UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO ESCUELA NACIONAL PREPARATORIA N 2 ERASMO CASTELLANOS QUINTO

PRCTICA # 2

TASA DE REACCIN DEL HGADO DE POLLO CON EL AGUA OXIGENADA

Badillo Gonzles Kindalaya Ollin Corona Cruz Deni Mellanie Fierro Alonzo Cinthya Karina Gallardo Aceves Brenda Alejandra Pineda Ballesteros Erika Vanessa Tepox Martnez Alejandra Nathin Grupo: 604 Fecha de entrega: 23 de noviembre del 2011

Profesor: Gonzlez Yoval Pablo

Tasa de reaccin del hgado de pollo con el agua oxigenada INTRODUCCION En esta prctica trataremos de desarrollar la reaccin qumica que se da entre el H2O2 (agua oxigenada) y el hgado de pollo (sabiendo que este contiene una enzima llamada catalasa que acelera la reaccin), durante el cual el H 2O2 se descompone en agua (H2O) y oxgeno (O2), pudiendo observar esta descomposicin al notar que se produce un burbujeo o efervescencia. As mismo desarrollaremos el modo en que con materiales reciclados, pudimos crear un dispositivo que fuera capaz de medir la cantidad de volumen de oxgeno que se desprenda durante la reaccin anteriormente mencionada. ANTECEDENTES Agua oxigenada El agua oxigenada que se utiliza para desinfectar heridas y decolorar el pelo, descompone espontneamente liberando oxigeno en forma de burbujas. Esta reaccin en condiciones normales ocurre lentamente, pero puede acelerase agregando un catalizador, es decir, una sustancia que acelera reacciones qumicas. Entre los catalizadores se encuentran compuestos inorgnicos, como el dixido de manganeso; y biolgicos -enzimas- como la catalasa. (Campbell, 2001 pg. 77) El hgado de pollo fresco es una fuente importante de peroxidasa (catalasa) que acelera el rompimiento del agua oxigenada en molculas de agua y oxgeno gaseoso. Esta reaccin se puede comprobar mediante el desprendimiento de burbujas en los tejidos vivos. (Campbell, 2001 pg. 77) *Propiedades del agua oxigenada El agua oxigenada es una sustancia inestable, oxidante y muy txica. Su accin desinfectante y decolorante se debe a que oxida componentes de los microrganismos. En las clulas se produce agua oxigenada en pequea

cantidad, como un subproducto de las reacciones bioqumicas de la respiracin. (Campbell, 2001 pg. 77) Campbell dice que espontneamente, el agua oxigenada se descompone en agua y oxgeno de acuerdo con la siguiente reaccin: 2H2O2 2H2O + O2 La unin de molculas de agua oxigenada sobre la superficie de un catalizador slido puede facilitar la ruptura y formacin de uniones qumicas. En el caso de la descomposicin del agua oxigenada, el catalizador debilita la unin entre los tomos de oxgeno (H-O-O-H), que separan durante el proceso. (pg. 77) Enzima Las enzimas son biomoleculas que regulan la velocidad de las reacciones qumicas de la clula. Las enzimas son protenas especificas cuya estructura se acopla al reactivo permitiendo que se lleve a cabo la reaccin. Algunas enzimas estn formadas por protenas que contienen molculas que no son proteicas. Estas molculas se llaman cofactores o grupo alostrico y pueden contener molculas orgnicas o inorgnicas. (Oate, 2009; Bohinski, 1991 pgs. 191) De igual forma Oate menciona que existen muchos grupos alostricos que estn formados por metales, como por ejemplo el magnesio y hierro. (pg. 191) La funcin de una enzima, es incrementar la velocidad o celeridad de una reaccin. Sin embargo, las enzimas poseen tres caractersticas. En primer lugar son los catalizadores ms eficientes que se conocen, pues basta cantidades muy pequeas de ellas para acelerar o disminuir una reaccin. (Oate, 2009; Bohinski, 1991 pg. 174) En segundo lugar, la mayora de las enzimas se distinguen por una especificidad de accin, lo que significa que prcticamente cada conversin de un reactivo llamado sustrato, es catalizada por determinada enzima. La tercera

caracterstica, es que las acciones de muchas enzimas son reguladas; es decir, pueden cambiar alternativamente de un estado de baja actividad a otro de gran actividad. (Oate, 2009; Bohinski, 1991 pg. 174)

*Estructura de una enzima Las enzimas esta formadas por polipptidos los cuales a su vez se forman por cadenas de aminocidos. Para que la enzima sea funcional, la estructura debe ser intacta. Algunas mutaciones ocasionan cambios en el orden de los aminocidos en la cadena, lo que afecta gravemente la funcin de la enzima. (Oate, 2009 pg. 192) El sitio ms importante de accin de la enzima se llama centro activo. El centro activo de la enzima es un sitio muy especfico, con una forma especifica, capaz de acoplarse al sustrato y con alguna fuerza electroesttica que le permite tener mayor afinidad por el sustrato. La correcta estructura y acomodo de los aminocidos en la cadena polipeptdica asegura la especificidad y accin de la enzima. (Oate, 2009 pg. 192) Por lo cual Oate, afirma que cualquier error en la cadena de aminocidos puede afectar la estructura globular de la enzima impidiendo que se acople al sustrato. (pg. 192) Catalasa La catalasa y la mayora de las protenas, tienen como caracterstica su estructura tridimensional. La actividad de las enzimas depende de esta estructura, en la cual hay una zona en la que se inserta una molcula del reactivo (o sustrato) de manera ajustada y especifica, como puede hacerlo una llave en la cerradura. (Campbell, 2001 pgs. 77-78) Campbell, afirma as que la unin del sustrato a la enzima desencadena la reaccin qumica, se liberan los productos y el sitio de unin queda libre

nuevamente, para captar otra molcula de sustrato y continuar con la reaccin. (pg. 78) La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria para que durante el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el peroxido de hidrogeno H2O2. Esta enzima, la catalasa lo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. (Campbell, 2001 pg. 78) La reaccin de la catalasa sobre el H2O2 es la siguiente: Reaccin A.- la existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como desinfectante en una herida. Como muchas de las bacterias son anaerobias (no pueden vivir con oxigeno), mueren con el desprendimiento, mueren con el desprendimiento de oxgeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta sobre el H2O2. (Campbell, 2001 pg. 78) Desnaturalizacin Ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin cataltica por lo que no podr descomponer el agua oxigenada y no se observara ningn tipo de reaccin. (Bohinski, 1991) La manera de demostrar la importancia que tienen una estructura especfica de una protena para su funcin biolgica es alterar la estructura y determinar cul es el efecto de esta alteracin en la funcin. Una alteracin extrema es la total anulacin de la estructura tridimensional, un proceso denominado desnaturalizacin. (Lehninger, 1993 pg. 180) A manera de ejemplo Lehninger comenta que se trata de un proceso tan familiar como el que ocurre cuando se hierve un huevo. La clara del huevo, que contiene la protena soluble como ovoalbmina, se coagula formando un slido blanco por accin del calor. Una vez enfriada, no volver a redisolverse para adquirir otra vez el aspecto que posea la clara del huevo original no cocido. El

calentamiento de la ovoalbmina ha variado su estructura, aparentemente de modo irreversible. (pg. 180) Este efecto del calor es observado en prcticamente todas las protenas globulares como la catalasa, independientemente de su tamao o funcin biolgica, aunque la temperatura exacta a la que ocurre este proceso puede variar y ser adems ocasionalmente reversible. (Lehninger, 1993 pg. 180) El cambio de estructura provocado por la desnaturalizacin se asocia casi invariablemente a la perdida de funcionalidad. (Lehninger, 1993 pg. 180) De acuerdo con Lehninger, esta es una consecuencia esperada a partir del principio que enuncia que la estructura tridimensional especfica de una protena resulta crtica para su funcin. (pg. 180) La desnaturalizacin de protenas puede llevarse a cabo no solamente por accin del calor, si no tambin por la accin de extremos de pH, de ciertos disolventes orgnicos miscibles en agua como el alcohol o la acetona, de ciertos solutos como la urea, o mediante la exposicin de la protena a determinados detergentes. El tratamiento con cada uno de estos agentes desnaturalizantes puede considerarse relativamente suave, en el sentido de que no se rompen enlaces covalentes de la cadena polipeptdica. (Lehninger, 1993 pg. 180) La ebullicin de una disolucin de protena destruye una serie de interacciones dbiles. Los disolventes orgnicos, la urea y los detergentes actan en principio deshaciendo las interacciones hidrofbicas que forman el ncleo estable de las protenas globulares; los extremos de pH alteran la carga neta de la protena, dando lugar a la aparicin de repulsiones electroestticas y a la destruccin de algunos enlaces de hidrogeno. (Lehninger, 1993 pg. 180) Recurdese que la estructura nativa de la mayora de las protenas es solo marginalmente estable. No es necesario eliminar todas las interacciones estabilizadoras dbiles para reducir la estabilidad termodinmica hasta un nivel

que es insuficiente para mantener intacta la conformacin de la protena. (Lehninger, 1993 pgs. 180-181) La prueba ms importante de que la estructura terciaria de una protena globular esta determinada por su secuencia de aminocidos vino de experimentos que demostraron que la desnaturalizacin de algunas protenas es reversible. (Lehninger, 1993 pg.181) Algunas protenas globulares desnaturalizadas por calor, extremos de pH o reactivos desnaturalizantes son capaces de recuperar su estructura nativa y su actividad biolgica en un proceso conocido como renaturalizacin, si son devueltas a condiciones en las que su conformacin nativa es estable. (Lehninger, 1993 pg. 181) JUSTIFICACION Realizaremos esta prctica, para demostrar mediante los conocimientos previamente adquiridos, la hiptesis de que los tejidos animales (en este caso hgado de pollo) contienen una enzima, llamada catalasa que acelera la descomposicin del H2O2. Adems de poder probar que el dispositivo que elaboramos con materiales reciclados funciona, mediante la medicin del volumen cada 2 segundos, y as determinar la tasa de reaccin del hgado y el agua oxigenada. OBJETIVO *Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en el tejido animal. *Realizar un dispositivo capaz de medir el volumen de oxigeno que se desprende de la reaccin, con un mnimo de margen de error.

Figura 1. Determinacin de la presencia o ausencia de la catalasa (Lourdes Luengo), obtenida en sitios web:

http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-catalasa

Figura 2. Determinacin de la presencia o ausencia de la catalasa (Lourdes Luengo), obtenida en sitios web: http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-catalasa

METODOLOGIA *Realizacin del dispositivo 1. En primera instancia conseguimos un tubo de ensaye que ya no ocupbamos, o bien dos moldes de gelatina. 2. Ya teniendo el envase lo sellamos muy bien para que no tuviera ningn tipo de fuga (con un corcho en el caso del tubo de ensaye, o con silicn si eran los moldes de gelatina). 3. Conseguimos dos jeringas, y ambas fueron introducidas en el corcho, fijndonos previamente que no hubiera ninguna fuga. *Realizacin de la reaccin 1. Ya que armamos el dispositivo, colocamos el hgado de pollo crudo, y previamente machacado en el tubo de ensaye.

2. Procedimos a cerrarlo nuevamente, y con una de las jeringas que habamos insertado vaciamos al tubo 4ml de agua oxigenada. 3. Al hacer reaccin, se desprendera el oxigeno, y lo que sucede con la otra jeringa vaca es que el embolo ira subiendo, por la presin (o empuje) que provoca el oxgeno. 4. Y por ultimo mientras transcurre la reaccin, segundos. 5. Repetiremos el paso anterior cuatro veces ms, para obtener resultados mas certeros. RESULTADOS
Tabla 1 En esta tabla se pueden mostrar las Observaciones y Resultados realizados durante el desarrollo del experimento, as mismo se exponen las imgenes correspondientes a cada reaccin.

con ayuda del

cronometro, iremos anotando cuantos mililitros sube el embolo cada 2

Explicacin de los resultados de la reaccin de hgado de pollo con H2O2

Tabla. 1 Resultados, Desarrollo e imgenes del experimento. Imagen Qu sucedi? En el tubo numero uno tenamos el hgado crudo (entero) y agregamos agua oxigenada y al terminar de agregar el agua oxigenada empez a hacer reaccin la catalasa que est contenida en el hgado con el H2O2 . Como resultado de la reaccin la enzima catalasa rompe las molculas del agua oxigenada convirtindola en agua y oxigeno. Por la liberacin de oxigeno logramos observar la efervescencia que se crea por la interaccin del hgado con el agua Tubo 1.Hgado entero oxigenada. En el tubo numero dos tenamos hgado macerado y al agregar el agua oxigenada la reaccin fue instantnea y muy fuerte ya que hay mucho mas efervescencia que en el tubo uno. Creemos que al macerar el hgado exponemos ms a las enzimas de este y es por eso que la catalasa puede descomponer al agua oxigenada mucho ms rpido en oxigeno y agua. Tubo 2.Hgado macerado En el tubo numero 3 colocamos un hgado cocido y al agregar el agua oxigenada no ocurri ninguna reaccin. En este tubo no ocurri nada ya que con el calor que aplicamos al cocer el hgado desnaturalizamos a la enzima catalasa que esta la encargada de descomponer al agua oxigenada. La catalasa de desnaturaliza ya que es una protena y son termolbiles. Tubo 3.Hgado cocido

Resultado de la medicin de liberacin de oxigeno en la reaccin de la catalasa y el hgado.

Tabla. 2 Velocidad de reaccin de la catalasa Tiempo (s) 2 4 6 8 10 Vol (cm) 1 2 3 4 5

Fig.

En la figura 3 se muestra la pendiente que se genera al relacionar el volumen del O2 liberado en cierto tiempo en la reaccin del hgado con el H2O2. As se puede observar q esta funcin es de tipo lineal y tiene una pendiente de 0.5, donde R es igual a 1. Nota: se hicieron varias pruebas para que los resultados fueran ms precisos y exactos debido a los diversos factores que pudieran afectarlos tales como el error humano.

Tabla. 3 Velocidad de reaccin de la catalasa Tiempo (s) 2 Vol. (cm3) 1

4 6 8 10

2 3.5 4.7 5.5

Fig. 4 En la figura 4 obtuvimos resultados un poco diferentes con los primeros, mas seguimos viendo que se produce una funcin lineal ascendente con una pendiente de 0.585 que a comparacin con la anterior (0.5) nos dice que tiene un ligero aumento pero sigue siendo bastante precisa. Tambin el R que anteriormente tena un valor de 1 y ahora es de 0.9911 (disminuyo), es preciso.

Tabla. 4 Velocidad de reaccin con la catalasa Tiempo (s) 2 4 6 8 10 Vol (cm) 1.5 2 3.3 4 5.4

Fig. 5 Ahora en la grfica anterior se observa que la pendiente de la funcin lineal ascendente disminuyo ligeramente de 0.585-0.5 a 0.49, al igual que el R que antes oscilaba entre 1 y 0.9911 ahora es de 0.9788. Tabla. 5 Velocidad de reaccin de la catalasa Tiempo (s) 2 4 6 8 10 Vol (cm) 1 2.4 3.1 4.2 5.3

Fig. 6

Por ultimo en la figura 6 de la funcin lineal se observa, como en la figura 4 un ligero aumento en la pendiente (antes 0.5, 0.585 y 0.49), que ahora vale 0.52, demostrando que nuestras pruebas en el experimento fueron realizadas de una

manera lo ms preciso posible, teniendo un rango de entre 0.58 a 0.49. As tambin con R se muestran datos cercanos que van de 1, 0.9911, 0.9788 y por ultimo 0.9923, dando pruebas de exactitud a nuestro experimento realizado.
Tabla. 6 En esta tabla se muestra la comparacin de los resultados obtenidos en las grficas de las pruebas en tasas de reaccin del hgado con el agua oxigenada.

Grfica 1 Grfica 2 Grfica 3 Grfica 4 DISCUSION

Ecuacin y=0.5x y=0.585x - 0.17 y=0.49x + 0.3 y=0.52x + 0.08

Pendiente (m) 0.5 0.585 0.49 0.52

R 1 0.9911 0.9788 0.9923

Despus de realizar el dispositivo y posteriormente la practica en el saln de clase, hemos discutido la causa de por qu el embolo sube marcando el nivel de oxigeno que produce la reaccin. Como podemos observar, la catalasa pertenece al grupo de enzimas que catalizan reacciones de oxido-reduccin. (Laguna J., 1979, pp. 89). Se ha demostrado que los peroxisomas del hgado tienen un sistema de oxidacin extraordinariamente activo capaz de oxidar los cidos grasos de cadena larga (C16, C18). Los cidos grasos de cadena corta no son oxidados por los peroxisomas, pero son utilizados rpidamente por las mitocondrias. (Conn, 1996, pag.332) Las enzimas de la oxidacin de los peroxisomas destacan por el hecho de que la primera etapa de la oxidacin es catalizada por una flavo protena, una acil CoA oxidasa (Conn, 1996, pag.332)
Acetil CoA + O2 acil CoA 1 - insaturada + H2O2

Todas las enzimas asociadas -oxidacin se localizan en las membranas internas y la matriz de las mitocondrias del hgado, esto debido a que la los sistemas de transporte de membrana interna es tambin el sitio de

electrones y la fosforilacin oxidativa, esta distribucin es de importancia

fundamental para la liberacin y conservacin eficientes de la energa potencial almacenada en los cidos grasos de cadena larga. (Conn, 1996, pag.445) As, tras catalizar la descomposicin de una molcula de H2O2, la catalasa vuelve a encontrarse exactamente en el mismo estado que antes, preparada para un nuevo ciclo. En segundo lugar, los catalizadores modifican la velocidad de los procesos, pero no afectan la posicin de equilibrio de una reaccin. (Devlyn, 1999, pp., 390). Todo lo anterior citado nos indica que la oxido-reduccin que protagoniza la catalasa, la pudimos observar muy claramente en el experimento que realizamos, pero al analizar todos los resultados obtenidos pudimos observar que obtuvimos un rango de diferencia, por ejemplo con los valores de las pendientes de la figura.3, figura. 4, figura. 5 y figura. 6 con valores de pendiente 0.5, 0.58 0.49 y 0.52 respectivamente, que aunque no varan mucho, si son significativos, ya que pudimos haber cometido ciertos errores que pudieron alterar los resultados reales, por ejemplo: Si medimos la misma cantidad de agua oxigenada y de hgado en las cuatro pruebas tomadas.

Si los valores eran los mismos o si las variaciones eran similares

o presentaban diferencias notorias. Si el dispositivo mostraba fallas a que se debieron y como las

podamos arreglar, adems de las fallas humanas. El hgado de pollo fresco es una fuente importante de peroxidasa (catalasa) que acelera el rompimiento del agua oxigenada en molculas de agua y oxgeno gaseoso. Esta reaccin se puede comprobar mediante el desprendimiento de burbujas en los tejidos vivos. (Campbell, 2001 pg. 77) De igual manera, como vimos en la Tabla. 1(Resultados, Desarrollo e

imgenes del experimento), en el experimento utilizamos el hgado de pollo, en varias presentaciones: por ejemplo, el hgado entero: este presento una reaccin considerablemente rpida, sin en cambio cuando maceramos el hgado, la reaccin se llevo a cabo an ms rpido, esto lo discutimos y

estuvimos de acuerdo en que fue gracias a que el hgado macerado al estar en pequeos trozos, la enzima catalasa estaba ms expuesta, y as con el agua oxigenada reaccionaron al mismo tiempo en todos los trocitos, por eso hubo un desprendimiento de oxigeno y burbujas ms violento, y como esta enzima (catalasa) se encuentra en los tejidos internos del hgado, al estar completo, tuvo que traspasar las capas del hgado hasta encontrase con la catalasa y as reaccionar. De la misma manera en el experimento usamos hgado previamente cosido, y al ponerlo en contacto con el agua oxigenada, nos percatamos de que no tuvo ninguna reaccin. Por lo cual Bohinski afirma ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria, perder tambin la funcin cataltica por lo que no podr descomponer el agua oxigenada y no se observara ningn tipo de reaccin. CONCLUSIONES En base a la informacin previa acerca de las enzimas tales como la catalasa y sobre el xito obtenido con la representacin del dispositivo antes descrito, podemos concluir que gracias al experimento, precisin y cuidado, se pudo observar que la catalasa pudo reaccionar en presencia del agua oxigenada; y adems de analizar y poder entender cmo es que estas reacciones qumicas se llevan a cabo en nuestro cuerpo, debido a que la catalasa es una enzima que est presente en muchos sistemas biolgicos ya sea en este caso, desde tejidos animales como vegetales; tambin es de grande importancia a nivel celular ya que debido a temas antes vistos en la unidad, podemos entender las diversas reacciones que tiene a nivel celular, ya que se localiza en las mitocondrias y los peroxisomas, adems de que son especficas, debido a que para cada reaccin qumica hay una enzima especial, y gracias a que son catalizadores, aceleran la velocidad de las reacciones qumicas sin intervenir directamente en ellas y obteniendo un gasto mnimo de energa de activacin de las reacciones, con ello comprendemos por que las reacciones de nuestro metabolismo son irreversibles.

BIBLIOGRAFIA * Bohinski, Robert, C. (1991), Bioqumica, Addison Wesley, Mxico, pp. 174191 * Campbell, Neil, A. et al, (2001), Biologa conceptos y relaciones, Pearson Educacin, Mxico, pp. 77-78 * Conn, Erick, E. (1996), Bioqumica Fundamental, Limusa, Mxico, pp. 332, 390, 445 * Lehninger, Albert, L. (1993), Principios de Bioqumica, Ediciones Omega, Barcelona, pp. 180-181 * Oate, Ocaa, L. (2009), Biologa, CENGAGE Learning, Mxico, pp. 191-192 AUTOEVALUACION Busqueda de informacin Kindalaya Ollin Deni Mellanie Cinthya Karina Brenda Alejandra Erika Vanessa Alejandra Nathin Organizar Participacin Elaboracin la en la de grficas, informacin redaccin tablas

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