Curs 6- Genetic DETERMINISMUL GENETIC AL SEXELOR Fenomenul de sexualitate presupune mperecherea organismelor de sex opus spre a realiza unirea

gameilor n cadrul procesului de fecundaie n urma cruia rezult zigotul, punctul de plecare n ontogeneza unui nou organism. Momentul cheie n procesul de sexualitate este meioza. n meioz se stabilete destinul viitorului organism cnd are loc asortarea independent a perechilor de factori ereditari cu toat gama de evenimente ce au loc dup acest fenomen: separarea i njumtirea cromosomilor, reunirea i refacerea, n urma fecundaiei, a garniturii diploide de cromosomi. Ca urmare a cercetrilor efectuate asupra a numeroase organisme, s-a ajuns la concluzia c pe cromosomii sexului se gsesc plasate i alte gene, toate constituind un grup de linkage, fenomen denumit X-linkage. Genele plasate pe autosomi se numesc gene autosomale, iar genele plasate pe cromosomul de sex X se numesc X-linkate sau heterosomale. La Drosophila melanogaster, ca i la alte organisme cu determinism genetic asemntor, la organismul mascul (XY) genele care se afl plasate pe cromosomul X se manifest nestingherit indiferent dac sunt dominante sau recesive. Acest fapt este posibil deoarece cromosomul X de la mascul nu are omolog, astfel c pentru genele X-linkate se manifest fenomenul de hemizigoie (masculii sunt hemizigoi pentru caracterele X-linkate). La femele (XX), genele plasate pe cromosomul X se manifest numai n stare homozigot. n afara genelor localizate pe cromosomul X, au fost depistate i gene localizate pe un alt heterosom, i anume cromosomul Y, ele fiind Y- linkate, manifestndu-se exclusiv la organismele ce conin cromosomul Y. Genele plasate pe cromosomul Y se transmit n mod normal de la tat la fii la acele organisme la care exist un determinism cromosomal asementor celui de la Drosophila. Ereditatea transmis prin intermediul cromosomului Y a fost denumit holandric, nsemnnd o transmitere n ntregime pe linie patern a unor caractere. Tipuri de determinism genetic al sexelor Cercetrile efectuate asupra a numeroase organisme, au permis identificarea a 2 categorii de determinism genetic al sexelor: determinism cromosomal i determinism genic. n cazul determinismului cromosomal al sexelor, au fost descrise 2 tipuri distincte:

Cu femele homogametice (organisme ce produc ovule de un singur tip) i masculi heterogametici (ce produc spermatozoizi de 2 tipuri); Cu femele heterogametice (care produc ovule de 2 tipuri) i masculi homogametici (ce produc spermatozoizi de un singur tip).

Din prima categorie fac parte organisme la care n determinarea sexului femel intervin doi heterosomi omologi notai XX, iar la mascul intervin doi heterosomi neomologi XY. Din aceast categorie face parte tipul Drosophila, care se ntlnete att la diptere (la care a fost identificat) ct i la alte organisme cum sunt mamiferele (inclusiv omul) i unele plante (spanacul, hameiul, cnepa). Tipul Drosophila este cel mai rspndit n natur. Combinarea probabilistic a gameilor femeli ce conin numrul corespunztor de autosomi i un cromosom X cu gamei masculi, ce pot fi de 2 tipuri: unul conine cromosomul X cellalt cromosomul Y, se obin organisme femele i mascule n proporie egal (50 % XX i 50 % XY). Conform acestui mkod de transmitere raportul de segregare dintre cele dou sexe este de 1 : 1. n cazul mamiferelor, prezena celor 2 heterosomi X la organismul femel i doar a unui cromosom X la sexul mascul ar conduce la diferene mult prea mari ntre cele dou sexe, dac ar funciona ambii cromosomi X la femele. Murray Barr i Edward Bertram, au realizat o serie de observaii asupra cromosomilor de la pisicile femele i au constatat c unul dintre cromosomii X este inactivat prin heterocromatinizare, el aprnd sub forma unui corpuscul nuclear intens colorat care a primit denumirea de corpuscul Barr sau cromatin sexual. O variant a tipului Drosophila este subtipul Protenor, la care femela prezint perechea XX iar masculul XO, ceea ce nseamn c sexul mascul este condiionat de absena unuia dintre cromosomii X. Astfel, femela are un numr par de cromosomi, iar masculul are un numr impar. Acest subtip este mult mai rar n natur, el fiind ntlnit la unele nevertebrate. Din a doua categorie face parte tipul Abraxas sau pasre, n care femelele heterogametice conin heterosomo neomologi XY sau ZW, iar masculii homogametici au heterosomi omologi XX sau ZZ. Acest mecanism a fost identificat iniial la fluturele Abraxas grossulariata, iar ulterior la unele nevertebrate, amfibieni, reptile i la toate speciile de psri. nrudit cu acest mecanism este subtipul fluture , la care organismele femele prezint un singur cromosom X (XO), iar masculii conin perechea XX. Si acest tip de determinism genetic al sexelor este mai rar ntlnit n natur. Exist, ns, i alte tipuri de determinism al sexelor. De exemplu la albine, matca i albinele lucrtoare sunt diploide pe cnd masculii sunt haploizi, derivnd partenogenetic, din ovule nefecundate. La rndul lor, formarea spermatozoizilor are loc prin mitoz. 2

n cazul plantelor i animalelor hermafrodite, acelai organism, produce att gamei masculi ct i femeli ceea ce nseamn c informaia genetic necesar pentru ambele sexe, se gsete n acelai organism. Prin urmare, acelai genotip codific ambele sexe, iar la animalele hermafrodite mediul determin care dintre cele dou fenotipuri sexuale vor fi exprimate. La melc (Helix pomatia) exist o gonad care, pornind de la celule situate apropiat unele fa de celelalte, produce att ovule ct i spermatozoizi. La rm, ovulele i spermatozoizii sunt produse n gonade separate localizate n segmente diferite ale corpului. La viermele marin Bonellia, sexele sunt separate, iar indivizii sunt fenotipic foarte diferii ntre ei: femelele sunt de dimensiuni foarte mari, au un corp globular de 5 cm, cu o tromp absorbant de cca 10 cm, n timp ce masculii sunt microscopici (1-2 mm) i triesc ca parazii ai femelei. Ovulele fecundate, se dezvolt ca femele n absena femelelor adulte; n prezena acestora sau a unui extract din trompa femelei, ovulele fecundate se dezvolt ca masculi. La mamifere, dei formula heterosomal este asemntoare celei de tip drosofila, exist i unele diferene. Astfel, prezena cromosomului Y determin masculinizarea iar absena lui determin feminizarea. Hormonii influeneaz dezvoltarea sexului. Pe lng gene care condiioneaz formarea sexului, cromosomii de sex conin i gene care nu au nicio legtur cu diferenierea acestuia, dar care determin nsuiri sex- linkate. La psri (cu femele heterogametice i masculi homogametici) culoarea penajului este un caracter sex linkat, care este folosit i n practic, permind sortarea puilor dup sex, imediat dup ecloziune. De exemplu, gena pentru culoarea penajului este sex-linkat, iar n stare hemizigot, determin la rasa Plymouth porumbac, alternana de dungi albe i negre (1:1), iar n dublu exemplar, masculi cu dou dungi albe la una neagr. Exist i gene cu localizare autosomal, care sunt influenate diferit de sex (se manifest diferit de la un sex la altul). n acest caz, este vorba de sex influenare fenomenul prin care unele caractere apar la ambele sexe, dar au o expresie mai pronunat la unul dintre sexe. De exemplu, calviia este determinat de o gen cromosomal ce se manifest ca dominant la brbai i ca recesiv la femei. n acest caz se consider c exprimarea genelor respective este influenat i de anumii hormoni. Dimorfismul sexual, se caracterizeaz prin trsturi specifice pentru un sex, anumite caractere manifestndu-se doar la un anumit sex. Acest fenomen se numete sex-limitare. De exemplu, producia de lapte la taurine i de ou la gini. Dei se manifest doar la un sex,

caracterele de sex-limitare sunt transmise prin ambele sexe. De exemplu, calitatea de a fi bune productoare de lapte, se transmite la fiice nu numai prin femele ct i prin masculi (tauri). EREDITATEA EXTRANUCLEAR n marea lor majoritate, caracterele ereditare sunt determinate de gene localizate n nucleu. Comportamentul acestor gene se supune legilor formulate de Mendel i Morgan. n unele cazuri ns, s-a constatat c unele caractere ereditare se transmit preferenial pe linia unui genitor, de regul a genitorului matern, indiferent de structura genetic nuclear a acestuia sau a genitorului patern (homozigot dominant - AA, heterozigot Aa sau homozigot recesiv - aa), ceea ce nseamn c aceste caractere nu se supun legilor mendeliene ale ereditii. Asemenea caractere, nu sunt determinate de gene localizate n nucleu ci de gene extranucleare localizate, n principal, n organitele citoplasmei celulei eucariote (mitocondrii i cloroplaste). Transmiterea pe linia genitorului matern efect descris uneori ca ereditate de tip matern- are la baz specificul gameilor: dac din punct de vedere cantitativ organizarea nuclear a gametului mascul ete identic cu cea a gametului femel, ntre gameii de sex opus apar diferene cantitative n ceea ce privete citoplasma. Astfel, gametul femel (ovul la animale, oosfer la plante), conine o cantitate incomparabil mai mare de citoplasm fa de gametul mascul (spermatozoizi la animale, nucleu spermatic la plante), al crui nucleu este nconjurat doar de un strat pelicular de citoplasm. n consecin, n citoplasma gametului femel se vor gsi mai multe gene extranucleare, asigurnd transmiterea preferenial a caracterelor determinate de acestea, pe linia genitorului matern. Principalele gene extranucleare sunt localizate n mitocondrii i cloroplaste, organite caracteristice celulelor eucariote. n celula eucariot interacioneaz sisteme genetice multiple: cel puin dou la animale (nucleu i mitocondrii) i trei la plante (nucleu, mitocondrii i cloroplaste). Genomurile organitelor celulare caracterizate pn n prezent sunt reprezentate de cte o molecul circular de ADN, care a primit notaia de ADNmt pentru mitocondrii sau de ADNcp pentru cloroplaste. n cazul unor eucariote inferioare, ADNmt este reprezentat dintr-o molecul liniar. De obicei, n fiecare organit celular exist cteva copii de molecule de ADN, iar prin faptul c celulele conin un numr mare de organite, se poate spune c exist mai multe genomuri extranucleare per celul. Dimensiunile acestor genomuri variaz foarte mult ntre diferitele specii de eucariote.

n cazul mitocondriilor, fiecare celul vegetal sau animal conine cca. 100 organite, al cror ADNmt reprezint nu mai mult de 1 % din genomul nuclear. n unele cazuri ns, cu este cel al ovulelor fecundate de broasc, numrul mitocondriilor poate ajunge la 1 milion astfel c el reprezint 99 % din ADN ul celular. Numrul de molecule de ADN per organit este de regul cuprins ntre 5 i 20. n celula eucariot de la plantele superioare, se gsesc cteva zeci de cloroplaste, n care se afl de obicei 20-40 molecule de ADNcp circular care reprezintpn la 15 % din totalul ADN circular. n ceea ce privete masa molecular a ADN n mitocondriile din celulele vegetale, se gsete o cantitate mult mai mare dect cea din celulele animale. Mrimea genomului cloroplastelor este mult mai uniform, comparativ cu cel al mitocondriilor. Fa de genele extranucleare localizate n organite celulare, la unele specii de eucariote au mai fost evideniate i alte tipuri de gene cu localizare citoplasmatic. Este cazul fenomenului killer de la protozoarul Paramecium aurelia. Tulpinile killer Paramecium elibereaz n mediu o substan toxic numita paramecin, care este letal pentru alte tulpini de protozoare. Fenotipul killer este dat de prezena unor particule citoplasmatice, numite particule kappa, a cror meninere este dependent de existena unei gene dominante cu localizare nuclear (gena K). La parameci, a fost evideniat un tip special de conjugare asociat cu fenomenul de autogamie care asigur transferul ntre celule a particulelor kappa. Dac celulele acceptoare sunt KK sau Kk, particulele kappa sunt multiplicate i determin sinteza de paramecin. Dac paramecii acceptori sunt kk multiplicarea particulelor kappa i producerea de paramecin nu sunt posibile, iar celulele respective rmn sensibile la toxina produs de ali parameci. Cercetrile efectuate n ultimii ani asupra particulelor kappa, au evideniat faptul c acestea sunt de fapt bacterii simbionte din specia Coedobacter taeniospiralis. Aceast bacterie conine informaia genetic necesar sintezei paramecinei, substan pe care astfel o i produce. Genomul mitocondrial Mitocondriile sunt organite celulare care au rolul de a stoca energia sub form chimic sintetiznd molecule de adenozin trifosfat (ATP) care particip la majoritatea proceselor metabolice. n cadrul acestor reacii, ATP este degradat elibernd astfel energia stocat. Mitocondriile au o form sferic sau elipsoidal, cu un diametru de 0,3- 0,7 i o lungime de 1-7 . 5

Genomurile mitocondriale variaz n ceea ce privete mrimea: la animalele superioare genomul mitocondrial este mai mic, fapt ce a permis secvenierea complet (la om, oarece sau bovine). Dimensiunea grnomului mitocondrial la asemenea organisme este n medie de aproximativ 16,5 kb. Cantitatea de ADNmt per celul este de 1 % fa de ADN nuclear, deoarece fiecare mitocondrie conine mai multe copii ADN, iar numrul de mitocondrii per celul este mare. Plantele prezint o variaie foarte mare n ceea ce privete mrimea ADNmt, cea minim fiind de aproximativ 100 kb. Numrul de gene mitocondriale variaz foarte mult ntre speciile examinate: de la 5 gene la Plasmodium falciparum (parazitul malariei), la 37 gene la om, 58 gene la Arabidopsis thaliana, 35 gene la Saccharomyces cerevisiae sau chiar 94 de gene la Reclinomonas americana. n general, genele mitocondriale codific pentru dou tipuri de ARNr, pentru toate tipurile de ARNt necesare pentru buna desfurare a biosintezei proteice i pentru un numr variat de proteine mitocondriale. Genele mitocondriale de la mamifere conin introni. Genele mitocondriale se transmit ereditar de la o generaie la alta non-mendelian. La animalele superioare, din cauz c ovulele conin mai mult citoplasm dect spermatozoizii, iar n unele cazuri spermatozoizii sunt comple lipsii de citoplasm, transmiterea ereditar a mitocondriilor este uniparental matern. La obolanii de laborator, unele linii conin ADNmt care difer, ntr-o mic msur, prin secvena nucleotidelor. Dac se ncrucieaz dou linii diferite n ceea ce privete ADNmt, descendenii motenesc tipul de ADNmt matern. Deci este vorba de ereditate non-mendelian. i la plantele superioare mitocondriile se transmit pe linie matern. La drojdii (Saccharomyces cerevisiae, S. carlsbergensis) transmiterea ereditar a mitocondriilor este biparental, celulele haploide care fuzioneaz sexuat pentru a forma zigotul sunt egale ca mrime i conin cantiti egale de ADNmt. Este vorba deci de o transmitere biparental. n cazul ncrucirii unei linii de drojdii mutante la nivelul ADNmt, de pild pentru gena ce determin rezistena la cloramfenicol, cu tipul normal (slbatic) sensibil la cloramfenicol, zigotul diploid conine un amestec de mitocondrii normale i mutante. Prin mitoze repetate, zigotul d natere la celule diploide prin nmugurire. n aceti muguri ptrund numai un numr redus de mitocondrii, astfel c prin replicare mitotic repetat, o celul poate primi ocazional numai mitocondrii normale, iar alta numai mitocondrii mutante. Prin acest proces probabilistic, de segregare mitotic, apar celule diploide de drojdii cu un singur tip de mitocondrii. Datorit transmiterii biparentale a mitocondriilor, la drojdii s-a evideniat fenomenul recombinrii genetice ntre ADNmt de origini diferite. 6

n genomul mitocondrial de la drojdii exist un numr similar de gene, dei el are dimensiuni mai mari ca cel de la mamifere. n genomul mitocondrial de la drojdii, au fost indentificate diverse tipuri de restructurri, mai ales deleii, prin care apar tulpinile petite. Toate mutantele de acest tip, se caracterizeaz prin pierderea funciilor mitocondriilor, astfel c tulpinile de acest tip supravieuiesc numai datorit capacitii alternative a drojdiilor de a tri n mediu aerob sau anaerob. Genomul mitocondrial uman este reprezentat de o macromolecul de ADN alctuit din 16569 perechi de nucleotide n care se gsete un numr de 37 gene. Prin mutaii ale acestor gene apar maladiile genetice mitocondriale umane. Un exemplu n acest sens este neuropatia optic Leber caracterizat prin pierderea acut sau subacut a vederii i care se transmite ereditar pe linie matern. Aparatul de sintez proteic a organitelor celulare are i el o origine mixt: cel mai multe dintre proteinele organitelor sunt preluate de citoplasm fiind codificate de ADN nuclear i doar o mic parte a proteinelor sunt codificate de gene specifice localizate n genomul organitelor. Genele mitocondriale sunt transcrise de o ARN polimeraz care, probabil, este codificat de gene nucleare. La nivelul mitocondriilor sunt sintetizate doar moleculele de ARNm ce au transcris genele mitocondriale, precum i catenele polipeptidice codificate de acestea, mitocondriile reprezentnd singurul sediu unde acest mesaj genetic se poate exprima. Dintre caracterele plantelor codificate de gene mitocondriale, se poate meniona sterilitatea masculin citoplasmatic, trstur cu specificaii practice deosebite. Plantele respective nu produc polen activ, n schimb componentele sistemului reproductor femel este normal, plantele fiind astfel fertile, dar la nivelul lor nu se poate realiza autofecundarea (autopolenizarea). Acest tip de sterilitate este utilizat n producerea de semine de porumb hibrid. S-a dovedit c fenomenul nu este controlat de gene nucleare ci se datoreaz unor rearanjamente masive de ARNmt. Genomul cloroplastic Una dintre primele observaii referitoare la ereditatea extranuclear la plante, a fost cea a variegrii frunzelor (fenotipul albomaculatus) la numeroase specii de plante. n 1909, Carl Correns a realizat experimente referitoare la modul de transmitere a caracterelor la planta Mirabilis jalapa constatnd c anumite caractere nu se supun legilor mendeliene ale ereditii. S-a evideniat faptul c unele plante pot avea trei tipuri de lstari: unii care prezint toate frunzele verzi, unii care prezint toate frunzele albe i alii care au frunze variegate (frunze verzi cu pete albe de dimensiuni diferite figura). 7

Deoarece pe toate tipurile de lstari se pot forma flori, s-au putut realiza ncruciri controlate pentru a clarifica modul de transmitere a fenotipului modificat. n acest mod s-a evideniat faptul c motenirea culorii frunzelor se face exclusiv pe linie matern. Explicaia fenomenului este urmtoarea: culoarea verde depinde de prezena pigmenilor clorofilieni care se gsesc n cloroplaste, iar grunciorii de polen nu conin cloroplaste; de diviziunea citoplasmei; celulele din esuturile vegetale de culoare alb-glbuie conin cloroplaste lipsite de clorofil. Cloroplastele au un genom similar celui mitocondrial alctuit din mai multe copii de ADNcp, cu o lungime ce variaz ntre 120 i 200 kb. ADNcp conine aproximativ 140 de genece codific toate tipurile de ADNr, ADNt precum i pentru un numr relativ mare de proteine specifice (50) (inclusiv ADN polimeraza i unele proteine ribozomale). Ribozomii cloroplastici conin, pe lng ARNr 16S i 23S, nc dou tipuri de ARNr de dimensiuni mai mici (ARNr 5S i ARNr 4,5S). n ce privete ARNt, la nivelul ADNcp codificate 30 tipuri de molecule. Ca i n cazul mitocondriilor, genele cloroplastice sunt transcrise i apoi traduse de aparatul propriu al organitelor respective. Replicarea ADNcp este tot de tip semiconservativ, se realizeaz de-a lungul ntregului ciclu celular, prin utilizarea enzimelor specifice din cloroplaste. Experimentele din ultimii ani au permis determinarea secvenei complete a nucleotidelor din ADNcp de la unele specii vegetale observndu-se c, dei lungimea moleculelor de ADNcp variaz foarte mult, organizarea genelor precum i numrul lor este asemntor. Genele cloroplastice identificate au evideniat mai multe tipuri de funcii: 45 de gene codific diferite tipuri de ARN, 27 codific proteine implicate n exprimarea genelor, 18 codific proteine ale membranei tilacoidale, iar alte 10 reprezint funcii legate de transferul de electroni. segregarea cloroplastelor n celulele fiice nu este determinat de nici o trstur a aparatului mitotic ci

Originea genomului mitocondrial i cloroplastic Studiul aprofundat al celulei eucariote a demonstrat c pe lng aparatul genetic nuclear, care are o pondere deosebit n structura i metabolismul celualar, exist aparate genetice extranucleare n organite, cu o relativ independen de cel nuclear i care mresc posibilitile de variabilitate genotipic a organismelor i capacitatea lor de adaptare la mediu. Cercetri privind originea i evoluia ADN extracelular au dus la ipoteza c organitele celulare au aprut datorit unor evenimente de endosimbioz, n care o celul primitiv a capturat bacterii care realizau funcii speciale i care au evoluat spre organite sau cloroplaste. Cele mai importante argumente n sprijunul acestei ipoteze sunt urmtoarele: structura i funciile unor organite prezint similitudine cu celulele procariote (bacterii i alge albastre- verzi); ADN din organite se prezint sub forma unui nucleotid similar cu cel bacterian; Cantitatea de ADN per organit este similar cu cea dintr-o celul bacterian; Replicaia genomului organitelor se realizeaz similar cu cea a bacteriilor, fiind de tip procariot; ea este independent de replicaia materialului genetic nuclear; Genele extranucleare din organite sunt capabile de mutaii i recombinare genetic, independent de materialul genetic al nucleului; n organite se sintetizeaz diferite tipuri de ARNr i ARNt, avnd loc o sintez proteic proprie, pe baza unor ribozomi particulari independeni de cei din citosol; Genele extranucleare din organite se caracterizeaz printr-o transmitere ereditar nonmendelian, nemanifestnd linkage cu nici unul din cromosomii din nucleu; Organitele celulare (mitocondrii, cloroplaste) nu pot aprea de novo n celul ci numai prin diviziunea celor pre-existente. Evident ca independena acestor organite este numai relativ, deoarece ele au realizat n timp un grad nalt de integrare cu celula gazd i ca urmare funciile lor sunt parial dependente de aparatul genetic nuclear i de importul de proteine, enzime etc. din citosol.