Mtodo Micro de fenoles totales en vino de Folin-Ciocalteu Este mtodo se utiliza de forma rutinaria en nuestro laboratorio para medir

fenoles totales. El procedimiento tambin se utiliza para el anlisis de fenoles totales en el t. Se utiliza el volumen mnimo de reactivos y casi elimina reactivo desperdiciado. Buenas pipetas micro debe ser utilizado para la reproducibilidad. Las cubetas de plstico o de vidrio pueden ser utilizados. Se basa en el mtodo descrito en Slinkard, K.; Singleton, VL Anlisis fenol total: Automatizacin y comparacin con los mtodos manuales. American Journal of Viticultura y Enologa de 1977, 28: 49-55; slo los volmenes se han reducido. Si no se puede medir de forma reproducible volmenes tan pequeos, tratar de reducir los volmenes lo mas posible. Esto reduce los residuos y el volumen de eliminacin. Folin Ciocalteu. Este se suele comprar tal como el reactivo 2N disponible de Sigma (F9252) o de Fisher Scientific (ICN19518690), y otros presumiblemente. Singleton y Rossi AJEV 1965, 16: 144-158, describen la preparacin del reactivo de tungstato sdico, molibdato de sodio, sulfato de litio, bromo, y algunos cidos. Solucin de cido glico: En un matraz aforado de 100 ml, se disuelven 0,500 g de cido glico seco en 10 ml de etanol y se diluye a volumen con agua. Se puede abrir todos los das, pero para almacenar, mantener cerrado en el refrigerador hasta por dos semanas. Solucin de carbonato de sodio.: Disolver 200 g de carbonato de sodio anhidro en 800 ml de agua y llevar a ebullicin. Despus de enfriar, aadir algunos cristales decarbonato de sodio, y despus de 24 horas, filtrar y aadir agua a 1 L. Para preparar una curva de calibracin, aadir 0, 1, 2, 3, 5, y 10 ml de la solucin madre en matraces volumtricos 100 ml y luego diluir a volumen con agua. Estas soluciones tienen concentraciones de fenol de 0, 50, 100, 150, 250 y 500 mg/l de cido glico, el alcance efectivo del ensayo.

De cada solucin de calibracin, la muestra, o el blanco, se toman con una micropipeta en 20 ul en cubetas separadas, y cada uno se adiciona 1,58 ml (1580 ul), de reactivo a continuacin, se aaden 100 ul del reactivo de Folin-Ciocalteu, y se mezcla bien. Se espera entre 30 segundos hasta 8 minutos, a continuacin, se aaden 300 ul de la solucin de carbonato de sodio anhidro y agitar para mezclar. Deja las soluciones a 20 C durante 2 horas y determinar la absorbancia de cada solucin a 765 nm frente al blanco (el "0 solucin) y determinar la absorbancia frente a la concentracin. Alternativamente, se pueden dejar a 40 C durante 30 min antes de la lectura de la absorbancia.
Crear una curva de calibracin con los standares y determinar los niveles en las muestras. No olvidar de multiplicar las concentraciones observadas por cualquier factor de dilucin de la muestra original. Los resultados se presentan en el equivalente de cido glico, GAE, debido a que los fenoles en el vino contienen fenoles sobre todo otras, y slo pequeas cantidades de cido glico

Dado que el ensayo mide todos los compuestos fenlicos, la eleccin de cido glico como estndar se basa en la disponibilidad de una sustancia estable y puro, y cido glico es a la vez, y es menos costoso que otras opciones. Adems, la respuesta al cido glico se ha demostrado que es equivalente a la mayora de los compuestos fenlicos en el vino otros sobre una base de masa. Tambin hemos probado la estabilidad de las soluciones de cido glico estndar y se puede decir que pierden menos del 5% de su valor de ms de dos semanas cuando se refrigera y se mantiene bien cerrado. Usted debe tomar su propia curva de calibracin cada vez que se ejecute el anlisis. No utilizar estos datos como una curva estndar. Es aqu solamente como un ejemplo de una curva estndar tpica.