PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI).

SETOR: LAB. DE IMUNOHEMATOLOGIA NMERO: N 003

1 - SINONIMO - Coombs indireto, teste indireto de antiglobinas. 2 - INTRODUO - A pesquisa de anticorpos irregulares, demonstra anticorpos antieritrocitrios irregulares, livres no soro ou plasma de doadores e pacientes, que possam provocar reaes ps-transfusionais. Deve ser realizada tambm no soro de gestantes, como forma de preveno da doena hemoltica do recm nascido. So utilizadas suspenses de hemcias de triagem do grupo sanguneo O, previamente fenotipadas e que apresentam a maioria dos antgenos de importncia na clnica transfusional. 3 - EXECUTANTES: - Tcnico de laboratrio. 4 - INDICAES MDICA DO EXAME - Exame til no pesquisa de anticorpos contra protenas de membrana de eritrcitos (em especial D), em exames pr-transfusionais ou pr-natais. 5 - AMOSTRA - Soro. Plasma obtido do sangue total c/ EDTA. Volume mnimo de 0,5 mL. 6 - METODOLOGIA - Reao de aglutinao 7 - PREPARO DO PACIENTE - Jejum obrigatrio de 8 horas. 8 - MATERIAIS NECESSRIOS: - Estante de metal porta tubos - Pipetas 100l e 2,0mL - Tubos de ensaio 120 x 100 mm - Soluo salina 0,9% - Soro de Coombs 9 - EQUIPAMENTOS - Centrifuga 10 - DESCRIO DO PROCEDIMENTO: a) Em um tubo de ensaio adicionar 100 L de soro da paciente Rh negativo a ser testado, b) Adicionar em seguida 100 L de hemcias O Rh positivas; c) Incubar por 5 minutos a temperatura ambiente; d) Encher o tubo com aproximadamente 2,0mL de soluo salina para retirar excesso de anticorpos no ligados; e) Centrifugar o tubo a 1.000rpm por 2 minutos temperatura ambiente; f) Desprezar o sobrenadante na pia com cuidado para no jogar fora o boto de hemcias; g) Adicionar em seguida 100L de anti-IgG humana (soro de Coombs); h) Centrifugar o tubo a 1.000rpm por 2 minutos temperatura ambiente; i) Para visualizar com maior preciso se houve aglutinao, derramar o sangue centrifugado em uma lmina de microscpio. 11 - CLCULOS - No se aplica 12 - RESULTADOS - Se aglutinar sinal que a paciente tem anticorpos anti-D classe IgG em seu soro que esto de forma perigosa atravessando a placenta e se ligando s hemcias Rh positivas do beb promovendo sua lise e fagocitose. Se no aglutinar, porque no houve sensibilizao da me com este antgeno em gestaes ou transfuses anteriores. VERIFICADO POR: APROVADO POR: Pgina 1 de 3

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13 - AES CORRETIVAS EM CASO DE NO CONFORMIDADES - O soro de Coombs: verificar a sua potncia, pois pode estar diminuda para a captao do anticorpo; alm disso, poder estar inespecfico, contendo uma contaminao para outro anticorpo. Isto acarreta um falso positivo, dependo o anticorpo contaminante. 14 - LIMITAES DO PROCEDIMENTO - Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das antiglobulinas humanas. Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao inadequada, no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos. Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente conservados na temperatura indicada, perdendo a reatividade. Quando o Soro AntiIgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste. - Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer: Quando hemcias com teste de Coombs Direto positivo so usadas durante o procedimento tcnico do teste de Coombs Indireto. Quando so utilizadas amostras de sangue contaminado. Quando for realizada uma centrifugao excessiva. Quando o soro, as hemcias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs) estiverem excessivamente frios, detectando a presena de aglutininas frias. 15- SIGNIFICADO CLNICO - Anticorpos ditos irregulares so aqueles formados por imunizao devido a transfuses, gestao ou ingesto constante de material imunognico, sendo de classe IgG ou IgM. um teste de triagem onde em casos de pesquisa positiva, deve-se identificar a classe e especificidade do anticorpo. O teste emprega um KIT contendo no mnimo duas suspenses de hemcias O (hemcias de triagem), as quais possuem a maioria dos antgenos estudados em rotina de banco de sangue. Havendo presena de anticorpos irregulares no soro a ser testado, estes reagiram com os antgenos correspondentes, presentes nas hemcias de triagem. Anticorpos da classe IgM so normalmente detectados em meio salino e temperatura ambiente, enquanto que anticorpos da classe IgG so detectados atravs da utilizao do soro antiglobulina humana aps a incubao a 37C. Quanto s enzimas proteolticas, sabe-se que modificam os antgenos presentes na membrana eritrocitria, podendo retir-los ou tornlos aglutinveis em suspenses salinas. Os antgenos sensveis ao enzimtica so os dos sistemas MNS Duffy Xga. Os anticorpos cuja reatividade aumentada pela ao de enzimas so os dos sistemas Rh, Kidd, Lewis e P. A ao enzimtica inclui ainda modificaes nas propriedades fsicas da suspenso de hemcias, podendo causar auto-aglutinao sem presena de processos auto-imunes. As tcnicas enzimticas podem ser associadas ao soro anti-gama globulina humana (soro anti IgG) e podem ser utilizadas em tcnicas de 1 ou 2 estgios. Na primeira adiciona-se a enzima diretamente mistura soro + hemcias, sendo mais bem indicada para testes de triagem enquanto que no segundo procedimento as hemcias so previamente tratadas com enzimas e depois misturadas ao soro teste, sendo mais bem indicado para identificao de anticorpos. As principais enzimas utilizadas em testes imunohematolgicos so: BROMELINA (abacaxi), PAPAINA (mamo), TRIPSINA (estmago de porco) e FICINA (ficus). As alquotas de soluo enzimticas devem ser mantidas em freezer, devendo-se desprez-las aps o descongelamento e utilizao. 16 - REFERNCIA AGNCIA TRANSFUSIONAL - HOSPITAL UNIVERSITRIO JLIO MULLER Procedimento operacional padro nas provas pr transfunsionais. Disponivel em:< http://www.ufmt.br/ufmt/site/userfiles/file/hujm/Comissoes%20e%20Comites/POP%20-%20Provas %20pr%C3%A9%20-%20transfusionais.pdf>. Acessado em 02/07/2012. VERIFICADO POR: APROVADO POR: Pgina 2 de 3

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HEMOCENTRO DE CAMPINAS. Manual bsico de orientaes transfunsionais. Disponivel em:< http://www.hemocentro.unicamp.br/pdfs/manualtecnicotransfusional-2010.pdf>. Acessado em 02/07/2012. LABORATORIO DE ANALISES CLINICAS SANTA CLARA. Manual de exames. Disponivel em:< http://www.laboratoriosantaclara.com/manual.aspx>. Acessado em 02/07/2012. Laboratrio de Imuno-hematologia. Disponivel em:<http://www.famema.br/hemocentro/hematologia.htm>. Acessado em 02/07/2012. Normas e rotinas operacionais do laboratrio de anlises clnicas. Disponivel em:< http://pt.scribd.com/doc/28239025/Normas-e-Rotinas-Operacionais-Do>. Acessado em 02/07/2012. ELABORADO POR: NOVA VERSO POR: VERSO: 1 DATA: 02/07/2012 DATA: 02/07/2012

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