Prctica: Conteo de Esporas de Beuveria Bassiana

Jazmn Hernndez

2009033
Anlisis instrumental Ing. Blanca Alicia Rodrguez Patio Marzo 27 de 2012

Introduccin. Cuando dos medios son isotnicos, el total de la concentracin molar de los solutos disueltos es el mismo en ambos. Cuando las clulas estn en una solucin isotnica, el movimiento de agua hacia afuera est balanceado con el movimiento de agua hacia adentro. Un 0.9% de solucin de NaCl (salina) es isotnica para las clulas animales.

Hipotnico viene del griego "hypo," que significa bajo, y "tonos," que significa dilatarse. En una solucin hipotnica, el total de la concentracin molar de todas las partculas disueltas, es menos que el de otra solucin o menos que el de la clula. Si las concentraciones de solutos disueltos son menos fuera de la clula que dentro, la concentracin de agua afuera es correspondientemente ms grande. Cuando una clula es expuesta a condiciones hipotnicas, hay un movimiento neto de agua hacia dentro de la clula. Las clulas sin pared celular se inflan y pueden explotar (lisis). Si el exceso de agua no es removido de la clula. Las clulas con paredes celulares a menudo se benefician de la presin que da rigidez en medios hipotnicos.

Hipertnica viene del griego "hyper," que significa sobre y "tonos," que significa expandirse. En una solucin hipertnica, la concentracin molar total de

todas las partculas de soluto disuelto, es ms grande que el de la otra solucin, o ms grande que la concentracin el la clula. Si las concentraciones de solutos disueltos son mayores fuera de la clula, la concentracin de agua es correspondientemente menor. Como resultado, el agua dentro de la clula sale para alcanzar el equilibrio, produciendo un encogimiento de la clula. Al perder agua la clula tambin pierden su habilidad para funcionar o dividirse. Los medios hipertnicos, como la salmuera o jarabes, han sido utilizados desde la antigedad para preservar la comida, debido a que los microbios que causan la putrefaccin, son deshidratados en esos medios hipertnicos y son incapaces de funcionar

Conteo de esporas por la cmara de Neubauer Qu es una cmara de recuento y dnde se utiliza? La cmara de recuento es un aparato de precisin hecho de vidrio ptico especial. Se utiliza para contar clulas u otras partculas en suspensiones bajo el microscopio. Las cmaras de recuento se utilizan principalmente para el anlisis de sangre (recuento de leucocitos, eritrocitos, trombocitos) y recuento de clulas en el licor. Adems las cmaras de recuento sirven para contar bacterias, esperma y esporas de hongo

Recuento de las partculas: Tcnica de recuento: En la ilustracin se ve las lneas triples del sistema Neubauer mejorado. Para que las clulas, que estn encima o cerca de las lneas delimitacin, no se cuenten dos veces o se olvidan en el recuento, hay que cumplir determinadas reglas. Se cuentan todas las clulas que se encuentran dentro de una definida

zona de medicin. Tambin se cuentan las clulas (marcadas en negro) que tocan o estn encima de 2 lneas en un lado.

Objetivo Observar y realizar el conteo del hongo Beuveria Bassiana utilizando la cmara de Neubauer, as tambin observar las formas de los espermatozoides y los linfocitos de la sangre.

Materiales Cmara de Neubauer Microscopio 10 ml de Sangre Semen Cloruro de sodio Micro pipetas Aza de platino Tubo de ensayo Tween 80 al 0.01% Espora Beuveria Bassiana Centrifugadora

Metodologa.

Para la realizacin de la practica de laboratorio, se tomaron muestras se sangre y semen. As mismo fue necesaria una solucin de Tween 80 al 100% para el conteo de esporas en la cmara de Neubauer.

Se tomo una muestra de Beuveria Bassiana del tubo de ensaye y se diluyo en 20 ml de agua destilada. Con el diluyente de Tween se observaron y contaron las esporas de Beuveria Bassiana utilizando la cmara de Neubauer manipulado por el microscopio (40x).

Tambin se tomo una muestra de sangre y se realizaron tres lavados con NaCl, se centrifug con un tiempo estimado de 3 minutos, posterior a la centrifugacin, se extrajo una muestra colocndolo en la cmara de Neubauer para la observacin en el microscopio.

Se coloco una pequea muestra de semen en el portaobjeto y se observo en el microscopio (40 x) las diferentes formas del espermatozoide. . Resultados. De acuerdo a la metodologa es necesario el conteo de las esporas de Beuveria Bassiana, y a continuacin se realizan los siguientes clculos para determinar el numero de esporas

Frmula: X1 + X2 + X3 + X4 + X5 = X/5 = X X1 + X2 + X3 + X4 + X5 = X/5 = X

X/2 = X

(V)(25)(10000)(V) = V esporas/ml

93 + 120 + 98 + 104 + 103 = 518/5 = 103.6

+
102 + 99 + 127 + 81 + 102 = 511/5 = 102.2 205.8/2 = 102.9 (102.9 esporas)(25)(10000)(20 ml) = 514 500 000 esporas/ml.

Conclusiones Con la realizacin de la prctica se logro observar las diferentes formas de los espermatozoides y los linfocitos de la sangre. As mismo con la cmara de Neubauer se logro realizar el conteo de las esporas del hongo Beuveria Bassiana.

Bibliografia http://www.maph49.galeon.com/memb1/isotonic.html http://es.scribd.com/doc/55063448/Camara-de-neubauer