Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Referencias
SHULER, Michael L.; KARGI, Fikret. Bioprocess engineering: basic concepts. 2nd. ed. concepts 2nd ed Upper Saddle River: Prentice Hall PTR PTR, c2002.553p. (Chemical engineering series ) ISBN 0130819085. SCHMIDELL Willib ld LIMA U l d Al id AQUARONE SCHMIDELL, Willibaldo; LIMA, Urgel de Almeida; AQUARONE, Eugnio; BORZANI, Walter (Coords.). Biotecnologia industrial: Engenharia Bioqumica, Vol. 2, Sao Paulo: Edgard Blucher, 2001. ISBN 8521202792 8521202792. GODIA C, e LOPEZ J. (editores) Ingeniera Bioqumica. Universidad Autnoma de Barcelona, Espaa. Captulo 4 Cintica microbiana. AIBA, S.; HUMPHREY, A. E.; MILLIS, N. F. Biochemical Engineering. Ed. Press, 153p. 1973
Fonte de carbono
Produtos
microrganismo
Fonte de nitrognio Clulas
CO2
H2O
Sntese
Manuteno
Hidrlise Hid li
Glicose
Piruvato
Produtos de Fermentao
( lactato, lcoois, cidos, etc.)
8 ATP
6 ATP
30 ATP
Ciclo de Krebs
Respirao Anaerbia p
(CO2, SO42-, NO3-)
O2
1 YX / ATP
1 YXM/ ATP
m ATP + D
1 YX / O2
1 YXM/ O2
mO
Parapodercalcularoscoeficientesestequiomtricosnecessrioconhecera composioelementaldomicrorganismo. Podeser:experimentalmenteporanliseelemental. porconsultaemaliteratura. Formulaempricaeexpressaseporconvenioemfunodeumnicotomode carbono. ParaareaoanteriorCH1,703O0,459N0,171 Permitefazerbalanodemassaeenergiaparacadacomponenteedeterminar Permite fazer balano de massa e energia para cada componente e determinar oscoeficientesestequiomtricos.
CLCULOS ESTEQUIOMTRICOS
CH1,8O0,5N0,2
Um mol de material biolgico definido como a quantidade que contm 1 grama de tomos de carbono, como em CHON
CLCULOS ESTEQUIOMTRICOS
Para a seguinte converso biolgica, onde no h formao de produtos, produtos alm de CO2 e H2O:
O coeficiente respiratrio fi i t i t i :
e RQ = a
GRAU DE REDUO ()
Quando as reaes so mais complexas, como quando h formao de produto extracelular, um coeficiente estequiomtrico adicionado. O conceito de grau de reduo utilizado para um balano de prtons e eltrons d bi t lt da biorreao. O grau de reduo de um composto orgnico definido como o nmero de equivalentes de eltrons disponveis por grama de tomos de carbono Os eltrons disponveis so aqueles que poderiam ser transferidos para o oxignio durante a oxidao de um composto a CO2, H2O e NH3. Grau de reduo de alguns elementos: g
C=4 H=1 N = -3
O = -2 P=5 S=6
Metano (CH4):
1(4) + 4(1) = 8,
( ) Glicose (C6H12O6): 6(4) + 12(1) + 6(-2) = 24, Etanol (C2H5OH): 2(4) + 6(1) + 1(-2) = 12,
Exemplo1:
Calcule o grau de reduo dos seguintes compostos. a) piruvato ( 3O3H3) ) p (C b) cido ltico (C3O3H6)
GRAU DE REDUO ()
s = 4 + m 2n b = 4 + 2 3 p = 4 + x 2y 3z
OBS: Os graus de reduo do CO2, H2O e NH3 so zero.
A equao da reao acima pode ser utilizada para balanos de massa, balanos elementares de C, H, O e N, balano eletrnico e energtico. Balano de carbono: c + d + f =1 ocoeficientec oYX/S ocoeficiented oYP/S
ocoeficientec oYX/S
RENDIMENTOS
coeficientederendimentobiomassa/substrato
ocoeficientec oYX/O2 coeficientederendimentobiomassa/oxignio ocoeficientec oYX/NH3 coeficientederendimentobiomassa/amnia fi i d di bi / i ocoeficiented oYP/S coeficientederendimentoproduto/substrato FATORDE FATOR DE CONVERSO
Exemplo2: p
Ocoeficienterespiratrio,RQiguala1,033(molesdeCO2formados/molde O2 gasto).
Resposta:
Exerccio1:
A degradao aerbica de um composto orgnico por uma cultura mista de bactrias em um efluente industrial pode ser representada pela seguinte reao:
C3H6O3 + aO2 + bNH3 cC5H7NO2 + dH2O + eCO2
b) Determine os coeficientes de rendimento YX/O2 e YX/NH3 c) Determine o grau de reduo para substrato, bactria e o coeficiente respiratrio (RQ).
Produto
Curva de Crescimento
Esgotamento de nutrientes E t t d ti t
Caractersticas nenhumaumentononmerodeclulas, aumentamdetamanho,sosintetizadasnovas d h i i d enzimasparaasclulasseadaptaremaonovo meio condiesdecrescimentobalanceado;asclulas souniformesemtermosdecomposioqumicae atividademetablicasefisiolgicas.Picoda atividadeeeficinciafisiolgica acmulodeprodutosmetablicostxicose/ou exaustodenutrientes.Algumasclulasmorrem, exausto de nutrientes Algumas clulas morrem outrascrescemesedividem.Onmerodeclulas viveisdiminui acmuloadicionaldeprodutosmetablicos inibitrios.Ataxademorteacelerada;onmero declulasdiminuidemodoexponencial.
Exponencialou Log
mximaou constante
Estacionria
zero
Morte
negativa
Muitas vezes no so possveis devido presena de slidos em suspenso DETERMINAO DO NMERO DE CLULAS:
Contagem Microscpica e Contagem Celular Eletrnica - expresso em nmero de clulas/mL Contagem em Placa - expresso em UFC/mL (unidade formadora de colnia)
Medidas do consumo de substrato e/ou formao de produtos Determinao de Componentes Celulares: Contedo de Nitrognio p g (protena), RNA, DNA, lipdios, polissacardeos Determinao de Produtos Metablicos Especficos Determinao de Componentes do Meio de Cultura glicose Viscosidade Produo de gs Condutncia Produo de calor
CRESCIMENTO CELULAR
O crescimento microbiano pode ser considerado como um conjunto de reaes qumicas em cadeia, que levam produo de biomassa. q ,q p Os nutrientes do meio de cultura so convertidos em energia e em compostos biolgicos substrato + clulas S + X produtos extracelulares P + nX + mais clulas
dX = X dt
1 dX = X d dt
YX / S =
YP / S =
Substrato (S)
dX = X dt
X = X0
ou
em t = 0
t
Integrando:
X ln = t X0
X = X 0e
d =
ln 2
0,693
Exerccio2: Foi realizado o crescimento de Saccharomyces cerevisiae a 30C em meio contendo: 30 C 10 g/L de extrato de levedura, 20 g/L de glicose e 20 g/L de peptona. O crescimento foi realizado em frascos de 1L contendo 300 mL de meio. p ( Amostras foram retiradas periodicamente e determinouse (os dados obtidos esto na tabela abaixo) : a absorbncia a 600 nm, o peso seco das clulas e o nmero total de clulas. Calcule e td para os trs modos de medida do crescimento microbiano.
Absorbncia ( )
N de clulas ( )
3 2
lnabs600nm
t(h)
Absorbncia ( )
Peso seco( )
2 1,5 1 0,5
lnX
t(h)
X=X e
dt
dN = k 'd N dt
ou
N = NSe
K 'd t
dx = dt
ds = dt
dp = dt
Crescimento
Consumo
Formao
exponencial
em
1 X
dX dt
1 X
s
dX dt d
1 = X dS dt
Consumodesubstrato:
1 X
dP dt
Como essa fase tem a distribuio de uma reta a velocidade especfica de crescimento constante e mxima.
log l
l log
0 i
= (t ti )
Rearranjandoaequaoanterior: j q
X
ln
= X
X
0 i
( t ti )
Ou,reescrevendodeoutraforma,temse:
= ln
0 i
+ t
Fatordeconversodesubstratoaclulas
Y
X / S
Tdup
ln 2
X X 0 S 0 S
Para leveduras e bactrias crescendo aerobicamente em glicose, YX/S 0 4 a 0 6 g/g e YX/O2 0 9 a 1 4 g/g 0,4 0,6 / 0,9 1,4 / O coeficiente de manuteno utilizado para descrever a velocidade especfica de consumo de substrato para a manuteno celular:
Este parmetro importante para a determinao de X em cultivo de fungos filamentosos e em processos de tratamento de efluentes. O fator de converso pode ser obtido tambm atravs de:
/ S
Coeficientedemanuteno
= m
'X / S
Produtividadedebiomassa
P = X
F
X T
F
RENDIMENTO BIOMASSA-SUBSTRATO
Exerccio3:
Uma linhagem de fungo foi cultivada em batelada, utilizando glicose como substrato. Os seguintes dados foram obtidos:
Calcule: a) A velocidade especfica de crescimento b) O rendimento biomassa/substrato c) e qual a mxima concentrao celular seria esperada se 150 g de glicose fosse utilizada com o mesmo tamanho de inculo?
4 3,5 3 2,5
lnX X
2 1,5 1 0,5 05 0 0 10 20
30
40
50
t(h)
1 dS S = X dt
1 dP P = X dt
de consumo de substrato
de formao de produto
Formaodeprodutos. Formao de produtos. 1. Formaodeprodutodiretamente relacionadocomutilizaodasubstrato. l d l d b Exemplo:Etanol. e p o: ta o . 2. Formaodeprodutoindiretamente relacionadocomutilizaodasubstrato. l i d tili d bt t Exemplo:cidoctrico. p 3. Formaodeprodutoaparentementeno associadacomautilizaodasubstrato. associada com a utilizao da substrato Exemplo:Penicilina.
Classificaoosprocessosfermentativosdependendodeotipodereao. Simples: Os Si l O nutrientes se convertem em produtos com uma taxa estequiomtrica fi i d i i fixa,
sem acumulo de intermedirios. Exemplo: Converso de glicose em cido glucnico pela Aspergillus niger.
1 dP P = = YP / X X dt
produo de enzima constitutiva, de etanol
P =
= constante
= +
relaodeLuedekingPiret g
P = +
Se = 0, o produto no associado ao crescimento Se = 0 o produto associado ao crescimento e = YP / X 0, crescimento,
a b
a: crescimento parcialmente associado ao crescimento b: crescimento associado ao crescimento
c: crescimento crescimento
no
associado
ao
TEMPERATURA 1. PSICRFILOS (Ttima < 20C) ( ) MICRORGANISMOS 2. MESFILOS (20C < Ttima < 50C) 3. TERMFILOS (Ttima > 50C)
Acima da temperatura tima, a velocidade de crescimento diminui e pode ocorrer a morte trmica das clulas. A velocidade d crescimento ( ) e a constante d morte celular (kd) l id d de i () de l l variam com a temperatura segundo a equao de Arrhenius:
= Ae
Ea / RT
k 'd = A' e
Ed / RT
Ea = 10 a 20 kcal/mol
Ed = 60 a 80 kcal/mol
A temperatura tambm afeta a formao de produtos A Ttima para a formao de produtos pode ser diferente da Ttima de crescimento!! O coeficiente de rendimento YX/S tambm afetado pela temperatura, pois acima da Ttima, os requerimentos de manuteno da clula aumentam.
pH
OXIGNIODISSOLVIDO Substrato importante em bioprocessos aerbicos Pode ser um substrato limitante, pois o oxignio pouco solvel na gua. Em altas concentraes celulares a velocidade de consumo de oxignio pode exceder a velocidade de fornecimento de oxignio, limitando o crescimento crescimento.
facultativo
aerbico estrito
OXIGNIODISSOLVIDO A concentrao crtica de oxignio o valor da velocidade de consumo de O2 que permite a respirao sem o microrganismo entre em metabolismo anaerbico A Ccrit de 5 a 10% da concentrao de saturao de oxignio dissolvido para bactrias e leveduras e de 10 a 50% para fungos.
POTENCIALREDOX Afeta a velocidade e a quantidade de muitas reaes de oxi-reduo. Num meio d cultura, o potencial redox f N i de lt t i l d funo d oxignio di do i i dissolvido, l id do pH e da concentrao de outros ons O potencial eletroqumico dado pela seguinte equao:
Equao de Monod:
mS
KS + S
KS = coeficiente de Monod ou constante de saturao KS = S quando = 1/2mx KS = relaciona a especificidade do microrganismo com o substrato m = velocidade especfica de crescimento mxima quando S >> KS
mS
KS + S
Se S >> KS
= m
dX m = dtX
dX m dt = X
dX X = t m dt X0 0
ln X ln X 0 = m (t t0 )
ln X ln X 0 m = t
EXERCCIO4: EXERCCIO 4: O estudo cintico em batelada de produo de etanol pela bactria Zymomonas mobilis apresentou os seguintes resultados: Tempo(h) Tempo (h) Biomassa(g/L) Biomassa (g/L) Glicose(g/L) Glicose (g/L) Etanol(g/L) Etanol (g/L) 5 9 14 18 22 24 26 30 35 0,05 0,15 0,45 1,20 2,80 3,40 3,80 3 80 4,15 4,20 247 240 225 195 130 100 75 40 25 1,5 5,0 12,0 22,0 47,0 63,0 74,0 74 0 90,0 100,0
Apresente um grfico utilizando os dados acima e calcule: a) a velocidade especfica de crescimento mxima b) os coeficientes de converso substrato/biomassa e substrato/etanol c) o coeficiente que associa a produo de etanol com a de biomassa
EXERCCIO5:
Considere as curvas de crescimento da levedura S. cerevisiae abaixo. Identifique as fases de crescimento da levedura, e indique o que cada uma das fases significa. O que pode ser concludo quando comparamos as trs curvas, sabendo que o cultivo foi realizado em batelada, em frascos erlenmeyer de 500 mL e que a curva ( ) representa o crescimento d microrganismo em 200 mL t i t do i i L de meio, a curva ( ) em 300 mL e a curva ( ) em 400 mL? Comente sobre a velocidade especfica de crescimento, o tempo de duplicao celular e a oxigenao do meio meio.
3
16 14 12
Absorbncia 600nm
2,5
ln(abs 600nm)
10 8 6 4 2 0 0 5 10 Tempo(h) 15 20
300mL 200mL 200 mL 400mL
1,5 15
0,5
0 0 2 4 Tempo(h) 6