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Extrao e caracterizao de quitina e quitosana a partir de fontes locais Quitina foi extrada de seis diferentes fontes de locais no Egito.

A quitina obtida foi convertida em quitosana mais til solvel por macerao em solues de NaOH de diferentes concentraes e por longos perodos de tempo, ento a soluo alcalinos quitina foi aquecida em uma outoclave, que reduziu drasticamente o tempo de desacetilao. Quitina de canetas squid no requerem imerso em soluo de hidrxido de sdio e mostrou reatividade muito maior para desacetilao na autoclave que mesmo aps 15 min de aquecimento de um grau de desacetilao de 90% foi alcanada. A quitina e quitosana obtidas foram caracterizadas por anlise espectral, difrao de raios X e anlise trmica gravimtrica. INTRODUO Quitina, um polmero natural abundante consiste de 2-acetamido 2-desoxi-b-D-glucose atravs de uma ligao b (1,4). Apesar da presena de nitrognio, pode ser considerado como celulose com hidroxila na posio C-2 substitudo por um grupo acetamido. Como celulose, funciona como polissacardeos estruturais. Sua produo natural inesgotvel; artrpodes, por si s, a contagem de mais de 106 espcies do 1,2 106 do total das espcies compiladas para reino animal, constituem fonte de biomassa permanente e de grande porte. Quitina um branco, duro, polissacardeo, nitrognio e inelstica a principal fonte de poluio superficial nas zonas costeiras. Quitina geralmente isolado do exoesqueleto de crustceos e, mais particularmente a partir de camares e caranguejos, onde uma quitina produzida (Minke e Blackwell, 1978;. Austin et al, 1989). Lula outra importante fonte de quitina em que existe sob a forma b, que foi encontrado para ser mais favorvel para desacetilao. Ela tambm mostra maior solubilidade, maior reatividade e maior afinidade para solventes e inchao do que um quitina, devido ligao mais fraca de hidrognio intermoleculares imputvel ao arranjo paralelo das principais cadeias (Pawadee et al, 2003;. Gardner e Blakwell, 1975; Caa e Elsherief, 1990; Chandumpaia et al, 2004).. Muitos autores (Tolaimate et al, 2000, 2003;. Pawadee et al, 2003;. Gardner e Blakwell, 1975; Hunt e Elsherief, 1990; Chandumpaia et al, 2004;. Acosta et al, 1993;. Rege e Block, 1999 ; Galed et al, 2005;.. Paulino et al, 2006) tm abordado o problema de extrao de quitina a partir de suas fontes naturais seguido por sua desacetilao para obter o muito mais til material de quitosana. Aplicaes potenciais e usuais de quitina, quitosana e seus derivados so estimados em mais de 200 (Sandford, 1989; Ravi Kumar, 2000). Esta ampla gama de aplicaes incluem cosmticos, agricultura,

alimentos, biomdicas e txtil, como agentes quelantes e efluentes refinamento industrial (Rathke e Hodson, 1994;. Chassarya et al, 2005). A produo de quitosana a partir de conchas de crustceos obtido como um desperdcio de alimentos economicamente vivel, especialmente se inclui a recuperao de carotenides. As conchas contm considervel quantidade de astaxantina, um carotenides que at agora no foram sintetizados, e que marcado como um aditivo alimentar de peixes na aquacultura. Quitosana em si foi diretamente extrado de fungos por tratamento alcalino e cido (Rane e Hoover, 1993; Cai et al, 2006;. Suntornsuk et al, 2002;.. Chatterjee et al, 2005). Alguns autores (Wang et al, 2006;. Gagne e Simpson, 1993; Oh et al, 2000;.. Yang et al, 2000) desenvolveram mtodos para usar os microrganismos ou enzimas proteolticas para a desproteinizao dos resduos de crustceos quitina, desta forma uma produo mais econmica de quitina e quitosana pode ser alcanado. O procedimento importante para a obteno de quitosana baseado na desacetilao alcalina da quitina com uma soluo alcalina forte. Isolamento da quitina-se de diferentes fontes afetada pela fonte. Geralmente a matria-prima esmagada, lavado com gua ou detergente e corte em pedaos pequenos. O contedo mineral do exoesqueleto do crustceo diferente no o mesmo e, consequentemente, tratamentos diferentes podem ser usados. O presente trabalho o primeiro ensaio sistemtico para investigar a extrao de quitina e quitosana a partir de diferentes fontes de indgenas no Egito. 2. parte experimental 2.1. Isolamento da quitina

Quitina foi isolada a partir de seis fontes, dois tipos de camaro (marrom e rosa) Conchas, dois tipos de canetas lulas, conchas caranguejos e conchas de lagosta de gua doce (camaro), Procambarus clarkii, que uma espcie de crustceo de gua doce, nativo do sul -leste dos Estados Unidos, mas encontrou tambm em outros continentes, onde muitas vezes uma praga invasora. conhecida tambm como o pntano vermelho lagosta, lagostim vermelho pntano, lagostins ou lagostas Louisiana Louisiana. Este crustceo uma espcie intrigante alm de ser uma fonte de quitina tambm um problema ambiental no Egito, o lagostim tornou-se um residente abundante no Rio Nilo por causa de sua

alta taxa de reproduo e sua adaptabilidade forte. Este crustceo um carnvoro voraz, predando sobre vrios crustceos, moluscos e pequenos peixes, bem como seus ovos e batatas fritas causando assim um srio obstculo para a aquicultura. Outras evidncias mostram que eles se alimentam bem em cima de alguns moluscos vetores bentnicos, e assim, pode ser usado como um agente de controle biolgico potencial esquistossomo se for intencionalmente introduzido na canais de irrigao e drenagem, que so em grande parte infestada com esses caracis. As matrias-primas foram obtidos em forma slida a partir de diferentes fontes, lavado com gua, desidratado em temperatura ambiente e cortada em pedaos pequenos. Desmineralizao foi realizado temperatura ambiente usando um M banha cido clordrico. O nmero de banha, com durao de dependente da fonte; observou-se que a emisso de gs CO2 foi mais ou menos um indicador importante de acordo com as espcies estudadas. Por exemplo, forte no caso de caranguejos e camares e lagostas e fraco no caso de uma espcie de lula. De proteinization foi realizada utilizando tratamentos alcalinos com 1 M de hidrxido de sdio em solues de 105 "110 C. Este tratamento foi repetido vrias vezes. O nmero de banha depende de clareza da soluo, a ausncia da protena foi indicada pela ausncia de cor do meio ao final do ltimo tratamento. Lavagem com gua destilada, em seguida, foi realizado at a neutralidade aps o qual as amostras foram secas. Nesta fase, quitina isolado de canetas squid perfeitamente branca, ao contrrio daqueles isolados de outras fontes que eram altamente rosa. Vestgios de pigmento responsvel pela cor so removidos com um tratamento leve de oxidao (KMnO4 + cido oxlico + H2SO4). Refluxo em etanol por 6 h tambm foi usado para eliminar vestgios de protenas e materiais de colorao. Contedo de quitina foi determinada a partir da diferena de peso a matria-prima e que da quitina obtida aps tratamentos cido e alcalino. 2.2. Desacetilao da quitina Experimentos preliminares foram realizados por refluxo quitina em soluo NaOH forte na atmosfera normal. Os experimentos foram necessrios mais de 20 h produzir contedo desacetilao baixo ea reao foi acompanhada pela degradao drstica da quitosana final. Para evitar longos tempos de aquecimento, o refluxo em soluo alcalina foi julgado em uma autoclave sob presso de duas atmosferas. O

aquecimento durou vrias horas (10-15 h) e ainda a quitosana resultante foi parcialmente solvel em cido actico, indicando grau de desacetilao baixo. Kurita (2001) indicou que desacetilao de quitina podem ser altamente facilitada pela imerso em soluo forte de hidrxido de sdio temperatura ambiente antes do aquecimento. Esta abordagem foi adaptado eo efeito do tempo de macerao sobre a viabilidade de desacetilao foi investigada. 3. Determinao do percentual de desacetilao 3.1. titulao potenciomtrica usar esta metodologia!!!!!!!! Quitosana (0,5 g) foi dissolvida em 25 ml de 0,1 M soluo aquosa padro de HCl. A soluo foi, ento, toped at 100 ml com gua destilada e quantidade calculada de KCl foi adicionado para ajustar a fora inica de 0,1. O titulante foi uma soluo de 0,05 M NaOH. medidor de pH foi utilizado para medies de pH, sob agitao contnua. O titulante foi adicionado at o valor de pH alcanou 2,00, o NaOH padro foi ento adicionada por etapas e os valores de pH da soluo foram gravadas e uma curva com dois pontos de inflexo foi obtida. A diferena dos volumes de soluo de NaOH entre estes pontos corresponde ao cido consumido para salification de os grupos amina da quitosana e permite a determinao de DDA% da quitosana. O DA foi calculada a partir da relao (Broussignac, 1968):
DDA% = 1-161Q/1+42Q

onde Q = NDV / m, DV o volume de NaOH soluo entre os dois pontos de inflexo (em l), N a concentrao de NaOH (em mol / l neste artigo 0,05 mol / l) e m o peso seco de quitosana (em g). 3.2. anlise elementar O valor DDA% das amostras de quitosana foi calculada a partir da seguinte frmula (Kasaai et al, 2000; Jiang et al, 2003..):
DDA%=6.857- C/N/1.7143

onde C / N a relao carbono / nitrognio medido a partir do composio elementar das amostras de quitosana. 3.3. Infravermelho transformada de Fourier FTIR espectroscopia Os espectros FTIR foram medidos em pastilhas de KBr no modo de transmisso na faixa de 400A "4000 de 1 cm usando Perkin Elmer espectrofotmetro de 2000. O DDA das amostras foram calculados

a partir dos espectros IR seguindo o mtodo de Ref. (Brugnerottoa et al., 2001). As bandas a 1650 e 1320 cm 1 foram escolhidas para medir da DA. Como referncia interna, as intensidades em 3450 e 1420 cm 1 foram avaliados. Os rcios de absoro da banda envolvendo a referncia a 3450 centmetros 1 tinha mais pobres em forma. A relao de absoro A1320/A1420 mostra superiores acordo entre o absoluto eo estimado DA-valores de acordo com Brugnerottoa et al. e, portanto, foi adaptada neste trabalho: [DA% = 31:92X(A1320/A1420)-12:20 ] 3.4. mtodo de NMR Hirari et al. (Hirari et al., 1991) relataram o deslocamento qumico dos prtons metila do grupo acetamida para aparecer em 2,07 ppm em solues de xido de deutrio cida enquanto o grupo metil do cido actico glacial aparece em 2,12 ppm (A Biblioteca Aldrich de espectros de RMN). Portanto, o pico de cerca de 2,1 ppm nos espectros (Fig. 1) pode ser seguramente atribudo ao prtons metila do grupo acetamida, e que cerca de 2,2 ppm devido ao grupo metila na poro de cido actico. O deslocamento qumico afetada pela concentrao, solvente e temperatura, e levar isso em conta, pode-se explicar a diferena entre o valor de deslocamento qumico relatado por Lavertu (Lavertu et al., 2003) e as relatadas aqui. Nos espectros obtidos, a diferena de deslocamentos qumicos entre os picos em cerca de 2,1 e 2,2 ppm constante (cerca de 0,15 ppm) dentro de erros experimentais. A configurao da TMS de pico a ser 0 ppm por vezes um pouco afetados por variaes operacionais e espectral, e para com muitos picos''espiges''como no nosso caso, a reprodutibilidade pode ser diminuda. Portanto, pode-se afirmar com segurana que o deslocamento qumico de prtons de metila amida pode ser ajustado para 2,06 ppm e que por poro de cido actico a 2,21 ppm. descrito (Hirari e Lavertu) que o pico de 4,9 ppm atribudo a C1 de prtons de glucosamina unidade em quitosana e os picos em ppm 3-4 para C2-C6 prtons de glucosamina e N unidades acetilglicosamina. Eles tambm mostraram que prtons C1 de N-acetilglicosamina unidade aparece em torno de 4,6 ppm, e esse pico sobreposto com o pico solvente forte em nosso espectro e pode ser visto como um ombro no exemplo mostrado na figura representativa. 1 para camaro-rosa quitosana obtido aps 0,5 ppm de aquecimento em autoclave a quitina foi embebido por um dia em 40% de NaOH. Para a determinao do grau de desacetilao mtodo (DDA) de Lavertu foi adaptado em que r = 0:990

DDA(%) = (H4,9/H4,9+H2,06/3) Com base nestes, pode-se calcular DDA inequivocamente dos espectros de RMN obtidos. NMR e titulao potenciomtrica foram encontrados para ser os mtodos mais fiveis e os valores aqui apresentados so geralmente a mdia desses mtodos. 3.5. medidas de viscosidade As viscosidades de todas as amostras preparadas quitosana (exceto as amostras insolvel) foram medidos usando um viscosmetro Ostwald capilar e as viscosidades intrnsecas foram determinados, o solvente foi de 5% de cido actico e 0,1 M KCl a viscosidade intrnseca obtida foi utilizada para calcular o peso molecular para o amostras preparadas a partir da relao de Mark-Houwink-Sakurada: [n] = KMa onde K e a so constantes que foram determinadas na literatura por muitos autores. K = 1,38 10 4 e a = 0,85 e K = 2,14 10 3 e a = 0,657 (Pankaj et al., 1999) outra, os valores foram K = 1,4 10 4 e a = 0,83 (Wan et al. , 2003). Outra frmula para squid quitosana tem sido adaptado com K = 8,93 10 4 a 0,71 Devido variao do K e constantes parecia razovel utilizar os dados de viscosidade intrnseca [g] diretamente desde convert-lo para valores de peso molecular ir produzir o mesmo padro de comportamento, alm da variao nos valores das constantes. 3.6. Difrao de raios X X-ray anlise de difrao (DRX) foi aplicado para detectar a cristalinidade das amostras extradas de quitina e quitosana seus correspondentes. Um difratmetro de p Scintag foi utilizada para este efeito entre 2h ngulos de 5 e 40. Ni-Cu Ka filtrada radiao foi usada como fonte de raios-X. A cristalinidade relativa dos polmeros foi calculado pela diviso da rea dos picos cristalinos pela rea total sob a curva. 3.7 NMR De ressonncia magntica nuclear RMN foram medidos usando JNMAl 300, Jeol espectrmetro, 300MHz em D2O em que gotas de DCL foi adicionado para melhorar a solubilidade. 3.8. anlise trmica

Termo-anlise gravimtrica TGA foi realizada utilizando instrumento Shimadzu TGA-50H a uma taxa de aquecimento de 10 C / min sob atmosfera de nitrognio.