COOMBS

Dr. Shivis Illis Zamora Jurez Patlogo Clnico Jefe de Banco de Sangre CETS Hidalgo

DEFINICION
La prueba de la antiglobulina humana o prueba de Coombs representa la tcnica ms importante de aglutinacin artificial en inmunohematologa. Mediante un procedimiento inmunolgico, esta reaccin nos permite revelar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en la membrana eritrocitaria

Pruebas de Coombs
Determinar la existencia de glbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y/o complemento in vivo, en particular IgG y C3d (Coombs directo) Determinar la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor (Coombs indirecto)

REACTIVO SUERO DE COOMBS

Es un reactivo que ser capaz de detectar globulinas humanas, especialmente gamma globulinas y componentes del complemento. La mezcla indicada se diluye con una solucin tampn (pH aprox. de 7) que contiene una pequea cantidad de albmina bovina; se le aade un 0,1 % de azida sdica (N3Na) como conservador. Para evitar errores en la utilizacin del reactivo obtenido, que es incoloro, puede adicionarse un colorante verde.

REACTIVO SUERO DE COOMBS

Poliespecfico:
Que contiene principalmente anti-IgG y anticomponente C3d del complemento, pudiendo contener adems anticuerpos de otras especificidades: anti IgM, anti-IgA, anti-C3b, etc., pero no es conveniente que contenga anti-C4, ya que dicha especificidad no slo carece de significado clnico, sino que los resultados positivos debidos a la misma pueden confundir por tratarse de falsos positivos.

REACTIVO SUERO DE COOMBS

Monoespecifico
Los diversos sueros antiglobulina inmunoespecficos se obtienen de modo anlogo a los poliespecficos, pero se utilizan las distintas fracciones separadas y purificadas para inyectar a los animales destinados a producir el reactivo, aunque en la actualidad se obtienen reactivos de calidad excelente gracias a los mtodos de obtencin de anticuerpos monoclonales.

Anticuerpos monoclonales
Tcnica de los hibridomas (Kohler, 1975) ha permitido el uso de los sueros reactivo con anticuerpos monoclonales, es decir, derivados de una clona nica de clulas y poseen por tanto, una sola especificidad.

En el campo de los grupos sanguneos han permitido la deteccin de subgrupos dbiles de algunos antgenos. Tambin son valiosos los reactivos antiglobulina humana obtenidos por este procedimiento.

Hibridoma
Un hibridoma es una lnea celular hbrida obtenida mediante la fusin de un linfocito B productor del anticuerpo especfico de inters, con una lnea celular de mieloma que no produce inmunoglobulina propia. Se obtiene as una lnea celular inmortal capaz de expresar el anticuerpo de inters, que se asla del sobrenadante.

COOMBS DIRECTO
El Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos de una reaccin hemoltica y en el diagnstico de anemias hemolticas auto inmunes, hemlisis inducidas por drogas, y enfermedad hemoltica del recin nacido.
Lavar tres veces los hemates del paciente con solucin salina fisiolgica. Hacer una suspensin de hemates lavados al 2-5 %. Aada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensin. Aada dos gotas de Suero de Coombs poliespecfico. Centrifugue un minuto a 1000 rpm. Lea desprendiendo suavemente el botn

 Si en la prueba de Coombs directo se observa aglutinacin esto indica presencia de anticuerpos y /o complemento unidos a los hemates in vivo, repita nuevamente el procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecficos anti-IgG y anti-C3d.

1:2 Anti Ig G 2+

1:4 1+

1:8 -

1:16 -

1:32 -

1:64 -

Anti C3b

1+

COOMBS INDIRECTO

Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero y decntelo en un tubo debidamente identificado. Prepare una suspensin al 2-5 % con la mezcla de hemates En un tubo debidamente rotulado aada dos gotas del suero y dos gotas de la suspensin y mezcle bien. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y aada en l dos gotas de la suspensin de hemates O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien Incube ambos tubos en un Bao de Mara a 37C por 30 minutos Lave tres veces con solucin salina escurriendo totalmente el sobrenadante del ltimo lavado. Aada dos gotas de suero de Coombs poliespecfico a cada tubo. Centrifugue 1minuto a 1000 rpm. Lea desprendiendo suavemente el botn en la lmpara aglutinoscopio.