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IV UNIDAD
II.
REACTIVOS A UTILIZAR: - Casena al 1% en buffer fosfato 0,1 M pH 8. - Buffer fosfato 0,1 M pH 8. - Solucin de extracto pancretico. - Solucin acuosa de ninhidrina al 0,25% saturada con butanol. - Acido tricloroactico al 10%. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento Armar el siguiente sistema: COMPONENTES (ml) Casena al 1% Buffer fosfato 0.1 M pH 8.0 Solucin de extracto pancretico Agua destilada Pasos: * Mezclar y colocar al bao de agua a 37 C por 30 minutos. * Despus del tiempo de incubado tomar 0,5 ml, de cada uno de los tubos y trasladarlo a otro sistema numerado (I, II, III). * En este nuevo sistema, agregar 1 ml de solucin de ninhidrina. * Mezclar y llevar a un bao de agua hirviendo (franca ebullicin), durante 3 a 5 minutos. * Observa los cambios de color de cada tubo. * Luego a los tubos de incubacin del primer sistema, agregue gota a gota 1 ml de cido tricloroactico al 10% agitando continuamente. * Observe las variaciones que se produce en cada tubo. IV. RESULTADOS Sistema I: I 1 1 1 --II 1 1 --1 III --1 1 1
III.
TUBO I: La ninhidrina evidencia la formacin de aminocidos, debido a esto el tubo I se va a teir ms oscuro, por la presencia de enzima y sustrato. TUBO II: En este tubo slo hay sustrato, as que la protena no se degrada, la ninhidrina lo reconoce con menor intensidad, haciendo que se tia de un color rojo pardo medio. TUBO III. Ausencia de sustrato. No hay reaccin alguna. La tincin es casi transparente.
El cido tricloroactico precipita la protena que no ha sido degrada, es por esto observamos lo siguiente:
TUBO I: Presencia de sustrato y enzima. La protelisis se dio por completo, no quedaron residuos de pptidos por lo que la solucin al entra en contacto con el cido tricloroactico no revela precipitado. TUBO II: Aqu observamos la precipitacin de protena no degradada ya que no hubo enzima que actuara sobre el sustrato. TUBO III: Ausencia de sustrato. El cido tricloroactico no tiene protenas que precipitar.
V. CUESTIONARIO 1. Seale las enzimas digestivas pancreaticas y los sustratos sobre los cuales acta - Lipasa pancretica. Acta sobre los lpidos y su producto son cadenas de cidos grasos y glicerol. - Amilasa pancretica. Rompe el almidn en maltosas. - Tripsina. Degrada los polipptidos en oligopptidos. - Quimiotripsina. Acta sobre los oligopptidos y su producto son dipptidos. 2. Cmo se explica los cambios de color, despus de la reaccin con ninhidrina en un sistema donde se produce la digestin de protenas? La ninhidrina es utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos. Da una coloracin que vara de azul a violeta intenso. La coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido. Indica que hay aminocidos libres hay aminoacidos libres. Por lo tanto en un sistema donde se produce la digestin de protenas correctamente se demostrara la degradacin de la protena debido a que la ninhidrina le dara un color violeta intenso al encontrar la presencia de aminocidos.
3. Qu efecto tiene el cido tricloroacetico sobre las protenas? Qu variaciones se obtienen en un sistema de digestin de protenas, despus de agregar acido tricloroacetico? El cido Tricloroactico es un precipitador de protenas es por esta razn que en un sistema de digestin de protenas correctamente realizado no se
observara variacin debido a que las protenas se habran degradado a aminocidos. En cambio en caso de que no se haya realizado un correcta digestin de protenas el cido tricloroactico precipitara a la protena que no ha sido degradada.