Observando microrganismos atravs do microscpio

Resumo I Microbiologia Tortora A unidade-padro de comprimento o metro (m). Os microrganismos so medidos em micrmetros (10 elevado a -6) e nanmetros (10 elevado a -9). Um microscpio simples tem uma lente; um microscpio composto tem mltiplas lentes.

Microscpio ptico
Microscpio ptico composto O microscpio mais comum usado em microbiologia o microscpio ptico composto. A ampliao total de um objeto calculada multiplicando a ampliao da lente objetiva pela da lente ocular. O microscpio ptico composto utiliza luz visvel. A resoluo mxima, ou potncia de resoluo ( a capacidade de diferenciar dois pontos) de um microscpio ptico composto de 0,2 micrmetros; a ampliao mxima de 2mil vezes. As amostras so coradas para aumentar a diferena entre os ndices de refrao da amostra e do meio. O leo de imerso usado com uma lente de imerso, para reduzir a perda de luz entre a lmina e a lente. A iluminao brilhante usada para esfregaos corados. As clulas sem colorao so observadas de modo mais produtivo com microscopia de campo escuro, contraste de fase ou CID. Microscopia de campo escuro O microscpio de campo escuro mostra uma silhueta de luz de um organismo contra um fundo escuro. Ele mais til para detectar a presena de organismos extremamente pequenos. Microscopia de contraste de fase Um microscpio de contraste de fase une os raios de luz direta e refletida ou difratada (em fase) para formar uma imagem da amostra na lente ocular. Ele permite a observao detalhada de organismos vivos. Microscopia de Contraste com interferncia diferencial (CID). O microscpio CID fornece uma imagem colorida tri-dimensional do objeto a ser observado. Ele permite observaes detalhadas das clulas vivas. Microscopia de Fluorescncia Na microscopia com fluorescncia, as amostras so primeiramente coradas com fluorocromos

e ento observadas atravs de um microscpio composto, utilizando uma fonte de luz ultravioleta. Os microrganismos aparecem como objetos brilhantes contra um fundo escuro. A microscopia com fluorescncia usada principalmente em um procedimento diagnstico denominado tcnica do anticorpo fluorescente (FA) ou imuno-fluorescncia. Microscopia confocal Na microscopia confocal, a amostra corada com um corante fluorescente, e um plano de cada vez iluminado. Utilizando um computador, imagens bi-dimensionais e tri-dimensionais das clulas podem ser produzidas.

Microscopia eletrnica
Um feixe de eltrons, ao invs de luz, usado em um microscpio eletrnico. Eletromagnetos, ao invs de lentes de vidro, controlam o foco, a iluminao e a ampliao. Cortes delgados de organismos podem ser observados em uma micrografia eletrnica feita com um microscpio eletrnico de transmisso. Ampliao: de 10.000 a 100.000 vezes. Potncia de resoluo: 2,5 nanmetros. Imagens tri-dimensionais das superfcies de microrganismos integrais podem ser obtidas com um microscpio eletrnico de varredura. Ampliao: de 1.000 a 10.000 vezes. Potncia de resoluo: 20 nanmetros.

Microscopia de varredura por sonda

A microscopia de tunelamento (MT) e a de fora atmica (MFA) produzem imagens tridimensionais da superfcie de uma molcula.

Preparao de amostras para microscopia ptica

Preparando esfregaos para colorao Realizar uma colorao significa colorir um microrganismo com um corante, para tornar algumas estruturas mais visveis. A fixao utiliza calor ou lcool para matar e fixar os organismos em uma lmina. Um esfregao um filme delgado de material usado para o exame microscpico. As bactrias so carregadas negativamente, e o on positivo colorido de um corante bsico ir corar as clulas bacterianas. O on negativo colorido de um corante cido ir corar o fundo de um esfregao bacteriano; uma colorao negativa produzida. Coloraes simples Uma colorao simples uma soluo aquosa ou alcolica de um nico corante bsico. Ela usada para tornar visveis as formas e os arranjos celulares. Um mordente pode ser usado para melhorar a ligao entre a colorao e a amostra.

Coloraes diferenciais Os corantes diferenciais, como a colorao de Gram e a colorao lcool-cido resistente, diferenciam as bactrias de acordo com suas reaes aos corantes. A colorao de Gram utiliza um corante prpura (violeta de genciana), iodo como mordente, um lcool descolorante e um contra-corante vermelho. As bactrias gram-positivas retm a cor prpura aps a descolorao; as bactrias gramnegativas no retm, e, assim, ficam rosadas com o contra-corante. Os micrbios lcool-cido resistentes, como os membros do gnero Mycobacterium e Nocardia, retm a carbol-fucsina aps a descolorao com lcool-cido e ficam vermelhos; os micrbios no-resistentes captam o contra-corante azul de metileno e ficam azuis. Coloraes especiais As coloraes para endosporos e flagelos so coloraes especiais que coram somente certas partes das bactrias. A colorao negativa usada para tornar visveis as cpsulas microbianas.