2. Introduccin La mitosis es el proceso de divisin celular de las clulas eucariticas no sexuales con el cual se conserva la informacin gentica.

En este proceso, el ncleo de la clula madre duplica sus cromosomas y luego se divide en dos clulas hijas que son copias de la clula madre; este proceso es observado en todas las clulas somticas de los organismos vivientes (WiseGeek, 2003). Tradicionalmente, el ciclo celular se divide en dos etapas fundamentales: Interfase, que es cuando una clula no se encuentra en alguna de las fases de mitosis y la Mitosis; la primera se caracteriza porque el ADN se encuentra en forma de cromatina (cromosomas desenrrollados, filamentosos) por todo el ncleo celular, en esta etapa sucede la replicacin, transcripcin (copia) y transduccin de los cromosomas, teniendo como resultado dos molculas iguales y, la Mitosis, que ocurre posteriormente, se compone de cuatro fases: Profase, Metafase, Anafase, Telofase (Figura 1).

Figura 1. Etapas de la divisin celular, con sealamiento de algunas partes importantes en cada una

La Profase es la primer fase mittica, en esta etapa, las cromatinas duplicadas se dividen por divisin longitudinal produciendo dos cadenas unidas en el medio, que al condensarse totalmente forman los cromosomas, que se mantienen unidos por un estrangulamiento en el centro, en una zona denominada centrmero (Figura 2). Los cromosomas se encuentran dispersos en el ncleo. Simultneamente al proceso anterior, el nuclolo se esfuma y los centrosomas (Figura 3) migran por separado a cada polo de la clula y quedan unidos por fibras (microtbulos) (Cooper & Hausman, 2010).

Figura 2. Esquema de las partes del cromosoma. (Atlas de Histologia Vegetal y Animal, 2009)

Figura 3. Esquema de los centrosomas y la migracin hacia los polos (Atlas de Histologia Vegetal y Animal, 2009)

Luego, la Metafase inicia con la destruccin o desaparicin de la membrana nuclear, aqu, el material gentico queda expuesto en el citosol y se forma la placa metafsica o ecuatorial en la regin media de la clula, sobre esta lnea se orientan los cromosomas fijando el centrmero a las fibras de la placa y situando el satlite y telmero de cada cromtide hermana hacia un polo diferente (Figura 2). Una vez, los cromosomas estn situados debidamente en el centro de la clula inicia la Anafase, en este lapso, las fibras de cada centrosoma se contraen separando las cromtides hermanas (Cooper & Hausman, 2010), las cuales, guiadas por su respectivo centrmero son arrastradas hacia el centrosoma respectivo; consecutivamente, los filamentos se desvanecen y los cromosomas permanecen unidos a su centrosoma. Esta fase es de vital importancia, pues un cambio o mutacin aqu puede ser causante de muchas enfermedades somticas. Finalmente ocurre la Telofase, que es la etapa en que los cromosomas unidos al centrosoma se encapsulan dentro de una membrana nuclear dando origen al ncleo definido, donde al finalizar este proceso, los cromosomas se extienden nuevamente en forma de cromatina. Posterior a esto ocurre la citocinesis y respecto a sta hay mucha polmica, pues muchos cientficos la consideran parte de la telofase, as como muchos otros consideran que es un proceso externo a esta; sea cual sea la realidad, el huso mittico que se estaba formando en la Metafase se encarga de la citocinesis; en clulas vegetales ocurre una tabicacin a lo largo del huso y una vez esta formado el tabique, se observan las dos clulas hijas; y en clulas animales, ocurre un estrangulamiento, en el que los microtbulos del huso se hacen cada vez ms estrechos, hasta el punto en que separan las dos clulas hijas (Teijn, 2005). La presencia de diferentes alcaloides o frmacos durante la mitosis, pueden causar mutaciones, deficiencia o interrupcin del ciclo celular; por ejemplo, la cafena, es un alcaloide que, segn Gonzlez & Lpez (1980), puede impedir la creacin del huso mittico, debido a la inhibicin de la actividad de cierta ATPasa que es esencial para la fusin de la membrana de las vesculas de golgi, por tanto, la no creacin del huso conlleva a la interrupcin de la citocinesis y por ende, a la creacin de clulas binucleadas, que una vez entren en fase mittica, generarn clulas polinucleadas. Otra sustancia que puede interferir en la mitosis, es la colchicina, un frmaco que obstruye la mitosis en la metafase o anafase; este frmaco no permite la separacin de las dos cromtides hermanas, y esto hace que la clula madre presente ms de tres juegos de cromosomas, a esta condicin se le denomina poliploida. Para este laboratorio, se us el meristemo de las races nuevas de cebolla (Allium cepa L), que anteriormente haban sido tratadas individualmente con cafena y con agua limpia. La cebolla es comnmente utilizada para el estudio del ciclo celular, ya que su ciclo mittico es continuo y de corta duracin, siendo este mayor en el trpico. Como objetivos principales se plantearon la preparacin adecuada y exitosa de las placas teidas con la orcena y la identificacin morfolgica de las clulas en interfase y en las fases mitticas; tambin, se propuso determinar y comprender el ndice mittico y los ndices de las fases durante la observacin del material puro, con cafena y con colchicina. 3. Metodologa

4. Resultados Las tablas y figuras que se presentan a continuacin representan los resultados obtenidos de cada uno de los puntos realizados en la prctica; las clulas observadas fueron de races de Allium cepa (cebolla) 4.1 Punto 1 Para proceder a encontrar el ndice mittico y de fases se utilizaron las siguientes frmulas: ndice mittico (IM): # De clulas en mitosis / # de clulas totales Frmula No.1

ndices de las fases (IP), (IM), (IA), (IT): Frmula No. 2 # De clulas en la fase correspondiente / # total de clulas en mitosis

El nmero total de clulas contadas fue de 300 de las cuales 58 estaban en mitosis. La tabla No. 1 muestra los valores de las clulas contadas en cada fase y el valor del ndice mittico y de cada una de las fases hallados con la formula No. 1 y 2.
Tabla No. 1 Conteo de clulas observadas e ndice mittico y de las fases

Conteo Celular en Cada Estado Fase # Clulas Contadas Interfase 242 Profase 21 Metafase 9 Anafase 17 Telofase 11

ndices Mitticos y de Fases Fase Valor de los ndices Mittico 0.1933 Profsico 0.3620 Metafsico 0.1551 Anafsico 0.2931 Telofsico 0.1896

La tabla No. 2 muestra los diferentes valores de ndices mitticos y de fases obtenidos por los distintos grupos que realizaron montaje de placa con races
Tabla No. 2 ndices mittico y de fases de races que no fueron tratadas con ninguna sustancia. Grupo No. (IM) (IP) (IM) (IA) (IT)

1 2 3 4 5 6

0.56 0.08 0.13 0.19 0.01 0.23

0.14 0.67 0.41 0.36 0.15 0.44

0.18 0.11 0.19 0.15 0.46 0.06

0.2 0.08 0.20 0.29 0.30 0.14

0.18 0.12 0.20 0.18 0.07 0.36

4.2 Punto 2 La figura mostrada a continuacin representa la observacin de clulas en Interfase.

Figura 4. Observacin de clulas en Interfase con aumento de 400X.

La figura a continuacin muestra las diferentes fases mitticas observadas durante la prctica.

a.

b.

c.

d.
a.

Figura 5. Observacin de clulas en sus diferente fases mitticas con aumento de 400 X Profase b. Metafase c. Anafase d. Telofase.

4.3 Punto 3 En esta parte del prctica, se utilizaron races que previamente haban sido tratadas con cafena al 0.1%; al llevar la placa realizada en la prctica, se mont al microscopio y se encontraron clulas binucleadas en interfase, profase y metafase, tambin se encontr una clula tetranucleada. La siguiente figura muestra clulas polinucleadas en algunas fases mitticas que estuvieron bajo el efecto de la cafena

a.

b.

c.

d.

Figura 6. Observacin de clulas polinucleadas bajo el efecto de la cafena con un aumento de 400X. a. Clula binucleada b. Clula binucleada en profase c. Clula binucleada en metafase desordenada d. Clula tetranucleada.

Como se pudo observar en la placa montada, la cafena afecta la creacin del tabique de separacin celular; de modo que no se produce la citocinesis quedando 2 o mas ncleos separados pero dentro del mismo citoplasma.

4.4 Punto 4 La figura mostrada a continuacin muestra una clula tratada con colchicina.

Figura 7. Observacin con aumento de 400x de clula en metafase desordenada por efecto de la colchicina.

El nmero total de clulas contadas fue de 384 de las cuales 64 estaban en mitosis La tabla No. 3 muestra los valores de las clulas contadas en cada fase y el valor del ndice mittico y de cada una de las fases hallados con la formula No. 1 y 2; dichas clulas fueron tratadas con colchicina.
Tabla No. 3 Conteo de clulas observadas e ndice mittico y de las fases

Conteo Celular en Cada Estado Fase # Clulas Contadas Interfase 320 Profase 20 Metafase 44 Anafase 0 Telofase 0

ndices Mitticos y de Fases Fase Valor de los ndices Mittico 0.16 Profsico 0.0.31 Metafsico 0.68 Anafsico 0 Telofsico 0

La tabla No. 4 muestra los diferentes valores de ndices mitticos y de fases obtenidos por los distintos grupos que realizaron montaje de placa con races tratadas previamente con colchicina
Tabla No. 4 ndices mittico y de fases de races que fueron tratadas con colchicina. Grupo No. (IM) (IP) (IM) (IA) (IT)

1 2 3 4 5 6

0.45 0.23 0.16 0.75 0.21 0.09

0.94 0.38 0.31 0.15 0.39 0.44

0.05 0.62 0.68 0.7 0.6 0.55

0 0 0 0.08 0 0

0 0 0 0.06 0 0

En esta parte de la prctica, las races de cebolla utilizadas fueron tratadas con colchina previamente, el efecto observado de la colchina sobre las clulas consisti en la inhibicin de la divisin celular en metafase, pues hubo observacin de profases normales; pero al no haber metafases correctas no se pudo hacer observacin de anafases ni telofases. Con respecto a las races que no fueron tratadas con ninguna sustancia, se pudo decir que en stas si se hizo la observacin de todas las fases; sin embrago en las tratadas con colchicina solo se pudo hacer observacin de la profase y metafases desordenas que por el efecto de haber dichas metafases no se produjo la aparicin u observacin de anafases y telofases. 5. Discusin: Existen varios alcaloides vegetales, de los cuales se ha demostrado que, al ser administrados en tejidos vegetales inhibe la formacin del tabique de separacin celular, y en el caso de las clulas animales la creacin del huso mittico; estos alcaloides son la teobromina, la teofilina y la cafena entre otros, (Timson, 1972) siendo esta ltima la ms estudiada. La inhibicin que realizan estos alcaloides impide la formacin de la nueva pared celular (vegetales), o membrana celular (animales) y cuando se impide la creacin de estas estructuras de separacin, no se lleva a cabo la citocinesis, que es la etapa posterior a la cariocinesis (profase, metafase, anafase y telofase). Al no realizarse la separacin celular (citocinesis), los dos ncleos aunque separados, se conservan al interior de la clula. La presencia de dos ncleos en una misma clula se denomina binucleacin. Las clulas binucleadas funcionan igual que aquellas uninucleadas, por tanto, pasado un tiempo estas entran tambin, en su respectiva mitosis y, es all cuando podemos observar mitosis mltiple; es decir biprofases, bimetafases, bianafases y bitelofases (Figura 6). En una segunda ronda de divisin celular, con una segunda exposicin a la cafena se crearn clulas polinucleadas. Dependiendo de la duracin de la exposicin de las clulas al alcaloide, se encuentran clulas con diferentes cantidades de ncleos. Respecto al mtodo de accin de la cafena en las clulas vegetales, hay varias teoras; un estudio realizado por Becerra & Lpez-Senz, (1978) concluy que la cafena disuade el reconocimiento y fusin de la membrana teniendo como principales cofactores, la presencia de calcio y magnesio para ejercer la inhibicin. Otro estudio, realizado por los investigadores Gonzlez-Fernandez & LpezSaenz (1980) postula que la cafena puede bloquear la formacin del huso mittico debido a la inhibicin de la actividad de una ATPasa especfica, de la cual se sabe est involucrada en la fusin de las membranas en las vesculas de golgi.

6. Bibliografa Atlas de Histologa Vegetal y Animal. Ciclo Celular, Cromosomas. Espaa, Universidad de Vigo, [En lnea], 2009 [Citado 20 Diciembre de 2011] En lnea: http://webs.uvigo.es /mmegias/5-celulas/ampliaciones/8-cromosomas.php Becerra J., Lpez-Sez J.F Effects of caffeine, calcium and magnesium on plant cytokinesis. En Experimental Cell Research, [En lnea], 1978, Universidad de Mlaga, Mlaga, Espaa. Volumen 111, Issue 2. Pginas: 301-308. [Citado Diciembre 21 de 2011]. En lnea: http://www.sciencedirect.com.bd.univalle.edu.co/science/article/pii/001 448277890174X Cooper, G., Hausman R. Regulacin celular. La clula. Quinta edicin. Madrid, Espaa. Marbn Libros, 2010. Pginas: 654 655, 672-674 Gonzlez-Fernandez A., Lpez-Saenz J.F. The effect of adenosine on caffeine inhibition of plant cytokinesis. En Enviromental and Experimental Botany, [En lnea], 1980, Volmen 20, Pgina 455. [Citado Diciembre 15 de 2011]. En lnea: http://www.science direct.com.bd.univalle.edu.co/science/article/pii/0098847280902403 Teijn J.M., Garrido A. Fundamentos de bioqumica estructural. Argentina. 1era edicin. Grupo editor Alfaomega, 2005. Pginas 96-100 Timson, J. Effect of theobromine, theophylline and caffeine on the mitosis of human lymphocytes. En Mutation Research/Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis, [En lnea], 1972, Manchester, Inglaterra. Volumen 15, Issue 2. [Citado Diciembre 21 de 2011]. En lnea: http://www.sciencedirect.com/science/article/ pii/0027510772900334 WiseGeek. What is Mitosis?, Copyright 2003 - 2011 Conjecture Corporation. En lnea: http://www.wisegeek.com/what-is-mitosis.htm ; Consulta: 18/12/2011