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SEDE MEDELLN

Drosophila Melanogaster
Anlisis de distribuciones mendelianas

Erika Gordillo
Estudiante ingeniera Biolgica, Facultad de ciencias, Universidad Nacional de Colombia Sede Medelln ejgordillose@unal.edu 01 10, 2012

___________________________________________________________________________________________________________ Resumen El bilogo austriaco Johann Gregor Mendel realizo experimentos y hallazgos que dieron como resultado las bases de la gentica, Drosophila melanogaster la mosca de la fruta es uno de los casos en los que las leyes mendelianas se pueden representar puesto que ha sido utilizada como modelo para la revisin del comportamiento de la herencia y adems en estas se puede visualizar de manera mas precisa las mutaciones genticas. Para este trabajo se obtuvieron 235individuos de Drosophila melanogaster en un cruce ( White x Canton) donde se analizaron los datos obtenidos en la F2 donde se hace diferencia entre un carcter mutagnico como lo son los ojos de color blanco tanto en machos como hembras con el propsito de determinar su dominancia y su ligamiento al sexo los cuales se muestran en las tablas de Punnet. Para determinar dichos datos se realiza una prueba estadstica de clasificacin denominada 2 ji-cuadrado (X ) comparando los datos obtenidos experimentalmente con los datos esperados comprobando as que el locus White presenta herencia Mendeliana ligada al sexo lo que permite concluir que la mutacin de tipo White en la mosca de la fruta posee una carcateristica en sus ojos que se encuentra determinada segn el sexo. Palabras Clave: Drosophila melanogaster, White, Canton, mutacin.
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Introduccin Gregor Mendel es considerado el padre de la gentica, al publicar experimentos sobre la transmisin de los caracteres hereditarios que han servido como fundamento para la actual teora de la herencia, sus leyes se encargan de explicar los rasgos de los descendientes a partir de las caractersticas o rasgos de sus parentales. Sus experimentos dieron como resultado dos principios que son conocidos como leyes de la herencia en donde se siguen dos trminos que en nuestra poca son todava muy empleados como lo son dominante y recesivo as como Factor e hbrido. En 1866 logra exponer su formulacin que contena la descripcin de cruzamientos los cuales los haba logrado expresar numricamente y someterlos a un anlisis estadstico. En la actualidad se conoce que las leyes de Mendel fueron tres denominadas como: Ley de la Uniformidad, Ley de segregacin y la ley de transmisin independiente, estas explican como van a ser las caractersticas de un nuevo individuo basndose en las caractersticas de sus padres ya que los caracteres se heredan de padres a hijos pero no siempre de forma directa ya que pueden ser dominantes o recesivos. Dominantes cuando se manifiestan en todas las generaciones y recesivos cuando permanecen latentes y sin desaparecer hasta surgir en algunas descendencias posteriores[1].

Los experimentos de Mendel comenzaron con lneas puras, cruzando estas lneas obtuvo semillas hibridas sin embargo cuando las autofecund obtuvo una proporcin de 3:1 mientras que el cruce de prueba mantena la proporcin 1:1.Ademas al realizar cruzamientos con lneas que difer.3an en dos caracteres encontr proporciones 9:3:3:1 en la segunda generacin mientras que los cruces de prueba seguan siendo de proporciones 1:1:1:1 con lo que consigui explicar la constitucin de los hbridos y su conducta en los cruzamientos[2]. Thomas Hunt Morgan fue un investigador estadounidense intrigado por la gentica y mediante sus estudios descubri principios significativos que llevaron a determinar que haba caracteres de la herencia ligados al sexo. Existen dos cromosomas sexuales X o Y y algunas de las caractersticas estn determinadas por genes que se encuentran en cualquiera de estos por esta razn las proporciones de la descendencia cambian respecto a los genes que se encuentran en los cromosomas somticos este es el tipo de herencia que se denomina Herencia Ligada al Sexo la cual ha sido estudiada principalmente en D. Melanogaster , estos cromosomas sexuales presentan genes como cualquier otro y en la especie humana tienen una proporcin homologa que se aparea durante la meiosis y una porcin no homologo donde se ubican estos genes.

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Los genes que se ubican en la porcin homloga de ambos cromosomas se comportan como genes autosmicos y se transmiten segn la herencia por lo que se les llama genes parcialmente ligados al sexo. En cambio a los genes que se ubican en la porcin no homologa del cromosomas Y se les denomina genes Holndricos, los genes ubicados en la porcin no homloga del cromosoma X se denominan Genes Ligados al Sexo, puesto que el varn recibe un solo cromosoma X, todos sus genes para rasgos ligados al sexo san de origen materno . [3]. [4]. y Fenotipo silvestre de la Drosophila melanogarter: El cuerpo es de color beige claro, los ojos son grandes y rojos, las alas sobrepasan la longitud del abdomen y son transparentes y ligeramente puntiagudas, las nerviaciones de las alas estn compuestas por 5 venas longitudinales y dos transversales. Mutacin White: El rasgo caracterstico de los mutantes White, al que deben su nombre es el color blanco puro de los ojos. Mutacin Ebony: Poseen un cuerpo de color negro brillante que se oscurece con la edad. Mutacin Vestigial: Tambin llamada mutacin de alas vestigiales se caracteriza por las alas y balancines muy reducidos.

y El gnero Drosophila es uno de los mas utilizados en gentica, es un pequeo organismo prolfico y fcil de mantener, tiene un ciclo vital muy corto por lo que hace fcil comprobar los resultados de cualquier experimento que se realice. [5]. Por tal razn hemos decidido realizar este trabajo basados en esta mosca conocida como la mosca de la fruta. Con este trabajo se tiene el propsito de observar las caractersticas fenotpicas de la mosca de la fruta D. Melanogaster, para comprobar como influyen los factores Mendelianos a base de las mutaciones encontradas. En este caso el cruce estudiado fue White x Canton en el cual se quiso determinar si sus caractersticas estaban ligadas a el sexo, esto se determino mediante los fenotipos resultantes de la F2. Para constatar estas hiptesis de si es o no ligado al sexo se realiza una prueba de fidelidad estadstica llamada chi-cuadrado.

Se realizaron adems diversos tipos de cruces entre cepas mutantes y cepas silvestres con o cual se pudieron observar los tipos de herencia. La segunda parte del trabajo consisti en tomar un cruce realizado con la debida supervisin, entre una cepa Canton (Silvestre: Ojos rojos) y una cepa White (Mutante: Ojos Blancos) las cuales fueron cruzadas de la siguiente manera White x Canton as como su reciproco Canton x White, para obtener una generacin F1 que simultneamente se cruza con si misma para obtener la generacin F2. Conteo y clasificacin Visualizando por el estereoscopio se observ en las moscas lo siguiente: Fenotipo: ojos rojos o blancos los cuales eran fcil de distinguir Sexo: hembra o macho, el cual se determino por color oscuro de la parte inferior dorsal para machos y en la hembra esta parte se distingua por la presencia de rayas transversales un poco ms claras.

Materiales y Mtodos Identificacin La practica se dividi en dos partes en la cual la primera consisti en la identificacin morfolgica de la mosca de la fruta as como las diferentes mutaciones que esta presenta. Debido a factores que se presentaron la identificacin fue realizada por parte de los monitores, adems de compaeros voluntarios que asistieron al conteo en el cual se realizo con el mayor cuidado la comparacin entre la mosca Canton (silvestre) y sus diferentes variaciones fenotpicas. Para esto se tuvieron en cuenta algunos factores de clasificacin que se muestran a continuacin: y Hembras: Tiene un abdomen ms grande que los machos, de coloracin clara y de terminacin puntiaguda; en la parte ventral el ltimo segmento lleva la placa vaginal, de coloracin blanquecina. Machos: La parte distal del abdomen es oscura, en la parte dorsal, y en la parte ventral lleva el pene rodeado por las placas genitales (que le sirven para sujetarse a la hembra). En promedio son ms pequeos que las hembras poseen una estructura compuesta de unos pelos gruesos y cortos, llamada peine sexual.

Anlisis estadstico La prueba chi cuadrado fue utilizada para comprobar que los datos obtenidos se ajustaban a los datos tericos, esto se obtiene implementando una hiptesis inicial y confrontando el valor obtenido con el valor terico mediante el resultado obtenido con ayuda de la ecuacin (1). Tomando n=2 ya que se tenan dos categoras fenotpicas, ojos rojos y ojos blancos los cuales los determinaban los alelos Canton y White se tiene que los grados de libertad serian = n-1= 1 y con = 0.05% la distribucin terica seria as: = 3,84

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= Ecuacin (1). mismo fenotipo es decir ambas son Canton se toma la primer opcin ya que suponemos que los parentales son cepas puras. Para el padre se XW Y, pues es el nico genotipo White que presenta el fenotipo de ojos blancos. P: XC XC * XW Y

Donde Oi es el valor observado y Ei es el valor esperado. Utilizando la regla de tres se pueden obtener los valores esperados.

F1: 3. Resultados Cruce original El cruce original se hizo entre una cepa White (mosca de ojos blancos) la cual es una mutacin de carcter recesivo y una cepa Canton la cual es la mosca silvestre. Convenciones: P: Parentales F1: Generacin uno. F2: Generacin dos. Y: Cromosoma Y X W: Gen White ligado al cromosoma X. X C: Gen Canton ligado al cromosoma X. Las tablas de Punnet se muestran a continuacin: P: X
C

XW X X
C W

Y X Y
C

Tabla 3: Cruce Parental

Toda la progenie de ojos rojos es decir todos son Canton. F1 * F1: XC XW * F2: XC X XW
C

XC Y

Y X Y XW Y
C

X X XC XW

Tabla 4: Cruce filial de F1

Proporcin es 3:1. ojos rojos, y equivalente a machos presenta ojos blancos.

XW XW *

XC Y Datos Observados En el laboratorio se obtuvieron los resultados presentados a continuacin: OBSERVADOS Hembras Machos 13 113 25 84 Total 126 109 235

F1: XC XW XW XC
Tabla 1: Cruce Parental

Y XW Y

En este cruce se presentan la mitad de las hembras Canton y la mitad de los machos White. F1 * F1: XC XW * F2: XW XC XW XC XW XW XW Y XC Y XW Y XW Y

Canton White Total Moscas

Tabla 5: Observados de la F2

Datos Esperados De acuerdo a los resultados de la tabla 2 se esperara de moscas Canton y de moscas White, lo que indica una proporcion 2:2. Moscas totales 235 4 Moscas White 2

Tabla 2: Cruce filial de F1

machos con ojos rojos y hembras con ojos rojos de machos con ojos blancos y hembras con ojos blancos. Cruce recproco. El cruce reciproco se realizo tomando como muestra el original es decir genotipo y fenotipo de los parentales para luego hacer un cruce con los parentales opuestos al original. Se pueden tener dos posibilidades en este cruce las cuales son XC XC, o XC XW. Como ambas moscas presentan el

La misma operacin se efecta para las moscas Canton arrojando un resultado igual ya que las proporciones son iguales. As que 117,5

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Tanro las hembras como los machos constituyen Canton y White, 117,5 equivale a , entonces 117,5 / 2 = 58.75 equivale a . ESPERADOS Hembras Machos 58.75 58.75 58.75 58.75 Total 117,5 117,5 235

I.

Observados vs Esperados-original

Utilizando la Ecuacin (1): Con grados de libertad = 1 y probabilidad = 0,05% se tiene: = 3,84 Canton White Total Moscas
Tabla 6: Esperados de la F2

= Como Datos Esperados Reciproco De acuerdo a los datos de la tabla 4, se esperan de moscas Canton y de moscas White, lo que indica una proporcin 3:1. Moscas totales 235 4 Moscas White 1 II.

+
, se acepta Ho.

= 1.23

Observados vs Esperados de acuerdo al sexo vs Esperados

Observados

Con grados de libertad = 1 y probabilidad = 0,05% se tiene: = 3,84 = = 9,72 , se rechaza Ho.

Moscas totales 235 4

Moscas Canton Como 3 176,25 Observados vs esperados Con grados de libertad = 1 y probabilidad = 0,05% se tiene:

Los machos constituyen White y Canton, y las hembras Canton. Por lo que 58,75 equivale a Machos White, 176,25 / 3 = 58,75 equivale a Machos Canton, y 58,75 * 2 = 117,5 equivale a Hembras Canton. As se tiene que: ESPERADOS RECIPROCO Hembras Machos Canton 117,5 58,75 White 0 58,75 Total Moscas
Tabla 7: Esperados de la F2

= 3,84

= Como


, se rechaza Ho.



Total 176,25 58,75 235

III.

Observados vs esperados-recproco

Prueba Chi-Cuadrado Para determinar que los resultados obtenidos concueradn con los tericos se realiza la prueba chi-cuadrado por lo que se asumen las siguientes hiptesis: Ho: Los datos obtenidos observados se ajustan a los datos esperados en la F2 fenotpicamente. Ha: Los datos obtenidos observados no se ajustan a los datos esperados en la F2 fenotpicamente.

Para esta prueba se utiliz la tabla7. De acuerdo a esta tabla, se debe tener en cuenta que no hay hembras con ojos blancos. Utilizando la Ecuacin (1): = = 57,3 Con grados de libertad = 1 y probabilidad = 0,05% se tiene: = 3,84 Como , se rechaza Ho.

+

Resultados Totales
OBSERVADOS
W C 25 13 84
113

Referencias
ESPERADOS ORIGINAL ESPERADOS RECIPROCO
0 117,5 58,75 58,75 total 58,75 176,25 235

[1]

total 109 126 235

58.75 58.75

58.75 58.75

total 117,5 117,5 235

VALEGA O,. Las Leyes de Mendel. En linea: http://www.beekeeping.com/articulos/leyesdemendel.pdf GRIFFITHS A, GELBART W.M., MILLER J.H., LEWONTIN RICHARD C. 2004. Gentica Moderna. McGraw-Hill. Espaa. PADRES ESCOLAPIOS. Colegio Hispanomaericano. Capitulo III: Herencia Ligada al Sexo. Deparatamento de Ciencias. Biologia. CORDOVEZ D, 2009. Las experiencias de Morgan y el Ligamiento de Genes. Venezuela. Variaciones genticas de la Drosophila melanogaster. Carnegie institute for scince.

[2] [3]

Tabla 8: Tabla de datos totales

4. Discusin Anlisis de resultados En las tablas 1 y 2 se muestran los resultados de las generaciones F1 y F2, donde se demuestra que el gen esta ligado al sexo. Los cruces recprocos siguen una proporcin 3:1 de donde se puede observar que es u carcter ligado al sexo y adems es recesivo dado que las hembras no presentan la caracterstica mientras que los machos la presentan, en caso contario se ve que Canton es dominante dado que la hembra es heterocigota para el gen y presenta sus ojos rojos. Las pruebas de chi cuadrado realizadas demuestran que los datos obtenidos no siguen las leyes de Mendel ya que la hiptesis nula se rechaza lo que se puede constatar ya que en el momento de realizar las cuatro pruebas solo hubo una que acepto los datos lo cual puedo haber sido causado por un mal conteo sin embrago en el momento de realizar la prueba se poda ver que los resultados no aceptaran la hiptesis nula ya que los datos tericos no coincidan con los observados.

[4]

[5]

Anexos

Anexo 1. Distribucin del Ji Cuadrado

Conclusiones Como se observa en algunas de las tablas, las proporciones fenotpicas cambian en el momento en el que se decide hacer un cruce reciproco ya que el macho tiene una gran influencia por su cromosomas Y. Debido a su gran contribucin y facilidad de anlisis der la mosca de la fruta Drosophila melanogaster se concluye que este organismo es uno de los ms usados en los estudios genticos ya que sus caractersticas fenotpicas tanto en cepas silvestres como en cepas mutantes se distinguen fcilmente. De acuerdo a los resultados se puede concluir que no se cumplen las leyes de herencia de Mendel ya que no se da la segregacin independiente puesto que con el cruce realizado se demuestra que, la mutacin de tipo White esta ligada al sexo ya que su transmisin de generacin en generacin se ve afectada por los genes de los padres ligados a los cromosomas X y Y.