Ensino Mdio - Biologia

Atividades prticas Professor: Flvio Chame Barreto

Extrao de DNA Introduo O DNA o responsvel pelo armazenamento e transmisso da informao gentica que expressadas pela produo das variadas protenas que compem o ser vivo. Esta informao copiada ou transcrita nas molculas de RNA, cujas seqncias contm o cdigo para a ordenao especfica de aminocidos de uma cadeia polipeptdica que formaro as protenas. Uma molcula de DNA constituda por duas cadeias que se organizam numa dupla hlice e cada cadeia simples de DNA formada por uma molcula do acar desoxirribose, uma base que pode ser uma adenina, guanina, citosina ou timina e um grupo fosfato. Existem apenas esses quatro tipos de bases no DNA sendo que a adenina e guanina pertencem ao grupo das purinas, enquanto a timina e citosina so do grupo das pirimidinas. Extrao do DNA da cebola Objetivo Extrair o DNA da cebola que visualizado a olho nu e mostrar o seu aspecto. Esta experincia muito indicada para o Ensino Mdio. Material - Cebola 100g - Detergente de cozinha 10 ml - Sal de cozinha (NaCl) 1,5 g. - gua destilada 100ml. - Colher - Pipeta 10 ml - Recipiente com gelo - Extrato de cebola 10ml Etanol a 95% (gelado) 10ml Pipeta de Pasteur Tubos de ensaio Suporte para tubo de ensaio 2 Beakers de 250 e 400 ml. Funil de vidro. Filtro de caf . Recipiente para banho de maria.

Procedimentos 1. Adicionar NaCl, detergente e um pouco de gua destilada. Dissolver cuidadosamente evitando a formao de espuma. Completar com gua destilada at 100 ml. 2. Cortar a cebola em pequenos pedaos ( 5mm) e colocar no interior do Becker que contm a soluo de detergente e NaCl. 3. Colocar o Becker no banho maria a 60C durante 15 minutos. Durante este perodo pressionar constantemente a mistura contra as paredes do recipiente de vidro com uma colher. 4. Esfriar o Becker com a mistura no gelo durante 5 minutos. Durante este perodo pressionar constantemente a mistura contra as paredes do recipiente de vidro com uma colher. 5. Filtrar a mistura (utilizando o funil e o filtro de caf), tendo cuidado para que a espuma na superfcie do lquido no contamine o filtrado. Separao do DNA 1. Colocar cerca de 10 ml desse extrato de cebola num tubo de ensaio. 2. Inclinar o tubo de ensaio e verter cuidadosamente na parede do tubo 10 ml de etanol gelado a 95% . 3. Deixe repousar durante 2-3 minutos. 4. Cuidadosamente girar a pipeta Pasteur na zona entre as duas solues, o extrato e soluo alcolica, pois nesse local onde se encontrar o DNA, que tem um aspecto de grumos esbranquiados.

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Resultados e discusso A visualizao dos pequenos grumos que so os filamentos de DNA acontece facilmente. Isto ocorre porque o detergente causa a ruptura das membranas celulares desfazendo as ligaes moleculares das membranas, conseqentemente os lipdeos e protenas formam complexos com o detergente e precipitam. A molcula de DNA possuem carga negativa devido presena do grupo fosfato, logo as molculas individualizadas de DNA tendem a se repelir. O cloreto de sdio ao fornecer ons de carga positiva neutraliza a carga negativa das molculas de DNA, permitindo que estas se condensem quando em contato com uma soluo alcolica. O aquecimento em banho maria visa o desarranjo dos fosfolipdios das membranas e a desnaturao parcial das enzimas do tipo DNAse, pois na presena destas o DNA cortado em pequenos fragmentos, o que tornaria impossvel a sua extrao posterior. O resfriamento que se segue da soluo visa diminuir a ruptura das molculas de DNA. O DNA menos denso do que a gua e os resduos celulares. Desta forma as diferenas de densidade possibilitam que o DNA flutue dentro do tubo de ensaio entre o extrato e a soluo alcolica, j que o DNA insolvel no etanol gelado.

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