea pentru sterilizare a unui microarztor electric. Sunt de preferat ansele de unic folosin, care nu au nevoie de sterilizare. 3. Trebuie luate msuri de precauie atunci cnd se usuc probele de sput pentru a evita formarea de aerosoli. 4. Probele i culturile a cror utilizare s-a ncheiat i care trebuie autoclavate i / sau evacuate, trebuie plasate n containere impermeabile, ex. saci speciali pentru deeuri de laborator. Partea de sus a sacilor trebuie nchis etan (ex. cu band adeziv martor de autoclavare) nainte de plasarea lor n containerele pentru deeuri infecioase. 5. Locul de munc trebuie decontaminat cu dezinfectante corespunztoare la sfritul ecrei etape i zile de lucru. Pentru informaii suplimentare vezi referina (12). 12.4. Utilizarea Hotelor de Siguran Biologic 1. Modul de utilizare i limitele de siguran ale HSB trebuie aduse la cunotina tuturor utilizatorilor poteniali (vezi capitolul 10) pe baza standardelor naionale i a literaturii de specialitate. Protocoale scrise sau ghiduri de operare/de siguran trebuie puse la dispoziia personalului. Trebuie s e clar, n mod particular, c HSB nu protejeaz pe cel ce lucreaz n caz de spargere, vrsare sau tehnici greite de manipulare. 2. HSB trebuie utilizat numai dac funcioneaz corect. 3. Panoul frontal transparent de sticl nu trebuie deschis n timpul lucrului. 4. Aparatele i volumele de materiale utilizate n HSB trebuie s e reduse la minimum. Circulaia aerului n partea din spate a incintei HSB nu trebuie blocat. 5. Becurile Bunsen nu trebuie utilizate n hot. Cldura produs perturb uxul de aer i poate avaria ltrele. Microarztoarele electrice sunt permise, dar ansele de unic ntrebuinare utilizare sunt de preferat. 6. ntreaga activitate din HSB trebuie s se desfoare n centrul sau n partea posterioar a ariei de lucru, bine vizibil prin panoul frontal de sticl. 7. Tracul n spatele operatorului trebuie s e minim. 8. Operatorul nu trebuie s perturbe uxul de aer prin micri repetate de du-te vino ale braelor. 9. Grilele frontale de admisie a aerului nu trebuie blocate cu foi, caiete, pipete sau alte materiale deoarece aceste ntreruperi ale uxului de aer pot determina contaminarea materialului i expunerea operatorului. 10. Suprafaa HSB trebuie tears cu dezinfectante adecvate dup ecare etap de lucru i la sfritul programului de lucru. 64
11. Ventilarea HSB trebuie pornit cu minimum 5 minute nainte de nceperea lucrului i oprit dup minimum acelai interval de la terminarea lucrului n HSB. 12. Documentele de lucru nu trebuie puse niciodat n interiorul HSB. Pentru alte informaii vezi capitolul 10. 12.5. Evitarea ingestiei de material infecios i a contactului cu pielea i ochii 1. Particulele mari i picturile cu diametrul mai mare de 5 m, aprute n timpul manipulrii materialului microbiologic, trebuie ndeprtate rapid de pe suprafaa de lucru i de pe minile operatorului. Trebuie purtate mnui de unic folosin. Lucrtorii din laborator trebuie s evite atingerea gurii, ochilor i a feei. 2. Este interzis depozitarea i consumul de alimente i butur n laborator. 3. Este interzis introducerea n gur a oricror obiecte (creioane, pixuri, gum de mestecat) 4. Este interzis aplicarea cosmeticelor n laborator; 5. Faa, ochii i gura trebuie protejate cu un ecran sau prin alte modaliti, n timpul oricrei operaii care se poate solda cu mprocarea de material infecios. 12.6. Evitarea injectrii de material infecios 1. Inocularea accidental ca urmare a rnilor provocate de sticla spart sau ciobit, poate evitat prin creterea ateniei n timpul procedurilor de lucru. Obiectele din sticl ar trebui nlocuite cu cele din material plastic, ori de cte ori este posibil. 2. Injectarea se poate produce accidental prin nepare cu ace de sering, pipete Pasteur din sticl i cioburi de sticl. 3. Accidentele prin nepare cu acul pot reduse prin: a) reducerea utilizrii seringilor i acelor (exist dispozitive simple pentru deschiderea acoanelor nchise cu capsul i dop de cauciuc, astfel nct pot folosite pipete n locul seringilor cu ac) ; b) utilizarea unor dispozitive de siguran mpotriva neprii atunci cnd seringile i acele sunt absolut necesare. 4. Acele nu trebuie niciodat reacoperite cu capacul de protecie. Ele nu se desprind de sering ci se arunc mpreun cu seringa ntr-un container special, rezistent la nepare, prevzut cu capac. 5. Pipetele Pasteur de plastic ar trebui s nlocuiasc pipetele de sticl. 12.7. Separarea serului 1. Aceast operaiune trebuie efectuat numai de personal bine instruit / calicat. 2. Trebuie folosite mnui i trebuie protejai ochii i mucoasele. 3. Aerosolii i stropirile pot evitate sau reduse la minim numai printr-o bun tehnic de laborator. Sngele i serul trebuie pipetate cu atenie. Este interzis pipetarea cu gura. 4. Dup utilizare, pipetele trebuie imersate complet n dezinfectantul corespunztor i meninute ct este necesar, nainte de evacuare sau splare i sterilizare pentru reutilizare. 5. Tuburile (vacutainerele) care au coninut probele utilizate, coninnd cheaguri de snge, etc trebuie introduse (cu dopul pus) ntr-un container impermeabil n vederea autoclavrii i/sau incinerrii. 6. Trebuie s existe la ndemn dezinfectante adecvate pentru curarea stropilor i lichidelor vrsate (vezi Capitolul 14). 12.8. Utilizarea centrifugii 1. Performanele mecanice bune sunt o condiie primordial pentru utilizarea centrifugilor n condiii de siguran microbiologic. 2. Centrifuga trebuie utilizat cu respectarea instruciunilor productorului. 65
3. Centrifuga trebuie plasat astfel nct lucrtorii s poat vedea n interiorul cuvei acesteia pentru a putea xa corect suporturile pentru cupe i cupele cu probe. 4. Tuburile de centrifug i containerele cu probe care urmeaz a centrifugate trebuie s e confectionae din sticl groas sau preferabil din plastic i trebuie vericate pentru absena defectelor nainte de utilizare. 5. Cupele de centrifug i containerele cu probe trebuie bine astupate/acoperite (de preferat cu capace cu let). 6. Cupele trebuie ncrcate, echilibrate, nchise i deschise ntr-o HSB. 7. Suporii pentru cupele de centrifug trebuie grupai cte doi, dup greutate i echilibrai corect cu cupele n poziie. 8. Trebuie respectat (conform instruciunilor din manualul de utilizare) spaiul dintre nivelul lichidului centrifugat i gura cupei. 9. Apa distilat sau alcoolul (propanol 70%) pot utilizate pentru echilibrarea cupelor goale. Soluiile saline (ser ziologic) sau de hipoclorit nu pot utilizate deoarece sunt corozive. 10. Numai tuburile de centrifug sau supori pentru cupe cu nchidere etan (cupe de siguran) trebuie utilizate cnd se lucreaz cu microorganisme din grupele de risc 3 i 4. 11. La folosirea rotoarelor de centrifug angulare trebuie avut grij ca tuburile s nu e suprancrcate pentru a evita scurgerile. 12. Cuva centrifugii trebuie controlat zilnic, pentru a verica eventuala apariie de urme de culoare sau murdrie la nivelul corespunznd rotorului. n caz de murdrie evident, trebuie reevaluate protocoalele de centrifugare. 13. Rotorul centrifugii i suporii pentru cupe trebuie examinate zilnic pentru a depista eventualele corodri sau suri. 14. Rotorul, suporturile pentru cupe i cuva centrifugii trebuie decontaminate dup ecare utilizare. 15. Dup utilizarea centrifugii, suporii pentru cupe trebuie pstrai (cu deschiderea n jos) pentru scurgerea lichidului de echilibrare. 16. n timpul funcionrii unei centrifugi pot ejectai din aceasta aerosoli infecioi. Aceste particule circul cu vitez prea mare pentru a putea reinute de uxul de aer al HSB dac centrifuga este plasat ntr-o hot tradiional cu deschidere frontal de Clasa I sau de Clasa II. Izolarea centrifugilor n HSB de Clasa III previne dispersarea n afara hotei a aerosolilor produi. Totui, o tehnic corect de centrifugare i folosirea cupelor sau suporilor cu capace etane asigur o protecie adecvat mpotriva aerosolilor i particulelor infecioase dispersate. 12.9. Utilizarea omogenizatoarelor, agitatoarelor, mixerelor/blenderelor i aparatelor de ultrasonare 1. Omogenizatoarele obinuite (mixere de buctrie) nu pot utilizate n laborator deoarece pot genera scurgeri i aerosoli. Blenderele i dispozitivele de tiere special concepute pentru laborator sunt mai sigure. 2. Cupele si capacele sau sticlele trebuie pstrate n bune condiii, fr defecte. Capacele trebuie s aib garnitura bun i s poat bine nletate. 3. Presiunea n vas crete n timpul operaiilor de omogenizare, amestecare i ultrasonare. Aerosolii coninnd material infecios se pot strecura ntre capac i vas. Vasele din plastic, n special cele din politetrauoroetilen (PTFE), sunt recomandate deoarece sticla se poate sparge, elibernd material infecios i poate rni operatorul. 4. n timpul funcionrii, omogenizatoarele, agitatoarele i aparatele de ultrasonare trebuie acoperite cu un ecran/clopot rezistent, din plastic transparent, ce se dezinfecteaz dup utilizare. Atunci cnd este posibil, aceste aparate trebuie utilizate sub ecranele lor de plastic, n HSB. 5. La sfritul operaiilor, containerele trebuie deschise ntr-o HSB. 6. Cei ce lucreaz cu aparate de ultrasonare vor utiliza cti de protecie. 66
12.7. Utilizarea mojarelor i a omogenizatoarelor de esuturi 1. Dac se utilizeaz mojare/omogenizatoare din porelan/sticl, mna cu care se in trebuie protejat cu mnu i un tampon de vat sau orice alt material absorbant. Mojarele din plastic (PTFE) sunt mai sigure. 2. Mojararea i deschiderea omogenizatoarelor trebuie efectuat n HSB. 12.8. Utilizarea i ntreinerea frigiderelor i congelatoarelor 1. Frigiderele, congelatoarele i lzile cu ghea carbonic trebuie dezgheate i curate periodic, iar olele, eprubetele etc. care s-au spart n timpul stocrii trebuie ndeprtate. n timpul currii se vor folosi mti de protecie i mnui groase de cauciuc. Dup curare, suprafeele interioare trebuie dezinfectate. 2. Toate containerele pstrate n frigider trebuie inscripionate clar cu denumirea tiinic a materialului coninut, data stocrii i numele celui care a fcut stocarea. Materialele nvechite i neinscripionate vor autoclavate i ndeprtate. 3. Trebuie inut un inventar al tuturor materialelor pstrate n congelator. 4. Soluiile inamabile nu trebuie stocate n frigider, dac acesta nu este rezistent la explozie.. Notie de avertizare n acest sens trebuie aate pe ua frigiderului. 12.9. Deschiderea olelor coninnd material infecios liolizat Fiolele care conin material infecios liolizat trebuie deschise cu precauie deoarece coninutul poate s e la o presiune sczut i deschiderea poate provoca o ptrundere brusc de aer n interiorul olei, cu dispersia unei pri din coninut n atmosfera nconjurtoare. Fiolele trebuie deschise ntotdeauna ntr-o HSB. Sunt recomandate urmtoarele proceduri pentru deschiderea olelor: 1. nti se decontamineaz suprafaa exterioar a olei. 2. Se pilete gtul olei la nivelul mijlocului dopului de bumbac sau celuloz dac ola e prevzut cu un astfel de dop. 3. Fiola se ine n vat mbibat cu alcool pentru a proteja mna de rnire, n momentul deschiderii olei. 4. Vrful olei (cu eventualul dop) se ndeprteaz cu atenie i se consider a material contaminat. 5. Dac dopul rmne n interior se ndeprteaz cu o pens steril. 6. Se adaug lichidul de reconstituire ncet pentru a mpiedica formarea spumei n ol. 12.10. Pstrarea olelor coninnd material infecios Fiolele coninnd material infecios nu trebuie niciodat introduse n azot lichid pentru c cele surate sau nchise imperfect pot exploda la scoatere. Dac este recomandat pstrarea la o temperatur foarte joas, olele pot stocate numai n faza gazoas, deasupra azotului lichid. n caz contrar, materialul infecios trebuie pstrat n congelatoare sau n ghea carbonic. Personalul de laborator trebuie s-i protejeze ochii i minile cnd scoate olele stocate la temperatur joas. Suprafaa olelor pstrate n acest mod trebuie dezinfectat cnd olele sunt scoase de la conservare. 12.11. Precauii standard privind sngele i alte lichide biologice, esuturi, secreii sau excreii. Precauiile standard (care includ precauiile universale [19]) sunt destinate reducerii riscului transmiterii microorganismelor din surse de infecie att cunoscute ct i necunoscute (2).
67
Colectarea, etichetarea i transportul probelor 1. Precauiile universale trebuie respectate ntotdeauna: se va lucra de ecare dat cu mnui de protecie. 2. Sngele trebuie recoltat de la pacieni i animale de ctre personal instruit. 3. Pentru ebotomie, acele clasice i sistemele cu sering trebuie nlocuite cu dispozitive de unic folosin cu vid, care permit recoltarea direct a sngelui n recipiente nchise de transport sau de cultur i care fac imposibil reutilizarea acului. Tuburile trebuie plasate n containere speciale pentru transportul ctre laborator (vezi capitolul 15 pentru cerinele de transport) i n cadrul laboratorului (vezi seciunea Transportul probelor n laborator din acest capitol). Formularele de solicitare a prestaiilor de laborator trebuie plasate separat n containerul de transport (n plicuri sau pungi impermeabile). 4. Personalul care face recepia probelor NU trebuie s deschid aceste plicuri . Deschiderea tuburilor cu probe i repartizarea coninutului 1. Tuburile cu probe trebuie deschise ntr-o HSB . 2. Este obligatoriu s se foloseasc mnui. De asemenea, este recomandat protecia ochilor i a mucoaselor (ochelari de protecie sau ecrane de protejare a feii). 3. mbrcmintea de protecie trebuie completat cu un or de plastic. 4. Dopul trebuie apucat printr-o bucat de hrtie sau tifon pentru a preveni mprocarea (stropirea). Sticlria i obiectele tietoare/neptoare (acele, seringile, acele hipodermice, pipetele Pasteur) Ori de cte ori este posibil, plasticul trebuie s nlocuiasc sticla. Vor folosite numai obiectele din sticl special de laborator (borosilicat) i orice articol ciobit sau crpat trebuie nlturat. Nu vor utilizate pentru pipetare acele de sering (vezi i seciunea Evitarea injectrii de material infecios din acest capitol). Lamele i frotiurile pentru microscopie Fixarea i colorarea frotiurilor de snge, sput, materii fecale pentru microscopie nu omoar obligatoriu toate organismele sau virusurile de pe frotiu. Aceste obiecte trebuie manipulate cu pensa, depozitate corespunztor i decontaminate i/sau autoclavate naintea evacurii. Echipamentul automatizat (aparate de ultrasonare, mixere, vortex-uri) 1. Echipamentul trebuie s e de tip nchis, pentru a preveni dispersia picturilor mici i a aerosolilor. 2. Reziduurile trebuie colectate n vase nchise n vederea autoclavrii i/sau evacurii. 3. Echipamentul trebuie dezinfectat dup ecare utilizare, urmnd instruciunile productorului. esuturile 1. Formolul trebuie folosit ca xator. 2. Secionarea probelor congelate trebuie evitat. Dac este necesar, criostatul trebuie s e ecranat, iar operatorul s poarte un ecran de protecie facial. Pentru decontaminare, temperatura instrumentului trebuie s e ridicat la cel puin 20 Celsius. Decontaminarea Pentru decontaminare se recomand hipocloritul i dezinfectantele n concentraie mare. Soluiile de hipoclorit proaspt preparate trebuie s conin clor 1 g/l pentru uz general i 5 g/l pentru decontaminarea sngelui. Glutaraldehida poate folosit pentru decontaminarea suprafeelor (vezi Capitolul 14). 68
12.12. Precauii privind materialele ce ar putea conine prioni Prionii (desemnai i ca virusuri lente) sunt asociai cu encefalopatiile spongiforme transmisibile (TSE), cum ar maladia Creutzfeldt-Jakob (CJD, inclusiv noua variant, sindromul Gerstmann -Straussler Scheinker), insomnia letal familial i boala Kuru la om, Boala oii i caprei nebune, encefalopatia spongiform bovin (BSE) i alte encefalopatii transmisibile la cprioare, elani i nurci. Dei CJD se transmite la om, nu este dovedit apariia bolii n laborator ca urmare a manipulrii acestor ageni infecioi. Totui sunt necesare precauii legate de manipularea materialului infecios sau potenial infecios provenind de la oameni i animale. Selectarea nivelului de biosiguran cnd se lucreaz cu materiale asociate TSE va depinde de natura agentului i de probele de studiat i trebuie decis cu consultarea autoritii naionale. Concentraia cea mai mare de prioni se gsete n esutul sistemului nervos central. Studii pe animale sugereaz c se pot gsi concentraii ridicate de prioni i n splin, timus, noduli limfatici i plmni. Studii recente arat c prionii din muchii scheletici i ai limbii pot prezenta de asemenea un risc infectios potenial. Deoarece inactivarea complet a prionilor este greu de realizat, este important s se pun accent pe folosirea instrumentarului de unic folosin ori de cte ori este posibil i s se foloseasc materiale de unic folosin pentru protecia suprafeei de lucru a HSB. Principala precauie este prevenirea ingestiei de material contaminat sau neparea pielii celor care lucreaz n laborator. Deoarece prionii nu sunt omori prin metodele obinuite de dezinfecie i sterilizare din laborator, trebuie luate urmtoarele precauii suplimentare : 1. Folosirea de echipamente special destinate, care nu sunt folosite i n alte laboratoare, este insistent recomandat. 2. Trebuie folosit mbrcminte de protecie de unic folosin (halate, oruri), precum i mnui (pentru anatomopatologi mnui din plas de oel, ntre dou de cauciuc ). 3. Este insistent recomandat folosirea obiectelor de unic utilizare din plastic ce pot tratate i evacuate ca deeuri uscate (vezi mai jos). 4. Dispozitivele de procesare a esuturilor nu se utilizeaz din cauza problemelor pe care le ridic dezinfecia lor. n locul lor se utilizeaz borcane i pahare de plastic. 5. Toate manipulrile se fac n HSB. 6. Trebuie avut mult grij pentru evitarea producerii de aerosoli, ingestiei accidentale i tierii sau neprii pielii. 7. esuturile xate cu formol trebuie considerate n continuare infecioase, chiar dup expunere ndelungat la aciunea formolului. 8. Probele histologice coninnd prioni sunt n mare msur inactivate dup expunerea la acid formic 96% timp de 1or. 9. Deeurile, inclusiv mnuile, halatele i orurile de unic folosin, trebuie autoclavate folosind un sterilizator cu aburi la 134-137C pentru un singur ciclu de 18 min sau 6 cicluri succesive a cte 3 min. ecare, apoi incinerate. 10. Instrumentarul reutilizabil (cum ar mnuile din plas de oel) trebuie colectate pentru decontaminare. 11. Reziduurile lichide infecioase contaminate cu prioni trebuie tratate cu soluie de hipoclorit de sodiu coninnd clor liber n concentraie nal de 20g/l (2%) timp de 1 or 12. Procedura de vaporizare cu paraformaldehid nu diminueaz titrul prionilor iar acetia sunt rezisteni la radiaiile UV. Cu toate acestea, hota trebuie decontaminat prin metode standard (ex. formaldehid gazoas) pentru inactivarea altor microorganisme ce pot prezente. 13. HSB contaminate cu prioni i celelalte suprafee pot decontaminate cu hipoclorit de sodiu 20g/l (2%) timp de 1 or . 69
14. Filtrele HEPA trebuie incinerate la minimum 1000C dup scoatere. Aciunile recomandate nainte de incinerare : a. pulverizarea cu lac de pr spray a feei expuse a ltrului, nainte de a-l scoate ; b. acoperirea ltrului cu un sac de plastic n momentul scoaterii ; c. scoaterea ltrului HEPA din camera de lucru astfel nct restul hotei s nu e contaminat. 15. Instrumentarul trebuie inut n soluie de hipoclorit de sodiu coninnd clor liber 20g/l (2%) timp de 1 or, apoi cltit bine cu ap naintea autoclavrii. 16. Instrumentarul ce nu poate autoclavat se cur prin splare repetat cu soluie de hipoclorit de sodiu coninnd clor liber 20g/l (2%) timp de > 1 or. Cltirea instrumentarului este necesar pentru ndeprtarea hipocloritului de sodiu rezidual. Pentru orice alte informaii privind manipularea agenilor neconvenionali vezi referinele 12, 26 i 27.
70
13. PLANURI PENTRU INTERVENII N CAZ DE ACCIDENTE I MSURI DE URGEN
13. Planuri pentru intervenii n caz de accidente i msuri de urgen
Fiecare laborator care lucreaz cu materiale infecioase trebuie s instituie msuri de siguran adaptate gradului de periculozitate al organismelor i animalelor manipulate. Existena unui plan scris pentru msurile de aplicat n caz de accidente n laborator sau n biobaz este o necesitate n orice instituie care manipuleaz sau gzduiete microorganisme din grupurile de risc 3 sau 4 (laborator de biosiguran securizat - nivelul 3 i laborator nalt securizat - nivelul 4). Autoritile sanitare locale i/sau naionale trebuie s se implice n elaborarea planurilor de intervenie n caz de accidente. 13.1. Planul de intervenie n caz de accidente Planul de intervenie n caz de accidente trebuie s cuprind proceduri operaionale privind: 1. precauii pentru prevenirea i limitarea urmrilor dezastrelor naturale, de exemplu: incendii, inundaii, cutremure i explozii 2. evaluarea riscului de contaminare biologic 3. conducerea i coordonarea aciunilor n caz de expunere la accidente i al celor de decontaminare 4. evacuarea de urgen a populaiei i a animalelor din zona afectat 5. tratamentul medical de urgen al rniilor i al persoanelor expuse la infecii 6. supravegherea medical a persoanelor expuse 7. organizarea adecvat a spitalizrii persoanelor expuse 8. msurile de investigaie epidemiologic 9. continuarea operaiunilor dup incident n alctuirea acestui plan trebuie incluse urmtoarele obiective: 1. identicarea organismelor cu risc crescut 2. localizarea ariilor de risc maxim, de exemplu: laboratoare, spaiile de depozitare, biobazele 3. identicarea personalului i a populaiei la risc 4. nominalizarea personalului cu responsabiliti i a atribuiilor acestuia, de ex: persoana responsabil de biosiguran, personalul de securitate, autoritatea local de sntate, medici, microbiologi, veterinari, epidemiologi i serviciile de pompieri i poliie 5. listele cu unitile medicale ce pot asigura tratamentul i izolarea persoanelor expuse sau infectate 6. transportul persoanelor expuse sau infectate 7. listele cu sursele de seruri imune, vaccinuri, medicamente, echipamente speciale i materiale consumabile 8. aprovizonarea cu echipament de urgen, de ex.: mbrcminte de protecie, dezinfectante, truse personale pentru tratarea contaminrilor cu substante chimice i biologice, echipament i materiale pentru decontaminare. 13.2. Msuri de urgen pentru laboratoarele de microbiologie Rni prin nepare, tiere i zgriere Individul afectat trebuie s scoat mbrcmintea de protecie, s se spele pe mini i pe prile afectate, s aplice dezinfectantul corespunztor i s solicite asisten medical dac este nevoie. Cauza rnii i microorganismele implicate trebuie raportate i se vor pstra consemnri medicale complete i conforme cu cele ntmplate. Ingestia accidental de produse potenial periculoase 71
mbrcmintea de protecie trebuie s e nlturat i trebuie solicitat asisten medical. Identicarea produsului ingerat i circumstanele n care s-a petrecut incidentul trebuie raportate. Se vor pstra consemnri medicale complete i conforme cu cele ntmplate. Eliberarea de aerosoli potenial periculoi (n exteriorul unei HSB) Toate persoanele trebuie imediat evacuate din aria contaminat i orice persoan expus trebuie supus unui control medical. eful laboratorului i persoana rspunztoare de biosiguran trebuie informai imediat. Nimeni nu trebuie s intre n camer pentru o perioad de timp corespunztoare (ex. 1 or), pentru a permite evacuarea aerosolilor i depunerea particulelor mai grele. Dac laboratorul nu are sistem central de evacuare a aerului, intrarea n laborator trebuie amnat (ex. pentru 24 h). Trebuie aate semnalizri care s indice c intrarea este interzis. Dup timpul necesar trebuie efectuat decontaminarea, care va supervizat de responsabilul cu biosigurana. Pentru acest scop trebuie purtat mbrcminte de protecie i dispozitiv pentru protecie respiratorie. Recipiente sparte si substane infecioase vrsate Recipientele contaminate cu substane infecioase care s-au spart i substanele infecioase rspndite trebuie acoperite cu crpe sau prosoape de hrtie. Dezinfectantul se toarn peste acestea i se las att ct este necesar. Crpele sau prosoapele de hrtie precum i obiectele sparte pot apoi ndeprtate; fragmentele de sticl trebuie apucate i ndeprtate cu pense. Suprafaa contaminat trebuie apoi tears cu dezinfectant. Dac a fost utilizat un fra pentru ndeprtarea obiectelor sparte, acesta trebuie autoclavat sau imersat ntr-un dezinfectant corespunztor. Crpele, prosoapele de hrtie i tampoanele utilizate pentru curare trebuie aruncate n containerul pentru deeuri contaminate. Pentru toate aceste proceduri trebuie folosite mnui de protecie. Dac formularele i alte materiale tiprite sau scrise au fost contaminate, informaia trebuie copiat n alte formulare iar originalele trebuie aruncate n containerul pentru deeuri contaminate. Spargerea eprubetelor cu material potenial infecios n centrifugi fr cupe sau supori nchii etan Dac n timpul centrifugrii se sparge eprubeta sau se suspecteaz spargerea acesteia, centrifuga se va opri i se va lsa n repaus, nchis (ex. pentru 30 minute) pentru a permite depunerea. Dac se observ spargerea dup terminarea centrifugrii, capacul trebuie nchis imediat la loc i lsat astfel (ex. pentru 30 minute). n ambele cazuri trebuie informat persoana responsabil cu biosigurana. Pentru operaiunile ulterioare trebuie purtate mnui din cauciuc gros, acoperite dac este necesar cu mnui de unic folosin. Pentru a ndeprta cioburile de sticl se utilizeaz pense sau pense cu tampon de vat. Toate eprubetele sparte, cioburile de sticl, cupele, suporii pentru cupe i rotorul centrifugii trebuie introduse ntr-un dezinfectant necoroziv cunoscut a activ mpotriva microorganismului implicat (vezi Capitolul 14). Eprubetele cu dop nesparte se pun n dezinfectant ntr-un vas separat. Cuva centrifugii trebuie curat cu acelai tip de dezinfectant, utilizat n diluia necesar, apoi tears din nou, splat cu ap i uscat. Toate materialele care au fost folosite pentru curare trebuie tratate ca deeuri infecioase. Spargerea eprubetelor n cupele nchise etan Toate cupele de centrifug care se nchid etan trebuie umplute i golite ntr-o HSB. Dac se suspecteaz o spargere n interiorul suportului pentru cupe nchis etans, capacul acesteia trebuie deurubat puin, iar cupa trebuie autoclavat. Alternativ, se poate face o dezinfecie chimic a cupei i a suportului. Incendiile i dezastrele naturale 72
13. PLANURI PENTRU INTERVENII N CAZ DE ACCIDENTE I MSURI DE URGEN
Pompierii i alte instituii trebuie implicate n elaborarea planurilor de intervenie n caz de urgen. Acetia trebuie informai dinainte care ncperi conin materiale potenial infecioase. Este recomandabil ca aceste servicii s viziteze laboratorul pentru a cunoate planul i interiorul acestuia. Dup un dezastru natural, serviciile de urgen local sau naional trebuie prevenite asupra pericolelor poteniale din cldirile laboratorului i/sau din mprejurimile acestora. Personalul acestor servicii poate intra n laborator numai nsoit de un angajat instruit al laboratorului. Materialele infecioase trebuie colectate n cutii impermeabile pentru lichide sau n saci groi de unic folosin. Recuperarea sau eliminarea trebuie decise de personalul responsabil cu biosigurana, pe baza informaiilor de la locul accidentului. Serviciile de urgen: persoanele de contact Lng telefoanele din instituie trebuie aate numerele de telefon i adresele urmtoare: 1. Laboratorul sau instituia (adresa i locaia s-ar putea s nu e cunoscut n detaliu de ctre cel care sun sau serviciul apelat) 2. Directorul instituiei 3. eful laboratorului 4. Responsabilul cu biosigurana 5. Pompierii 6. Spitalul sau serviciul de ambulan sau personalul medical (numele clinicii, departamentele, i/sau personalul medical dac este posibil) 7. Poliia 8. Responsabilul pentru probleme medicale al instituiei (laboratorului) 9. Tehnicianul ef 10. Serviciile de ap, gaz i electricitate Echipament de urgen Pentru cazurile de urgen trebuie s existe la ndemn urmtorul echipament de protecie: 1. Trusa de prim ajutor care s includ antidoturi universale i speciale 2. Extinctoare, pturi ignifuge n funcie de circumstanele locale, se recomand i urmtorul echipament de urgen care poate adaptat n funcie de particularitile locale: 1. mbrcminte complet pentru protecie (salopet, mnui, echipament de protecie a capului (glugi), acestea ind utilizate n cazul incidentelor cu microorganisme din grupurile de risc 3 i 4) 2. masc respiratorie cu ltre specice chimice i pentru particule 3. aparat de dezinfecie a camerei, de exemplu: spray i vaporizator cu formaldehid 4. targ 5. unelte, de ex.: ciocan, topor, chei mecanice, urubelni, scar, frnghie 6. echipamente i ae/pancarte pentru delimitarea zonei de pericol. Pentru alte informaii vezi referinele 12 i 28.
73
74
14. DEZINFECIA I STERILIZAREA
14. Dezinfecia i sterilizarea
Cunotinele de baz privind dezinfecia i sterilizarea sunt extrem de importante pentru sigurana biologic n laborator. Din moment ce obiectele puternic contaminate nu pot dezinfectate ecient i nici sterilizate cu uurin, este la fel de important i nelegerea principiilor precurrii, operaie anterioar dezinfeciei. Din acest punct de vedere, capitolul de fa este dedicat principiilor generale care se aplic tuturor claselor de microorganisme patogene, cu excepia notabil a prionilor. Cerinele specice pentru decontaminare vor depinde de tipul activitii i de tipul de agent(i) infecios(i) cu care se lucreaz. Prin urmare, este necesar s e folosite informaiile generale prezentate aici, pentru a elabora att proceduri standard ct i msuri specice adaptate particularitilor de periculozitate din ecare laborator. Timpii de contact pentru dezinfectante sunt specici pentru ecare substan, sunt precizai n prospectele produselor i vor utilizai conform indicaiilor productorilor. 14.1. Deniii n procesele de decontaminare i sterilizare n condiii de siguran biologic sunt utilizai numeroi termeni. Dintre acetia enumerm pe cei mai frecvent utilizai: Antimicrobian - un agent care omoar microorganismele sau le suprim creterea i multiplicarea. Antiseptic o substan care inhib creterea i dezvoltarea microorganismelor fr s le omoare neaprat. Antisepticele se aplic uzual pe suprafaa corpului. Biocid un termen general care se aplic oricrui agent care ucide organismele. Germicid chimic o substan chimic sau un amestec de substane chimice utilizat pentru omorrea microorganismelor. Decontaminare orice proces utilizat pentru ndeprtarea i/sau omorrea microorganismelor. Acelai termen se aplic i pentru ndeprtarea sau neutralizarea substanelor chimice periculoase i a materialelor radioactive. Dezinfectant o substan chimic sau un amestec de substane chimice utilizate pentru omorrea microorganismelor, dar nu neaprat i a sporilor acestora. Dezinfectantele sunt de obicei aplicate pe suprafee sau obiecte inerte. Dezinfecie metodele zice sau chimice utilizate pentru omorrea microorganismelor, dar nu neaprat i a sporilor acestora. Microbicid o substan chimic sau un amestec de substane chimice care omoar microorganismele. Acest termen se utilizeaz adesea n loc de biocid, germicid, sau antimicrobian. Sporocid - o substan chimic sau un amestec de substane chimice care omoar microorganismele i sporii. Sterilizare proces care omoar i/sau ndeprteaz toate clasele de microorganisme i sporii. 14.2. Precurarea i curarea materialelor de laborator n termeni practici, curarea este ndeprtarea murdriei, materiilor organice si a coloranilor. Curarea include perierea, aspirarea sau curarea de praf uscat, splarea sau tergerea umed cu ap i spun sau detergent. 75
Acolo unde riscul de contaminare cu microorganisme patogene este crescut i este necesar decontaminarea, precurarea este o manevr de rutin. Aceasta este necesar deoarece petele i murdrirea cu substane organice pot forma un scut de protecie pentru microorganisme i astfel interfer cu aciunea distrugtoare a decontaminanilor (antiseptice, germicide chimice i dezinfectani). n aceste cazuri, precurarea este esenial pentru a asigura o dezinfecie sau sterilizare corespunztoare. Se tie c multe produse germicide sunt eciente numai asupra materialelor precurate. Precurarea trebuie efectuat cu precauii deosebite, pentru a evita expunerea la ageni patogeni. Dup precurare, pentru curarea i dezinfecia propriu-zis trebuie s e aplicate substane chimice cu aciune germicid. Pentru precurare i dezinfecie este important s se utilizeze substane germicide chimice compatibile ntre ele. Adeseori se folosesc n aceste scopuri aceleai substane. 14.3. Germicidele chimice Multe tipuri de substane chimice pot utilizate ca dezinfectante i/sau antiseptice. Numrul produselor comercializate este n continu cretere. Compoziiile acestora trebuie selectate cu grij n funcie de nevoile specice. Activitatea germicid a multor substane chimice este rapid i ecient la temperaturi nalte. n acelai timp ns, temperaturile nalte pot accelera evaporarea i degradarea substanelor folosite. Multe germicide pot duntoare oamenilor, animalelor i mediului nconjurtor. De aceea trebuie alese, manipulate, depozitate i evacuate cu foarte mult grij, respectndu-se recomandrile productorului. Pentru sigurana personalului se impune utilizarea de mnui, halate i ochelari de protecie, atunci cnd se prepar soluiile diluate ale acestor germicide. De regul, germicidele chimice nu sunt recomandate pentru curarea de rutin a podelelor, pereilor, echipamentelor i mobilierului. Ele pot totui utilizate n cazuri excepionale, cum ar focarele de boli infecioase. Utilizarea corespunztoare a germicidelor chimice contribuie la sigurana locului de munc, prin reducerea riscului de expunere a personalului i a mediului la agenii infecioi. Pe ct posibil, numrul germicidelor chimice utilizate va limitat din raiuni economice, de simplicare a aprovizionrii i inventarului i pentru limitarea polurii mediului. Clasele cele mai utilizate de germicide chimice sunt descrise n cele ce urmeaz, cu prezentarea informaiilor generale n ceea ce privete utilizarea i sigurana manipulrii. Concentraiile germicide sunt redate n termeni de greutate pe volum (g/v), cu unele excepii menionate la locul potrivit. Tabelul 12 rezum diluiile de lucru recomandate pentru compuii care degaj clor. Tabel 12. Diluiile recomandate ale produselor pe baz de clor Condiii curatea) Concentraie de clor necesar Soluie de hipoclorit de Na (5% Cl) Hipoclorit de Ca (70% Cl) Diclor-izocianurat de Na pudr (60% Cl) Diclor-izocianurat de Na tablete (1,5 g Cl/tablet) Cloramina (25% Cl) c)
a b
Condiii murdrieb) 0,5% (5g/l) 100 ml/l 7,0 g/l 8,5 g/l 4 tablete/litru 20 g/l
0,1% (1g/l) 20 ml/l 1,4 g/l 1,7 g/l o tablet /litru 20 g/l
) Dup precurare (ndeprtarea grosului materialului organic (ex. snge) ) Se toarn peste materialul organic (ex. snge nainte de ndeprtarea acestuia) c ) Vezi textul 76
Clorul (hipoclorit de Na) Clorul este un oxidant puternic i rapid, cu spectru larg de utilizare. Este comercializat n mod normal, ca nlbitor: o soluie de hipoclorit de Na (NaOCl), care poate diluat cu ap pentru a obine soluii de diferite concentraii. Soluia clorinat, n mod special sub forma de nlbitor, este foarte alcalin i poate corosiv pentru metal. Aciunea sa este redus considerabil de unele substane organice (proteine). Pstrarea soluiilor stoc sau de lucru se va face n containere nchise, deoarece cnd acestea sunt deschise, mai ales la temperaturi crescute elibereaz Clorul, reducndu-se potenialul lor germicid. Frecvena cu care aceste soluii de nlbire trebuie rennoite, depinde de concentraia lor iniial, de mrimea i tipul recipientelor n care sunt inute (de ex. cu sau fr capac etan), frecvena i condiiile utilizrii, de condiiile de mediu. Ca regul general se recomand ca soluiile de hipoclorit utilizate pentru materiale murdrite cu cantiti importante de substane organice s e schimbate la ecare 24 de ore cu altele proaspete, n timp ce soluiile folosite mai rar pot schimbate mai rar (la cel mult o sptmn). Un dezinfectant de uz general pentru toate scopurile laboratorului trebuie s aib o concentraie de 1 g/l clor disponibil. O soluie mai puternic, coninnd 5 g/l clor disponibil este recomandat pentru decontaminarea suprafeelor contaminate, n prezena de materii organice. Soluia de hipoclorit de Na, ca nlbitor casnic, conine 50 g/l clor i trebuie diluat 1:50 sau 1:10 pentru a obine concentraii nale de 1 g/l i, respectiv, de 5 g/l, respectiv. Soluiile industriale de nlbitor au o concentraie de hipoclorit de Na apropiat de 120 g/l i trebuie diluate corespunztor pentru a se obine concentraiile indicate mai sus. Granulele sau tabletele de hipoclorit de Ca (Ca(ClO)2) conin, de obicei, peste 70% Cl disponibil. Soluiile preparate din tablete sau granule coninnd 1,4 g/l i 7,0 g/l, trebuie s aib concentraii de Clor de 1 g/l i respectiv 5 g/l. nlbitorul nu este recomandat ca antiseptic, dar poate utilizat pe scar larg ca dezinfectant de uz general i pentru obiectele nemetalice. n condiii de urgen, nlbitorul poate utilizat pentru dezinfectarea apei potabile, ntr-o concentraie nal de Cl disponibil de 1-2 mg/l. Clorul gazos este foarte toxic. Soluiile clorinate trebuie depozitate i utilizate numai n camere bine aerisite. De asemenea, ele nu trebuie amestecate cu acizi, pentru c elibereaz foarte repede clorul gazos. Multe derivate de clor pot vtmtoare pentru om i mediul nconjurtor, de aceea trebuie evitat utilizarea abuziv a acestora, n special a hipocloritului de sodiu. Diclorizocianuratul de Na Diclorizocianuratul de Na (NaDCC) sub form de pulbere conine 60 % clor. Soluiile preparate cu NaDCC pulbere la 1,7 g/l i 8,5 g/l conin 1 g/l sau respectiv 5 g/l clor. Tabletele de NaDCC conin echivalentul a 1,5 g Cl / tablet. Prin dizolvarea unei tablete sau a 4 tablete ntr-un litru de ap, se vor obine concentraiile de lucru: 1 g/l sau 5 g/l. NaDCC sub form de pulbere sau tablete este foarte uor i sigur de depozitat. NaDCC poate aplicat ca atare (n stare solid) pe petele de snge sau alte lichide contaminate, lsndu-l cel puin 10 minute nainte de a ndeprtat. Cloraminele Cloraminele sunt disponibile sub form de pulbere coninnd aproximativ 25% clor. Cloraminele elibereaz clor ntr-o proporie mai mic dect hipocloritul. Prin urmare pentru o ecien echivalent cu cea a hipocloritului se impun concentraii iniiale superioare de cloramin. Pe de alt parte ns, soluiile de cloramin nu sunt inactivate de materia organic, n aceeai msur ca soluiile de hipoclorit. Se recomand utilizarea concentraiei de 20 g/l pentru ambele situaii: pe suprafee curate i suprafee murdare. Soluiile de cloramin sunt n principiu inodore. Cu toate acestea, obiectele nmuiate n aceste soluii trebuie cltite insistent, pentru a ndeprtat orice urm de substan adjuvant adugat de productori pulberii de cloramin T (sodium tosylchloramid). 77
Dioxidul de clor Dioxidul de clor (ClO2) este un germicid puternic cu aciune imediat, adesea activ la concentraii mai joase dect cele de hipoclorit recomandate. Dioxidul de clor este instabil sub forma de gaz i se descompune n clor gazos (Cl2) i oxigen gazos (O2), cu degajare de cldur. Totui, dioxidul de clor este solubil n ap i este stabil sub forma de soluie apoas. El se poate obine e prin amestecarea de acid clorhidric i clorit de sodiu (NaClO2), e se poate comanda sub forma de soluie apoas stabilizat, care este activat n momentul folosirii. Dintre biocidele cu efect oxidant, dioxidul de clor este oxidantul cel mai selectiv. Ozonul i clorul sunt mult mai reactive dect dioxidul de clor i se vor consuma mai rapid n cazul deeurilor care conin substante organice n cantitate mare ; el reacioneaz selectiv, n special asupra compuilor sulfurici, aminelor secundare i teriare i asupra altor compui organici intens redui. Ca urmare, folosind dioxid de clor se poate asigura o cantitate mai stabil de clor rezidual cu doze mult mai mici dect dac s-ar folosit clor sau ozon. Dac se recurge la un sistem adecvat de generare a sa, dioxidul de clor poate folosit cu mai mult ecacitate dect clorul sau ozonul n prezena unor ncrcturi organice importante, tocmai datorit selectivitii aciunii sale. Formaldehida Formaldehida (HCHO) este un gaz care distruge microorganismele i sporii acestora, la temperaturi mai mari de 20C. Formaldehida nu este activ fa de prioni, are o vitez de aciune relativ redus i necesit o umiditate relativ mai mare de 70%. Este vndut, e sub form de polimer solid (para-formaldehid), ca fulgi sau tablete, e ca formol - o soluie a gazului n ap de aproximativ 370 g/l (37%), coninnd metanol (100 ml/l) ca stabilizator. Ambele forme sunt nclzite pentru a elibera gazul, care este utilizat pentru decontaminarea i dezinfecia spaiilor nchise, cum ar hotele de biosiguran (HSB) i alte incinte sau ncperi (vezi mai jos seciunea intitulat Decontaminarea spaiului nconjurtor). Formaldehida (5% formol n ap) poate utilizat ca dezinfectant lichid. Formaldehida este suspectat a cancerigen. Are un miros neptor, iar vaporii si pot irita ochii i mucoasele. De aceea, trebuie depozitat i utilizat n nie speciale de protecie chimic (hote chimice) sau ncperi foarte bine aerisite. naintea utilizrii trebuie consultate regulile i normele naionale de folosire precum i precauiile ce in de sigurana chimic. Glutaraldehida Ca i formaldehida, glutaraldehida (OHC(CH2)3CHO) este de asemenea activ mpotriva formelor vegetative ale bacteriilor, sporilor, ciupercilor, precum i a viruilor ce conin lipide, dar i a celor fr lipide. Este necoroziv i reacioneaz mai rapid dect formaldehida. Cu toate acestea, sunt necesare cteva ore pentru a distruge sporii bacterieni. n general, este furnizat ca o soluie cu concentraie de aprox. 20 g/l (2%). Majoritatea acestor produse trebuie activate (alcalinizate) nainte de utilizare, prin adugare de bicarbonat, furnizat mpreun cu produsul. Soluia activat poate utilizat timp de 1-4 sptmni de la preparare, n funcie de activare, condiiile i frecvena utilizrii. Baghetele de scufundat n soluie pentru a aa dac mai este activ, furnizate de unii productori, dau numai indicaii orientative. Soluiile de glutaraldehid trebuie aruncate, dac devin tulburi. Glutaraldehida este toxic i iritant pentru piele i mucoase; de aceea, contactul cu acestea trebuie evitat. Glutaraldehida se utilizeaz numai sub ni (hot) sau n spaii bine aerisite. Nu este recomandat sub form pulverizat sau soluii pentru decontaminarea suprafeelor din mediu. naintea utilizrii trebuie consultate regulile i normativele naionale de folosire precum i precauiile ce in de sigurana chimic. 78
Compuii fenolici Compuii fenolici, un grup larg de ageni au fost printre primele germicide folosite. n ciuda acestui fapt, anumite probleme recente pe care le ridic sigurana utilizrii lor, recomand restrngerea folosirii. Sunt activi mpotriva formelor vegetative ale bacteriilor i asupra virusurilor ce conin lipide. n cazul unei formulri corespunztoare, compuii fenolici prezint activitate i mpotriva mycobacteriilor. Nu sunt activi mpotriva sporilor, iar activitatea asupra virusurilor non-lipidice (nenvelite sau nude) este variabil. Muli produi fenolici sunt utilizai pentru decontaminarea suprafeelor de lucru i a celor ambientale; triclosanul i cloro-xylenolul fac parte din soluiile antiseptice cele mai utilizate. Triclosanul se regsete frecvent n produsele destinate splrii minilor. El este activ cu precdere mpotriva bacteriilor vegetative i nu este duntor pielii i mucoaselor. Cu toate acestea, studiile de laborator au demonstrat c bacteriile care au devenit rezistente la concentraii mici de triclosan, prezint de asemenea rezisten la unele antibiotice. Importana acestei descoperiri pentru utilizarea fenolilor n teren nu a fost nc evaluat. Anumii compusi fenolici sunt sensibili i pot inactivai de srurile din apa dur; de aceea se recomand ca diluarea lor s se fac cu ap distilat sau ap deionizat. Compuii fenolici nu sunt recomandai pentru suprafeele care vin n contact cu mncarea, i nici pentru spaiile destinate copiilor mici (pot absorbii de cauciuc i pot ptrunde n piele). Se vor respecta i reglementrile de siguran chimic. Compuii de amoniu cuaternari Multe tipuri de compui de amoniu cuaternari sunt utilizai sub form de amestecuri i deseori n combinaie cu alte substane germicide, cum ar alcoolul. Acetia prezint o bun activitate mpotriva formelor vegetative ale bacteriilor i a virusurilor lipidice. Anumite tipuri (ex. clorura de benzalconiu) sunt folosite ca antiseptice. Activitatea germicid a anumitor tipuri de compui de amoniu cuaternari este considerabil redus de ctre substanele organice, apa cu duritate mare sau de detergenii anionici. Prin urmare, atunci cnd se intenioneaz utilizarea acestor produi pentru dezinfecie, este necesar alegerea cu grij a produselor pentru precurare. Unele bacterii potenial patogene se pot dezvolta n soluiile de compui cuaternari de amoniu. Datorit biodegradabilitii reduse, aceti compui se pot acumula n mediul nconjurtor. Alcoolii
Etanolul (C2H5OH) i 2-propanolul (izopropil alcoolul, (CH3)2CHOH) au proprieti dezinfectante similare. Ei sunt activi mpotriva formelor vegetative ale bacteriilor, ciupercilor precum i mpotriva virusurilor lipidice (nvelite), dar nu i mpotriva sporilor. Aciunea lor mpotriva virusurilor nude este variabil. Pentru o mai mare ecien, alcoolii trebuie utilizai la o concentraie de aproximativ 70% (v/v) n soluie apoas. Concentraiile mai mici sau mai mari pot s nu aib aceeai aciune germicid. Soluiile alcoolice nu las nici un reziduu pe suprafeele de lucru sau pe obiectele tratate, ceea ce reprezint un avantaj major. Amestecurile cu alte substane chimice sunt de asemenea mai eciente dect alcoolul singur, de exemplu: alcool 70% (v/v) cu 100 g/l formaldehid sau alcool coninnd 2 g/l clor. O soluie alcoolic de 70% (v/v) etanol poate utilizat pentru piele, suprafee de lucru ale meselor de laborator i din hotele de biosiguran, precum i pentru imersarea diferitelor instrumente chirurgicale. Deoarece etanolul usuc pielea, adeseori se amestec cu substane emoliente. Frecarea/ splarea minilor cu alcool este recomandat pentru decontaminarea minilor uor murdare, n situaiile n care splatul minilor nu este posibil. Oricum trebuie avut n minte c etanolul este inecient mpotriva sporilor i poate s nu distrug toate tipurile de virusuri nude. Alcoolii sunt substane volatile, uor inamabile i este bine s nu e utilizate lng cri deschise. Soluiile de lucru trebuie s e depozitate n containere adecvate pentru a mpiedica evaporarea alcoolilor. Acetia pot ntri cauciucul i dizolv anumite tipuri de lipici. Este foarte important inventarierea 79
i depozitarea adecvat a etanolului n laborator pentru a se evita utilizarea acestuia n alte scopuri dect cele de dezinfectare. Sticlele cu soluii pe baz de etanol trebuie s e etichetate vizibil, pentru a evita autoclavarea din greeal. Iodul i substanele iodate Aciunea acestor dezinfectani este similar cu cea a clorului, dei sunt n general mai puin inhibai de substanele organice. Iodul poate pta suprafeele de lucru i esturile i, n general, nu este recomandat ca dezinfectant. Pe de alt parte, soluiile iodate i tincturile sunt antiseptice bune. n general, antisepticele pe baz de iod nu sunt recomandate pentru ustensilele medicale i stomatologice. Iodul nu trebuie utilizat pe obiectele din aluminiu sau cupru. Iodul poate toxic. Produsele organice pe baz de iod trebuie depozitate la 4 - 10C pentru a mpiedica dezvoltarea n ele a unor bacterii potenial nocive. Peroxidul de hidrogen i peracizi Ca i cloramina, peroxidul de hidrogen (H2O2) i peracizii sunt oxidani puternici i germicide puternice, cu spectru larg de aciune. De asemenea, aceste produse sunt mai puin duntoare dect cloramina att pentru oameni ct i pentru mediul nconjurtor. Peroxidul de hidrogen este furnizat e ca soluie gata de utilizare n concentraie 3%, e ca soluie apoas de concentraie 30 %, care trebuie diluat ulterior cu ap distilat, de 5 pn la 10 ori volumul su. Cu toate acestea, soluiile de peroxid de hidrogen cu concentraie 3-6%, sunt relativ lente i cu aciune germicid limitat. Produsele disponibile la ora actual conin stabilizatori speciali ai concentraiei de peroxid de hidrogen, ceea ce duce la accelerarea aciunii germicide i le face mai putin corozive. Peroxidul poate utilizat pentru decontaminarea suprafeelor de lucru, a meselor de laborator i a hotelor de biosiguran. Soluiile n concentraie mai ridicat pot utilizate pentru dezinfectarea instrumentarului medical sau stomatologic sensibil la cldur. Utilizarea peroxidului de hidrogen vaporizat sau a acidului peracetic (CH3COOOH) pentru decontaminarea instrumentelor (dispozitivelor) medicale / chirurgicale termosensibile necesit un echipament adecuat. Peroxidul de hidrogen i peracizii pot avea aciune coroziv asupra metalelor cum ar aluminiul, cuprul, alama i zincul i pot de asemenea decolora esturile, prul, pielea i mucoasele. Articolele tratate cu aceste substane trebuie cltite riguros cu ap, nainte de a veni n contact cu ochii i mucoasele. Aceste substane trebuie depozitate n spaii protejate de cldur i lumin. 14.4. Decontaminarea mediului de lucru (laboratorului) Decontaminarea laboratorului, a mobilierului i a echipamentului acestuia necesit o combinaie de dezinfectani lichizi i gazoi. Suprafeele pot decontaminate prin utilizarea unor soluii de hipoclorit de sodiu coninnd 1g/l clor activ. Soluii mai puternice cu o concentraie de 5g/l sunt recomandate pentru decontaminarea suprafeelor cu risc crescut. Pentru decontaminarea spaiului de lucru soluii coninnd 3% peroxid de hidrogen pot utilizate ca nlocuitori pentru soluiile de nlbitor. ncperile i echipamentele pot decontaminate prin fumigare cu gaz de formaldehid, generat prin nclzirea para-formaldehidei sau prin erberea unei soluii de formol. Procedeul este foarte periculos i necesit personal special instruit. n aceste situaii ferestrele i uile laboratorului trebuie sigilate mai nti cu band adeziv sau cu produse similare, nainte de eliberarea gazului. Fumigarea trebuie s e efectuat la o temperatur ambiental de minim 21C i la o umiditate relativ de 70% (vezi seciunea privind decontaminarea hotelor de biosiguran, mai jos). Dup fumigare incinta trebuie s e foarte bine aerisit i abia apoi va permis accesul personalului. Persoanele care trebuie totui s ptrund n aceste spaiii, o pot face numai dac poart aparate de protecie respiratorie adecvate. Bicarbonatul de amoniu, sub form gazoas, poate utilizat pentru neutralizarea formaldehidei. 80
Este ecace i fumigarea spaiilor foarte mici cu vapori de peroxid de hidrogen, dar pentru aceast metod trebuie s se utilizeze un echipament adecvat. 14.5. Decontaminarea hotelor de biosiguran Pentru decontaminarea hotelor de biosiguran de clas 1 i clas 2 exist echipament special, portabil, pentru generarea, circularea i neutralizarea formaldehidei gazoase. n lipsa acestor echipamente specializate, se pot folosi 2 tigi plasate pe 2 plite (reouri) electrice aezate n hot, care conin una para-formaldehid (sucient pentru a obine o concentraie nal de 0,8 % para-formaldehid n aerul din hot), i cealalt bicarbonat de amoniu (cu 10% mai mult dect para-formaldehida). Plitele sunt conectate la curent electric n afara hotei, astfel nct conectarea i deconectarea plitelor s se fac din exterior. Dac umiditatea relativ se situeaz sub 70%, n hot trebuie s e amplasat i un vas deschis cu ap erbinte. Panoul frontal se etaneizeaz cu band adeziv solid (de ex. cea folosit pentru conducte). Se lipete o folie groas de plastic peste deschiderea hotei, xnd-o etan de jur mprejur inclusiv n jurul relor electrice care ptrund n hot spre cele dou plite - ; n acelai mod se etaneizeaz i racordul hotei la gura de exhaustare, evitndu-se astfel orice scpare a formaldehidei gazoase n atmosfera laboratorului. Se deschide ntreruptorul pentru formaldehid, care este apoi nchis dup ce s-a evaporat paraformaldehida. Incinta va rmne nchis cel puin 6 ore. Se pornete apoi a doua plit pentru evaporarea bicarbonatului de amoniu. Dup aceea, se deconecteaz a doua plit i se pornete ventilatorul hotei de dou ori cte dou secunde, permind astfel circulaia gazului degajat de bicarbonatul de amoniu n ntreaga hot. Ulterior, dup cel puin 30 min, etanrile de la panoul frontal i conducta de exhaustare pot ndeprtate, iar hota poate din nou folosit, dup o curare prealabil. 14.6. Splarea minilor /decontaminarea minilor Atunci cnd este posibil, trebuie purtate mnui adecvate n timpul manipulrii materialelor care prezint risc biologic. Cu toate acestea, purtarea mnuilor nu nlocuiete necesitatea splrii pe mini a personalului din laborator. Minile trebuie splate dup manipularea materialelor sau animalelor cu risc biologic i nainte de ieirea din laborator. n multe situaii, splarea insistent a minilor cu spun obinuit i cu ap este sucient pentru a le decontamina, dar se recomand, totui, utilizarea spunurilor germicide pentru situaii cu risc biologic crescut. Minile trebuie spunite foarte bine, iar splarea se face printr-o frecare riguroas, care trebuie s dureze minim 10 secunde, urmat de cltire din abunden cu ap curat i apoi uscate cu erveele de hrtie sau un prosop curat (se pot folosi usctoarele de mini cu aer cald cnd exist la ndemn). Se recomand instalarea n acest scop de robinete acionate cu cotul sau cu piciorul. Unde acestea nu exist, se recomand utilizarea unui prosop de hrtie sau textile pentru nchiderea robinetului, pentru a evita contaminarea minii proaspt splate. Aa cum s-a menionat mai sus, atunci cnd nu este posibil splarea adecvat a minilor, se poate recurge la frecarea lor cu soluii pe baz de alcool, pentru decontaminare. 14.7. Dezinfecia prin cldur i sterilizarea Cel mai utilizat agent zic pentru decontaminare este cldura. Cldura uscat (care este total non-coroziv) este utilizat pentru multe materiale din laborator, care pot suporta temperaturi de 160C sau mai nalte, timp de 2-4 ore. Arderea sau incinerarea (vezi mai jos) este, de asemenea, o form de cldur uscat. Autoclavarea este preferabil altor metode de sterilizare deoarece genereaz cldur umed, care este mai ecient dect cldura uscat. Fierberea nu garanteaz distrugerea tuturor microorganismelor i a agenilor patogeni, dar poate folosit ca un procedeu minim de dezinfecie, atunci cnd alte metode (ex. dezinfecie chimic, sterilizare prin autoclavare) nu pot efectuate. 81
Obiectele sterilizate trebuie manipulate i depozitate astfel nct s rmn necontaminate pn la urmtoarea utilizare. 14.7.1. Autoclavarea Cea mai ecient i mai sigur metod de sterilizare pentru materialele din laborator este cea cu vapori saturai sub presiune i anume autoclavarea. Pentru majoritatea scopurilor, urmtoarele cicluri vor asigura sterilizarea n autoclavele ncrcate corect (este indicat timpul necesar pentru omorrea bacteriilor dup atingerea a diverse temperaturi): 1. 3 minute la 134C 2. 10 minute la 126C 3. 15 minute la 121C 4. 25 minute la 115C. Exemple de autoclave: Autoclave cu evacuare gravitaional a aerului. Figura 10 prezint schema general de construcie a autoclavelor cu evacuare gravitaional. Vaporii intr n compartimentul de sterilizare sub presiune i deplaseaz aerul, mai greu, printr-o valv, n compartimentul de drenaj, echipat cu ltru HEPA. Autoclave cu pre-vacuum. Aceste instalaii permit ndeprtarea aerului din camer nainte de intrarea vaporilor. Aerul este evacuat printr-o valv echipat cu ltru HEPA. La sfritul ciclului aburii sunt evacuai automat. Aceste autoclave pot funciona la 134C, iar ciclul de sterilizare poate redus la 3 minute. Ele nu pot utilizate pentru sterilizarea lichidelor din cauza vacuumului, dar sunt ideale pentru obiectele poroase. Autoclave cu surs de nclzire proprie. Acestea vor utilizate numai atunci cnd nu sunt disponibile autoclave cu evacuare gravitaional sau alte tipuri de autoclav. Acestea sunt ncrcate vertical i sunt nclzite cu gaz, electricitate sau alte tipuri de combustibil. Vaporii sunt generai prin nclzirea apei de la baza vasului, iar aerul este mpins n sus i eliminat prin intermediul unui oriciu de evacuare. Atunci cnd tot aerul a fost nlturat, se nchide valva oriciului de evacuare i se reduce aportul de cldur. Temperatura i presiunea cresc, apoi, pn cnd valva de siguran acioneaz la un nivel prestabilit anterior. Acesta este momentul din care se consider c ncepe de fapt sterilizarea. La sfritul ciclului, sursa de cldur se nchide i se ateapt scderea temperaturii pn la 80C sau chiar mai jos, nainte de deschiderea capacului.
82
Figura 10. Schema autoclavului gravitaional ncrcarea autoclavului Materialele trebuie mpachetate i aranjate cu grij n compartimentul de sterilizare sau n coul autoclavului pentru a permite ptrunderea i circulaia aburului printre obiecte precum i eliminarea aerului. Ambalajele saci autoclavabili, containere, cutii, etc. - trebuie s permit aburului s ptrund pn la coninutul acestora. Precauii n utilizarea autoclavului Pericolele inerente mnuirii recipientelor sub presiune pot minimizate prin respectarea urmtoarelor reguli: 1. Responsabilitatea pentru efectuarea acestor operaii trebuie atribuit numai unor persoane special instruite. 2. Programul de intreinere periodic trebuie s cuprind msuri preventive cum sunt inspeciile periodice ale compartimentului de sterilizare al autoclavului, ale uilor, valvelor, supapelor, robinetelor i instrumentelor de msur, controlul ind efectuat de persoane special instruite i autorizate n acest scop. 3. Vaporii trebuie s e saturai i s nu conin substane chimice (de exemplu inhibitori ai coroziunii) care ar putea contamina obiectele ce urmeaz a sterilizate. 4. Toate materialele care urmeaz a sterilizate, trebuie s e puse n containere care s permit eliminarea complet a aerului i ptrunderea nestnjenit a cldurii, respectiv a aburului; camera nu trebuie ncrcat la refuz, iar vaporii trebuie s ajung uniform n toate colurile compartimentului de sterilizare. 5. Pentru autoclavele care nu sunt prevzute cu dispozitiv de blocare a uilor, care s previn deschiderea acestora, ct vreme compartimentul de sterilizare este sub presiune robinetul principal de admisie pentru aburi trebuie nchis, iar temperatura trebuie s scad sub 80C, nainte ca ua (capacul) s e deschise. 83
6. Cnd se autoclaveaz lichide, dup ncheierea sterilizrii se va aplica un program de evacuare lent a aburului, pentru a evita erberea lichidelor n momentul deschiderii autoclavului; recipientele vor umplute pn la cel mult 75% din volum. 7. Operatorul trebuie s poarte mnui adecvate i scut transparent de protecie a feei cnd deschide autoclavul, chiar dac temperatura a sczut sub 80C. 8. Pentru monitorizarea performanelor autoclavului, indicatorii biologici sau termocuplurile trebuie amplasate n centrul ncrcturii. Este preferabil monitorizarea permanent cu termocupluri i dispozitive de nregistrare amplasate n zonele cele mai critice ale ncrcturii, pentru a determina ciclurile de operare cele mai potrivite. 9. Daca autoclavul este prevzut cu ltru pe canalul de scurgere al compartimentului de sterilizare al autoclavului, acesta trebuie ndeprtat i curat zilnic. 10. Trebuie vericat ca supapa de siguran s nu e blocat de hrtie sau alte materiale n momentul ncrcrii aparatului. 14.8. Incinerarea Incinerarea este util pentru ndeprtarea cadavrelor de animale, precum i pentru ndeprtarea pieselor anatomice sau altor deeuri de laborator, care au fost sau nu decontaminate anterior (vezi seciunea Evacuarea materialelor contaminate n Capitolul 3). Incinerarea materialelor infecioase poate constitui o alternativ a autoclavrii, numai dac incineratorul este sub controlul laboratorului. Incinerarea corect necesit un control ecient al temperaturii i o camer de ardere secundar. Multe incineratoare, n special cele cu o singur camer de combustie, nu sunt corespunztoare pentru lucrul cu materiale infecioase, cadavre de animale i materiale plastice. Astfel de materiale ar putea s nu e complet distruse, iar ceea ce se elimin prin coul incineratorului ar putea polua atmosfera cu microorganisme, substane chimice toxice i fum. Exist totui mai multe conguraii satisfctoare pentru camerele de combustie; ideal ar ca n camera principal temperaturile s e de minim 800C iar n camera secundar, de minim 1000C. Materialele pregtite pentru incinerare, chiar dac au fost decontaminate anterior, vor transportate n saci, preferabil de plastic. Operatorii incineratorului trebuie s primeasc instruciuni clare n ceea ce privete ncrcarea incineratorului i controlul temperaturii. Nu trebuie uitat c funcionarea corespunztoare a incineratorului depinde foarte mult de amestecul corect de materiale care urmeaz a incinerate. Exist preocupri active referitoare la impactul negativ asupra mediului nconjurtor al incineratoarelor existente sau n curs de montare. n acest sens, se fac eforturi continue pentru a realiza i instala incineratoare mai eciente din punct de vedere energetic i care s respecte integral normele de protecie a mediului nconjurtor. 14.9. ndeprtarea deeurilor ndeprtarea deeurilor medicale i de laborator face obiectul a diverse reglementri regionale, naionale i internaionale. naintea elaborrii i aplicrii unor programe pentru manipularea, transportul i evacuarea deeurilor cu risc biologic potenial este obligatoriu s e consultate versiunile la zi ale reglementrilor amintite. n general, cenua de la incineratoare poate manipulat ca orice alte resturi menajere, ndeprtarea acesteia ind efectuat de rmele de salubritate. Deeurile decontaminate prin autoclavare pot e s e incinerate n afara incintei instituiei, e s e evacuate la locurile special amenajate pentru aruncarea gunoaielor (vezi Capitolul 3). Pentru alte informaii vezi referinele 13 i 29-39. 84
15. NOIUNI INTRODUCTIVE PRIVIND TRANSPORTUL MATERIALELOR INFECIOASE
15. Noiuni introductive privind transportul materialelor infecioase
Transportul materialelor infecioase i potenial infecioase face obiectul unor reglementri stricte naionale i internaionale. Aceste reglementri descriu modalitile corecte de utilizare a materialelor de ambalare precum i alte cerine legate de transport. Personalul laboratorului trebuie s expedieze substanele infecioase n acord cu reglementrile de transport n vigoare, urmrindu-se prin aceasta : 1. reducerea probabilitii de deteriorare a ambalajului i de producere a unor scurgeri i astfel 2. reducerea riscului de apariie a infeciilor 3. mbuntirea ecienei sistemului de expediere a coletelor 15.1. Reglementrile internaionale pentru transport Reglementrile internaionale privind transportul materialelor infecioase (pe orice cale) se bazeaz pe modelul reglementrilor ONU - Regulations on the Transport of Dangerous Goods (40), elaborat de Comitetul de Experi ONU pentru Transportul Mrfurilor Periculoase (United Nations Committee of Experts on the Transport of Dangerous Goods (UNCETDG)). Pentru a dobndi putere de lege, reglementrile ONU trebuie s e introduse n reglementrile naionale i internaionale de ctre autoritile competente (de ex. Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goods by Air (41) of the International Civil Aviation Organization (ICAO) pentru transportul aerian i European Agreement concerning the International Carriage of Dangerous Goods by Road (ADR) (42). Asociaia Internaional de Transport Aerian (IATA) public n ecare an Ghidul de transport al substantelor infecioase (Infectious Substances Shipping Guidelines) (43). Ghidul IATA trebuie s respecte Instruciunile tehnice ale ICAO (Technical Instructions) ca standard minim, dar poate impune restricii suplimentare. Ghidul IATA trebuie urmat ori de cte ori transportul este efectuat de membrii IATA . De cnd Reglementrile ONU au devenit un set dinamic de recomandri, care este amendat bianual, cititorul trebuie s consulte i s aplice cele mai recente reglementri naionale i internaionale. OMS furnizeaz sugestii i expertiz grupului de experi ai ONU (UNCETDG). Schimbri majore ale reglementrilor privind transportul legate de transportul substanelor infecioase au fost introduse n ediia a 13-a (2003) a Modelului Reglementrilor ONU. Aceste amendamente pot consultate pe larg n documentele OMS (44). Reglementrile internaionale nu sunt concepute pentru a se substitui celor naionale sau locale. Totui, n situaiile n care nu exist reglementri pe plan naional, se vor respecta cele internaionale. Este important de menionat c, n plus, transportul internaional al substanelor infecioase se supune de asemenea i este subiect al reglementrilor naionale privind importul i exportul. 15.2. Sistemul ambalajului triplu Sistemul ambalajului triplu este utilizat pentru transportul substanelor infecioase sau potenial infecioase (Figura 11). Acest sistem de ambalare const n 3 straturi : container primar, ambalaj secundar i ambalaj extern. Containerul primar, care conine proba, trebuie s e nchis etan, impermeabil pentru lichide i etichetat corespunztor coninutului. El trebuie s e nvelit n sucient material absorbant pentru a absorbi integral lichidele pe care le conine n caz de spargere sau scurgere. 85
Ambalajul secundar etaneizat i impermeabil pentru lichide este folosit pentru a proteja containerul(erele) primar(e). Mai multe containere primare pot introduse ntr-un singur ambalaj secundar. Exist diverse reglementri care stabilesc limite privind volumul i/sau greutatea materialelor infecioase incluse ntr-un colet. Ambalajul extern protejeaz ambalajul secundar de deteriorri zice n timpul transportului. Formularele cu date despre probe, scrisorile i alte tipuri de informaii care identic sau descriu proba, expeditorul i destinatarul, precum i orice alte documente solicitate trebuie s e furnizate n conformitate cu ultimele reglementri n vigoare. Modelul de reglementri (Model Regulations) al Naiunilor Unite descrie 2 tipuri diferite de sisteme cu triplu ambalaj pentru transport. Sistemul obinuit de ambalaj triplu se folosete pentru transportul a diferite materiale infecioase; totui microrganismele cu risc crescut trebuie transportate conform unor reglementri mai stricte. Pentru mai multe detalii despre utilizarea diferitelor ambalaje corespunztoare materialelor transportate, se recomand consultarea reglementrilor naionale i internaionale pentru prevederile aplicabile. 15.3. Procedura de curare/tratare n cazul vrsrii materialului infecios n cazul vrsrii de material infecios sau potenial infecios trebuie aplicat urmtoarea procedur : 1. Se vor purta mnui, mbrcminte de protecie, inclusiv ochelari i scut transparent pentru protecia feii, dac este cazul. 2. Se va acoperi materialul vrsat cu o crp sau cu prosoape de hrtie pentru a-l reine. 3. Se va turna dezinfectantul corespunztor peste materialul absorbant folosit i peste zona din imediata vecintate (n general, soluie de cloramin 5% ; pentru vrsri n timpul transportului cu avionul trebuie utilizate dezinfectante pe baz de compui cuaternari de amoniu). 4. Se va aplica dezinfectantul concentric i centripet, dinspre marginea zonei spre interior. 5. Dup timpul de aciune corespunztor (ex. 30 minute), se ndeprteaz materialele absorbante. Dac exist cioburi de sticl sau alte obiecte ascuite se va utiliza un fra sau o bucat de carton rigid pentru strngerea acestora i punerea lor ntr-un container pentru obiecte ascuite. 6. Se va cura i dezinfecta aria contaminat (dac este necesar, se vor repeta etapele 2 - 5). 7. Se vor evacua materialele contaminate ntr-un container pentru deeuri impermeabil, rezistent la nepare. 8. Dup dezinfectare, se va informa autoritatea competent c locul a fost decontaminat.
86
15. NOIUNI INTRODUCTIVE PRIVIND TRANSPORTUL MATERIALELOR INFECIOASE
Ambalarea i etichetarea substanelor infecioase din categoria A
Ambalarea i etichetarea substanelor infecioase din categoria B
Figura 11. Exemple de sisteme de triplu ambalaj (prin amabilitatea, IATA, Montreal Canada) 87
88
16. BIOSIGURANA I TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT
16. Biosigurana i tehnologia ADN recombinant
Tehnologia ADN recombinant realizeaz combinarea de material genetic provenit din diferite surse, contribuind astfel la crearea unor organisme modicate genetic (OMG) care s-ar putea s nu existat pn acum n natur. La nceput, cercettorii din domeniul biologiei moleculare au fost ngrijorai de faptul c aceste organisme ar putea avea proprieti imprevizibile i nedorite, constituind un risc biologic dac ar ajunge n afara laboratorului. Aceast ngrijorare a constituit obiectul dezbaterilor de la conferina tiinic desfurat n 1975 la Asilomar (SUA). Aici s-au dezbtut probleme de siguran i a fost propus primul ghid privitor la tehnologia ADN recombinant. Experiena obinut prin cercetarea din urmtorii 25 de ani a demonstrat c ingineria genetic poate condus ntr-o manier nepericuloas atunci cnd se evalueaz corect riscul i se aplic msuri de siguran adecvate. Prin intermediul tehnologiei ADN recombinant sau ingineriei genetice s-au clonat, iniial, segmente de ADN n gazde bacteriene, pentru a supraexprima produii genici specici necesari pentru diverse studii. Moleculele de ADN recombinant au fost, de asemenea, folosite pentru a crea OMG, precum animale transgenice i knock-out i plante transgenice. Tehnologia ADN recombinant are deja un impact enorm asupra biologiei i a medicinei i probabil va cpta o inuen i mai mare odat cu cunoaterea secvenei nucleotidice a ntregului genom uman. Folosind tehnologia ADN recombinant vor putea studiate zeci de mii de gene cu funcii nc necunoscute. Terapia genic ar putea deveni o metod curent pentru tratarea anumitor boli i folosind tehnici de inginerie genetic ar putea construii noi vectori de transfer genic. De asemenea, plantele transgenice produse prin tehnologia ADN recombinant ar putea ajunge s joace un rol din ce n ce mai important n agricultura modern. Experienele implicnd construirea sau folosirea OMG nu trebuie fcute dect dup evaluarea bioriscului. Proprietile patogene sau alte riscuri poteniale asociate acestor organisme pot reprezenta proprieti noi, insucient caracterizate. Trebuie evaluate proprietile organismului donor, natura secvenelor de ADN care vor transferate, proprietile organismului receptor i ale mediului nconjurtor. Aceti factori vor trebui s ajute la stabilirea nivelului de biosiguran necesar pentru manipularea cu un minimum de riscuri a OMG rezultate i la identicarea sistemelor de securizare biologic i zic la care va trebui s se apeleze. 16.1. Criterii de biosiguran pentru sistemele biologice de expresie Sistemele biologice de expresie sunt alctuite din vectori i celule gazd. Pentru a prezenta ecien i siguran n folosire ele trebuie s satisfac o serie de criterii. Un exemplu de asemenea sistem biologic de expresie este plasmidul pUC18. Frecvent utilizat ca vector de clonare n combinaie cu celule de Escherichia coli K12, plasmidul pUC18 a fost secvenializat n ntregime. Toate genele necesare pentru exprimarea n alte bacterii au fost ndeprtate din plasmidul su precursor, pBR322. E. coli K12 este o tulpin nepatogen care nu poate coloniza intestinul oamenilor sntoi sau al animalelor. Experienele de inginerie genetic de rutin pot desfurate n siguran pe sistemul E. coli K12/pUC18 n condiiile unui nivel de biosiguran 1, cu condiia ca produii de expresie ai lanului de ADN strin inserat s nu impun niveluri de biosiguran mai nalte.
89
16.2. Criterii de biosiguran pentru vectorii de expresie Niveluri mai nalte de biosiguran pot necesare cnd : 1. expresia secvenelor de ADN derivate din organisme patogene poate spori virulena OMG, 2. insucienta caracterizare a anumitor secvene de ADN inserate, ca de exemplu cu ocazia preparrii unor biblioteci de ADN genomic pornind de la microorganisme patogene, 3. produii genici sunt potenial activi farmacologic, 4. produii genici codic toxine. 16.3. Vectori virali pentru transfer genic Vectorii virali, cum sunt vectorii de adenovirus, sunt folosii pentru transferul genelor n alte celule. Acestor vectori le lipsesc anumite gene de replicare viral, ind capabili de propagare numai n liniile celulare care compenseaz defectul respectiv. Stocurile de asemenea vectori pot contaminate cu virusuri capabile de replicare, aprute prin evenimente rare de recombinare spontan la nivelul liniilor celulare n care au fost propagai sau printr-o insucient puricare. Aceti vectori trebuie manipulai respectnd acelai nivel de biosiguran ca i acela aplicat n cazul adenovirusurilor parentale din care deriv. 16.4. Animale transgenice i knock-out Animalele care poart material genetic strin (animale transgenice) trebuie manipulate n condiii de securizare corespunztoare caracteristicilor produilor genelor strine n cauz. Animalele cu deleii intite pentru anumite gene (animale knock-out) nu comport n general riscuri biologice particulare. Printre exemplele de animale transgenice se includ i animalele care exprim receptori pentru virusuri care n mod normal sunt incapabile s infecteze speciile respective. Dac aceste animale scap din laborator sau din biobaz i transmit transgena populaiei de animale slbatice, se poate genera teoretic un rezervor animal pentru virusul n cauz. Aceast posibilitate a fost discutat n cazul poliovirusului i este relevant n special n contextul eradicrii poliomielitei. oareci transgenici exprimnd receptorul pentru poliovirusul uman, obinui n diferite laboratoare, devin sensibili la infecia cu poliovirus pe diverse ci de inoculare a acestuia, iar boala declanat este clinic i histopatologic similar cu poliomielita uman. Totui, modelul oarece difer de om prin aceea c poliovirusul administrat oral e c nu se replic deloc la nivelul tractului digestiv, e se replic inecient. Astfel, este puin probabil ca asemenea oareci transgenici evadai din laborator n populaia slbatic s poat conduce la apariia unui nou rezervor natural de poliovirus. Acest exemplu subliniaz faptul c pentru ecare linie nou de animal transgenic trebuie studiate n detaliu cile prin care poate infectat animalul respectiv, mrimea inocului necesar producerii infeciei i amploarea eliminrii de virus de ctre animalele infectate. n plus, trebuie luate toate msurile pentru a asigura izolarea acestor oareci transgenici. 16.5. Plante transgenice Plantele transgenice care exprim gene ce confer toleran la ierbicide sau rezisten la insecte duntoare sunt un subiect curent de controvers n multe pri ale lumii. Discuiile se refer la inocuitatea alimentelor derivate din aceste plante i la consecinele ecologice pe termen lung ale cultivrii lor. Plantele transgenice exprimnd gene de origine animal sau uman sunt folosite pentru a elabora produi cu aplicaie medical i nutriional. Se impune o evaluare atent a riscului pentru stabilirea nivelului corect de biosiguran n cazul producerii acestor plante. 16.5. Evaluarea riscului pentru OMG Evaluarea riscului pentru lucrul cu OMG trebuie s in cont de caracteristicile organismelor donoare i receptoare, gazd. Exemple privind aceste caracteristici sunt prezentate n continuare. 90
16. BIOSIGURANA I TEHNOLOGIA ADN RECOMBINANT
Riscuri rezultate direct din gena inserat (organismul donor) Analiza este necesar n situaii n care produsul genei inserate are proprieti biologice i farmacologice cunoscute, care pot duntoare, cum ar de exemplu: 1. toxine 2. citokine 3. hormoni 4. factori de reglare a expresiei genice 5. factori de virulen sau stimulatori 6. secvene din oncogene 7. rezistena la antibiotice 8. alergeni. n analizarea acestor cazuri trebuie s se includ i o evaluare a pragului de exprimare necesar pentru manifestarea activitii biologice sau farmacologice. 1. 2. 3. 4. 5. Riscuri asociate cu receptorul (gazda) Sensibilitatea gazdei Patogenitatea tulpinii gazd incluznd virulena, infectivitatea i producia de toxine Modicarea spectrului de gazde Statusul imun al receptorului Consecinele expunerii. Riscuri generate de modicarea unor caractere de patogenitate existente Multe modicri nu implic gene ai cror produi au o nocivitate intrinsec, dar pot aprea efecte adverse ca rezultat al modicrii unor caractere existente, patogene sau nepatogene. Modicarea genelor normale poate inuena patogenitatea. n ncercarea de a identica aceste riscuri poteniale trebuie rspuns la urmtoarele ntrebri (lista nu este exhaustiv) : s-a produs o cretere a infectivitii sau patogenitii ? orice mutaie duntoare pentru receptor poate anihilat ca urmare a inseriei unei gene strine ? gena strin codic un determinant de patogenicitate provenit de la alt organism ? dac ADN strin include un determinant de patogenitate, se poate anticipa c aceast gen va contribui la patogenitatea OMG ? exist vreun tratament ? va afectat sensibilitatea OMG la antibiotice sau la alte forme de tratament ca urmare a modicrii genetice ? se poate eradica OMG ?
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
16.6. Alte consideraii Problema utilizrii de animale sau plante ntregi n scopuri experimentale necesit de asemenea o atenie deosebit. Cercettorii trebuie s se supun regulilor, restriciilor i cerinelor lucrului cu OMG aplicate n ara n care se a i de instituiile acesteia. rile pot avea autoriti naionale care stabilesc ghiduri de lucru cu OMG i care pot ajuta cercettorii s-i ncadreze munca n nivelul de biosecuritate corespunztor. n unele cazuri clasicarea poate diferi ntre ri sau rile pot decide s clasice cerinele de biosiguran ntr-un nivel mai sczut sau mai nalt n funcie de apariia unor noi informaii referitoare la un anumit sistem vector/gazd. Evaluarea riscului este un proces dinamic care ine cont de noile performane i de progresele tiinei. Evalurile corecte ale riscurilor vor permite omenirii s se bucure n anii ce vin de roadele tehnologiei ADN recombinant. 91
92
17. SUBSTANE CHIMICE PERICULOASE
17. Substane chimice periculoase
Personalul din laboratoarele de microbiologie nu este expus numai unor microorganisme patogene, ci i unor substane chimice periculoase. De aceea este vital cunoaterea exact a efectelor toxice ale acestor substane chimice, a cilor de expunere, ct i a pericolului care poate asociat cu manipularea i depozitarea acestora (Anexa 5). Fiele ce cuprind precauiile recomandate n mnuirea acestor substane, precum i alte informaii suplimentare care descriu pericolul pe care l implic utilizarea unei anumite substane chimice, disponibile de la productori i/sau de la distribuitori, trebuie s e prezente i uor accesibile n laboratoarele n care aceste substane sunt utilizate, de exemplu prin includerea lor n Ghidul de biosiguran sau n Manualul cu procedurile specice de lucru. 17.1. Deniii i clasicri Substanele chimice periculoase sunt adeseori denite i clasicate n funcie de a reglementar de nsoire pentru transportul bunurilor periculoase sau n funcie de riscurile i gradele de periculozitate pe care acestea le prezint. Ele pot mprite n funcie de gradul de reactivitate, instabilitate, riscul de incendiu, riscul pentru sntate sau n funcie de efectele toxice. 17.2. Ci de expunere Exist mai multe ci de expunere la substane chimice periculoase : 1. Inhalare 2. Contact direct 3. Ingestie 4. nepare 5. Prin leziuni cutanate 17.3. Depozitarea substanelor chimice n laborator se va depozita doar o cantitate minim de chimicale, necesar pentru uzul zilnic. Stocurile de rezerv trebuie pstrate n ncperi/cldiri avnd n mod expres aceast destinaie, dotate cu pardoseal din beton i praguri ctre exterior pentru a reine deversrile accidentale. Substanele inamabile trebuie depozitate separat, n cldiri situate la oarecare distan. Pentru prevenirea aprinderii vaporilor inamabili i explozivi de la scnteile contactelor electrice, ntreruptoarele trebuie plasate n afara ncperii iar corpurile de iluminat vor protejate cu globuri etane. Substanele chimice nu se depoziteaz n ordine alfabetic, pentru c astfel substane chimice incompatibile (vezi lista de mai jos !) pot ajunge n proxima vecintate, iar unele substane chimice periculoase pot plasate pe rafturi nalte. Toate recipientele mari de sticl i toate recipientele coninnd acizi/baze puternice trebuie depozitate la nivelul pardoselii i plasate n tvi (pentru prevenirea mprtierii accidentale). Trebuie asigurate suporturi protectoare pentru transportul recipientelor mari de sticl i dispozitive de sifonare pentru umplerea unor recipiente mai mici din containere. Scrile mobile sunt indispensabile acolo unde exist rafturi nalte. 93
17.4. Reguli generale privind incompatibilitile chimice Substanele gurate mai jos, n coloana din stnga a Tabelului 13, trebuie astfel depozitate i manipulate nct s nu poat veni n contact accidental cu substanele enumerate n dreptul lor n coloana din dreapta. Tabelul 13. Reguli generale pentru incompatibiliti chimice Categoria de substane - Metale alcaline (sodiu, potasiu, cesiu i litiu) - Halogeni - Acid acetic, hidrogen sulfurat, anilin, hidrocarburi, acid sulfuric Substane incompatibile - Dioxid de carbon, hidrocarburi clorurate, ap - Amoniac, acetilen, hidrocarburi - Ageni oxidani (acid cromic, acid azotic, peroxizi, permanganai)
17.5. Efecte toxice ale substanelor chimice Este binecunoscut faptul c unele substane chimice au efecte adverse asupra sntii celor care le manipuleaz sau inhaleaz vaporii acestora. n afara substanelor reputate ca toxicitate i ncadrate ca otrvuri, un numr de substane chimice sunt cunoscute a avea variate efecte toxice. Aparatul respirator, sngele, catul, rinichii i aparatul gastro-intestinal, ca i alte organe i esuturi, pot afectate n diverse grade. Unele substane chimice sunt cunoscute pentru efectele carcinogene sau teratogene. Unii vapori de solveni sunt toxici cnd sunt inhalai. n afar de efectele toxice propriu-zise, expunerea la vaporii toxici poate determina i efecte secundare, ca, de exemplu, lipsa de coordonare, slbiciune i alte simptome similare, care pot duce la producerea de accidente. Expunerea prelungit sau repetat la solveni organici n faz lichid poate duce la afeciuni ale pielii, datorit degresrii acesteia; au mai fost semnalate reacii alergice sau efecte corozive. Pentru informaii detaliate asupra efectelor toxice ale substanelor chimice, se va consulta Anexa 5. 17.6. Substane chimice explozive Azidele, adesea utilizate n compoziia soluiilor antibacteriene, nu trebuie s vin n contact cu plumbul sau cuprul (de ex. n instalaiile sanitare de evacuare). Azida de cupru va exploda violent chiar i la un impact de mic intensitate. Eterii mbtrnii sau uscai sub form de cristale sunt extrem de instabili i potenial explozivi. Acidul percloric, dac se usuc pe lemnrie, ceramic sau esturi va exploda i va arde la impact. Acidul picric i picraii detoneaz la cldur i impact. 17.7. Vrsarea accidental de substane chimice Majoritatea productorilor de reactivi chimici de laborator public diagrame / postere care descriu modalitile de aciune n caz de vrsri accidentale de substane chimice. Pe pia sunt disponibile diagrame i truse de intervenie. Postere/ae adecvate trebuie expuse n locuri vizibile din laborator. De asemenea, vor procurate materiale cum sunt: Truse pentru decontaminare chimic 94
17. SUBSTANE CHIMICE PERICULOASE
mbrcminte de protecie (ex: mnui groase din cauciuc; galoi sau cizme de cauciuc) aparat pentru asisten/protecie respiratorie Lopei i frae Pense pentru culegerea fragmentelor de sticl tergtor de pardoseal (mop), crpe i prosoape de hrtie Glei Sod de rufe (carbonat de sodiu, Na2CO3) sau bicarbonat de sodiu ( NaHCO3), pentru neutralizarea acizilor Nisip Detergent neinamabil
n cazul unei deversri accidentale a unei substane chimice periculoase trebuie luate urmtoarele msuri: Noticarea evenimentului ctre responsabilul cu biosigurana si evacuarea din zon a personalului care nu este necesar. Examinarea i acordarea de ngrijiri medicale persoanelor care ar putut contaminate. Dac lichidul deversat este inamabil, se vor stinge toate focurile deschise, se vor nchide sursele de gaze din ncperea respectiv i din zonele adiacente i se vor opri echipamentele electrice care pot genera scntei. Evitarea inhalrii de vapori din lichidul deversat. Se va conecta ventilaia de aerisire, dac operaiunea este lipsit de pericole. Se va asigura necesarul de materiale i echipamente (vezi mai sus !) pentru a ndeprta substana chimic deversat. n eventualitatea unei deversri chimice masive, ncperea trebuie evacuat i ferestrele vor deschise dac este posibil. Dac materialul deversat este inamabil, trebuie stinse toate focurile deschise din ncperea respectiv i din cele adiacente; vor oprite toate echipamentele electrice care genereaz scntei. 17.8. Gazele comprimate i licheate Informaii privind condiiile de pstrare a gazelor comprimate i licheate sunt prezentate n Tabelul 14.
95
Tabelul 14. Pstrarea gazelor comprimate i licheate Container Cilindrii cu gaze comprimate sau buteliile cu gaze licheatea,b Condiii de pstrare xai n mod solid de perete ( colier / lan) sau prin intermediul unui suport solid, n aa fel nct s nu poat dislocate accidental transportai cu capacele proprii montate i sprijinite pe inele de cauciuc cilindrii de rezerv trebuie depozitai ntr-o alt cldire, la distan de laborator. Acest loc trebuie inut ncuiat i semnalizat ca atare printr-un a. nu trebuie s e plasai n vecintatea surselor de cldur, a focurilor deschise sau lng echipamentele electrice care genereaz scntei i trebuie evitat expunerea lor la lumina solar direct. Cilindrii mici (de unic utilizare) cu gazea,b
a.
nu trebuie incinerai
Valva principal de presiune nalt trebuie s e nchis cnd echipamentul nu este utilizat i cnd n ncpere nu este personal care lucreaz b. Camerele n care sunt folosii sau pstrai cilindri cu gaze inamabile trebuie marcate prin ae de avertizare pe ui.
Pentru informaii suplimentare vezi referinele bibliograce 1 i 49-51, precum i Anexa 5.
96
18. PERICOLE ADIIONALE N LABORATOR
18. Pericole adiionale n laborator
Personalul laboratoarelor se poate confrunta cu pericole generate de diverse forme de energie: foc, electricitate, radiaii sau zgomot. Informaiile de baz despre fiecare sunt prezentate n acest capitol. 18.1. Pericolul de incendiu Strnsa cooperare dintre responsabilul cu biosigurana i responsabilul local cu prevenirea incendiilor este esenial. n afar de pericolele chimice, trebuie luate n considerare i efectele unui incendiu sub raportul unei posibile diseminri de material infecios. n funcie de aceasta se poate stabili dac este mai bine ca focul s e stins sau izolat (limitat). Este de dorit colaborarea cu responsabilii locali pentru prevenirea incendiilor, pentru instruirea personalului de laborator cu privire la prevenirea incendiilor, intervenia imediat n caz de incendiu i utilizarea corect a echipamentului de intervenie mpotriva incendiilor. Avertizrile de incendiu, instruciunile i cile de evacuare trebuie aate la vedere, n ecare ncpere, pe coridoare i ci de acces. Cele mai frecvente cauze de incendiu n laboratoare sunt: 1. Suprancrcarea reelei electrice 2. ntreinerea necorespunztoare a reelei / echipamentelor electrice, de exemplu izolaia necorespunztoare i deteriorat a cablurilor 3. Lungimea excesiv a tubulaturii pentru gaze i a cablurilor i prelungitoarelor electrice aparente 4. Echipamente lsate inutil n funciune 5. Echipamente care nu au fost concepute s funcioneze ntr-un laborator 6. Focul deschis 7. Conductele pentru gaze deteriorate 8. Stocarea / manipularea necorespunztoare a materialelor inamabile sau explozive 9. Pstrarea mpreun a unor chimicale incompatibile 10. Funcionarea unor echipamente generatoare de scntei n atmosfer de substane sau vapori inamabili 11. Ventilaie insucient sau inadecvat. Echipamentul de intervenie mpotriva incendiilor trebuie plasat lng uile ncperilor i n puncte strategice de pe coridoare i ci de acces. Acest echipament va include furtunuri, glei cu ap i nisip i un stingtor de incendiu. Extinctoarele trebuie inspectate regulat i ntreinute corespunztor; trebuie s nu e depit perioada de valabilitate nscris pe extinctor. Utilizrile diferitelor tipuri de stingtoare de incendiu sunt prezentate n Tabelul 15.
97
Tabel 15. Tipuri de stingtoare de incendiu i utilizarea acestora Tip* Ap Dioxid de carbon ( CO2 ) Pulbere uscat Se utilizeaz pentru: Hrtie, lemn, esturi Lichide i gaze inamabile, incendii electrice Lichide i gaze inamabile, metale alcaline, incendii electrice Spum Lichide inamabile Nu se va utiliza pentru: Incendii electrice, lichide inamabile, metale arznde Metale alcaline, hrtie Echipament reutilizabil, instrumente (rezidiile sunt foarte greu de nlturat) Incendii electrice
* Stingtoarele cu ap sunt propulsate de dioxidul de carbon; stingtoarele cu dioxid de carbon i pulbere trebuie manipulate cu grij deoarece fora jetului poate mprtia materiale arznde; ncperile trebuie bine ventilate dup utilizarea stingtoarelor care utilizeaz / genereaz dioxid de carbon.
Pentru informaii suplimentare consultai referina 49. 18.2. Pericole datorate curentului electric ocul electric pune n pericol viaa; defeciunile electrice pot cauza incendii. De aceea este esenial ca toate instalaiile i echipamentele electrice s e inspectate i testate cu regularitate, inclusiv mpmntarea de electricieni calicai. Personalul de laborator nu trebuie s efectueze nici un fel de reparaie a echipamentului electric. Chiar tensiuni de alimentare joase pot uneori periculoase. Trebuie luate ntotdeauna precauiuni pentru a asigura ntre sursa de alimentare i echipament sigurane calibrate corect. ntreruptoarele de circuit i releele de deconectare n caz de absen a mpmntrii trebuie incluse n circuitele electrice ale laboratoarelor. Not. ntreruptoarele de circuit nu protejeaz personalul; ele au scopul de a evita supranclzirea conductorilor i astfel previn incendiile. mpmntarea i releele de deconectare n caz de absen a acesteia au scopul de a proteja personalul de ocurile electrice. Toate echipamentele electrice de laborator trebuie s e prevzute cu mpmntare, preferabil cu techere cu trei borne. Echipamentele care nu prezint mpmntare din construcie trebuie mpmntate separat. Un echipament fr mpmntare poate deveni periculos prin apariia accidental a unui contact electric accidental nedetectat. Toate echipamentele electrice trebuie s e conforme cu standardele i codurile naionale de siguran electric. 18.3. Zgomotul Zgomotul excesiv are efect insidios n timp. Unele tipuri de echipamente de laborator, cum ar anumite tipuri de aparatur cu laser, precum i facilitile pentru creterea i ntreinerea animalelor de laborator pot expune personalul la zgomote excesive. Trebuie monitorizat producerea de zgomote pentru identicarea pericolelor ce ar putea reprezentate de acestea. Acolo unde datele concrete o justic, se pot crea bariere fonice n jurul echipamentelor productoare de zgomot sau ntre zonele zgomotoase i alte zone ale laboratorului. De asemenea, atunci cnd nu se poate reduce nivelul zgomotelor i personalul laboratorului este supus constant unor surse sonice nocive se poate recurge la utilizarea unor protecii pentru urechi i se va instaura un program de monitorizare medical a efectelor zgomotelor asupra celor supui cronic la efectul lor. 98
18.4. Radiaiile ionizante Radioprotecia are ca obiect protejarea oamenilor mpotriva efectelor duntoare ale radiaiilor ionizante, care includ : 1. Efecte somatice, cum sunt simptomele clinice care apar la indivizii expui. Printre efectele somatice se numr cancere induse de radiaii (leucemii i cancere osoase, de plmni i ale pielii), care pot debuta la muli ani de la iradiere, precum i efecte mai puin severe afectri ale pielii, cderea prului, tulburri hematologice sau gastrointestinale, precum i formarea de cataract. 2. Efecte ereditare, cum sunt simptomele observate la descendenii indivizilor expui. Efectele ereditare ale expunerii gonadelor includ alterri cromosomiale i mutaii genice. Iradierea celulelor germinale din gonade cu doze mari de radiaii pot duce de asemenea la moarte celular, ceea ce conduce la infertilitate n cazul ambelor sexe sau la modicri ale ciclului menstrual la femei. Expunerea la radiaii a ftului n curs de dezvoltare, cu deosebire n sptmnile 8-15 de sarcin, poate crete riscurile de malformaii congenitale, de retardare mental sau de cancere induse de radiaii care apar mai trziu n viaa extrauterin. 18.4.1. Principiile activitilor de radioprotecie Pentru a limita efectele nocive ale radiaiilor ionizante, utilizarea de radioizotopi va trebui s aib loc n condiii controlate i va trebui s se conformeze standardelor naionale corespunztoare. Protejarea fa de radiaii va trebui s e condus pe baza urmtoarelor patru principii: 1. Reducerea la minimum a timpului de expunere la radiaii ; 2. Creterea la maximum a distanei pn la sursa de radiaii ; 3. Ecranarea sursei de radiaii cu un scut radioopac; 4. Substituirea utilizrii radionuclizilor cu tehnici non-radiometrice. 18.4.2. Activitile de protecie cuprind urmtoarele : 1. Timpul. Durata de expunere cu ocazia manipulrii materialelor radioactive poate redus prin : Recurgerea la practicarea, n perioada de formare, a unor tehnici non-radiometrice; abia dup stpnirea acestora se vor folosi radionuclizi; Practicarea tehnicilor radiometrice fr grab, n mod ordonat i la momentul oportun; Returnarea n spaiul de depozitare a surselor radioactive, imediat dup lucru; Evacuarea din laborator a rezidiilor radioactive la intervale ct mai frecvente; Rmnerea n aria radioactiv numai timpul strict necesar; Supravegherea ndeaproape a utilizrii timpului i a planicrii corespunztoare a operaiunilor de laborator care presupun manipulri de substane radioactive. Cu ct timpul petrecut n cmpul de radiaii este mai redus, cu att doza de radiaii primit de o persoan este mai redus, dup cum reiese din ecuaia: Doza = doza per unitatea de timp x timpul 2. Distana. Doza per unitatea de timp este funcie de inversul ptratului distanei pn la surs, pentru cele mai multe radiaii i X : Doza per unitatea de timp = constant x 1 / distana2 ; Exemplu : Dublarea distanei pn la surs va duce la o reducere a expunerii la n acelai interval de timp. Se pot utiliza diferite sisteme sau dispozitive pentru creterea distanei de manipulare dintre operator i sursa radioactiv cleti, pense, brae articulate, dispozitive de pipetare, etc. De notat c o reducere mic a distanei va duce la o reducere mare a dozei efectiv primite. 99
3.
Bariera. Ecranarea, adic amplasarea ntre operatori sau alte persoane din laborator i surs a unor scuturi / bariere care absorb sau atenueaz energia radiaiilor va limita expunerea. Alegerea i grosimea materialelor din care sunt confecionate scuturile depind de abilitatea/capacitatea de penetrare (tipul i energia)radiaiilor. Bariere din material acrilic, ln sau metale uoare, n grosime de 1,3-1,5 cm se utilizeaz pentru particulele de energie nalt, n timp ce scuturi de plumb, cu densitate nalt, se utilizeaz pentru oprirea radiaiilor de energie nalt i X . Substituia. Nu se vor utiliza materiale bazate pe radionuclizi, dac sunt disponibile se poate recurge la alte tehnici n acelai scop. Dac substituia nu este posibil, se vor alege radionuclizii cu puterea de penetrare sau energia cea mai sczut.
4.
18.4.3. Proceduri de siguran n timpul lucrului cu radionuclizi n stabilirea regulilor de lucru cu substane radioactive trebuie luate n considerare urmtoarele patru domenii: 1. Aria de lucru cu radionuclizi substanele radioactive se vor utiliza numai n zone special destinate ; nu este permis prezena dect a persoanelor strict necesare; se va utiliza echipament de protecie personal (halate, ochelari de protecie, mnui de unic folosin ); se va monitoriza expunerea la radiaii a personalului ; Laboratoarele n care se manipuleaz radioizotopi vor astfel concepute i amenajate nct s permit restrngerea ariilor de lucru efectiv i s simplice la maximum curarea i decontaminarea. Aria de lucru cu radionuclizi trebuie s e amplasat ntr-o ncpere mic adiacent spaiilor principale ale laboratorului sau ntr-o arie special destinat n interiorul laboratorului dar separat de alte activiti. Semne de avertizare reprezentnd sigla internaional pentru pericolul radioactiv vor aate la intrarea n aria cu radiaii (Figura 12). 2. Masa de lucru Se va lucra n tvi n care a fost aternut hrtie absorbant de unic utilizare ; Se vor limita cantitile de radionuclizi utilizate ; Se vor monta ecrane (scuturi) de radiaii pe mesele de lucru i n ariile de colectare de deeuri radioactive ; Containerele cu deeuri radioactive vor marcate cu sigla de radiaii, precum i cu identitatea radionuclidului, activitatea lui i data testrii ; Se vor utiliza detectoare/contoare de radiaii pentru monitorizarea ariilor de lucru, echipamentelor de protecie personal i a minilor, dup terminarea lucrului. 3. Zona de depozitare a deeurilor radioactive Deeurile radioactive vor evacuate frecvent din aria de lucru ; Pentru transportul deeurilor se vor utiliza containere cu ecranare corespunztoare. 4. nregistrrile i interveniile de urgen. Se vor realiza i pstra consemnri detaliate privind utilizarea i evacuarea materialelor radioactive ; Se vor analiza nregistrrile dozimetrice pentru materialele care depesc normele admise; 100
Se vor alctui planuri de intervenie n caz de urgen i se vor face periodic exerciii de aplicare ; n cazuri de urgen, se va asigura n primul rnd asistena persoanelor rnite; Ariile contaminate se vor cura i decontamina cu mult grij ; Se solicit asistena responsabilului cu biosigurana ; Se vor consemna i arhiva toate raportrile de incidente.
Figura 12. Simbolul internaional de pericol de radiaii
101
102
19. RESPONSABILUL CU BIOSIGURANA I COMITETUL DE BIOSIGURAN
19. Responsabilul cu biosigurana i comitetul de biosiguran
Este esenial ca ecare laborator s aib stabilit o politic atotcuprinztoare, un ghid de biosiguran precum i programe de aciune pentru aplicarea lor. Responsabilitatea pentru acestea revine directorului / efului instituiei sau al laboratorului, care poate delega unele sarcini responsabilului pentru biosiguran sau altui personal specializat. Sigurana muncii n laborator este totodat responsabilitatea tuturor, de la e i tehnicieni superiori pn la ultimul angajat al laboratorului; ecare membru al personalului este responsabil att pentru propria siguran ct i pentru cea a colegilor de lucru. Fiecare angajat este obligat s-i desfoare activitatea n condiii de siguran i s raporteze superiorului orice incident, aciune sau situaie periculoas. Este de dorit s se efectueze periodic audituri pe linia proteciei muncii prin specialiti proprii sau din afara instituiei. 19.1. Responsabilul cu biosigurana Oriunde este posibil trebuie numit un responsabil cu biosigurana pentru a asigura c politicile i programele sunt aplicate cu consecven n tot laboratorul. Responsabilul cu biosigurana i execut atribuiile n numele efului instituiei sau al laboratorului. n unitile mici, responsabilul cu biosigurana poate un microbiolog sau un membru al personalului tehnic care ndeplinete i aceste atribuii, ind prevzut c le consacr o anumit parte din timpul su de lucru. Indiferent de gradul de implicare n munca de biosiguran, persoana desemnat trebuie s aib competena profesional necesar pentru iniierea, monitorizarea i aprobarea unor activiti specice, n concordan cu procedurile generale de biosecurizare i biosiguran. Responsabilul cu biosigurana trebuie s cunoasc i s aplice legile, reglementrile i ghidurile naionale i internaionale relevante; de asemenea trebuie s asiste laboratorul n elaborarea propriilor proceduri operaionale standard. Persoana desemnat trebuie s aib o pregtire de baz n microbiologie i cunotine de biochimie, biologie i zic. Sunt de dorit cunotine despre practici de laborator, clinice i de biosiguran, inclusiv despre echipamente de securizare i informaii tehnologice relevante pentru proiectarea, operarea i ntreinerea facilitilor. Persoana respectiv trebuie s e capabil s comunice ecient cu personalul administrativ, tehnic i din serviciile auxiliare. Activitile responsabilului cu biosigurana trebuie s includ urmtoarele: Consultan tehnic privind biosigurana i biosecuritatea; Efectuarea de audituri interne periodice n domeniul biosiguranei, avnd ca obiect metodele, procedurile i protocoalele de lucru, agenii biologici, materialele i echipamentele; Discutarea nclcrilor protocoalelor sau procedurilor de biosiguran cu persoanele n cauz; Vericarea faptului c toi membrii personalului au fost instruii corespunztor n probleme de biosiguran; Asigurarea unui program de educaie continu n domeniul biosiguranei; Investigarea tuturor incidentelor care implic o posibil diseminare de materiale infectate sau toxice i raportarea celor constatate i a recomandrilor ctre eful de laborator i Comitetul de biosiguran; Conlucrarea cu personalul medical n legtur cu posibilele infecii dobndite n laborator; 103
Asigurarea unei decontaminri corespunztoare, n urma unor scurgeri sau a altor incidente implicnd materiale infecioase; Asigurarea gestionrii corecte a deeurilor; Asigurarea unei decontaminri corespunztoare a echipamentelor nainte de a supuse unor operaii de reparaii sau ntreinere periodic; Meninerea interesului comunitii privind problemele de sntate i de mediu; Stabilirea de proceduri adecvate pentru intrarea / ieirea n/din laborator a materialelor infecioase patogene n conformitate cu reglementrile naionale; Analizarea aspectelor de biosiguran din toate planurile, protocoalele i procedurile operaionale din activitile de cercetare care implic lucrul cu ageni infecioi, nainte de nceperea efectiv a acestor activiti; Instituirea unui sistem de intervenie n caz de situaii de urgen.
19.2. Comitetul de biosiguran Trebuie ninat un comitet de biosiguran pentru a elabora politicile instituionale n materie de biosiguran i codurile de practici n domeniu. Comitetul de biosiguran trebuie, de asemenea, s analizeze protocoalele de cercetare care implic utilizarea de ageni infecioi, animale de laborator, ADN recombinant i materiale modicate genetic. Alte funcii ale comitetului pot include evaluarea riscurilor, formularea unor noi politici de biosiguran i arbitrajul n disputele referitoare la probleme de biosiguran. Componena comitetului de biosiguran trebuie s reecte diversele arii de activitate i nivelul de competen tiinic ale instituiei. Componena de baz a unui comitet de siguran ar trebui s includ : 1. 2. 3. 4. 5. 6. Responsabilul (ii) cu biosigurana; Personal tiinic; Personal medical; Veterinar (i) (dac se lucreaz cu animale); Reprezentani ai personalului tehnic; Reprezentani ai conducerii laboratorului.
Comitetul de biosiguran trebuie s solicite sfatul responsabililor pentru siguran din diferitele departamente (ex. specialiti n radioprotecie, securitatea muncii n industrie, prevenirea incendiilor, etc.), iar n unele situaii se poate solicita asistena unor experi independeni din diferite domenii apropiate de activitate, a autoritilor locale i a organismelor naionale de reglementare. Participarea unor membri ai comunitilor locale poate de asemenea util, mai ales dac exist chestiuni controversate n dezbatere.
104
20. REGULI DE SIGURAN PENTRU PERSONALUL AUXILIAR
20. Reguli de siguran pentru personalul auxiliar
ntr-un laborator, desfurarea activitii n condiii optime i de siguran depinde, n mare msur, de personalul auxiliar i, de aceea, este esenial ca acesta s e bine instruit asupra regulilor de siguran care trebuie respectate pentru o astfel de activitate. 20.1 Personalul tehnic i de ntreinere a cldirii Personalul tehnic care se ocup cu ntreinerea i repararea cldirii, instalaiilor i echipamentelor trebuie s aib anumite cunotine legate de natura activitii laboratorului respectiv, s cunoasc normele i procedurile de biosiguran. Testarea echipamentului dup vericare trebuie fcut i/sau supravegheat de responsabilul cu biosigurana (de exemplu: testarea ecienei HSB dup instalarea unor ltre noi). Laboratoarele sau instituiile care nu au tehnicieni i servicii de ntreinere proprii, trebuie s-i asigure colaborarea cu tehnicieni abilitai existeni n localitate pe care s i pun la curent cu dotarea i condiiile de lucru din laborator. Inginerii i personalul de ntreinere vor avea acces n laboratoarele cu grad de biosiguran de Nivel 3 sau de Nivel 4 numai cu aprobarea i sub supravegherea responsabilului cu biosigurana i/sau a efului laboratorului. 20.2. Personalul responsabil cu meninerea cureniei n laboratoarele cu grad de biosiguran de Nivel 3 i Nivel 4, curenia este de preferat s e fcut de personalul laboratorului. Personalul angajat pentru curenie va avea acces n laboratoarele de Nivel 3 sau de Nivel 4 numai cu aprobarea i sub supravegherea responsabilului cu biosigurana i/sau a efului laboratorului.
105
106
21. PROGRAMELE DE INSTRUIRE
21. Programele de instruire
Un program continuu de instruire privind protecia la locul de munc este esenial pentru meninerea vigilenei personalului laboratorului i a personalului auxiliar n domeniul biosiguranei. ei de laborator, cu ajutorul responsabilului cu biosigurana i a altor persoane calicate au un rol cheie n instruirea personalului. Eciena instruirii privind biosigurana, de fapt ntreaga instruire privind protecia personal i meninerea sntii, depinde de implicarea echipei de conducere, de factori motivaionali, instructajul profesional iniial adecvat, relaiile de comunicare bune i, n ultim instan, de elurile i obiectivele instituiei. n cele ce urmeaz vor prezentate elementele critice ale unui program ecace de instruire privind biosigurana. 1. Evaluarea necesitilor Acest proces include denirea sarcinilor identicate, n ordinea importanei lor (frecven, grad de risc, complexitate) i anumite detalii privind etapele ce trebuie parcurse pentru realizarea acestora. 2. Stabilirea obiectivelor instruirii Acestea sunt deprinderi corecte pe care cel instruit va trebui s demonstreze, dup instruire, c i le-a nsuit, n timpul muncii. Obiectivele pot preciza condiiile n care se desfoar anumite activiti sau deprinderi i nivelul cerut de competen. 3. Precizarea coninutului i mijloacelor de desfurare a instruirii. Coninutul este reprezentat de cunotinele sau aptitudinile pe care persoanele instruite trebuie s i le nsueasc i care s-i permit atingerea obiectivelor urmrite n materie de comportament. Acele persoane, care-i cunosc cel mai bine profesia i cerinele acesteia, sunt cele mai n msur pentru a deni coninutul programului de instruire privind biosigurana. Alte metode folosite trebuie s se concentreze pe includerea unor exerciii menite a nlesni rezolvarea problemelor sau pe imaginarea unor mijloace educative menite s duc la corectarea greelilor constatate la aplicarea unor tehnici. Nu este evident c o anumit metod de nvare (lectur, cursuri televizate, programe pe calculator, cursuri video interactive etc.) este mai bun dect alta. Foarte multe depind de necesitile specice ale instructajului, de componena grupului care este instruit, etc. 4. Stabilirea diferenelor individuale de instruire Instruirea efectiv trebuie s in seama de particularitile i calitile persoanelor instruite. Indivizii i grupurile pot diferi n ceea ce privete aptitudinile, gradul de instruire, cultur, limba vorbit i nivelul deprinderilor profesionale preexistente instruirii. Modul n care este perceput programul de instruire de ctre participani, ca un mijloc de a-i mbuntii performanele profesionale sau securitatea personal, va inuena substanial modalitatea de instruire. Unii nva mai bine prin metoda vizual, alii prin practica direct, alii prin studierea unor materiale scrise. Cursurile trebuie s se adreseze n egal msur angajailor cu probleme speciale, de aceea trebuie adaptate, de exemplu pentru cei cu defecte de auz. n plus, se recomand ca toi cei care concep i desfoar programe de instruire pe probleme de biosiguran, s e familiarizai cu metodele, principiile de pedagogie pentru nvare n cazul adulilor. 107
5. Adaptarea modalitilor de instruire Modalitile de instruire: curs, proiecii, materiale scrise, etc. nu trebuie s vin n conict, s genereze reacii negative sau s nu e adaptate temei abordate. De exemplu, dac scopul activitii de instruire este acela de a dezvolta capacitatea de rezolvare a problemelor survenite, atunci ar trebui s e stimulat mai mult gndirea/judecata/reacia prompt n cunotin de cauz, dect memorizarea mecanic. Instruirea ar trebui s stimuleze un comportament practic i/sau un feedback corespunztor (pozitiv/precis/credibil). n plus, programele de instruire care furnizeaz informaii pentru practic, n condiii similare celor de la locul de munc, vor stimula transferul deprinderilor i cunotinelor dobndite la actualul loc de munc. 6. Evaluarea instruirii Aceasta furnizeaz informaii care ajut s se aprecieze n ce msur instruirea a avut efectul scontat. Evalurile instruirilor sunt n general de patru feluri: - evaluarea reaciei cursanilor la tematica i coninutul instructajului - estimarea cunotinelor asimilate i/sau a noilor performane ale cursanilor - estimarea schimbrilor de comportament la locul de munc - evaluarea unor rezultate tangibile obinute n raport cu obiectivele i elurile organizatorilor Cea mai complet evaluare a instruirii presupune cumularea celor patru modaliti menionate. Cea mai puin ecient metod de evaluare este s se ia n considerare numai reacia cursanilor la tematica instructajului, deoarece aceasta poate s nu coincid cu aplicarea la locul munc a informaiilor primite i deci cu ecacitatea real a instructajului. Aceasta nu trebuie s constituie unicul criteriu pentru aprecierea ecienei. 7. Revizuirea instruirii Evaluarea unei instruirii arat rareori c un program de instruire a avut succes deplin sau a fost un eec total, datorit utilizrii unui numr mare de criterii pentru msurarea rezultatelor. De obicei, datele indic o mai bun nelegere, reinere sau aplicare a unor pri din curs, comparativ cu altele. Diferenele sau lipsurile n cunotinele sau competenele care ar trebuit s e nsuite n timpul instruirii, arat necesitatea unei prelungiri a timpului de instruire, a folosirii unor tehnici alternative sau a unor instructori mai ecieni. OMS furnizeaz o gam variat de materiale pentru instruirea n domeniul siguranei microbiologice.
108
22. LISTA DE EXAMINARE PRIVIND SIGURANA
22. Lista de examinare privind sigurana
Prezenta list-chestionar de examinare este destinat s serveasc la evaluarea preocuprilor unui laborator biomedical dat n domeniul biosiguranei i al biosecuritii. ncperile n care este instalat laboratorul 1. S-au respectat criteriile de calicare i certicare atunci cnd s-a construit, respectiv cnd s-a reevaluat localul ? 2. Localul corespunde cerinelor naionale i locale pentru construcii, inclusiv cele referitoare la precauiile n caz de dezastre naturale, acolo unde este cazul ? 3. Cile de acces sunt bine semnalate i accesibile ? 4. Localul este curat ? 5. Exist vicii de structur la nivelul pardoselii ? 6. Pardoseala i scrile sunt netede, uniforme i nealunecoase ? 7. Spaiul de lucru permite realizarea activitilor n condiii de siguran ? 8. Spaiile de acces i coridoarele sunt adecvate pentru deplasarea persoanelor i a unor echipamente de mari dimensiuni ? 9. Mesele de lucru, mobilierul i instalaiile sunt n stare bun ? 10.Suprafeele de lucru sunt rezistente la solveni i substane corozive ? 11. Exista cte o chiuvet pentru splarea minilor n ecare camer ? 12. Cldirile sunt construite i ntreinute astfel nct s previn ptrunderea i cuibrirea roztoarelor i insectelor ? 13. Prile expuse ale conductelor de abur i ap erbinte sunt izolate sau mascate pentru a asigura protecia personalului ? 14. Exist un generator electric autonom pentru cazurile de ntrerupere a curentului ? 15. Poate restricionat accesul n laborator, acesta ind permis numai persoanelor autorizate ? 16. A fost fcut o evaluare a riscului pentru a se asigura c echipamentul i facilitile sunt adecvate pentru desfurarea activitilor prevzute ? Facilitile i condiiile de depozitare 1. Locurile de depozitare, rafturile, etc sunt astfel amenajate nct materialele depozitate s nu alunece sau s cad ? 2. Se pstreaz curenia, se evit acumularea de gunoaie, de materiale i obiecte de prisos ce pot reprezenta pericol de accidentare, incendiu sau explozie ? 3. Congelatoarele i spaiile de depozitare se pot ncuia ? Instalaii sanitare i dependine pentru personal 1. ncperile i dotrile sunt meninute curate, n ordine i corespunztoare din punct de vedere sanitar ? 2. Exist ap potabil ? 3. WC-urile i duurile sunt adecvate, curate, n bun stare ? Exist WC-uri i duuri separate pentru brbai i femei ? 4. Exist ap rece, cald, spun i prosoape ? 109
5. Sunt vestiare pentru brbai i femei ? 6. Exist spaii (de ex.dulapuri) individuale pentru hainele de strad ? 7. Exista o camer n care se poate mnca, bea cafea etc ? 8. Nivelul zgomotului este acceptabil ? 9. Depozitarea i evacuarea gunoiului menajer se face n mod corespunztor ? nclzire i ventilaie 1. Temperatura la locul de munc este n limitele confortului termic ? 2. Ferestrele sunt protejate de soare prin jaluzele ? 3. Este asigurat o ventilaie adecvat (ex: minimum 6 schimburi ale aerului /or), mai ales n camerele cu sistem mecanic de ventilaie ? 4. Sistemul de ventilaie este prevzut cu ltre HEPA ? 5. Ventilaia mecanic perturb uxul de aer laminar n interiorul sau n jurul hotelor de securitate biologic sau al hotelor de protecie chimic ? Iluminare 1. Iluminarea este adecvat (ex. 300 400 lx.) ? 2. Exist iluminare local la nivelul meselor de lucru ? 3. Este asigurat o iluminare uniform, fr locuri ntunecoase sau slab luminate n ncperi sau pe coridoare ? 4. Lmpile uorescente sunt dispuse paralel cu mesele de lucru ? 5. Lumina lmpilor uorescente este corespunztoare cromatic (compensat) ? Servicii 1. Este ecare ncpere a laboratorului prevzut cu suciente chiuvete, ap, prize de electricitate i guri de gaz pentru a permite desfurarea activitii n condiii de securitate ? 2. Exist programe adecvate de ntreinere curent i inspecie periodic pentru sigurane, prize, instalaii de iluminat, cabluri, conducte, etc. ? 3. Defeciunile sunt remediate n timp optim ? 4. Exist un serviciu tehnic propriu de reparaii i ntreinere, cu personal calicat, care s aib cunotinte referitoare la activitatea specic de laborator ? 5. Accesul personalului de ntreinere n diferite zone ale laboratorului este controlat i consemnat ? 6. Dac nu exist un serviciu tehnic i de ntreinere propriu, au fost contactate rme de reparaii i ntreinere care s se familiarizat cu echipamentele i activitatea din laborator ? 7. Exist o unitate pentru ntreinerea cureniei ? 8. Accesul personalului pentru curenie n diferite zone ale laboratorului este controlat i consemnat ? 9. Sunt asigurate serviciile IT n condiii de securizare ? Msuri de biosecuritate 1. A fost fcut o evaluare calitativ a riscurilor pentru care este necesar un sistem de alarm ? 2. S-a fcut o evaluare a riscurilor i au fost stabilite planuri de intervenie conform prioritilor ? 3. ntreaga cldire rmne ncuiat n afara programului de lucru ? 4. Uile i ferestrele sunt asigurate mpotriva spargerilor ? 5. Accesul n ncperile n care se a materiale periculoase sau aparatur scump este controlat i consemnat ? 6. n afara programului aceste ncperi sunt ncuiate ?
110
Prevenirea i combaterea incendiilor 1. Exist un sistem de alarm n caz de incendiu ? 2. Ieirile de incendiu sunt accesibile ? 3. Sistemul de detectare a incendiilor exist, funcioneaz i este testat periodic ? 4. Exist monitorizare din partea echipelor de pompieri ? 5. Ieirile sunt semnalizate luminos n mod adecvat ? 6. Drumul ctre ieire este marcat atunci cnd nu este evident ? 7. Toate ieirile sunt accesibile i descuiate n timpul programului ? 8. Exist ieiri ascunse de elemente de decor, mobil sau aparatur ? 9. Accesul ctre ieiri este asigurat n aa fel nct s nu e necesar traversarea unor zone periculoase ? 10. Toate ieirile conduc spre spaii deschise ? 11. Coridoarele, spaiile de trecere i holurile sunt libere i fr obiecte care s mpiedice deplasarea personalului i folosirea mijloacelor destinate stingerii incendiilor ? 12. Echipamentul pentru stingerea incendiilor este uor de identicat printr-un cod de culori adecvat ? 13. Stingtoarele de incendiu portabile sunt ncrcate cu regularitate, funcioneaz i se a n permanen n locurile special desemnate ? 14. ncperile cu risc potenial de incendiu sunt echipate cu stingtoare i/sau echipamente contra incendiilor ? 15. n cazul n care ntr-o ncpere se folosesc lichide i gaze inamabile, ventilaia mecanic este sucient pentru a elimina vaporii nainte de atingerea unei concentraii periculoase ? 16. Personalul este instruit pentru a interveni n caz de incendiu ? Stocarea lichidelor inamabile 1. Depozitul de lichide inamabile este separat de cldirea principal ? 2. Depozitul de substane inamabile este clar semnalizat ca zon cu risc de incendiu ? 3. Are un sistem de ventilaie propriu, care s e separat de cldirea principal ? 4. Comutatoarele electrice sunt protejate sau plasate n afara depozitului ? 5. Instalaia de iluminat este asigurat mpotriva aprinderii eventualilor vapori prin scnteie ? 6. Lichidele inamabile sunt pstrate n containere adecvate, ventilate, construite din materiale neinamabile ? 7. Coninutul containerelor este corect menionat pe etichet ? 8. Stingtoarele, pturile ignifuge i alte echipamente contra incendiilor exist i sunt plasate n afara, dar n imediata apropiere a depozitului ? 9. Inscripiile care interzic fumatul se a la vedere n afara i n interiorul depozitului de lichide inamabile ? 10. n laborator sunt stocate numai cantiti minime de substane inamabile ? 11. Sunt acestea inute n spaii special amenajate, destinate substanelor inamabile ? 12. Aceste spaii poart inscripiile Lichide inamabile-Pericol de incendiu ? 13. Personalul este instruit pentru manipularea i folosirea corect a lichidelor inamabile ? Gazele comprimate i licheate 1.Containerele pentru gaz sunt corect etichetate i marcate cu coduri de culoare adecvate ? 2. Cilindrii cu gaz comprimat i valvele acestora pentru presiune nalt i reductorii de presiune sunt inspectai periodic ? 3.Valvele de reducie sunt ntreinute corespunztor ? 4. Indicatorul de presiune este conectat cnd cilindrul se a n funciune ? 5. Capacul de protecie este pus n timpul transportului sau cnd cilindrul nu funcioneaz ? 6. Cilindrii cu gaz comprimat sunt depozitai corespunztor, astfel nct s nu cad n cazul unor dezastre naturale ? 111
7.Cilindrii (buteliile) cu gaz licheat i rezervoarele de produse petroliere lichide sunt ferite de sursele de cldur ? 8. Personalul este corect instruit pentru a folosi i transporta corect gazele comprimate i licheate ? Pericole de natur electric 1. Toate instalaiile electrice noi, nlocuirile, modicrile i reparaiile sunt fcute n conformitate cu normele naionale de siguran ? 2. Instalaia electric are mpmntare ? 3. Sunt protejate toate circuitele din laborator cu sigurane, sigurane de mpmntare i dispozitive de deconectare de la reea ? 4. Dispozitivele electrice existente sunt avizate pentru a folosite n laborator ? 5. Cordoanele electrice ale aparatelor au lungime adecvat (sunt contraindicate cablurile prea lungi), sunt n bun stare i lipsite de uzuri, crpturi i tieturi ? 6. Este ecare priz destinat unui singur aparat ? (nu se recomand folosirea de prize multiple) Echipamentul de protecie pentru personal 1. Exist echipament de protecie specic pentru ntreg personalul, ex. mnui, halate, oruri, salopete ? 2. Exist echipament special pentru lucrul cu substane chimice, radioactive i cancerigene (soruri de cauciuc, mnui pentru chimicale); exist mnui rezistente la cldur pentru descrcarea autoclavelor i pupinelelor ? 3. Exist ochelari de protecie, mti, scuturi (vizoare) tranparente pentru fa ? 4. Exist dispozitive pentru splarea ochilor ? 5. Exista duuri pentru situaii de urgen ? 6. Protecia mpotriva radiaiilor se realizeaz conform standardelor naionale i internaionale, inclusiv existena dozimetrelor ? 7. Exist mti de gaze curate, dezinfectate i controlate cu regularitate; sunt ele pstrate la ndemn i n condiii igienice ? 8. Exist ltre corespunztoare tipurilor de mti (ex: ltre HEPA pentru microorganisme, ltre adecvate pentru gaze sau particule ? 9. Mtile de gaze individuale au fost testate pentru etaneitate pe faa persoanelor respective ? Protecia i starea de sntate a personalului 1. Exist un serviciu de medicin profesional pentru personal ? 2. Trusele de prim ajutor sunt plasate n locuri accesibile ? 3. Exist personal calicat pentru a acorda primul ajutor ? 4. Acetia sunt instruii pentru a face fa situaiilor de urgen specice laboratorului (contact cu substane corozive, ingestie accidental de substane toxice sau infectante) ? 5. Personalul auxiliar (de ex. personalul care face curenia i cel administrativ) a fost instruit asupra riscurilor poteniale pe care le prezint laboratorul i materialele pe care le manipuleaz ? 6. Sunt aate anunuri vizibile cuprinznd numele persoanelor care pot acorda primul ajutor i telefoanele serviciilor de urgen ? 7. Femeile de vrst fertil sunt informate despre riscurile i consecinele posibile pe care le implic lucrul cu substane carcinogene, mutagene, teratogene i cu bacterii ? 8. Femeile de vrst fertil care bnuiesc sau sunt sigure c sunt nsrcinate tiu c trebuie s-i informeze ei n scopul eventualei schimbri a locului de munc pe perioada sarcinii ? 9. Exist un program de imunizri adaptat specicului laboratorului ? 10. Se efectueaz teste cutanate i radiologice pentru cei care lucreaz n condiii de risc TBC sau alte 112
teste specice pentru alte infecii ? 11. Exist o eviden a bolilor profesionale i a accidentelor de munc ? 12. Exist semnale, sigle i ae de avertizare pentru prevenirea i reducerea riscului de accidente ? 13. Personalul este instruit pentru respectarea precauiilor de biosiguran ? 14. Personalul este ncurajat s raporteze expunerile poteniale ? Echipamentul de laborator 1. ntregul echipament a fost certicat ca sigur pentru folosire i autorizat sub raportul folosirii n condiii de securitate ? 2. Exist proceduri scrise pentru decontaminarea echipamentului nainte de a supus operaiunilor de ntreinere ? 3. Hotele de siguran biologic i hotele de protecie chimic sunt ntreinute i vericate periodic ? 4. Autoclavele i alte aparate care funcioneaz sub presiune sunt vericate periodic ? 5. Rotoarele i port-cuvele centrifugilor sunt vericate periodic ? 6. Filtrele HEPA sunt nlocuite periodic ? 7. Se folosesc pipete n locul acelor de sering ? 8. Sticlria ciobit sau crpat este ntotdeauna aruncat i nu refolosit ? 9. Exist containere speciale pentru sticlria spart ? 10. Se folosete de preferin material plastic n locul sticlriei ori de cte ori este posibil ? 11. Se folosesc containere speciale pentru obiecte neptoare/ tietoare folosite ? Materiale infecioase 1. Primirea probelor se face n condiii de securitate ? 2. Se pstreaz nregistrri ale probelor recepionate ? 3. Probele sunt despachetate n hota de siguran biologic cu grija i atenia cuvenite pentru a evita spargerea i scurgerea/stropirea ? 4. Se folosesc mnui i alte echipamente de protecie pentru despachetarea probelor ? 5.Personalul este instruit n ceea ce privete transportul produselor infecioase conform legislaiei naionale i/sau internaionale ? 6. Este meninut ordinea i curenia pe mesele de lucru ? 7. ndeprtarea materialelor infecte se face cel puin o dat pe zi, iar tratarea i evacuarea lor se face fr riscuri pentru personal i pentru mediul nconjurtor ? 8. Au fost instruii toi membrii laboratorului asupra procedurilor de urmat n cazul n care se produce spargerea i mprtierea de culturi microbiene i materiale infecioase ? 9. Ecacitatea sterilizrii este controlat prin utilizarea de indicatori zici, chimici i biologici ? 10. Exist o procedur scris pentru decontaminarea cu regularitate a centrifugilor ? 11. Cupele sau suporii pentru cupe ai centrifugilor sunt prevzui cu capace etane ? 12. Se folosesc curent i corect dezinfectanii indicai ? 13. Personalul care lucreaz n laboratoare cu nivel de biosecuritate 3 i 4 este pregtit n mod corespunztor prin instructaje speciale ? Chimicale i substane radioactive 1. Chimicalele incompatibile ntre ele sunt stocate i manipulate separat ? 2. Sunt toate chimicalele etichetate corect cu menionarea denumirii corecte i avertizare asupra pericolelor legate de manipulare ? 3. Sunt expuse la vedere ae de avertizare cu privire la riscul de accidentare legat de manipularea unor chimicale ? 113
4. Exista truse pentru curarea/neutralizarea chimicalelor vrsate ? 5. Personalul este instruit cu privire la msurile ce trebuie luate n cazul scurgerilor sau vrsrii de chimicale periculoase ? 6. Substanele inamabile sunt depozitate corect i n siguran n cantiti minime n locuri securizate ? 7. Exist crucioare/suporturi pentru transportul sticlelor ? 8. Exist un responsabil cu protecia mpotriva radiaiilor, sau un manual de referin la ndemna personalului, spre consultare ? 9. Personalul este instruit corespunztor pentru lucrul cu substane radioactive ? 10. Exist evidene i nregistrri corecte ale stocurilor i consumurilor de substane radioactive folosite ? 11. Exist ecrane de protecie mpotriva radiaiilor ? 12. Este monitorizat gradul de iradiere al personalului ?
114
ANEXA 1
Anexa 1
Primul-ajutor
Primul ajutor n caz de expunere accidental la material real / potenial infecios const n aplicarea imediat dup eveniment, de ctre o persoan avizat, a tratamentului medical adecvat, chiar la locul producerii accidentului. Primul ajutor se acord respectnd metoda aprobat pentru o anumit expunere, urmnd ca ngrijirile s e continuate de ctre un medic de specialitate pentru tratarea consecinelor accidentului. Echipamentul minim necesar pentru acordarea primului ajutor const n: 1. Trusa de prim-ajutor, 2. mbrcminte de protecie i echipament de siguran pentru persoana care asigur primul ajutor, 3. Echipament de irigare ocular. 1. Trusa de prim-ajutor Trusa de prim-ajutor va confecionat din materiale care s asigure protecia coninutului mpotriva prafului i a umiditii. Trusa va pstrat la loc vizibil, uor de recunoscut i de accesat. Prin convenie internaional, trusa de primajutor este identicat printr-o etichet cu o cruce alb pe fond verde. Trusa de prim-ajutor trebuie s conin: 1. Instruciuni generale de utilizare i lista de inventar a acesteia 2. Comprese sterile de diferite dimensiuni, n ambalaje individuale 3. Comprese sterile oculare cu bandaje de ataare 4. Comprese triunghiulare 5. Comprese sterile de acoperire a rnilor 6. Ace cu siguran 7. Fee sterile simple 8. Ghid / manual de acordare a primului-ajutor calicat, de exemplu, editat de Crucea Roie Internaional. 2. Echipamentul pentru protecia celui care acord primul-ajutor 1. Piesa pentru respiraia gur-la-gur 2. Mnui de cauciuc i alte mijloace de protecie mpotriva expunerii la snge. 3. Trusa de curenie/neutralizare a dispersrilor de snge (vezi Capitolul 14). 3. Echipamentul de irigare ocular Echipamentul de irigare ocular trebuie s e la ndemn, iar personalul bine instruit pentru utilizarea sa corect.
115
Procedurile de prim ajutor dup expunerea accidental la material infecios

1. neparea, tierea, zgrierea, abraziunea accidental Consider ca ind un risc de expunere semnicativ orice leziune cu corpuri ascuite, tioase, chiar dac nu sunt urme de snge vizibile la locul leziunii i tegumentul nu pare a fost lezat serios. Spal imediat abundent zona afectat cu un jet de ap, apoi cu ap i spun. Dezinfecteaz zona cu un antiseptic activ, ecient, proaspt preparat; aplic un pansament steril dac este necesar. Raporteaz incidentul efului de laborator i medicului epidemiolog-infecionist. 2. Contactul accidental cu material infecios Categoria include orice contact neprotejat al tegumentului prezentnd soluii de continuitate, a mucoasei bucale, nazale sau a globului ocular cu material potenial infecios. Spal abundent imediat zona tegumentar cu jet de ap i spun. Folosete doar ap pentru cavitatea bucal i, respectiv, ser ziologic steril pentru globul ocular. Raporteaz imediat incidentul efului de laborator i medicului epidemiolog / infecionist. 3. Aciuni imediate dup expunerea accidental Indiferent de potenialii ageni microbieni patogeni, coninui de materialul infecios implicat n expunerea accidental potenial infectant, se impun cteva msuri imediate: Se va preleva o prob de snge de la accidentat pentru testri de baz (armarea / inrmarea unei / unor infecii preexistente accidentului cu etiologie: HBV +/- HDV, HCV, HIV, Treponema pallidum, etc.). O contraprob de ser se va pstra n congelator pentru investigaii suplimentare. Se va preleva (dac este posibil) o prob de snge de la subiectul de la care provine materialul biologic potenial infectios (teste paralele cu accidentatul). Raiunea pentru care se fac aceste prelevri este de : o a stabili caracterul profesional / neprofesional al unei / unor mbolnviri ulterioare; o a se adopta o atitudine terapeutic imediat, raional i ecient fa de accidentat; o a stabili durata de urmrire/ supraveghere clinic i de laborator a accidentatului (n general, pe durata maxim de incubaie a agentului/ agenilor infecioi potenial / real existeni n materialul infecios implicat n accident. n cursul investigrii unei izbucniri epidemice, trebuie stabilite proceduri adecvate, specice, de prevenie i tratament i de urmrire pe durata maxim de incubare (pentru agentul etiologic incriminat) a personalului implicat n aciune. n cursul unei izbucniri epidemice suspectate de a o febr hemoragic, personalul implicat n investigarea focarului va monitorizat de dou ori pe zi, timp de trei sptmni, pentru starea general i temperatur. Dac un detaliu procedural este identicat drept cauza generatoare a accidentului, este necesar a se ntreprinde o aciune corectiv.
116
ANEXA 2
Anexa 2
Imunizarea personalului
Evaluarea riscurilor pe care le implic lucrul cu diferii ageni microbieni trebuie s fac obiectul unor discuii amnunite cu specialitii n domeniu. Disponibilitatea i existena autorizaiilor de punere pe piaa local, avizarea de ctre Ministerul Sntii i utilitatea unor vaccinuri i/sau medicamente (n special antibiotice) pentru cazurile de expunere accidental trebuie s e evaluate i luate n considerare atunci cnd se intenioneaz a se lucra cu anumii ageni microbieni. De asemenea, screening-ul serologic prealabil al personalului expus la un anumit risc infecios (cnd este disponibil un vaccin specic) se impune naintea unei vaccinri, deoarece poate depista starea de imunitate dobndit (vaccinri, infecii anterioare) a unei pri a personalului pentru care vaccinarea este inutil. Dac un vaccin / anatoxin este avizat de Ministerul Sntii i este disponibil, vaccinarea personalului va efectuat abia dupa evaluarea riscului unei posibile expuneri accidentale i dup evaluarea clinic a strii de sntate a personalului vizat. Va luat n considerare i existena / accesibilitatea la servicii clinice de specialitate pentru managementul cazurilor posibile de expuneri accidentale la ageni microbieni.
117
118
ANEXA 3
Anexa 3
Centre colaboratoare ale OMS n domeniul biosiguranei
Informaii n privina cursurilor de instruire i a materialelor informative de prol disponibile pot obinute prin solicitare n scris de la oricare dintre urmtoarele: Biosafety programme, Department of Communicable Disease Surveillance and Response, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (http://www.who.int/csr/). WHO Collaborating Centre for Biological Safety, Swedish Institute for Infectious Disease Control, Nobels Vg 18, S-171 82 Solna, Sweden (http://www.smittskyddsinstitutet.se/English/english.htm). WHO Collaborating Centre on Biosafety Technology and Consultative Services, Ofce of Laboratory Security, Health Canada, 100 Colonnade Road, Loc.: 6201A, Ottawa, Ontario, Canada K1A 0K9 (http://www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl). WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Training, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, 1600 Clifton Road, Mailstop F05, Atlanta, GA 30333, USA (http://www.cdc.gov/). WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Research, Division of Occupational Health and Safety, Ofce of Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, 13/3K04 13 South Drive MSC 5760, Bethesda, MD 20892-5760, USA (http://www.nih.gov/). WHO Collaborating Centre for Biosafety, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, 10 Wreckyn St, Nth Melbourne, Victoria 3051, Australia. Postal Address:Locked Bag 815, PO Carlton Sth, Victoria 3053, Australia (http://www.vidrl.org.au/).
119
120
ANEXA 4
Anexa 4
Sigurana microbiologic a echipamentelor
n cursul utilizrii, anumite echipamente pot genera pericole de contaminare microbiologic. Alte echipamente sunt concepute special pentru a preveni sau reduce riscurile de contaminare microbiologic (vezi Capitolul 11). Echipamente care pot genera pericole de contaminare microbiologic n Tabelul A4-1 sunt cuprinse echipamentele i operaiunile care pot genera pericole de contaminare microbiologic precum i sugestii privind modul n care pot eliminate sau reduse aceste riscuri. Tabel A4-1. Echipamente i operaiuni care pot genera pericole Echipament Ace de sering Riscul Inoculare accidental, aerosoli, stropire Msuri de eliminare sau reducere a riscului Nu reacoperii acele i nu retezai acele Folosii seringi cu sistem tip baionet de blocare a acului sau seringi de unic utilizare, la care acul este parte integrant a seringii pentru a preveni detaarea acului de sering Folosii tehnici corecte de laborator, ex : - umplei seringa cu atenie pentru a reduce la minimum cantitatea de bule de aer sau formarea de spum n inocul - evitai folosirea seringilor pentru a amesteca lichide infecioase; dac totui le folosii, asigurai-v c vrful acului este imersat n lichid i evitai expulzarea din sering cu for excesiv - nfurai acul i amboul ntr-un tampon de vat imbibat n dezinfectantul corespunztor nainte de a extrage acul din capacul/dopul de cauciuc al unui acon - eliminai excesul de lichid i bulele de aer innd seringa vertical ntr-un tampon de vat imbibat n dezinfectant sau ntr-un acon Efectuai toate operaiunile cu material infecios ntr-o HSB Imobilizai animalele n timpul inoculrii. Folosii ace boante sau canule pentru inocularea intranazal sau oral. Lucrai ntr-o HSB. Autoclavai acele de sering dup utilizare i asigurai-v c evacuarea lor se face corect. Dac acul i seringa nu formeaz un dispozitiv unitar, nu le dezasamblai nainte de autoclavare Folosii cupe cu capac sau rotoare cu capac etan. Deschidei cupele sau rotoarele dup ce aerosolii s-au depus (30 min) sau n HSB 121
Centrifuga
Aerosoli, stropire i spargerea cupelor
Echipament Ultracentrifuga
Riscul Aerosoli, stropire i spargerea cupelor
Msuri de eliminare sau reducere a riscului Instalai un ltru HEPA ntre centrifug i pompa de vid nregistrai orele de funcionare pentru ecare rotor i respectai un program preventiv de supraveghere a funcionrii (service) pentru a reduce riscul unor defeciuni mecanice. Umplei i golii cupele ntr-o HSB Asigurai-v de integritatea capsulei din srm din jurul catalizatorului Aezai-le ntr-o cuc rezistent din plas de srm
Exicatoare pentru anaerobioz Desicatoare
Explozie, rspndire de materiale infecioase Implozie, dispersarea fragmentelor de sticl i materiale infecioase Aerosoli, scurgeri i spargeri ale containerului
Omogenizatoare, aparate pentru fragmentarea esuturilor
Efectuai operaiunile i deschidei echipamentul n HSB Folosii modele special concepute care previn scurgeri pe la garniturile pieselor rotative sau ale capacelor sau folosii aparate cu incinte etane nainte de a deschide omogenizatorul ateptai 30 min, pentru a permite aerosolilor s se depun. Refrigerarea condenseaz aerosolii Dac folosii un omogenizator manual, nfurai tubul ntrun material absorbant Efectuai operaiunile i deschidei echipamentul n HSB Asigurai izolarea mpotriva ultrasunetelor Utilizai mnui pentru a v proteja mpotriva efectelor chimice ale detergenilor Efectuai operaiunile n HSB sau n nie speciale Utilizai pentru culturi recipiente solide, nchise etan, cu capac nurubat, prevzute cu ltre protectoare, dac este necesar, i bine securizate. Utilizai ltre de aer pentru a proteja dispozitivul de vid Utilizai o metod ecient de decontaminare, de ex. chimic Asigurai-v de existena unor capcane pentru umezeal i a unui condensator de vapori. Inspectai atent toate recipientele din sticl pentru vid pentru a observa eventuale zgrieturi sau crpturi. Utilizai numai sticlrie special conceput pentru vid
Sonicatoare i bi cu ultrasunete Agitatoare pentru culturi, shakere, mixere Liolizatoare
Aerosoli, tulburri auditive, dermatite
Aerosoli, stropire, vrsare
Aerosoli i contaminare prin contact direct
Bi de ap
Creterea Asigurai curarea i dezinfecia periodic microorganismelor Nu utilizai azida de sodiu pentru a preveni creterea Formarea de microorganismelor compui explozivi ai azidei de sodiu cu anumite metale 122
ANEXA 4
Pe lng riscurile microbiologice, riscurile produse de echipament trebuie anticipate i prevenite. Tabelul A4-2 prezint cteva cauze ale accidentelor generate de echipamente. Tabel A4-2. Cauze mai frecvente ale accidentelor generate de echipamente Accident Cauza accidentului Msuri de reducere sau eliminare a riscului Respectarea standardelor naionale
Concepere sau construcie greit Fire electrice n incubatoare Electrocutri Utilizare improprie Accidente de centrifugare Explozia incubatoarelor pentru anaerobioz Adaptare improprie Explozie n recipiente sub vid de uz casnic Explozie n frigidere de uz casnic Transportul impropriu al azotului lichid Chimicale periculoase depozitate n containere nerezistente la aprindere i explozii. Ex : eter n recipient cu dop nurubat care permite scurgerea Utilizarea unui echipament corespunztor Pstrarea solvenilor i extractelor cu punct de aprindere sczut numai n frigidere i containere rezistente la aprindere i explozii Neechilibrarea cupelor Utilizarea unui gaz necorespunztor Instruirea i supravegherea personalului Instruirea i supravegherea personalului Creterea necontrolat a temperaturii. mpmntare defectuoas
ntreinere incorect Foc n am-fotometru Incorecta reasamblare a Instruirea i supravegherea componentelor cu ocazia personalului reparaiilor i operaiunilor de ntreinere
123
124
ANEXA 5
Anexa 5
Substanele chimice: pericole i precauii
Aceast anex cuprinde informaii de baz cu privire la sntate i siguran, informaii i precauii de protecie referitoare la o list selectat de substane chimice folosite n mod obinuit n laboratoarele de sntate public i n cele de cercetare medical. Aceast list nu este exhaustiv, absena din ea a unei anumite substane chimice nu implic i faptul c aceasta nu este periculoas. Toate substanele chimice din laborator trebuie manipulate cu atenie i de o manier care s minimalizeze riscurile de expunere.
125
Tabel A5-1. Substane chimice: pericole i precauii

PERICOLE DE FOC PRECAUII DE SIGURAN INCOMPATIBILITI CHIMICE ALTE PERICOLE
SUBSTANE CHIMICE
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE PENTRU SNTATE
Acetaldehida
CH3CHO
Lichid incolor sau gaz cu miros neptor, arom de fructe; punct topire-121C, punct erbere 21C.
Iritaie moderat a ochilor i tractului respirator. Afecteaz SNC, tractul respirator, rinichii. Posibil carcinogen.
Extrem de inamabil ; amestecul vapori / aer este explozibil ; punct de aprindere -39C, interval inamabil 4-57%.
Se vor evita acra deschis, scnteile, fumatul, contactul cu suprafee erbini. Se stocheaz n recipiente nchise ermetic, la distan de oxidani; se stocheaz doar dac este stabilizat. Se va lucra n nia de protecie chimic sau n spaii bine ventilate, cu mnui din cauciuc, ochelari de protecie i protecie respiratorie. Se pstreaz n recipiente bine nchise. Se lucreaz n nia de protecie chimic, n hot sau cu ventilaie cu exhaustarea aerului ; cu mbrcminte de protecie incluznd ltru respirator pentru pulberi, ochelari de protecie chimic, mnui din cauciuc sau plastic, protecia ochilor.
n contact cu aerul poate forma peroxizi explozibili. Poate polimeriza sub inuena acizilor, materialelor alcaline,n prezena urmelor de metale. Agent puternic reductor, reacioneaz violent cu oxidanii, cu variate substane organice, cu halogenii, acidul sulfuric i amine.
126
Deosebit de inamabil ; interval inamabil 2,5100%. Pentru protecia pielii se folosesc mnui izolatoare, ochelari de protecie i scuturi transparente pentru fa. Se vor evita acra deschis, scnteile i fumatul. Se lucreaz cu ventilaie local de exhaustare, echipamente electrice i sisteme de iluminare protejate contra exploziei.
Acetat de taliu Cristale albe, delicvescente ; punct topire 110C; TIC2H3O2 foarte solubil n ap.
Extrem de toxic prin ingestie, cu posibil efect cumulativ. Afecteaz sistemul nervos i cardiovascular. Vtmtor n caz de contact cu ochii sau cu pielea.
Acetilena
HCCH
Asxiant ; cauzeaz Gaz incolor, cu miros slab eteric degerturi la contactul sau de usturoi; cu pielea. se livreaz n containere sub presiune, dizolvat n aceton ; punct topire -81C, sublimeaz la -84C
Agent puternic reductor ; reacioneaz violent cu oxidanii i cu orurile i clorurile n prezena luminii. Reacioneaz cu cuprul, argintul i mercurul sau cu srurile acestora, formnd compui sensibili la ocuri (pericol de explozii).
SUBSTANE CHIMICE
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
INCOMPATIBILITI CHIMICE
ALTE PERICOLE
Acetona
CH3COCH3
Lichid incolor volatil cu miros dulceag ; punct topire -95C, punct erbere 56C; miscibil cu apa. Recipientele care o conin se stocheaz n zone bine ventilate, la distan de surse de foc. Se va evita inhalarea vaporilor. Se manipuleaz cu protecie respiratorie i ocular. Reacioneaz violent cu oxidanii (acid cromic i acid nitric) i cu cloroformul n prezena bazelor. Incompatibil cu amestecuri concentrate de acid sulfuric i nitric.
Uoar iritaie a ochilor, nasului i gtului. Inhalarea poate cauza ameeli, narcoz i com.
Deosebit de inamabil ; punct de aprindere - 18C, limite explozibile 2,212,8%.
Se stocheaz n recipiente i vase mari, cu mpmntare pentru a preveni acumulrile i descrcrile de electricitate static.
Acetonitril
CH3CN
Lichid incolor cu miros aromatic; punct topire -46C, punct erbere 82C.
Iritare a cilor respiratorii, a ochilor i pielii. Expunerea poate determina convulsii, pierderea cunotinei, intoxicare cu cianuri.
Deosebit de inamabil ; punct de aprindere 12,8C, limite explozibile 3,0-16%.
ANEXA 5
127
Inamabil ; punct de aprindere 40C, interval inamabil 5,416%. Se va evita inhalarea vaporilor. n cazul contactului cu ochii se cltete imediat cu ap i se solicit asisten medical. Se manipuleaz cu mnui din nitril i cu asigurarea proteciei oculare.
Se vor evita acra deschis, scnteile, fumatul i contactul cu oxidani. Se manipuleaz numai n spaii fr surs de foc. Se stocheaz n recipiente nchise etan, separat de oxidani. Se lucreaz cu ventilaie de exhaustare. Se evit contactul cu pielea, ochii i mucoasele. Se folosete protecie respiratorie i mnui din cauciuc.
Reacioneaz cu soluii apoase acide i bazice, producnd gaze i vapori toxici. Reacioneaz cu oxidani puternici. Atac anumite feluri de plastic, cauciuc i esturi. Descompunerea prin ardere produce acid cianhidric i oxizi de azot.
Acid acetic
Reacioneaz violent sau exploziv cu oxidanii.
CH3CO2H
Lichid incolor cu miros neptor ; punct topire 17C, punct erbere 118C ; miscibil cu apa.
Coroziv; produce arsuri severe; vaporii sunt iritani. Efectele pot tardive.
SUBSTANE CHIMICE Se va evita inhalarea vaporilor; se asigur protecie respiratorie. n caz de contact cu ochii, se cltete imediat cu ap i se solicit asisten medical; n caz de contact cu pielea, se spal imediat cu ap din abunden. Se lucreaz n nia de protecie chimic, cu mnui din cauciuc sau plastic i protecie ocular (ochelari de lucru sau ochelari de protecie) Reacioneaza violent cu bazele (solide i soluii concentrate), exploziv n contact cu permanganatul de potasiu solid. La contactul cu numeroase metale genereaz gaze toxice sau explozive. La foc elibereaz vapori i gaze foarte toxice.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Acid clorhidric Lichid incolor, fumegnd, cu (10-37%) miros neptor ; punct erbere HCl -121C ; miscibil cu apa.
Coroziv pentru ochi, sistemul respirator i piele ; inhalarea repetat a vaporilor poate cauza bronit cronic.
Acid cromic
128
Atac multe metale producnd hidrogen. Elibereaz gaze toxice prin expunere la foc. n caz de contact cu ochii, se cltete cu ap i se solicit asisten medical. Se lucreaz cu mnui din nitril i protecie ocular.
CrO3
Fulgi sau pudr rou-nchis utilizat frecvent n soluie apoas ; punct topire 197C. Se previne contactul cu tegumentele i ochii, i inhalarea prafului n. Se lucreaz n spaii cu ventilaie, exhaustare local sau protecie respiratorie.
Iritant pentru ochi, piele i tractul respirator. Contactul prelungit sau repetat cu pielea poate cauza dermatite, ulcer cromic i sensibilizare a pielii. Inhalarea poate cauza reacii de tip astmatiform. Poate produce perforare a septului nazal. Carcinogen pentru om.
Se descompune la temperaturi de peste 250C n oxid cromic i oxigen, cu pericol crescut de aprindere. Numeroase reaciii pot genera pericole.
In soluie apoas este un acid puternic ce reacioneaz cu bazele i este coroziv. Oxidant puternic, reacioneaz cu substane combustibile, materiale organice sau alte materiale uor oxidabile (hrtie, lemn, sulf, aluminiu , plastic, etc.). Coroziv pentru metale.
Acid fosforic
Coroziv, cauzeaz arsuri ale pielii i ochilor.
H3PO4
Lichid incolor, vscos sau cristale albe higroscopice ; punct topire 42C, se descompune sub punctul de erbere la 213C ; solubil n ap.
SUBSTANE CHIMICE Acid acetic, acid cromic, acid hidrocianic, anilin, carbon, hidrogen sulfurat, baze, metale i multe alte substane.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Acid nitric (50-70%)
HNO3
Lichid fumegnd incolor sau galben pal ; punct topire -42C, punct erbere 83C -121C; miscibil cu apa.
Coroziv, cauzeaz arsuri severe ale ochilor sau pielii. Inhalarea vaporilor poate cauza edem pulmonar.
Oxidant ; contactul cu materiale combustibile poate produce foc. Elibereaz gaze toxice prin expunere la foc.
Se evit inhalarea vaporiilor ; se folosete protecie respiratorie. n caz de contact cu ochii se spal imediat i se solicit asisten medical; n caz de contact cu pielea, se spal imediat; se ndeprteaz mbrcmintea contaminat. Se lucreaz n nia de protecie chimic, cu mnui din PVC, or de plastic i ochelari de protecie. Se evit contactul cu pielea i ochii ; se manipuleaz cu protecia ochilor i cu mnui. Ageni oxidani; de asemenea argintul i mercurul i compuii acestora.
Acidul nitric concentrat este implicat n mai multe reacii periculoase dect oricare alt substan chimic.
Acid oxalic
ANEXA 5
129
Agent puternic oxidant. Nu este combustibil, dar stimuleaz combustia altor substane. Se va evita inhalarea vaporilor i orice alt expunere ; se lucreaz cu mbrcminte de protecie, incluznd mnui din nitril, protecia ochilor i protecia feei. Soluiile erbini se manipuleaz n nia de protecie chimic sau sub hot.
HO2CCO2H
Cristale incolore ; solubil n ap ; punct topire 190C ; se descompune.
Vtmtor dac vine n contact cu pielea sau este ingerat. Pulberea irit tractul respirator i ochii. Soluia irit ochii i poate cauza arsuri ale pielii. Combustibil. Produce gaze iritante sau toxice prin expunere la foc.
Acid percloric Lichid incolor ; miscibil cu apa.
HClO4
Coroziv, cauzeaz arsuri severe ale ochilor i pielii; de asemenea dac este ingerat. Vaporii sunt corozivi pentru ochi, piele i tractul respirator. Inhalarea vaporilor poate cauza edem pulmonar.
Materiale combustibile i ageni reductori ; anhidrida acetic, bismut i aliajele acestuia, alcool, metal, hrtie, lemn i alte materiale organice.
Agent puternic oxidant ; poate forma produi explozivi dac vine n contact cu mai multe materiale anorganice sau organice ; contamineaz pardoselile de lemn, bncile, etc. Poate exploda la percuie.
SUBSTANE CHIMICE Exploziv cnd se usuc. Se menine tot timpul umezit cu ap sau se folosete doar n soluie alcoolic. Formeaz sruri cu numeroase metale, care sunt mult mai explozive dect acidul n sine.n contact cu cimentul poate forma picratul de calciu, care este un exploziv sensibil la frecare. Poate reaciona cu ageni reductori. Coloreaz n galben. pielea
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Acid picric
C6H2 (NO2)3OH 2,4,6, trinitrofenol
Cristale galbene, umezite cu ap sau dizolvate n alcool ; punct topire 122C, puin solubil n ap.
Toxic prin ingestie, inhalare sau contact cu pielea. Ingestia poate produce cefalee, grea. Iritant pentru ochi.
Acid sulfuric
H2SO4
Lichid vscos, incolor, inodor ; punct topire 10C, punct erbere 340C (cu descompunere). n caz de contact cu ochii se cltete imediat i se solicit asisten medical; n cazul contactului cu pielea se spal imediat i se nltur mbrcmintea contaminat. Se manipuleaz cu mnui din nitril, asigurndu-se protecia ochilor i a feei. Nu trebuie s vin n contact cu substane inamabile.
Dac se adaug acid concentrat n ap poate aparea erbere localizat.
130
Nu este combustibil. Poate emana gaze toxice prin expunere la foc. Se evit contactul cu ochii i pielea ; se lucreaz cu mnui din cauciuc sau plastic i ochelari de protecie chimic sau scut transparent pentru protecia feei combinat cu protecie respiratorie. n caz de contact cu ochii, se cltete imediat i se solicit asisten medical.
Soluia concentrat (15%) coroziv , cauzeaz arsuri severe ; vaporii sunt foarte corozivi prin inhalare ; soluiile diluate sunt iritante pentru ochi i piele ; cauzeaz arsuri i dermatite.
Poate emana gaze toxice prin expunerea la foc. Nu este combustibil. Multe reacii pot cauza foc sau explozie. Diluarea cu ap genereaz cldur i poate apare erberea. ntotdeauna se adaug acidul n ap, niciodat nu se adaug ap n acid.
Este un desicant oxidativ puternic i reacioneaz violent cu muli reactivi incluznd compui organici ai azotului, permanganat de potasiu, alcali metalici i perclorai, materiale combustibile, oxidani, amine, baze, ap, exces de cldur i majoritatea metalelor.
Acid triclor acetic
Coroziv, cauzeaz arsuri severe pentru ochi, piele, tractul respirator.
CCl3COOH
Cristale albe higroscopice, cu miros ptrunztor ; punct topire 58C, punct erbere 197,5C; solubil n ap, etanol, dietileter.
Reacioneaz violent cu amestecuri de cupru / dimetil sulfoxid i n contact cu baze, ageni oxidani puternici i metale precum erul, zincul, aluminiul.
Se stocheaz n spaii uscate. Soluiile apoase concentrate se pot descompune violent.
SUBSTANE CHIMICE
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Acroleina
CH2=CHCHO
Lichid incolor sau galben, cu miros neptor, dezagreabil; punct topire -87C, punct erbere 53C
Lcrimare. Iritaie sever respiratorie ; edem pulmonar la nivele ridicate de expunere. Efectele pot tardive.
Extrem de inamabil ; punct de aprindere 26C, limite explozibile 2,8-31%.
Se va evita contactul cu tegumentele sau cu ochii. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau cu o bun ventilaie. Oxidani, acizi, alcali, amoniac, amine. Polimerizeaz rapid dac procesul nu este inhibat, n mod obinuit cu hidrochinon. Poate forma n timp peroxizi sensibili la ocuri (pericol de explozii).
Amoniac (Soluii
amoniacale)
Lichid incolor cu miros neptor ; Pentru forma gazoas: punct topire -78C, punct erbere -33C ; Pentru soluie 25%: punct topire -58C, punct erbere 38C ; miscibil cu apa. Se vor evita acra deschis, scnteile, fumatul. Se previne contactul cu pielea sau ochii.
Coroziv pentru ochi, tract respirator i piele sau n cazul ingestiei; cauzeaz edem pulmonar n cazul expunerii masive la gaze sau vapori.
Sub form de gaze amoniacale ; interval inamabil 1528%.
Reacioneaz violent cu metale grele, cum ar mercurul i srurile acestuia formnd produi explozivi.
ANEXA 5
131
Inamabil, dezvolt prin expunere la foc vapori sau gaze iritante sau toxice ; punct de aprindere 49C, limite inamabile 2,710,3%.
Se stocheaz n recipiente nchise etan. n cazul contactului cu ochii, se spal imediat cu ap i se solicit asisten medical. Se lucreaz n nia de protecie chimic, cu mnui din cauciuc sau plastic i ochelari de protecie chimic.
Anhidrida acetic
(CH3CO) 2O
Lichid incolor cu miros puternic neptor de oet ; punct topire -73C, punct erbere 139C.
Iritaie sever a ochilor i a tractului respirator superior; aciune coroziv. Efectele pot tardive.
Reacioneaz violent cu apa n erbere, cu aburii, oxidanii puternici, alcooli, amine, baze puternice i multe alte substane chimice. Atac multe metale n prezena apei
SUBSTANE CHIMICE Oxidani puternici, acizi tari.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Anilina
C6H5NH2
Lichid uleios, de la incolor la cafeniu, cu miros de amine aromatice ; punct topire -6C, punct erbere 185C.
Cianoz cauzat de methemoglobinemie. Iritaie a ochilor i pielii. Poate absorbit prin piele; expuneri repetate sau prelungite pot cauza sensibilizare.
Combustibil; punct de aprindere 70C, interval exploziv 1,2-11%.
Se stocheaz n recipiente nchise etan, n spaii separate de oxidani. Se previne contactul cu pielea sau cu ochii. Se lucreaz n spaii cu ventilaie local sau protecie respiratorie, mnui i mbrcminte de protecie, scuturi transparente pentru fa. Incompatibil cu acetilena, compuii de amoniu, acidul oxalic i acidul tartric.
Argint
Nu este combustibil, cu excepia pulberii.
Ag
132
Se evit contactul cu pielea sau inhalarea pulberii. Se manipuleaz cu mnui din cauciuc sau plastic i cu ochelari de protecie chimic. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau cu ltru respirator pentru praf.
Metal alb, se nnegrete dac este expus la ozon, hidrogen sulfurat sau sulf ; punct topire 962C, punct erbere 2212C.
Inhalarea unei cantiti mari de vapori de argint metalic poate cauza afectarea plmnilor cu edem pulmonar. Poate cauza colorarea gri-albstruie a ochilor, nasului, gtului i pielii, n condiiile expunerii ndelungate sau repetate (argiria). Se lucreaz cu exhaustarea local a aerului, cu mnui i ochelari de protecie sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie pentru pulberi sau gaze toxice.
Auramina
4,4-Carbonoimidoil bis (N, N-dimetilenzenamina)
Fulgi sau pudr galben ; punct topire 136C ; insolubil n ap.
Vtmtor n caz de ingestie, inhalare sau contact cu pielea. Poate cauza iritaie a ochilor sau a pielii. Posibil carcinogen.
Ageni puternic oxidani.
SUBSTANE CHIMICE Se descompune exploziv cnd este nclzit peste punctul de topire. Elibereaz gaze toxice cnd este nclzit ; nu se folosete apa pentru stingerea focului. n caz de contact cu pielea, se spal imediat. Se evit inhalarea pulberii. Se manipuleaz cu mnui din cauciuc sau plastic i cu protecie ocular. Reacioneaz exploziv cu bromul, sulfura de carbon i clorura de crom. Sub forma solid reacioneaz cu metale grele, incluznd cuprul, plumbul i mercurul, formnd sruri metalice ale azidelor, compui explozivi. La contactul cu un acid, elibereaz gaze deosebit de toxice sau explozive.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Azida de sodiu Solid, cristalin, incolor ; punct topire N3Na 300C; solubil n ap.
Foarte toxic prin ingestie, inhalare sau contact cu pielea ; poate cauza arsuri. Praful i soluia irit ochii i pielea ; poate absorbit prin piele.
Benzen
C6H6
Lichid incolor, volatil, cu miros aromatic caracteristic ; punct topire 6C, punct erbere 80C.
Inhalarea vaporilor afecteaz SNC cauznd vertij i cefalee, iar la concentraii mai mari pierderea cunotinei i moarte. Risc de anemie aplastic, leucemie, leziuni hepatice dup expunere prelungit sau cronic. Poate absorbit prin piele. Combustibil, produce gaze toxice prin expunere la foc.
Deosebit de inamabil ; punct de aprindere -11C, interval inamabil 1,3-8%.
Se stocheaz recipientele n spaii bine ventilate, la distan de sursele de foc. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau n hote cu ventilaie adecvat; cu protecie ocular i mnui din PVC sau nitril. Se previne formarea de acumulri sau descrcri electrostatice, prin mpmntare.
Poate reaciona violent cu oxidanii, incluznd acidul cromic, permanganatul de potasiu i oxigenul lichid.
ANEXA 5
133
Se evit orice tip de expunere. Se lucreaz cu protecia ochilor i a pielii, n nia de protecie chimic cu ventilaie de exhaustare.
Benzidina
n multe ri, utilizarea sa este interzis sau controlat prin lege.
1,1- Bifenil4,4 -diamina
Pudr galben deschis ; punct topire 128C, punct erbere 400C ; puin solubil n ap, dar foarte solubil n acizi sau solveni organici.
Poate absorbit prin piele. Poate cauza cancer de vezicul biliar. Se evit orice tip de expunere.
SUBSTANE CHIMICE Se manipuleaz purtnd mbrcminte de protecie. Ageni oxidani.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Biselenit de sodiu
Pulbere cristalin, alb, incolor ; Solubil n ap.
NaHSeO3
Toxic prin ingestie i inhalare de pulberi ; posibil pericol prin efecte cumulative. Teratogen experimental. Contactul prelungit cu pielea cauzeaz dermatit.
Brom
Br2
Lichid fumegnd, rou-maroniu, cu miros neptor ; punct topire -7,2C, punct erbere 58,8C.
Oxidant puternic, reacioneaz violent cu materialele combustibile i reductoare. Reacioneaz violent cu soluia apoas de amoniac, cu oxidani, metale, compui organici i fosfor.
Atac unele feluri de plastic, cauciuc i esturi.
134
Nu este combustibil dar stimuleaz combustia altor substane. Se lucreaz n condiii de sistem nchis i ventilaie; cu mnui izolatoare i mbrcminte de protecie, ochelari de protecie sau protecie ocular combinat cu protecie respiratorie.
Coroziv. Vaporii sunt corozivi pentru ochi i pentru tractul respirator ; inhalarea poate cauza edem pulmonar i poate afecta SNC. Contactul cu ochii poate cauza tulburri de vedere, roea, durere, arsuri severe ale esuturilor. Nu este combustibil dar stimuleaz combustia altor substane. Multe reacii pot cauza foc sau explozie. nclzirea poate cauza creterea presiunii cu risc de ardere. Se utilizeaz n sistem nchis i cu ventilaie. Se lucreaz cu mnui i mbrcminte de protecie, ochelari de protecie, scut transparent pentru fa sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie.
Clor
Cl2
Gaz galben-verzui, cu miros neptor, punct topire -101C, punct erbere -34C.
Coroziv pentru ochi, piele i tractul respirator. Inhalarea de gaz poate cauza pneumopatie, edem pulmonar conducnd la sindrom de disfuncie reactiv a cilor aeriene. Evaporarea rapid a clorului lichid poate cauza degerturi. Expunerea masiv poate cauza moarte. Efectele pot tardive; se recomand supraveghere medical.
Soluia apoas este un acid puternic, reacioneaz violent cu bazele i muli compui organici: acetilen, butadien, benzen i alte fraciuni petroliere, amoniac, hidrogen, carbur de sodiu, terebentin i pulberi metalice ne, genernd pericol de foc i explozie.
Atac multe metale n prezena apei. Atac materialele plastice, cauciucul i esturile.
SUBSTANE CHIMICE Baze tari; unele metale cum ar aluminiul sau magneziul, zincul pulbere ; oxidani puternici.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Cloroform
CHCl2
Lichid incolor volatil cu miros caracteristic ; punct topire -63C, punct erbere 61C. ; puin solubil n ap. Se lucreaz n ni de protecie chimic purtnd mbrcminte de protecie, mnui din nitril i protecie ocular.
Vtmtor prin inhalare, ingestie i contact cu pielea ; iritant pentru piele. Poate cauza afectare hepatic, renal i a SNC conducnd la cefalee, grea, icter slab, inapeten, confuzie. Expunerea prelungit sau cronic s-a dovedit carcinogen la animale ; suspect a carcinogen la om.
Dac se nclzete pn la descompunere formeaz fosgen gaz. Atac materialele plastice i cauciucul.
ANEXA 5
Cianobrom
135
Bromcian
BrCN
Cristale incolore sau albe, cu miros neptor ; punct topire 52C, punct erbere 61C.
Afecteaz ochii, pielea i tractul respirator; inhalarea vaporilor poate cauza edem pulmonar genernd convulsii, pierderea cunotinei, insucien respiratorie, moarte. Nu este combustibil dar formeaz gaz inamabil la nclzire. Prin expunere la foc produce emanaii gazoase iritante sau toxice.
Se lucreaz n sistem nchis cu ventilaie ; cu mnui i mbrcminte de protecie, ochelari de siguran, cu scut transparent pentru protecia feii sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie.
Se descompune prin nclzire i la contactul cu acizii producnd acid cianhidric, foarte toxic i inamabil, i acid bromhidric, foarte coroziv. Reacioneaz cu oxidani puternici. Reacioneaz ncet cu apa i umezeala producnd acid bromhidric i acid cianhidric. Atac multe metale n prezena apei.
SUBSTANE CHIMICE Poate elibera gaze toxice prin expunere la foc. Se va evita inhalarea de pulberi; se foloseste protecie respiratorie. Se evit contactul cu ochii sau pielea ; n cazul contactului cu pielea se spal imediat cu ap i se ndeprteaz mbrcmintea contaminat. Se lucreaz cu ochelari de protecie chimic i mnui din cauciuc sau plastic. Se pstreaz sub cheie, n spaii ventilate. Elibereaz, n contact cu acizii sau cu apa ce conine dioxid de carbon dizolvat, gaze deosebit de toxice de acid cianhidric (HCN). Poate forma amestecuri explozive cu nitriii.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Cianura de sodiu
NaCN
Pudr alb cristalin cu miros de migdale ; punct topire 563C, punct erbere 1496C; foarte solubil n ap.
Extrem de toxic prin ingestie, inhalare sau contact cu pielea ; iritant sever pentru ochi. Poate absorbit prin piele. Expunerea repetat poate afecta tiroida.
136
Se evit contactul cu ochii, pielea Ageni puternic oxidani. i mbrcmintea. Se vor purta ochelari de protecie chimic i mnui din cauciuc sau plastic. Combustibil. Se lucreaz cu exhaustare local a aerului sau protecie respiratorie, cu mnui i ochelari de protecie . Formeaz cu compuii acetilenici, etilen oxid azid i peroxidul de oxigen, produi sensibili la ocuri. Reacioneaz cu oxidanii puternici, cum ar cloraii, bromaii sau iodaii, genernd pericol de explozie.
Se trateaz stropii de soluie cu nlbitor pulbere (hipoclorit de sodiu) i se las n contact 24 ore. Substana solid vrsat se terge cu grij cu o lavet care se va scufunda apoi n ap cu nlbitor pulbere; se las 24 ore nainte de a aruncat. n laborator se pstreaz la ndemn antidotul cianurii.
Citochalazina
(A-J)
Pudr alb ; punctul de topire variaz.
Toxic prin ingestie, inhalare sau absorbie prin piele. Poate cauza malformaii congenitale la ft.
Cupru
Cu
Solid roiatic, lucios, maleabil, inodor ; pudra roie devine verde dup expunerea la aer i umezeal; punct topire 1083C, punct erbere 2567C.
Inhalarea emanaiilor gazoase de cupru poate cauza febra fumurilor de metal .
SUBSTANE CHIMICE Foarte inamabil ; punct de aprindere 45C, interval inamabil 1,7-48%. Se pstreaz recipientele n spaii bine ventilate, la distan de sursele de foc, n containere cu mpmntare pentru a preveni acumulrile i descrcrile de electricitate static. Se lucreaz n nia de protecie chimic, cu mnui din nitril pentru a preveni degresarea pielii. Expunerea la aer i lumin poate conduce la formarea de peroxizi explozivi. Poate reaciona violent cu oxidanii i halogenii. Poate reaciona cu oxidanii i cu mercurul.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Dietil eter
C2H5OC2H5
Lichid incolor, foarte volatil, cu miros dulceag caracteristic ; punct topire -161C, punct erbere 34C ; puin solubil n ap.
Iritant pentru ochi i tractul respirator. Poate afecta SNC cauznd somnolen i pierderea cunotinei. Inhalarea repetat poate cauza dependen.
Dimetilamina
CH3)2NH
ANEXA 5
137
Se pstreaz umed pentru a reduce riscul de explozie. Se manipuleaz cu ltru respirator pentru praf, mnui din cauciuc sau plastic i ochelari de protecie chimic.
Gaz licheat incolor i volatil, cu miros neptor ; punct topire -93C, punct erbere 7C ; miscibil cu apa. Foarte inamabil ; punct de aprindere 25C, limite inamabile 2,8-14% . Foarte inamabil ca soluie, punct de aprindere -18C. Se ine la distan de sursele de foc ; n cazul contactului cu ochii se spal imediat i se solicit asisten medical. Se lucreaz n nia de protecie chimic, cu mnui din nitril i ochelari de protecie chimic.
Iritaie sever a ochilor i sistemului respirator; inhalarea poate cauza edem pulmonar. Evaporarea rapid poate cauza degerturi. Soluiile sunt corozive pentru piele i ochi.
Pulbere cristalin 2,4-Dinitrofenil-hidrazina portocalie-roiatic ; punct topire 200C, puin solubil n ap. C H (NO ) -
NHNH2 1-Hidrazin-2,4dinitro-benzen
6 3
2 2
Iritant pentru piele i ochi. Vtmtor prin ingestie, inhalare i contact cu pielea.
Poate reaciona violent cu compuii oxidani i reductori.
SUBSTANE CHIMICE
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Dioxan
C4H8O2 Dietilen dioxid
Lichid incolor cu miros caracteristic ; punct topire 12C, punct erbere 101C . Foarte inamabil ; posibil aprinderea la distan ; ca rezultat al curgerii, agitrii, etc, pot generate ncrcri electrostatice.
Iritant pentru ochi i tractul respirator. Poate afecta SNC cauznd cefalee, grea, tuse, durere de gt, dureri abdominale, ameeal, somnolen, vom, pierderea cunotinei. Poate absorbit prin piele. Afecteaz rinichii i catul. Probabil carcinogen pentru om.
Se lucreaz cu ventilaie cu exhaustare local. Se vor evita acra deschis, scnteile, fumatul sau contactul cu oxidanii sau suprafee erbini. Nu se folosete aer comprimat pentru umplere, evacuare sau manipulare ; se folosesc dispozitive ce nu produc scntei. Se lucreaz cu mnui i mbrcminte de protecie, scut transparent pentru fa sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie. Se manipuleaz cu mnui izolatoare. Se depoziteaz numai n camere sau spaii ventilate, n containere deschise. Alcali metalici, baze puternice.
Poate forma peroxizi explozivi. Reacioneaz viguros cu oxidanii puternici i acizii tari concentrai. Reacioneaz exploziv cu unii catalizatori. Atac multe feluri de plastic.
138
Nu este combustibil dar stimuleaz combustia altor substane ; poate exploda cnd este nclzit, la expunerea la soare sau cnd este expus la ocuri sau scntei. Se lucreaz n condiii de sistem nchis cu ventilaie, cu mnui izolatoare i mbrcminte de protecie, ochelari de protecie sau protecie ocular combinat cu protecie respiratorie.
Dioxid de carbon (solid ; ghea carbonic, ghea uscat) CO2
Solid, alb translucent la -79C ; Sublimeaz la gaz la temperatura mediului ambiant.
Risc de asxiere n spaii nchise sau prost ventilate ; contactul cu forma solid de ghea carbonic cauzeaz degerturi
Dioxid de clor Gaz de la galben la rou sau lichid roumaroniu ; ClO2 punct topire -59C, punct erbere 10C.
Iritant sever pentru ochi, piele i tractul respirator; inhalarea gazului poate cauza edem pulmonar. Efectele pot tardive; se recomand supraveghere medical.
Oxidant puternic ; reacioneaz violent cu materialele combustibile sau reductoare. Reacioneaz violent cu fosforul, hidroxidul de potasiu, sulful, amoniacul, metanul, fosna i hidrogenul sulfurat.
SUBSTANE CHIMICE Se pstreaz n recipiente bine nchise, la distan de sursele de foc. Reacioneaz violent cu oxidanii puternici.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Etanol
CH3CH2OH
Lichid incolor, Duntor dac este volatil, cu miros n nghiit. Iritant pentru caracteristic ; ochi. Poate afecta SNC. punct topire -117C, punct erbere 79C ; miscibil cu apa. Foarte inamabil ; punct de aprindere 12C, limite inamabile 3-19% . Punctul de aprindere 85C. Se manipuleaz cu mnui din cauciuc sau plastic i protecie ocular Reacioneaz cu oxidanii puternici.
Etanolamina
Lichid vscos, incolor, nevolatil, H2NCH2CH2OH cu miros 2-Amino-etanol amoniacal; punct topire 10C, punct erbere 171C ; miscibil cu apa.
Coroziv pentru ochi, tractul respirator i piele. Poate cauza sensibilizarea pielii.
ANEXA 5
139
Punct de aprindere 80C ; interval inamabil 1,7-6%.
Fenol
C6HcOH
Cristale incolore sau roz pal, cu miros caracteristic ; punct topire 41C, punct erbere 182C ; solubil n ap.
Substanele i vaporii sunt corozivi pentru ochi, piele i tractul respirator, cauznd arsuri severe ; se absoarbe prin piele. Tulburri ale SNC, com. Afecteaz rinichii i catul. Simptomele includ dureri abdominale, vrsturi, diaree, iritaii ale pielii, dureri oculare. Contactul prelungit cu soluii diluate poate cauza dermatite.
Se va evita inhalarea vaporilor, Reacioneaz cu oxidanii cauznd se folosete protecie foc i pericol de explozie. respiratorie. Se evit contactul cu ochii i pielea. Se lucreaz cu mnui din nitril i protecie ocular. n cazul contactului cu ochii se spal imediat cu ap i se solicit asisten medical. n cazul contactului cu pielea, se ndeprteaz mbrcmintea contaminat i se terge zona contaminat cu glicerol, polietilen glicol 300 sau un amestec de polietilen glicol lichid (70%) i spirt metilat (30%) i apoi se cltete cu ap.
SUBSTANE CHIMICE Punctul de aprindere 50C. Se lucreaz purtnd haine de protecie de tipul orului de cauciuc, mnuilor din cauciuc sau plastic i ochelari de protecie chimic n nia de protecie chimic sau n spaii bine ventilate. Poate reaciona viguros cu oxidanii, cu nitrometanul formnd produi explozivi ; cu acidul clorhidric formnd bis(clormetil) eter, un puternic carcinogen.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Formaldehida soluie (37-41% formaldehid cu 11-14% metanol)
Lichid incolor cu miros neptor; punct erbere 96C; miscibil cu apa.
HCHO
Iritant puternic pentru ochi i piele; iritant al tractului respirator. Expunerea prelungit la vapori poate cauza simptome de tip astmatiform, conjunctivit, laringit, bronit sau bronhopneumonie. Contactul cu pielea poate cauza sensibilizare. Posibil risc de afectare ireversibil a strii de sntate. Posibil carcinogen. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau spaii bine ventilate, cu mnui din cauciuc sau plastic i protecie ocular. Poate reaciona oxidanii. viguros cu
Soluia concentrat de formaldehid devine tulbure dac este stocat sub 21C i trebuie stocat la 21-25C. Soluia diluat (1-5%) i soluia de concentraie medie (5-25%) pstreaz multe dintre pericolele formei concentrate. Este livrat frecvent sub form de soluie apoas n diferite concentraii, adiionat cu stabilizatori pentru creterea stabilitii.
140
Foarte inamabil ; limite explozibile 4,3-46%. Se lucreaz cu ventilaie cu exhaustare local. Se poart ochelari de protecie sau protecie ocular combinat cu protecie respiratorie.
Glutaraldehida Soluie incolor sau galben pal, cu miros OHC(CH2)3CHO neptor ; punct topire -14C, punct erbere 189C ; miscibil cu apa.
Iritant sever pentru ochi i tractul respirator superior ; expunerea prelungit prin inhalare sau contactul cu pielea pot cauza sensibilizare.
Hidrogen sulfurat
Oxidani puternici i acid nitric puternic. Atac multe metale i materiale plastice.
H2S
Gaz incolor cu miros neplcut, puternic, de ou stricate; punct topire -85C, punct erbere -60C.
Poate afecta SNC cauznd cefalee, ameeal, tuse, durere n gt, grea, dispnee, pierderea cunotinei i moarte. Inhalarea poate cauza edem pulmonar. Roea, dureri, arsuri profunde, severe ale ochilor.
Acuitatea olfactiv scade rapid i nu se poate pune baz pe aceasta pentru avertizarea asupra continurii prezenei gazului.
SUBSTANE CHIMICE Atac unele metale (aluminiu, zinc, cositor) n condiii de umezeal.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Hidroxidul de potasiu
KOH
Fulgi, pulbere, pastile sau bare ; punct topire 360C, punct erbere 1320C; foarte solubil n ap. n caz de contact cu ochii, se spal imediat cu ap i se solicit asisten medical ; n caz de contact cu pielea, se spal imediat ; se nltur mbrcmintea contaminat. Se lucreaz cu mnui din cauciuc sau plastic i protecie ocular chiar n cazul soluiilor diluate.
Coroziv pentru tractul respirator, ochi i piele; inhalarea prafului cauzeaz edem pulmonar.
Reacioneaz violent cu acizii, cu nitrobenzenul i cu muli ali detergeni. Elibereaz o cantitate crescut de energie termic cnd se amestec cu apa. Se pstreaz n recipiente nchise etan.
Hidroxidul de sodiu
ANEXA 5
NaOH
Fulgi, pulbere, pastile sau bare ; punct topire 318C, punct erbere 1390C; solubil n ap.
Solid sau soluie concentrat. Inhalarea pulberii afecteaz tractul respirator, pn la edem pulmonar. Coroziv prin ingestie. Soluia diluat este iritant pentru ochi i poate cauza leziuni severe n condiiile unui contact prelungit. Oxidant puternic. Poate elibera gaze toxice prin expunerea la foc.
Nu este combustibil. Contactul cu umezeala sau apa poate genera sucient cldur pentru a aprinde substanele combustibile.
n cazul contactului cu ochii, se cltete imediat i se solicit asisten medical; n cazul contactului cu pielea, se spal imediat cu ap i se ndeprteaz mbrcmintea contaminat. Se lucreaz cu mnui din cauciuc sau plastic i cu protecie ocular chiar n cazul soluiilor diluate.
Elibereaz o cantitate crescut de cldur atunci cnd este amestecat cu apa. Reacioneaz viguros cu amestecul cloroform metanol i cu acizii puternici.
Se stocheaz n recipiente nchise etan, n spaii uscate.
141
n cazul contactului cu ochii se cltete imediat cu ap i se solicit asisten medical; n caz de contact cu pielea, se spal imediat. Se evit inhalarea vaporiilor, se folosete protecie respiratorie. Se manipuleaz n spaii bine ventilate, cu mnui din cauciuc sau plastic i cu protecie pentru ochi.
Hipoclorit de sodiu, soluie (10-14%clor)
Soluie incolor sau galben pal, cu miros de clor ; miscibil cu apa.
NaOCl
Coroziv pentru ochi i piele ; coroziv prin ingestie, pentru tractul respirator ; inhalarea poate cauza edem pulmonar. Expunerea repetat poate cauza sensibilizarea pielii.
Elibereaz gaze foarte toxice n contact cu acizii. Poate reaciona viguros cu produii combustibili i reductori. Poate reaciona cu compui ai azotului formnd compui N-cloro explozivi. Poate reaciona violent cu metanolul.
Pe parcursul stocrii pierde treptat clorul ; soluiile diluate folosite ca dezinfectant se deterioreaz rapid. Se pstreaz la distan de acizi, n spaii ntunecoase, rcoroase, bine ventilate.
SUBSTANE CHIMICE
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Iod
I2
Solid negru albstrui, cristalin, cu miros caracteristic ; punct topire 114C, punct erbere 184C ; practic insolubil n ap. Nu este combustibil. Prin expunere la foc eman gaze iritante sau toxice.
Iritant al ochilor, al tractului respirator i al pielii. Expunerea repetat poate cauza sensibilizarea pielii. Poate afecta tiroida.
Nu este combustibil dar poate stimula combustia altor substane. Multe reacii pot cauza foc sau explozie. Prin expunere la foc eman gaze iritante sau toxice.
Se va evita inhalarea vaporilor i se va evita contactul cu ochii. Se lucreaz cu mnui din nitril.
Reacioneaz violent cu metalele, incluznd aluminiul, potasiul i sodiul i amestecul etanol/fosfor, acetilen i amoniac.
Mercur
Hg (argint viu)
Lichid argintiu greu ; punct topire -39C punct erbere 357C; insolubil n ap.
Poate absorbit prin piele. Expunerea repetat poate afecta rinichii i SNC; poate cauza vrsturi, diaree, cefalee, grea, inamarea gingiilor, cderea dinilor.
Se pstreaz n recipiente bine nchise. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau n spaii bine ventilate. Se vor preveni stropirile. Se poart mnui din nitril.
Acetilena, acidul fulminic. Reacioneaz cu amoniacul, azidele i oxidul de etilen, pentru a forma produi explozivi. Reacioneaz violent cu bromul. Formeaz amalgamuri cu multe metale.
142
Deosebit de inamabil ; punct de aprindere -16C, intervalul inamabil 7-37% . Se pstreaz n recipiente bine nchise, la distan de orice surs de foc. Se evit inhalarea vaporilor i contactul cu pielea. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau n spaii bine ventilate, cu mnui din cauciuc sau plastic i protecie ocular.
Recipientele se stocheaz i se manipuleaz pe tvi de siguran pentru a preveni stropirile; picturile rspndite se absorb ntr-un acon de aspirare cu un tub capilar i conectat cu o pomp de vid; suprafeele stropite se trateaz cu praf de zinc pentru a forma un amalgam.
Metanol
CH3OH
Lichid incolor, volatil, cu miros caracteristic ; punct topire -98C punct erbere 65C; miscibil cu apa.
Afecteaz SNC, determinnd pierderea cunotinei ; iritant pentru mucoase. Expunerea cronic poate leza retina i nervul optic. Contactul prelungit cu tegumentele poate cauza dermatita. Poate absorbit prin piele.
Poate reaciona viguros cu oxidanii. Reaciile cu magneziul sau bromul pot violente, iar cele cu oxidani puternici, cloroform sau sodiu pot explozive.
SUBSTANE CHIMICE INCOMPATIBILITI CHIMICE Utilizarea sa este interzis sau controlat legal n multe ri. ALTE PERICOLE Combustibil Se evit orice fel de expunere ; se manipuleaz purtnd mbrcminte de protecie, n nia de protecie chimic sau sub hot sau cu ventilaie de exhaustare .
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
Naftilamina ( si )
C10H9N N-fenil naftilamina i N-fenil-naftilamina
Cristale de la alb la roz, cu miros caracteristic ; : punct topire 50C, punct erbere 301C; : punct topire 113C, punct erbere 305C; putin solubil n ap, dar hidroclorura este solubil n ap.
Ambele forme sunt foarte toxice dac sunt inhalate, ingerate sau vin n contact cu pielea. Carcinogen pentru om, producnd cancer de vezicul biliar. Experimental, este mutagen i teratogen. Se absoarbe prin piele.
Ninhidrina
ANEXA 5
C9H6O4
Substan solid galben-pal, ce se descompune nainte de topire la 121C. Livrat n recipiente de tip spray 0,5% soluie n butanol ; solubil n ap. Nu este combustibil dar stimuleaz combustia altor substane. Se va evita dispersia pulberilor. Se respect strict regulile de igien. Se manipuleaz cu mnui din cauciuc sau plastic i scut transparent pentru fa sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie. n caz de contact cu ochii, se spal cu ap i se solicit asisten medical.
Vtmtor prin ingestie i inhalare. Iritant pentru ochi, sistemul respirator i piele. Expunerea repetat poate cauza sensibilizarea pielii.
Inamabil, combustibil solid; punct de aprindere 39C.
Se evit inhalarea spray-ului sau vaporilor i contactul cu ochii. Se manipuleaz cu mnui din cauciuc sau plastic i ochelari de protecie chimic.
Contactul cu pielea determin apariia unei culori violete persistente.
143
Nitrat de argint Cristale albe ; punct topire 212C, punct erbere 444C; AgNO3 solubil n ap.
Poate cauza iritaii severe i arsuri ale ochilor i pielii. Coroziv prin ingestie. Poate cauza colorarea roualbstruie a pielii n cazul expunerii prelungite sau repetate (argiria).
Soluiile amoniacale pot precipita exploziv nitratul de argint n prezena bazelor sau a glucozei. Poate forma compui explozivi cu etanolul i poate cauza polimerizarea exploziv a acrilonitrilului. Poate cauza explozie cu aprindere dac este amestecat cu crbune, magneziu, fosfor sau sulf.
SUBSTANE CHIMICE INCOMPATIBILITI CHIMICE ALTE PERICOLE Combustibil ; risc de foc i explozie ; punct de aprindere 88. Se lucreaz cu ventilaie cu exhaustare local sau protecie respiratorie, cu mnui, mbrcminte i ochelari de protecie.
PROPRIETI FIZICE PERICOLE PENTRU SNTATE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
Nitrobenzen
C6H5NO2
Lichid uleios, galben pal, cu miros caracteristic ; punct topire 6C, punct erbere 211C.
Methemoglobinemie cu cianoz, leziune hepatic; simptomele includ cianoza buzelor sau a unghiilor, cianoza pielii, vertij, grea, vrsturi, astenie, pierderea cunotinei. Se absoarbe prin piele.
Prin combustie genereaz emanaii gazoase corozive, incluznd oxizi de azot. Reacioneaz violent cu oxidanii puternici i agenii reductori, cauznd pericol de foc i explozie. Atac materialele plastice. Formeaz substane sau amestecuri explozive (instabile termic) cu muli compui organici i anorganici.
Oxigen
O2
La concentraie foarte Gaz incolor ridicat, iritant pentru comprimat ; punct topire -218,4C, tractul respirator. punct erbere -183C . Nu este combustibil, dar stimuleaz combustia altor substane. nclzirea crete presiunea n recipiente, cu risc de explozie. Se vor evit acra deschis, sursele de scntei, fumatul, contactul cu substane inamabile.
144
Nu este combustibil, dar stimuleaz combustia altor substane. Multe reacii pot provoca foc sau explozie. Elibereaz gaze toxice prin expunere la foc. Se lucreaz cu exhaustare local a aerului pentru protecie, cu mnui i mbrcminte de protecie, cu scut transparent pentru fa sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie.
Oxidant puternic, reacioneaz cu materialele combustibile i reductoare, cauznd pericol de foc sau explozie. Reacioneaz cu uleiuri, grsimi, hidrogen i lichide, solide i gaze inamabile.
Pentoxid de fosfor
P2O5
Cristale sau pulbere alb, higroscopic ; punct topire 340C, punct de sublimare 360C.
Coroziv pentru ochi, piele, tractul respirator, producnd durere n gt, tuse, senzaie de arsur, dispnee, arsuri ale pielii, durere, vezicule, arsuri oculare. Inhalarea poate cauza edem pulmonar. Ingestia poate cauza crampe abdominale, senzaie de arsur, diaree, disfagii, vrsturi.
Soluia apoas este un acid puternic ; reacioneaz violent cu bazele i este coroziv. Reacioneaz violent cu acidul percloric, cauznd pericol de foc i explozie. Reacioneaz violent cu apa formnd acid fosforic. Atac multe metale n prezena apei.
SUBSTANE CHIMICE INCOMPATIBILITI CHIMICE ALTE PERICOLE Agent oxidant puternic; poate aprinde materialele combustibile. Se lucreaz purtnd mbrcminte de protecie, protecie ocular i ltru respirator dac se produce praf.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
Permanganat de potasiu
KMnO4
Cristal purpuriu ; punct topire 240C (se descompune). Se dizolv uor n ap. Agent oxidant ; contactul cu materiale combustibile poate provoca foc. n cazul contactului cu pielea, se spal din abunden cu ap. Dac concentraia depete 20% se impune protecie cu mnui din nitril i protecie ocular.
Coroziv dac este nghiit sau dac praful este inhalat. Deosebit de iritant pentru ochi i tractul respirator, inhalarea prafului poate cauza edem pulmonar.
Reacioneaz violent sau exploziv dac este amestecat cu o larg varietate de compui anorganici sau organici sau cu pulberi de metale.
Peroxid de hidrogen
H2O2
Lichid incolor ; punct topire -39C (70%), punct erbere 125C (70%); miscibil cu apa ; este furnizat sub form de soluie concentrat n variate concentraii.
Coroziv la concentraii mari (60%), precum i la concentraii sczute (6%) n cazul contactului prelungit cu pielea. Soluiile diluate sunt iritante pentru ochi, tractul respirator i piele.
Reacioneaz viguros cu o gam variat de substane chimice, incluznd oxidani i baze. Atac majoritatea metalelor i srurile acestora, lichidele inamabile i alte materiale combustibile (hrtie, textile), aniline i nitrometan.
ANEXA 5
145
Deosebit de inamabil ; punct de aprindere 20C, limitele explozibile 1,812,4%. Produce gaze iritante sau toxice prin expunere la foc. Vaporii/amestecurile sunt explozibile. Se lucreaz cu ventilaie cu exhaustare local sau cu protecie respiratorie; cu mnui i mbrcminte de protecie.
Se poate descompune genernd oxigen liber, determinnd creterea presiunii n container. Se pstreaz n locuri ntunecoase i reci. Nu se folosesc recipiente sau echipamente din metal, ex. bronz, cupru, er. Reacioneaz violent cu oxidanii puternici i acizii tari.
Piridina
C5H5N
Lichid incolor, cu miros caracteristic ; punct topire 42C, punct erbere 115C.
Afecteaz SNC determinnd ameeal, cefalee, grea, dispnee, pierderea cunotinei. Poate absorbit prin piele cauznd roea i senzaie de arsur. Ingestia determin dureri abdominale, diaree, vrsturi, astenie. Expunerea repetat afecteaz catul i rinichii.
SUBSTANE CHIMICE Poate reaciona viguros cu oxidani, pentru a forma peroxizi instabili n cazul expunerii prelungite la aer i lumin.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Propan-2-ol
(CH3)2CHOH izopropanol
Lichid incolor cu miros alcoolic ; punct topire -89C, punct erbere 82C; miscibil cu apa. Foarte inamabil ; punct de aprindere 112C, interval inamabil 2,3-12,7% . Se pstreaz n recipiente nchise etan, la distan de sursele de foc. Se lucreaz n nia de protecie chimic, cu mnui din nitril i protecie ocular.
Iritant pentru ochi i tractul respirator. Poate afecta SNC cauznd cefalee, ameeal, grea, vrsturi i com.
Soluia apoas 70-85% de propan-2-ol, utilizat ca spray dezinfectant, rmne un pericol de incendiu i nu trebuie utilizat n vecintatea surselor de foc.
Seleniu
Se
Solid inodor n diferite forme, solid amorf cafeniurocat nchis pn la negru albstrui sau cristale roii transparente sau cristale gri metalizat pn la negru ; punct topire 170 - 217C, punct erbere 685C. Se manipuleaz purtnd mbrcminte de protecie.
Iritant pentru piele i ochi. Inhalarea prafului poate cauza edem pulmonar. Expunerea repetat poate cauza cderea unghiilor, afectare gastrointestinal.
Combustibil. Produce gaze iritante sau toxice prin expunere la foc.
146
Se va evita dispersia pulberii. Se urmrete respectarea strict a igienei. Se lucreaz cu ventilaie cu exhaustare local, cu mnui, mbrcminte i ochelari de protecie.
Reacioneaz violent cu oxidanii i acizii puternici. Reacioneaz cu apa la 50C formnd hidrogen i acid selenios inamabile. Reacioneaz cu incandescen dup o nclzire uoar n contact cu fosforul i metale precum nichelul, potasiul, platina, sodiul i zincul.
Telurit de potasiu
Cristale albe, foarte Toxic prin ingestie sau solubile n ap. inhalarea de praf. Iritant pentru piele i ochi.
K2TeO3
SUBSTANE CHIMICE INCOMPATIBILITI CHIMICE La contactul cu suprafee erbini sau acr, se descompune formnd vapori i gaze toxice i corozive (acid clorhidric, clor, fosgen). Reacioneaz cu unele metale cum ar aluminiu, magneziu, zinc. ALTE PERICOLE Nu este combustibil. Prin expunere la foc produce vapori sau gaze iritante sau toxice. Se evit orice contact. Se lucreaz cu ventilaie, cu exhaustare local sau protecie respiratorie ; cu mnui din nitril i mbrcminte de protecie, scut transparent pentru fa sau protecia ochilor combinat cu protecie respiratorie.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
Tetraclorura de Lichid incolor cu miros eteric carbon caracteristic ; punct topire -23C, CCl4 punct erbere 76,5C.
Poate absorbit prin piele ; expunerea prelungit poate cauza dermatite. Iritant ocular. Poate cauza leziuni hepatice sau renale, tulburri ale SNC reprezentate de cefalee, grea, icter slab, inapeten i confuzie. Carcinogen pentru animale. Se lucreaz cu ventilaie, cu exhaustarea local a aerului sau cu protecie respiratorie, mnui i ochelari de protecie.
Tetrahidrofuran Lichid incolor cu miros caracteristic ; punct topire -108,5C, C4H8O punct erbere 66C Dietilen oxid
Inhibitor pentru SNC, cauzeaz narcoza. Iritant pentru ochi, piele i tractul respirator.
ANEXA 5
147
Agent oxidant puternic. Nu este combustibil dar stimuleaz combustia altor substane. Se pstreaz containerele bine nchise, n spaii bine ventilate. Forma solid sau soluiile se manipuleaz n nia de protecie chimic sau hot, cu ochelari i mnui de protecie. Prepararea soluiei: se adaug o ol nedesfcut la volumul propus de ap, se astup i se agit puternic pn la spargerea olei.
Tetrametilen oxid
Deosebit de inamabil ; poate forma peroxizi explozivi ; punct de aprindere -14C. Apa poate s nu e ecace n stingerea unui incendiu cu implicarea tetrahidrofuranului, dar poate utilizat pentru a rci recipientele expuse la foc.
Reacioneaz violent cu oxidanii puternici, bazele tari i unele halogenuri ale metalelor, cauznd pericol de foc i explozie. Atac unele forme de plastic, cauciucul i esturile. Tetrahidrofuranul poate polimeriza n prezena inhibitorilor cationici. Contactul cu hidroxid de calciu poate cauza explozie.
Tetraoxid de osmiu
OsO4
Cristale galben pal, cu miros neptor ; punct topire 40C, punct erbere 130C ; sublimeaz sub punctul de erbere ; solubil n ap.
Foarte toxic prin inhalare, ingestie i contact cu pielea, provocnd arsuri i iritaie severe. Sub form de vapori, solid sau n soluie este coroziv pentru piele i tractul respirator. Inhalarea poate cauza edem pulmonar.
SUBSTANE CHIMICE
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Toluen
C7H8 Metilbenzen
Lichid incolor cu miros caracteristic ; punct topire -95C, punct erbere 111C; nu este miscibil cu apa. Foarte inamabil; vaporii pot cauza aprindere ; punct de aprindere 4C, interval inamabil 1,4-7%. Stingerea n cazul focurilor mici se face cu: substane chimice uscate, dioxid de carbon, spum, vapori de ap sau gaz inert (nitrogen). Se evit contactul ; se lucreaz cu protecie ocular i cu mnui. Ageni oxidani. Se pstreaz n recipiente bine Poate reaciona cu acizii tari, alcali nchise, la distan de sursele de i oxidani. aprindere ; Recipientele s e cu mpmntare pentru a preveni acumulrile i descrcrile de electricitate static. Se va evita inhalarea vaporilor; se folosete protecie respiratorie. Se lucreaz n nia de protecie chimic sau n spaii bine ventilate. Se poart mnui din nitril.
Inhibitor pentru SNC. Iritant pentru ochi, mucoase i piele. La om, expunerea repetat poate toxic pentru funcia reproductoare i pentru dezvoltare.
o Toluidina
148
Combustibil n condiii particulare. Se lucreaz cu ventilaie sau cu exhaustare local ; cu mnui, ochelari de siguran sau alte mijloace de protecie a ochilor combinat cu protecie respiratorie.
(C6H3-(3CH3)(4NH2)) 2 3,3 - Dimetil(1,1 - bifenil) 4,4 - diamina
Cristale incolore ; punct topire 131C, punct erbere 200C; puin solubil n ap.
Vtmtoare prin contact cu pielea sau prin ingestie. Pulberea irit tractul respirator i ochii. Probabil carcinogen uman.
Combustibil. Elibereaz gaze iritante sau toxice prin expunere la foc.
Tricloretilen
CHClCCl2
Lichid incolor, cu miros caracteristic ; punct topire -73C, punct erbere 87C.
Iritant pentru ochi, piele; expunerea prelungit poate cauza dermatit i poate afecta SNC conducnd la pierderea memoriei. Poate afecta catul i rinichii. Probabil carcinogen uman.
Se descompune n contact cu suprafee ncinse sau acr, formnd gaze toxice i corozive (fosgen, acid clorhidric). Se descompune n contact cu alcali puternici producnd diclor-acetilena; reacioneaz violent cu pulberi de metale precum aluminiu, bariu, magneziu sau titan; se descompune ncet n prezena luminii i a umezelii, formnd acid clorhidric.
SUBSTANE CHIMICE Se evit contactul cu ochii. Se manipuleaz cu mnui din nitril i protecie ocular. Se stocheaz n recipiente bine nchise, la distan de surse de aprindere. Poate conine etil-benzen ca impuritate. Etilbenzenul este un posibil carcinogen uman.
PROPRIETI FIZICE
PERICOLE DE FOC
PRECAUII DE SIGURAN
ALTE PERICOLE
Xilen (izomeri mixti)
Lichid incolor cu miros aromatic ; punct topire -95C la -13C, C6H4(CH3)2 punct erbere 136 Dimetil-benzen - 145C ; insolubil n ap.
ANEXA 5
149
Lichid inamabil ; Poate afecta SNC, conducnd la cefalee, Punct de aprindere ameeal, astenie 27-32C. i grea. Lichidul i vaporii irit ochii, pielea, mucoasele i tractul respirator. Vtmtor i prin ingestie. Degreseaz pielea prin contact prelungit. Afectare neurologic nespecic. Expunerea poate amplica pierderea de auz cauzat de expunerea la zgomote. Teste pe animale sugereaz toxicitate pentru funcia reproductiv uman i pentru cretere.
150
ANEXA 6
Anexa 6
Clasicarea agenilor biologici

Clasicarea este conform Anexei III (Clasicarea Comunitii) din Directiva 2000/54/CE a Parlamentului European i Consiliului din data de 18 Septembrie 2000, referitoare la protejarea lucrtorilor mpotriva riscurilor presupuse de expunerea la ageni biologici la locul de munc. Note introductive 1. n clasicare sunt introdui doar agenii care sunt cunoscui a infecta inele umane. Acolo unde este cazul, sunt furnizate indicaii asupra potenialului toxic i alergic al acestor ageni. Agenii patogeni pentru animale i plante cunoscui c nu afecteaz omul sunt exclui. La stabilirea acestei liste de ageni biologici nu au fost luate n considerare microorganismele modicate genetic. 2. Lista agenilor clasicai se bazeaz pe efectul acestor ageni asupra lucrtorilor sntoi. Efectele particulare asupra celor a cror sensibilitate ar putea modicat dintr-un motiv sau altul, cum ar patologia preexistent, administrarea de medicamente, imunitate compromis, sarcin sau alptare nu sunt luate n considerare n mod specic. Riscul suplimentar la care sunt expui aceti lucrtori trebuie luat n considerare n evaluarea riscului cerut de Directiv (52). Msurile tehnice de precauie luate n cadrul anumitor procese industriale, anumitor lucrri de laborator sau anumitor activiti cu animale care implic expunerea efectiv sau potenial la ageni biologici din grupele 3 sau 4, trebuie s e n conformitate cu Articolul 16 al Directivei. 3. Agenii biologici ce nu au fost clasicai n grupele 2 - 4 nu sunt inclui implicit n grupa 1. n cazul agenilor cu mai multe specii cunoscute ca patogene pentru om, lista va include speciile cel mai frecvent cauzatoare de mbolnviri i o referire de ordin mai general la faptul c i alte specii ale aceluiai gen pot afecta sntatea. Cnd n clasicarea agenilor biologici se menioneaz un gen ntreg, se subnelege c speciile i tulpinile care sunt non-patogene au fost excluse. 4. Atunci cnd o tulpin este atenuat sau i-a pierdut genele de virulen, securizarea cerut prin clasicarea tulpinii parentale nu trebuie aplicat n mod necesar, sub rezerva evalurii corespunztoare a riscului la locul de munc. Acesta este cazul, de exemplu, cnd o astfel de tulpin este utilizat ca un produs sau parte a unui produs n scopuri prolactice sau terapeutice. 5. Nomenclatura agenilor clasicai utilizat pentru a ntocmi aceasta list reect i este n conformitate cu cele mai recente acorduri internaionale privind taxonomia si nomenclatura agenilor n vigoare n momentul ntocmirii sale. 6. Lista agenilor biologici clasicai reect nivelul cunotinelor la momentul ntocmirii sale. Ea va reactualizat imediat ce nu va mai reecta cel mai recent nivel al cunotinelor. 7. Toate virusurile care au fost deja izolate la om i care nu au fost evaluate i incluse n aceasta anex vor clasicate cel puin la grupa 2, cu excepia cazurilor n care se dovedete c este improbabil aceste virusuri s provoace boli la om. 8. Anumii ageni biologici clasicai n grupa 3 i care sunt marcai n lista alturat cu dou asteriscuri (**), pot prezenta un risc limitat de infecie pentru lucrtori, ntruct n mod obinuit ei nu sunt infecioi pe cale aerogen. 151
Se vor evalua msurile de securizare ce vor aplicate acestor ageni, innd cont de natura activitilor specice implicate i de cantitatea agenilor respectivi, determinndu-se dac, n anumite circumstane particulare, se poate renuna la unele din aceste msuri. 9. Cerinele de securizare care decurg din clasicarea paraziilor se vor aplica numai la stadiile din ciclul de via al parazitului care pot infecioase pentru om la locul de munc. 10. Aceasta list conine, de asemenea, indicaii separate pentru agenii biologici care pot provoca reacii alergice sau toxice, atunci cnd este disponibil un vaccin ecace sau cnd se recomand ca lista lucrtorilor expui s e pstrat mai mult de 10 ani. Aceste indicaii sunt ilustrate prin urmtoarele litere: A: Posibile reacii alergice D: Lista lucrtorilor expui la acest agent biologic trebuie pstrat mai mult de 10 ani de la ncetarea ultimei expuneri cunoscute T: Producerea de toxine V: Vaccin ecace disponibil Efectuarea vaccinrii preventive trebuie s respecte codul de practic menionat n Anexa VII a Directivei. BACTERII i organisme similare NB: Pentru agenii biologici din list, meniunea spp indic i alte specii cunoscute ca patogene pentru om. Agent biologic Clasicare Actinobacillus actinomycetemcomitans 2 Actinomadura madurae 2 2 Actinomadura pelletieri Actinomyces gerencseriae 2 Actinomycesis israelii 2 2 Actinomyces pyogenes Actinomyces spp. 2 Arcanobacterium haemolyticum (Corynebacterium haemolyticum) 2 Bacillus anthracis 3 Bacteroides fragilis 2 2 Bartonella bacillifonnis Bartonella quintana (Rochalimaea quintana) 2 Bartonella (Rochalimaea) spp. 2 Bordetella bronchiseptica 2 Bordetella parapertussis 2 Bordetella pertussis 2 Borrelia burgdorferi 2 2 Borrelia duttonii Borrelia recurrentis 2 Borrelia spp. 2 3 Brucella abortus Brucella canis 3 3 Brucella melitensis Brucella suis 3 152 Observaii
ANEXA 6
Burkholderia mallei (Pseudomonas mallei) Burkholderia pseudomallei (Pseudomonas pseudomallei) Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Campylobacter spp. Cardiobacterium hominis Chlamydia pneumoniae Chlamydia trachomatis Chlamydia psittaci (tulpini aviare) Chlamydia psittaci (alte tulpini) Clostridium botulinum Clostridium perfringens Clostridium tetani Clostridium spp. Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium minutissimum Corynebacterium pseudotuberculosis Corynebacterium spp. Coxiella burnetii Edwardsiella tarda Ehrlichia sennetsu (Rickettsia sennetsu) Ehrlichia spp. Eikenella corrodens Enterobacter aerogenes/cloacae Enterobacter spp. Enterococcus spp. Erysipelothrix rhusiopathiae Escherichia coli (cu excepia tulpinilor nepatogene) Escherichia coli, tulpinile verocitotoxigene (de ex. O157:H7 sau O103) Flavobacterium meningosepticum Fluoribacter bozemanae (Legionella) Francisella tularensis (Tip A) Francisella tularensis (Tipe B) Fusobacterium necrophorum Gardnerella vaginalis Haemophilus ducreyi Haemophilus inuenzae Haemophilus spp. Helicobacter pylori Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae Klebsiella spp. Legionella pneumophila Legionella spp. Leptospira interrogans (toate serotipurile) Listeria monocytogenes Listeria ivanovii Morganella morganii 153
3 3 2 2 2 2 2 2 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3(**) 2 2 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
T T, V T, V
Mycobacterium africanum Mycobacterium avium/intracellulare Mycobacterium bovis (exceptnd tulpina BCG) Mycobacterium chelonae Mycobacterium fortuitum Mycobacterium kansasii Mycobacterium leprae Mycobacterium malmoense Mycobacterium marinum Mycobacterium microti Mycobacterium paratuberculosis Mycobacterium scrofulaceum Mycobacterium simiae Mycobacterium szulgai Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium ulcerans Mycobacterium xenopi Mycoplasma caviae Mycoplasma hominis Mycoplasma pneumoniae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Nocardia asteroides Nocardia brasiliensis Nocardia farcinica Nocardia nova Nocardia otitidiscaviarum Pasteurella multocida Pasteurella spp. Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Porphyromonas spp. Prevotella spp. Proteus mirabilis Proteus penneri Proteus vulgaris Providencia alcalifaciens Providencia rettgeri Providencia spp. Pseudomonas aeruginosa Rhodococcus equi Rickettsia akari Rickettsia canada Rickettsia conorii Rickettsia montana Rickettsia typhi (Rickettsia mooseri) Rickettsia prowazekii Rickettsia rickettsii Rickettsia tsutsugamushi 154
3 2 3 2 2 2 3 2 2 3(**) 2 2 2 2 3 3(**) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3(**) 3(**) 3 3(**) 3 3 3 3
V V
ANEXA 6
Rickettsia spp. Salmonella arizonae Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium Salmonella paratyphi A, B, C Salmonella typhi Salmonella (alte serotipuri) Serpulina spp. Shigella boydii Shigella dysenteriae (Tip 1) Shigella dysenteriae, altele dect Tip 1 Shigella exneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Streptobacillus moniliformis Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Streptococcus suis Streptococcus spp. Treponema carateum Treponema pallidum Treponema pertenue Treponema spp. Vibrio cholerae (inclusiv El Tor) Vibrio parahaemolyticus Vibrio spp. Yersinia enterocolitica Yersinia pestis Yersinia pseudotuberculosis Yersinia spp. (**) Vezi paragraful 8 al notelor introductive. Agent biologic Adenoviridae Arenaviridae Complexul LCM-Lassa virus (arena virusuri ale lumii vechi): Virusul Lassa Virusul coriomeningitei limfocitare (tulpini neurotrope) Virusul coriomeningitei limfocitare (alte tulpini) Virusul Mopeia Alte virusuri ai complexului LCM-Lassa Complexul Tacaribe-Virus (arena virusuri ale lumii noi): Virusul Guanarito Virusul Junin Virusul Sabia Virusul Machupo Virusul Flexal Alte virusuri ale complexului Tacaribe 155
2 2 2 2 2 3(**) 2 2 2 3 (**) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 2 2 VIRUSURI (*) Clasicare 2 4 3 2 2 2 4 4 4 4 3 2
V V
Observaii
Astroviridae Bunyaviridae Belgrade (cunoscut i ca Dobrava) Bhanja Virusul Bunyamwera Germiston Virusul Oropouche Sin Nombre (fostul Muerto Canyon) Virusul encefalitei de California Hantavirusuri: Hantaan (febra hemoragic de Coreea) Virusul Seoul Virusul Puumala Virusul Prospect Hill Alte hantavirusuri Nairovirusuri: Virusul febrei hemoragice de Crimeea-Congo Virusul Hazara Flebovirusuri: Febra Valley Rift Febra mutei-de-nisip Virusul Toscana Alte bunyaviridae cunoscute ca ind patogene Caliciviridae Virusul Hepatitei E Virusul Norwalk Alte Caliciviridae Coronaviridae Filoviridae Virusul Ebola Virusul Marburg Flaviviridae Encefalita de Australia (Encefalita Murray Valley) Virusul encefalitei Central-Europene transmis prin cpu Absettarov Hanzalova Hypr Kumlinge Virusul Dengue tip 1-4 Virusul Hepatitei C Virusul Hepatitei G Virusul encefalitei japoneze B Kyasanur Forest Louping ill Omsk (a) Powassan Rocio Encefalita de primvar-var rus (TBE) (a) 156
2 3 2 2 2 3 3 2 3 3 2 2 2 4 2 3 2 2 2 3(**) 2 2 2 4 4 3 3 (**) 3 3 3 3 3 3(**) 3(**) 3 3 3(**) 3 3 3 3 V V
D D V V V V
ANEXA 6
Encefalita de St Louis Virusul Wesselsbron Virusul febrei West Nile Febra galben Alte avivirusuri cunoscute ca ind patogene Hepadnaviridae Virusul Hepatitei B Virusul Hepatitei D (Delta) (b) Herpesviridae Citomegalovirus Virusul Epstein-Barr Herpesvirus simiae (Virusul B) Virusul Herpes simplex, tipurile 1 i 2 Herpesvirus varicella-zoster Virusul limfotrop B uman (HBLV-HHV6) Virusul herpes uman 7 Virusul herpes uman 8 Orthomyxoviridae Virusurile gripale tip A, B i C Orthomyxoviridae transmise prin capu: Dhori i Thogoto Papovaviridae Virusurile BK i JC Papillomavirusuri umane Paramyxoviridae Virusul pojarului Virusul oreionului Virusul bolii Newcastle Virusurile paragripale tipurile 1 - 4 Virusul respirator sinciial Parvoviridae Parvovirusul uman (B 19) Picornaviridae Virusul conjuctivitei hemoragice acute (AHC) Virusul Coxsackie Echo virusuri Virusul Hepatitei A (enterovirusul uman tip 72) Poliovirusuri Rinovirusuri Poxviridae Virusul Buffalopox (e) Virusul variolei taurinelor Virusul Elephantpox (f) Virusul Milkers node Molluscum contagiosum virus Virusul Monkeypox Virusul Orf 2 Virusul Rabbitpox (g) Virusul Vaccinia Virusul variolei (major i minor) 157
3 3(**) 3 3 2 3(**) 3(**) 2 2 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 2 2 4
V V, D V, D
D V(c) D(d) D(d) V V
V V
Virusul Whitepox (Variola virus) Virusul Yatapox (Tana & Yaba) Reoviridae Coltivirus Rotavirusuri umane Orbivirusi Reuvirusi Retroviridae Virusurile imunodecienei umane Virusurile limfotropice ale celulelor T umane (HTLV), tipurile 1 i 2 SIV (h) Rhabdoviridae Virusul rabic Virusul stomatitei veziculare Togaviridae Alfavirusuri Encefalomielita equin estic Virusul Bebaru Virusul Chikungunya Virusul Everglades Virusul Mayaro Virusul Mucambo Virusul Ndumu Virusul Onyong-nyong Virusul Ross River Virusul Semliki Forest Virusul Sindbis Virusul Tonate Encefalomielita equin venezuelean Encefalomielita equin vestic Alte alfavirusuri cunoscute Rubivirus (rubeola) Toroviridae Virusuri neclasicate Virusul pojarului equin Virusuri hepatitice nc neidenticate Ageni neconvenionali asociai cu encefalopatiile spongiforme transmisibile (TSEs) Boala Creutzfeldt-Jakob Varianta bolii Creutzfeldt-Jakob Encefalopatia spongiforma bovin (BSE) i alte encefalopatii spongiforme transmisibile (i) Sindromul Gerstmann-Strussler-Scheinker Kuru (*) Vezi paragraful 7 al notelor introductive. (**) Vezi paragraful 8 al notelor introductive. (a) Encefalita transmis de cpu. 158
4 2 2 2 2 2 3(**) 3(**) 3(**) 3(**) 2 3 2 3(**) 3(**) 3 3(**) 3 2 2 2 2 3(**) 3 3 2 2 2 4 3(**) 3(**) 3(**) 3(**) 3(**) 3(**)
D D V
V V V
D D(d) D(d) D(d) D(d) D(d)
ANEXA 6
(b) Virusul hepatitei D reprezint un agent patogen pentru lucrtori doar n prezena unei infecii simultane sau secundare cauzat de virusul hepatitei B. Vaccinarea contra virusului hepatitei B va proteja deci lucrtorii care nu sunt afectai de virusul hepatitei B, mpotriva virusului hepatitei D (Delta). (c) Numai pentru tipurile A i B. (d) Recomandat pentru activitile care implic contactul direct cu aceti ageni . (e) Sunt identicate dou virusuri: unul de tip buffalopox iar cellalt o variant a virusului Vaccinia. (f) Variant a virusului cowpox. (g) Varianta a virusului Vaccinia. (h) n prezent, nu exist dovezi de boal la om provocat de alte retrovirusuri de origine simian. Ca msur de precauie, pentru activitile cu risc de expunere la acetia, se recomand securizare de nivel 3. (i) Nu exist dovezi de infecii provocate la om de ageni responsabili pentru alte encefalopatii spongiforme transmisibile animale. Cu toate acestea, ca msur de precauie pentru lucrrile de laborator, se recomand msuri de securizare pentru agenii inclui n grupa de risc 3 (**), cu excepia lucrrilor de laborator care implic un agent scrapie pentru care nivelul de securizare 2 este sucient. Agent biologic Acanthamoeba castellani Ancylostoma duodenale Angiostrongylus cantonensis Angiostrongylus costaricensis Ascaris lumbricoides Ascaris suum Babesia divergens Babesia microti Balantidium coli Brugia malayi Brugia pahangi Capillaria philippinensis Capillaria spp. Clonorchis sinensis Clonorchis viverrini Cryptosporidium parvum Cryptosporidium spp. Cyclospora cayetanensis Dipetalonema streptocerca Diphyllobothrium latum Dracunculus medinensis Echinococcus granulosus Echinococcus multilocularis Echinococcus vogeli Entamoeba histolytica Fasciola gigantica Fasciola hepatica Fasciolopsis buski Giardia lamblia (Giardia intestinalis) Hymenolepis diminuta Hymenolepis nana PARAZII Clasicare 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3(**) 3(**) 3(**) 2 2 2 2 2 2 2 Observaii
A A
159
Leishmania brasiliensis Leishmania donovani Leishmania ethiopica Leishmania mexicana Leishmania peruviana Leishmania tropica Leishmania major Leishmania spp. Loa loa Mansonella ozzardi Mansonella perstans Naegleria fowleri Necator americanus Onchocerca volvulus Opisthorchis felineus Opisthorchis spp. Paragonimuswes termani Plasmodium falciparum Plasmodium spp. (human and simian) Sarcocystis suihominis Schistosoma haematobium Schistosoma intercalatum Schistosoma japonicum Schistosoma mansoni Schistosoma mekongi Strongyloides stercoralis Strongyloides spp. Taenia saginata Taenia solium Toxocara canis Toxoplasma gondii Trichinella spiralis Trichuris trichiura Trypanosoma brucei brucei Trypanosoma brucei gambiense Trypanosoma brucei rhodesiense Trypanosoma cruzi Wuchereria bancrofti (**) Vezi paragraful 8 al notelor introductive. Agent biologic Aspergillus fumigatus Blastomyces dermatitidis (Ajellomyces dermatitidis ) Candida albicans Candida tropicalis Cladophialophora bantiana (fosta: Xylohypha bantiana, Cladosporium bantianum sau trichoides) Coccidioides imitis 160 FUNGI
3(**) 3(**) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 2 2 2 2 2 3(**) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3(**) 2 2 2 2 2 2 3(**) 3 2
Clasicare 2 3 2 2 3 3
Observaii A A
ANEXA 6
Cryptococcus neoformans var. neoformans (Filobasidiella neoformans var. neoformans) Cryptococcus neoformans var. gattii (Filobasidiella bacillispora) Emmonsia parva var. parva Emmonsia parva var. crescens Epidermophyton occosum Fonsecaea compacta Fonsecaea pedrosoi Histoplasma capsulatum var. capsulatum (Ajellomyces capsulatus) Histoplasma capsulatum duboisii Madurella grisea Madurella mycetomatis Microsporum spp. Neotestudina rosatii Paracoccidioides brasiliensis Penicillium marneffei Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii) Scedosporium prolicans (inatum) Sporothrix schenckii Trichophyton rubrum Trichophyton spp.
2 2 2 2 2 2 2 3 3 2 2 2 2 3 2 2 2 2 2 2
A A A
A A
161
162
BIBLIOGRAFIE
Bibliograe
1. Safety in health-care laboratories. Geneva, World Health Organization, 1997, (http://whqlibdoc.who. int/hq/1997/WHO_LAB_97.1.pdf). 2. Garner JS, Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Guideline for isolation precautions in hospitals. American Journal of Infection Control, 1996, 24:2452, (http://www.cdc.gov/ncidod/hip/ isolat/isolat.htm). 3. Hunt GJ, Tabachnick WJ. Handling small arbovirus vectors safely during biosafety level 3 containment: Culicoides variipennis sonorensis (Diptera: Ceratopogonidae) and exotic bluetongue viruses. Journal of Medical Entomology, 1996, 33:271277. 4. National Research Council. Occupational health and safety in the care and use of research animals. Washington, DC, National Academy Press, 1997. 5. Richmond JY, Quimby F. Considerations for working safely with infectious disease agents in research animals. In: Zak O, Sande MA, eds. Handbook of animal models of infection. London, Academic Press, 1999:6974. 6. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 4th ed. Washington, DC, United States Department of Health and Human Services/Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, 1999. 7. Class II (laminar ow) biohazard cabinetry. Ann Arbor, MI, National Sanitation Foundation,2002 (NSF/ ANSI 492002). 8. Richmond JY, McKinney RW. Primary containment for biohazards: selection, installation and use of biological safety cabinets, 2nd ed. Washington, DC, United States Department of Health and Human Services/Centers for Disease Control and Prevention/National Institutes of Health, 2000. 9. Microbiological safety cabinets. Recommendations for information to be exchanged between purchaser, vendor and installer and recommendations for installation. London, British Standards Institution, 1992 (Standard BS 57262:1992). 10. Microbiological safety cabinets. Recommendations for selection, use and maintenance. London, British Standards Institution, 1992 (Standard BS 57264:1992). 11. Biological containment cabinets (Class I and II): installation and eld testing. Toronto, Canadian Standards Association, 1995 (Standard Z316.395 (R2000)). 12. Collins CH, Kennedy DA. Laboratory acquired infections: history, incidence, causes and prevention, 4th ed. Oxford, Butterworth-Heinemann, 1999. 13. Health Canada. Laboratory biosafety manual, 2nd ed. Ottawa, Minister of Supply and Services Canada, 1996. 14. Biological safety cabinets biological safety cabinets (Class I) for personnel and environment protection. Sydney, Standards Australia International, 1994 (Standard AS 2252.11994). 15. Biological safety cabinets laminar ow biological safety cabinets (Class II) for personnel, environment and product protection. Sydney, Standards Australia International, 1994 (Standard AS 2252.21994). 16. Standards Australia/Standards New Zealand. Biological safety cabinets installation and use. Sydney, Standards Australia International, 2000 (Standard AS/NZS 2647:2000). 17. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. Guidance on the use, testing and maintenance of laboratory and animal exible lm isolators. London, Health and Safety Executive, 1990. 163
18. Standards Australia/Standards New Zealand. Safety in laboratories microbiological aspects and containment facilities. Sydney, Standards Australia International, 2002 (Standard AS/NZS 2243.3:2002). 19. Centers for Disease Control and Prevention. Recommendations for prevention of HIV transmission in health-care settings. Morbidity and Mortality Weekly Report, 1987, 36 (Suppl. 2):1S18S. 20. Bosque PJ et al. Prions in skeletal muscle. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2002, 99:38123817. 21. Bartz JC, Kincaid AE, Bessen RA. Rapid prion neuroinvasion following tongue infection. Journal of Virology, 2003, 77:583591. 22. Thomzig A et al. Widespread PrPSc accumulation in muscles of hamsters orally infected with scrapie. EMBO Reports, 2003, 4:530533. 23. Glatzel M et al. Extraneural pathologic prion protein in sporadic Creutzfeld-Jakob disease. New England Journal of Medicine, 2003, 349:18121820. 24. Brown P, Wolff A, Gajdusek DC. A simple and effective method for inactivating virus infectivity in formalin-xed tissue samples from patients with Creutzeld-Jakob disease. Neurology, 1990, 40:887 890. 25. Taylor DM et al. The effect of formic acid on BSE and scrapie infectivity in xed and unxed braintissue. Veterinary Microbiology, 1997, 58:167174. 26. Safar J et al. Prions. In: Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 4th ed. Washington, DC, United States Department of Health and Human Services, 1999:134143. 27. Bellinger-Kawahara C et al. Puried scrapie prions resist inactivation by UV irradiation. Journal of Virology, 1987, 61:159166. 28. Health Services Advisory Committee. Safe working and the prevention of infection in clinical laboratories. London, HSE Books, 1991. 29. Russell AD, Hugo WB, Ayliffe GAJ. Disinfection, preservation and sterilization, 3rd ed. Oxford, Blackwell Scientic, 1999. 30. Ascenzi JM. Handbook of disinfectants and antiseptics. New York, NY, Marcel Dekker, 1996. 31. Block SS. Disinfection, sterilization & preservation, 5th ed. Philadelphia, PA, Lippincott Williams & Wilkins, 2001. 32. Rutala WA. APIC guideline for selection and use of disinfectants. 1994, 1995, and 1996 APIC Guidelines Committee. Association for Professionals in Infection Control and Epidemiology, INC. American Journal of Infection Control, 1996, 24:313342. 33. Sattar SA, Springthorpe VS, Rochon M. A product based on accelerated and stabilized hydrogen peroxide: evidence for broad-spectrum germicidal activity. Canadian Journal of Infection Control, 1998, 13:123130. 34. Schneider PM. Emerging low temperature sterilization technologies. In: Rutala WA, eds. Disinfection & sterilization in health care. Champlain, NY, Polyscience, 1997:7992. 35. Springthorpe VS. New chemical germicides. In: Rutala WA, eds. Disinfection & sterilization in health care. Champlain, NY, Polyscience, 1997:273280. 36. Steelman VM. Activity of sterilization processes and disinfectants against prions. In: Rutala WA, eds. Disinfection & sterilization in health care. Champlain, NY, Polyscience, 1997:255271. 37. Taylor DM. Transmissible degenerative encephalopathies: inactivation of the unconventional causal agents. In: Russell AD, Hugo WB, Ayliffe GAJ, eds. Disinfection, preservation and sterilization, 3rd ed. Oxford, Blackwell Scientic, 1999:222236. 164
BIBLIOGRAFIE
38. Infection control guidelines for hand washing, cleaning, disinfection and sterilization in health care, 2nd ed. Ottawa, Laboratory Centre for Disease Control, Health Canada, 1998. 39. Springthorpe VS, Sattar SA. Chemical disinfection of virus-contaminated surfaces. CRC Critical Reviews in Environmental Control, 1990, 20:169229. 40. Recommendations on the transport of dangerous goods, 13th revised edition, New York and Geneva, United Nations, 2003, (http://www.unece.org/trans/danger/publi/unrec/rev13/ 13les_e.html). 41. Technical instructions for the safe transport of dangerous goods by air, 20032004 Edition. Montreal, International Civil Aviation Organization, 2002. 42. Economic Commission for Europe Inland Transport Committee. Restructured ADR applicable as from 1 January 2003. New York and Geneva, United Nations, 2002, (http://www.unece.org/trans/ danger/publi/adr/adr2003/ContentsE.html). 43. Infectious substances shipping guidelines. Montreal, International Air Transport Association,2003, (http://www.iata.org/ads/issg.htm). 44. Transport of Infectious Substances. Geneva, World Health Organization, 2004, (http://www.who.int/ csr/resources/publications/WHO_CDS_CSR_LYO_2004_9/en/). 45. Berg P et al. Asilomar conference on recombinant DNA molecules. Science, 1975, 188:991994. 46. European Council. Council Directive 98/81/EC of 26 October 1998 amending Directive90/219/EEC on the contained use of genetically modied microorganisms. Ofcial Journal, 1998, L330:1331. 47. OMalley BW Jr et al. Limitations of adenovirus-mediated interleukin-2 gene therapy for oral cancer. Laryngoscope, 1999, 109:389395. 48. World Health Organization. Maintenance and distribution of transgenic mice susceptible to human viruses: memorandum from a WHO meeting. Bulletin of the World Health Organization, 1993, 71:497502. 49. Furr AK. CRC handbook of laboratory safety, 5th ed. Boca Raton, FL, CRC Press, 2000. 50. Lenga RE. The Sigma-Aldrich Library of Chemical Safety Data, 2nd ed. Milwaukee, WI, Aldrich Chemical Company, 1988. 51. Lewis RJ. Saxs dangerous properties of industrial materials, 10th ed. Toronto, John Wiley and Sons, 1999. 52. DIRECTIVE 2000/54/EC of The European Parliament and of The Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC)
165
166

Ghid de Biosiguranta 2005

Caricato da

Informazioni sul documento

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Ghid de Biosiguranta 2005

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

MINISTERUL SNTII

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

Cuvnt nainte la ediia n limba romn

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

De baz - Nivel de nvmnt, biosiguran 1 cercetare

nalt securizat - Nivel de biosiguran 4

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

2. EVALUAREA RISCULUI MICROBIOLOGIC

2. Evaluarea riscului microbiologic

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

3. LABORATOARELE DE BAZ NIVELELE DE BIOSIGURAN 1 I 2

3. Laboratoarele de baz Nivelele de Biosiguran 1 i 2

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

3. LABORATOARELE DE BAZ NIVELELE DE BIOSIGURAN 1 I 2

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

3. LABORATOARELE DE BAZ NIVELELE DE BIOSIGURAN 1 I 2

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

3. LABORATOARELE DE BAZ NIVELELE DE BIOSIGURAN 1 I 2

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

3. LABORATOARELE DE BAZ NIVELELE DE BIOSIGURAN 1 I 2

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

4. LABORATORUL SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 3

4. Laboratorul securizat Nivelul de Biosiguran 3

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

4. LABORATORUL SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 3

Un exemplu de design pentru laboratorul de Nivel de biosiguran 3 este prezentat n Figura 4.

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

A. Faa anterioar a cardului

B. Faa posterioar a cardului

Figura 5. Format recomandat pentru cardul medical de noticare

5. LABORATORUL NALT SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 4

5. Laboratorul nalt securizat Nivelul de Biosiguran 4

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

5. LABORATORUL NALT SECURIZAT NIVELUL DE BIOSIGURAN 4

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

7. RECOMANDRI PENTRU CALIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

7. Recomandri pentru calicarea laboratorului / facilitilor acestuia

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

8. Recomandri pentru certicarea laboratorului/facilitilor acestuia

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

Nume, prenume auditor .................................................................. Semntura ..................................................................

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

Observaii Locaie: Marc: Tip: Serie Nr.:

8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

Data auditului :......................

8. RECOMANDRI PENTRU CERTIFICAREA LABORATORULUI / FACILITILOR ACESTUIA

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

Nume, prenume auditor.............................................. Semntura...................................................................

9. CONCEPTUL DE BIOSECURITATE N LABORATOR

9. Conceptul de biosecuritate n laborator

GHID NAIONAL DE BIOSIGURAN PENTRU LABORATOARELE MEDICALE

10. HOTELE DE SIGURAN BIOLOGIC

10. Hotele de siguran biologic1