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Farmacognosia
(Mesa
Lpez A, Loayza L., Cervantes R., Zarate A., Caso J. 5- Grupo jueves) LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA Y MEDICINA TRADICIONAL, FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA, UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS.
RESUMEN
El presente estudio tuvo como objetivo la determinacin de los glicsidos flavonoides en distintas especies vegetales, tales como: naranja, ruda y maz morado. Material y mtodos: Se trabaj con muestras de las drogas de las especies vegetales mencionadas, otorgadas por la ctedra de farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San marcos (UNMSM); se realiz el anlisis cualitativo, primero utilizando el mtodo de maceracin para la extraccin de los metabolitos, para continuar con las reacciones especificas de identificacin: para el reconocimiento de la hesperidina en la naranja se hizo la reaccin con H2SO4cc, HClcc, HNO3 Y NaOH 30%; para el reconocimiento de la rutina, en la ruda, se hizo reaccionar con los reactivos de Wilson, Shinoda y FeCl3; para el reconocimiento de la quercetina, en la cebolla, se utilizo los reactivos Pb(CH3COO)2 FeCl3 y por ltimo para el reconocimiento de antocianina en el maz morado se utiliz los reactivos H2SO4cc y NaOH 30%. Se utiliz la cromatografa en capa fina (TLC) para comparar las relaciones de flujo de la muestra problema y de los estndares de hesperidina y rutina. Resultados: Los resultados del anlisis cualitativo fueron todos positivos y las relaciones de flujo de la muestra problema y los estndares, calculadas en la cromatoplaca, fueron muy prximas. Conclusiones: Las diferentes especies vegetales estudiadas, en especial las drogas de estas, como: las hojas de ruda, el albedo de la naranja, los bulbos de la cebolla y la coronta del maz morado; presentan diferentes tipos de flavonoides, utilizados hoy en las industrias con fines teraputicos, alimentarios, etc. Palabras clave: Glicsidos, flavonoides, maceracin, hesperidina, rutina, quercetina, antocianina, cromatografa capa fina.
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I. INTRODUCCIN
Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados bajo un sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromticos llamados A y B estn unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir es llamado anillo C. Se conoce como 10 clases de flavonoides los cuales pueden encontrarse como aglicona o bajo la forma de glicsidos con una o tres unidades de azcar, generalmente en los carbonos 3 y/o 7, siendo los azucares ms comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa. Es frecuente que diferentes azcares se hallen unidas a una misma aglicona y en diferentes posiciones lo que hace mayor el nmero de glicsidos conocidos; es tambin comn, que se encuentren en mezclas como agliconas y/o glicsidos, aun de las diferentes clases siendo esto ltimo lo ms frecuente. Se hallan presente en todas las partes de la planta, algunas clases se encuentran ms ampliamente distribuidas que otras, siendo ms comunes las flavonas y flavonoles y ms restringidos en su ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y auronas. Aunque los flavonoides han sido empleados desde mucho tiempo como colorantes de lana, se les atribuye diversas propiedades en las plantas, entre ellos podemos citar (a) proteccin a los vegetales contra la incidencia de rayos ultravioleta y visible, as como proteccin contra insectos, hongos virus y bacterias, (b) atrayentes de animales con finalidad de polinizacin, (c) antioxidantes, (d) control de la accin de las hormonas vegetales, (e) agentes alelopticas y (f) inhibidora de las enzimas. Por otro lado, estos compuestos poseen tambin importancia farmacolgica, resultado de algunas propiedades importantes atribuidas a algunos representantes de las diferentes clases, como por ejemplo, antinflamatorio, antialrgico, antiulcerognico, antiviral, anticarcinognico; asimismo, son utilizados para el tratamiento de la fragilidad capilar, de la diabetes, de las afecciones cardiacas, entre otras. Como caractersticas generales de estos compuestos debemos sealar su solubilidad en agua y etanol, su carcter fenlico y su intensa absorcin en la regin ultravioleta y visible del espectro debido a la presencia de sistemas aromticos conjugados. Una clasificacin
preliminar del tipo de flavonoide en un extracto de planta, puede hacerse basado inicialmente en un estudio de sus propiedades de solubilidad y de comportamiento ante reacciones de color; esto, seguido por un examen cromatogrfico directamente del extracto y/o del extracto hidrolizado1. Los objetivos de este trabajo son: 1) Determinar la presencia de glicsidos flavnicos en diferentes especies vegetales. 2) Separar e Identificar mediante reacciones especficas de identificacin la presencia de glicsidos flavnicos en diferentes especies vegetales. 3) Comprobar la presencia de glicsidos flavnicos en especies vegetales por el anlisis cromatogrfico.
INFORME 8: DROGAS CON HETERSIDOS FLAVONOIDES B. Reacciones especificas de identificacin2 Reaccin con H2SO4 cc. Coloque 1mg de extracto seco de hesperidina en una placa de toques, agregue gotas de H2SO4 cc. Observe el cambio de coloracin Reaccin con HCl cc. Coloque 1mg de extracto seco de hesperidina en una placa de toques, agregue gotas de HCl cc. Observe el cambio de coloracin. Reaccin con HNO3 Coloque 1mg de extracto seco de hesperidina en una placa de toques, agregue gotas de HNO3. Observe el cambio de coloracin. Reaccin con NaOH 30% Coloque 1mg de extracto seco de hesperidina en una placa de toques, agregue gotas de NaOH 30%. Observe el cambio de coloracin. 2.1.2. RUTINA: Ruta graveolens ruda A. Extraccin2 Pese 1g de muestra seca y pulverizada de hojas de ruda en un Erlenmeyer de 50mL, aade 5mL de metanol y caliente por 10 minutos a 600C. Filtre sobre un vial B. Reacciones especificas de identificacin2 Reaccin de Shinoda Coloque 0,5mL de extracto de ruda en un tubo de ensayo, agregue 2 a 3 virutas de Mg y adicione gotas de HCl cc. Observe el cambio de coloracin. Reaccin de Wilson o Boroctrica Coloque 0,5mL de reactivo Wilson A u 0,5mL de reactivo Wilson B en un tubo de ensayo, agregue 0,5mL de extracto de ruda y dejar en oscuridad por 30 minutos. Observar coloracin amarilla en luz natural y en UV fluorescencia verde. Reaccin con FeCl3 Coloque 0,5mL de extracto de ruda en un tubo de ensayo, agregue gotas de FeCl3. Observe el cambio de coloracin. 2.1.3. QUERCETINA: Allium cepa L. cebolla A. Reacciones especificas de identificacin2 Reaccin con FeCl3 Coloque 0,5mL de extracto de cebolla en un tubo de ensayo, agregue gotas de FeCl3. Observe el cambio de coloracin. Reaccin con Pb(CH3COO)2 Coloque 0,5mL de extracto de cebolla en un tubo de ensayo, agregue gotas de Pb(CH3COO)2. Observe el cambio de coloracin.
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2.1.4. ANTOCIANINAS: Zea mays L. maz morado A. Reacciones especificas de identificacin2 Reaccin con H2SO4 cc. Coloque 0,5mL de extracto maz morado en un tubo de ensayo, agregue gotas de H2SO4 cc. Observe el cambio de coloracin Reaccin con NaOH 30% Coloque 0,5mL de extracto maz morado en un tubo de ensayo, agregue gotas de de NaOH 30% cc. Observe el cambio de coloracin
III. RESULTADOS
1. ANALISIS CUALITATIVO
1.1. HESPERIDINA Ensayo Reaccin Observacin Caracterstica Coloracin naranja Resultado positivo positivo positivo positivo
H2SO4 cc
HCl cc
Precipitado blanco
HNO3
NaOH 30%
INFORME 8: DROGAS CON HETERSIDOS FLAVONOIDES 1.2. QUERCETINA Ensayo Reaccin Observacin Caracterstica Precipitado color amarillo Resultado
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FeCl3
positivo
A IV. DISCUSIN
1.3. RUTINA Ensayo Reaccin Wilson o boroctrica Shinoda FeCl3 Observacin Caracterstica Coloracin amarillo Rayos UV: fluorescencia verde Coloracin rosada Coloracin verde Resultado positivo
positivo positivo
1.4. ANTOCIANINAS Ensayo Reaccin H2SO4 cc Observacin Caracterstica Coloracin roja Resultado positivo
Las antocianinas son ms estables en un medio cido que en un medio neutro o alcalino. En medio cido a pH 1, la forma predominante es la del in flavilio, el cual da el color rojo, cuando esta es sometida a pH bsico o alcalino, el in flavilio es susceptible al ataque nucleoflico por parte del agua, producindose la pseudobase carbinol, esto es a pH 4.5 y seguido se forma la chalcona, las dos formas son incoloras. A un pH 7 se produce la base quinoidal, el cual da una coloracin azul debido a cambios conformacionales y a la estabilizacin de los electrones de valencia del catin flavilio y resonancia del anillo aromtico B3. La muestra problema de antocianina obtenida de la coronta de maz cambi a color rojo al agregar cido sulfrico concentrado; luego de agregar una base como el NaOH 30% cambi a color verde azulado oscuro
NaOH 30%
Coloracin azul
positivo
2. ANLISIS CROMATOGRFICO
Flavonoides Rutina (A) Hesperidina (A) M.P. (B) Relacin de Flujo (R.F) 0.67 0.72
En el ensayo de identificacin de rutina se tuvo que preparar extracto de ruda. Para la preparacin del extracto, las hojas frescas fueron estabilizadas por accin del alcohol hirviente que solubiliza los hetersidos. Esta purificacin permite eliminar la clorofila cuya intensa coloracin enmascara ciertas reacciones de caracterizacin4. La reaccin del extracto de ruda con el reactivo de Wilson, present una coloracin amarilla y cuando se llev la muestra a la lmpara uv, se
INFORME 8: DROGAS CON HETERSIDOS FLAVONOIDES torn de color verde fluorescente. La reaccin indica positivo cuando el flavonoide posee un grupo carbonilo y un grupo oxhidrilo posicin 5, tal es el caso de la rutina, dan complejos amarillos y en fluorescencia verde. Esta coloracin intensa en la lmpara UV se debe a la deslocalizacin de los electrones presentes en los anillos (sistemas aromticos conjugados) 3. En el caso de la reaccin de Shinoda, el extracto de ruda en contacto con cido clorhdrico con virutas de magnesio metlico se genera hidrgeno, este ltimo reduce al flavonoide (rutina), lo cual se reconoce por la coloracin rosada 4. En la reaccin de coloracin con FeCl3, la muestra de extracto de ruda cambio a una coloracin verde. Esto se debe a que la naturaleza polifenlica de los flavonoides, especficamente compuestos con orto-difenoles, lleva a la formacin de coloraciones variadas en presencia de FeCl3, que en este caso por presentar rutina, produce una coloracin 4 verde .
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V. CONCLUSIONES
1. Las diferentes especies vegetales estudiadas, en especial las drogas de estas, como: las hojas de ruda, el albedo de la naranja, los bulbos de la cebolla y la coronta del maz morado; presentan diferentes tipos de flavonoides, utilizados hoy en las industrias con fines teraputicos, alimentarios, etc. 2. Mediante los mtodos de extraccin (maceracin) y las reacciones de identificacin, la naranja presenta el hetersido flavnico hesperidosido (genina: flavonona hesperidina); la ruda presenta hetersido flavnico rutinsido (genina: flavonol rutina); la cebolla presenta hetersido flavnico quercetinsido (genina: flavonol quercetina) y el maz morado presenta hetersido flavnico antocianina (genina: antocianidina). 3. La muestra problema de flavonoides rutinas (ruda), presenta una relacin de flujo aproximado, cercano a los estndares empleados.