2.3.

- Separacion por metodo de salazon y determinacion de protenas del suero plasmatico

Posibles preguntas Qu sales su utilizan y cul es la ms indicada? Buscar ventajas y desventajas Principalmente el sulfato amnico, pero este tiene el gran inconveniente de que la presencia de la sal amoniacal dificulta la determinacin de las fracciones resultantes mediante el anlisis de biuret, recordemos que las sales de amonio reaccionan con el cobre formando un complejo, por lo que interfiere en la formacin del complejo Cu-protena. Por tanto se utiliza sulfato de sodio. Una desventaja de usar esta sal es la necesidad de trabajar a temperaturas sobre 37C para evitar que se produzca una cristalizacin de esta. Por qu la sal es al 22%? Esta concentracin permite la que las seroglbulinas precipiten, dejando en solucin la seroalbumina. Se llego a esta concentracin experimentalmente probando diversas concentraciones y corroborando los resultados mediante electroforesis.

Para qu es el ter? El ter permite disminuir la densidad de las globulinas (agregados de globulinas). Se aprovecha que el ter es menos denso que el agua, por tanto se formara una fase en la que quedan atrapadas las seroglobulinas y adems como posee una constante dielctrica menor a la del agua, las protenas en esa fase tienden a precipitar impidiendo que se vuelvan a solubilizar. Formndose de esta manera una masa compacta situada entre las dos fases liquidas en la que se encuentran los complejos de seroglobulinas.

Ventajas y desventajas de la tcnica La principal ventaja de esta tcnica es que las protenas precipitadas no estn desnaturalizadas, y en lneas generarles se vuelven a disolver al disminuir la concentracin de la sal en la solucin. No es exacto, si bien existe una estrecha relacin entre los valores obtenidos y los normales, la concentracin de globulinas se obtiene mediante una substraccin(clculos) y no directamente.

Factores que afectan la solubilidad de una protena. 1. 2. 3. 4. pH fuerza inica propiedad dielctrica del solvente (naturaleza del solvente) temperatura

1. pH. El pH al que una protena muestra un mnimo de solubilidad es su pH isoelctrico, definido como aquel valor de pH al que la molcula no posee carga elctrica (carga neta cero) y es incapaz de desplazarse en un campo elctrico. En estas condiciones no existe repulsin electroesttica entre molculas proteicas vecinas y tienden a interaccionar (protena-proteina) y tienden a precipitar. Sin embargo cuando los valores de pH estn por encima o bajo el punto isoelctrico, todas las molculas de protena poseen una carga elctrica neta del mismo signo. Por dicha razn se repelen mutuamente impidiendo la interaccin protena-protena para formar agregados que precipitan 2. fuerza inica. (Explicada en el tipeo de salazn) 3. Propiedad dielctrica o naturaleza del solvente Se refiere a como varia la constante dielctrica del solvente. El agua tiene la constante dielctrica mas alta por lo que las protenas se encuentran disuletas. En cambio en soluciones con solventes orgnicos como el ter, el cloroformo, disminuye la constante dielctrica por tanto se pierde la interaccin solvente-protena, por tanto tiene el mismo efecto que la sal (deshidratacin) y por tanto se favorece la interaccin protenaprotena, formndose agregados que finalmente precipitan. 4. Temperatura A temperaturas bajas las protenas son menos solubles porque disminuye la cintica A temperaturas altas (hasta cierto punto porque sobre los 50C se desnaturalizan) las protenas son ms solubles, porque aumenta la cintica del sistema