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Estructural
y
Metablica
TEMA
5.
Enzimologa
TEMA 5. Enzimas. Clasicacin. Principios de la catlisis enzim6ca. Energa de ac6vacin. Velocidad de reaccin y equilibrio de reaccin. Cin6ca enzim6ca: ecuacin de Michaelis-Menten. Ecuacin de los dobles recprocos. Inhibicin enzim6ca. Tipos de inhibicin. Mecanismos de regulacin de la ac6vidad enzim6ca: alosterismo, modicacin covalente, proenzimas. Isoenzimas.
ENZIMAS
Catalizadores
de
las
reacciones
biolgicas.
La
mayora
son
protenas
aunque
hay
molculas
de
RNA
con
ac6vidad
catal6ca
(ribozimas).
Gran
poder
catal6co.
Alto
grado
de
especicidad.
Actan
en
soluciones
acuosas
a
37C
y
pH
neutro.
Su
ac6vidad
puede
regularse.
El
25%
de
los
genes
humanos
codican
enzimas
que
catalizan
reacciones
metablicas.
ENZIMAS:
DEFINICIONES
Cofactor:
necesario
para
la
ac6vidad
enzim6ca.
Pueden
ser
iones
metlicos
o
una
molcula
orgnica,
denominada
coenzima.
Si
el
cofactor
est
unido
fuertemente
al
enzima
se
denomina
grupo
prost6co.
Apoenzima:
parte
proteica
del
enzima
(no
ac6va).
Holoenzima:
apoenzima
+
cofactor.
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez
CLASES DE ENZIMAS
E
+
S
=
ES
=
E
+
P
Nelson,
DL
and
Cox,
M.M.
Lehninger
Principles
of
Biochemistry.
3
ed.
Worth
Publishers,
2000.
Jess
Navas
Mndez
LOS ENZIMAS SON ESTEREOESPECFICAS PORQUE FORMAN VARIAS INTERACCIONES ENTRE AMINOCIDOS DEL CENTRO ACTIVO Y LOS DISTINTOS GRUPOS DEL SUSTRATO
Mathews & Van Holde. Bioqumica. McGraw-Hill, 1998. Jess Navas Mndez
Progreso
de
la
reaccin
Jess
Navas
Mndez
Encaje inducido
Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa (Hexoquinasa = ATP: glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 ).
D-Glucosa
Nelson,
DL
and
Cox,
M.M.
Lehninger
Principles
of
Biochemistry.
3
ed.
Worth
Publishers,
2000.
Jess
Navas
Mndez
LA
Vmax
SE
ALCANZA
CUANDO
TODOS
LOS
CENTROS
ACTIVOS
ESTN
OCUPADOS
CON
SUSTRATO
Velocidad
inicial
1/2 Vmax
Km
Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.
[E]
La
velocidad
inicial
es
funcin
lineal
de
la
concentracin
de
enzima,
siempre
que
la
concentracin
de
sustrato
sea
alta.
Jess
Navas
Mndez
ECUACIN
DE
MICHAELIS-MENTEN
Vmax
(S)
Vo
=
Km
+
(S)
E
+
S
K1
K1
ES
K2
K2
+
K1
Km
=
K1
Jess
Navas
Mndez
LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO
1/2 Vmax
Velocidad inicial
Km
Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez
Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez
PARMETROS
ENZIMTICOS
1. Km
(constante
para
cada
enzima)
=
concentracin
de
S
a
la
que
la
Vo
es
1/2
Vmax.
Es
una
medida
de
la
anidad
del
enzima
por
S.
Cuanto
menor
es
Km,
mayor
es
la
anidad
del
enzima
por
S.
2. Kcat
(constante
para
cada
enzima)
=
nmero
de
recambio
=
nmero
de
molculas
de
sustrato
conver6das
en
producto
por
molcula
de
enzima
y
unidad
de
6empo,
en
condiciones
de
saturacin
de
sustrato.
3. Vmax
=
velocidad
mxima
terica
=
la
velocidad
cuando
todos
los
centros
ac6vos
estn
ocupados
con
sustrato
(nunca
alcanzada
en
la
realidad).
4. Unidad
de
enzima
=
can6dad
de
enzima
que
transforma
1
mol
de
sustrato
por
min
=
una
forma
comn
de
expresar
la
velocidad.
5. AcKvidad
especca
=
unidades
por
mg
de
protena
total
de
la
preparacin
enzim6ca.
En
el
caso
de
enzimas
en
suero:
unidades/L.
Jess
Navas
Mndez
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez
INHIBICIN
ENZIMTICA
Inhibicin
irreversible
(uniones
covalentes
entre
inhibidor
y
enzima.
Ejemplo:
frmacos).
Inhibicin
reversible.
COMPETITIVA.
NO
COMPETITIVA.
INHIBICIN
COMPETITIVA
+
Inhibidor
Unin
del
Inhibidor
al
centro
ac6vo,
compi6endo
con
S:
Aumenta
Km.
No
cambia
Vmax.
Inhibidor
compe66vo
Sustrato
Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
INHIBICIN
NO
COMPETITIVA
+
Inhibidor
Unin
del
Inhibidor
a
un
si6o
del
enzima
dis6nto
del
centro
ac6vo:
no
compite
con
S:
No
cambia
Km.
Disminuye
Vmax.
Sustrato
Inhibidor
no
compe66vo
Sustrato
Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
INHIBICION COMPETITIVA
INHIBICION NO COMPETITIVA
Sustrato
Inhibidor compe66vo
Sustrato
Inhibidor acompe66vo
Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 5 ed. Freeman and Co, 2002. Jess Navas Mndez
Regulacin
de
la
canKdad
de
enzima
presente
en
las
clulas.
Inhibicin
reversible
por
productos.
Interaccin
con
moduladores
(protenas
u
otros):
-
AcKvacion/inhibicin
alostrica:
El
modulador
alostrico
se
une
a
un
si6o
dis6nto
del
centro
ac6vo.
La
unin
del
modulador
es
reversible
e
implica
cambio
conformacional.
Suelen
ser
enzimas
mul6mricas.
Tienen
cin6ca
sigmoidea.
-
Modicacin
covalente:
Fosforilacin.
ADP-ribosilacin.
Me6lacin.
AcKvacin
proteolKca
de
pro-enzimas.
Jess
Navas
Mndez
ENZIMAS ALOSTRICOS
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez
Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez
Auto-ac6vacin de quimotripsina
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez
1% 3%
18%
45% 33%
BIBLIOGRAFA
Lehninger
Principles
of
Biochemistry.
5
ed.
Freeman,
2009.
Cap
6.
Marks
Basic
Medical
Biochemistry.
A
clinical
approach.
3
ed.
LWW.,
2008.
Cap
8.
Devlin.
Textbook
of
Biochemistry
with
Clinical
correla>ons.
7
ed.
Wiley,
2010.
Cap
10.
Feduchi
y
cols.
Bioqumica:
conceptos
esenciales.
Panamericana,
2011.
Cap
8.
Berg,
Tymoczko
and
Stryer.
Biochemistry.
7
ed.
WH.
Freeman,
2011.
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Voet
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Voet.
Biochemistry.
4
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Wiley,
2011.
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Baynes
and
Dominiczak.
Bioqumica
Mdica.
3
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Elsevier,
2011.
Cap
6.
Garreh
and
Grisham.
Biochemistry.
4
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2009.
Caps
13,
14,
15.