1.

INTRODUO TERICA
A fluorimetria consiste na tcnica utilizada na determinao qualitativa ou quantitativa de substncias nas quais ocorre o fenmeno da fluorescncia, que, segundo Mendham et. al. (2002), resultado da absoro de energia radiante e da posterior emisso de parte dessa energia. A fluorescncia, assim como a fosforescncia, fenmeno similar, so casos distintos de um fenmeno que recebe a denominao generalista de fotoluminescncia. A diferena entre estes dois fenmenos, segundo Skoog et. al. (2002), que na fluorescncia, o intervalo de tempo entre a captao do fton e a emisso da energia captada extremamente curto (<10-5s, podendo ser de at 10-12s), enquanto na fosforescncia, esse intervalo de tempo maior, podendo ser de alguns segundos ou at mais. Este retardo no tempo da emisso de energia ocorre porque a molcula entrou num estado de energia chamado estado excitado triplete, caracterizado por um desemparelhamento nos orbitais eletrnicos, ou seja, os spins dos eltrons passaram a estar paralelos. Na fluorescncia, a energia emitida mais rapidamente pelo fato de a molcula estar num estado chamado estado excitado singlete, no qual os orbitais eletrnicos esto emparelhados, e os spins dos eltrons, consequentemente, em direes opostas. A fluorescncia ocorre com a liberao de energia que faz com que a molcula sofra uma transio do estado excitado singlete para o estado fundamental singlete, no qual a molcula se encontrava antes da absoro da energia que a excitou. O diagrama sugerido por A. Jablonski para os nveis de energia ilustra o processo de absoro e emisso de luz.

Diagrama de Jablonski para o sistema de nveis de energia para a molcula de benzeno. Na figura, os diferentes tipos de processos para a desativao molecular dos estados eletrnicos e vibracionais excitados, esto representados por: transies radiativas permitidas por multiplicidade de spin (setas contnuas, ); transies radiativas proibidas por multiplicidade de spin (setas tracejadas, --); as transies no radiativas (setas onduladas, ), como no processo de relaxao vibracional, que ocorrem dentro de um mesmo nvel eletrnico e envolvem a desativao por liberao de calor atravs dos modos normais de vibrao. Alm destas transies outras podem ocorrer na molcula como: cruzamento intersistemas, que representa transies no radiativas, isoenergticas, envolvendo estados de multiplicidades de spin diferentes; converso interna, associada a transies isoenergticas que ocorrem em 1012 s envolvendo estados de mesma multiplicidade de spin. No processo de absoro de luz h uma transio eletrnica que ocorre em 1015s, tempo demasiado curto para um deslocamento significativo do ncleo (princpio Franck-Condon); isto devido a que a massa de um ncleo muito maior do que a do eltron. Por isso que as transies entre os vrios nveis eletrnicos so verticais. Uma diferena entre os espectros de absoro e emisso que o espectro de absoro reflete os nveis vibracionais dos estados excitados eletronicamente e

o espectro de emisso reflete os nveis vibracionais do estado eletrnico fundamental. A fluorimetria tem como vantagens a elevada sensibilidade (cerca de 100 vezes maior do que a da espectroscopia UV-visivel), e a maior seletividade, j que nem todas as substncias que absorvem radiao eletromagntica so capazes de emitir fluorescncia. Em contrapartida, tem como desvantagem o fato de que o campo de aplicao se limitaria apenas a molculas capazes de emitir fluorescncia ou fosforescncia. Fato este, que pode ser parcialmente contornado por outras tcnicas que envolvem luminescncia, como a quimiluminescncia molecular, na qual a fonte de energia para a excitao das molculas do analito uma reao qumica, e no a absoro de ftons, como na fotoluminescncia. Ressalta-se que nestes casos, pode no haver envolvimento direto do analito na medida, mas sim envolver a luminescncia do produto da reao ou mesmo a inibio que o analito causa na luminescncia de um determinado reagente. A procura por mtodos analticos mais sensveis tem impulsionado o desenvolvimento dos mtodos fluorimtricos, sendo que a determinao da fluorescena a nvel de fentomoles (LD = 0,6 x 10-15 molL-1) possvel pelo uso da fluorimetria. Dependendo, da tcnica aplicada, pode-se em alguns casos at triplicar a fluoescncia do analito, elevando assim a sensibilidade do mtodo. Como exemplos podemos destacar desde o simples uso de tensoativos, at reaes qumicas complexas de derivao gerando espcies fluorescentes. O emprego de tensoativos na determinao fluorimtrica do cido flico em preparaes farmacuticas, foi utilizado para aumentar a intensidade da fluorescncia emitida. Outra estratgia comumente empregada no desenvolvimento de mtodos fluorimtricos envolve a supresso da fluorescncia de substncias altamente fluorescentes, como ons fluoreto, fosfato, cianeto e sulfato pelo analito alvo.

Espectrofluormetros Existem duas classes de espectrofluormetros: os fotoestacionrios e os pulsados. Os espectrofluormetros que operam em condies fotoestacionrias excitam as espcies em modo contnuo, obtendo-se os espectros eletrnicos de emisso e de excitao. Os espectrofluormetros pulsados excitam as espcies por meio de pulsos de radiao, obtendo-se os tempos de decaimento do estado eletrnico excitado e os espectros resolvidos no tempo. O espectrofluormetro utilizado em nosso trabalho um espectrofluormetro fotoestacionrio, j que tem uma fonte de excitao que emite de modo contnuo e conseqentemente origina uma populao constante de espcies no estado eletrnico excitado. Os espectrofluormetros estacionrios Um espectrofluormetro geralmente composto por dois monocromadores, um de excitao e um de emisso, um sistema de excitao e um sistema de deteco.

Esquema ptico de um espectrofluormetro modelo SLM-500 Aminco

Um espectrofluormetro se diferencia de um espectrofotmetro nos seguintes elementos: Monocromador: composto por um arranjo ptico no qual uma fonte de luz policromtica incidente se descompe em seus diferentes comprimentos de onda atravs de uma grade de difrao. Os comprimentos de onda para a excitao da amostra so selecionados pelo monocromador de excitao, e a radiao emitida analisada pelo monocromador de emisso, sendo a intensidade da radiao emitida determinada pelo tubo fotomultiplicador, como nos espectrofotmetros. Fontes de radiao: nos instrumentos comerciais mais comuns a fonte de radiao uma lmpada de emisso contnua, que pode ser de xennio e mercrio. A lmpada de xennio emite praticamente em toda a regio visvel e ultravioleta (250 nm< <800 nm) e a de mercrio emite, nesta mesma regio, na forma de linhas. A lmpada de xennio oferece maior nmero de comprimentos de onda possveis para a excitao da amostra, enquanto que a lmpada de mercrio oferece maior intensidade nos comprimentos de onda que emite. Um detalhe importante no espectrofluormetro que a radiao emitida pela amostra focalizada na entrada do monocromador de emisso em um ngulo de 90 em relao radiao incidente. Esta geometria diferente daquela de um espectrofotmetro de absoro no qual a luz que emerge da amostra e vai para o detector tem a mesma direo da luz incidente. Isto se deve ao fato de que a intensidade de emisso muito menor do que a intensidade da radiao de excitao, e conseqentemente o sinal de emisso, se analisado na mesma direo da excitao, ficaria mascarado (Atvars e Martelli, 2002).

2. METODOLOGIA
Parte I Determinao do teor de clcio em gua de torneira (mtodo da calcena) Preparou-se uma soluo padro de Ca2+ 2 ppm, a partir da soluo estoque 1000 ppm. Separou-se 1 balo volumtrico de 50 mL para o branco de calibrao, 5 outros para as solues analticas de calibrao e 2 para amostras. Adicionou-se em todos bales volumtricos, uns 10 mL de gua deionizada; e com pipeta graduada, 1 mL da soluo de KOH 2 M e 1 mL da soluo de calcena 60 ppm. Nos 5 bales de calibrao, adicionou-se respectivamente com uma pipeta graduada 1, 2, 3, 4 e 5 mL da soluo padro de Ca 1 ppm, de forma a se obter uma curva de calibrao 40, 80, 120, 1600 e 200 ppb em clcio. Num dos bales para amostra, adicionou-se 500 de gua de torneira. No L outro balo, adicionou-se uma alquota de 1000L de gua de torneira. Adicionou-se a todos os bales 1 mL de calcena 120 ppm. Completou-se todos os bales com gua de osmose at a marca. Mediu-se a fluorescncia emitida das solues em 540 nm para radiao de excitao em 480 nm. Calculou-se a concentrao de clcio nas duas amostras analisadas. Parte II Determinao fluorimtrica do cido acetilsaliclico em comprimidos de aspirina Pesou-se o comprimido transferindo-o para um gral limpo e triturou-o at reduzir a p. Pesou-se 103 mg e transferiu-se o p para um papel de filtro qualitativo previamente dobrado e instalado num funil de vidro, sobre um balo volumtrico de 1 L. Ferveu-se 1 L de gua destilada num Becker e transferiu-se a gua quente para o funil contendo a aspirina triturada. Nesta etapa o cido acetilsaliclico se

dissolveu, sendo transferido para o balo, enquanto que os aglutinantes restam-se no filtro. Resfriou-se o balo em gua corrente e completou-se at a marca de 1 L com gua destilada. Preparou-se uma soluo padro do cido saliclico dissolvendo cerca de 71 mg do cido em balo volumtrico de 1 L. Separou-se 7 bales volumtricos de 100 mL: 1 para o branco, 5 para as solues padres e 1 para a amostra. Utilizou-se uma pipeta graduada de 10 mL e transferiu-se para os bales da curva de calibrao respectivamente 2,0 4,0- 6,0 8,0 e 10 mL da soluo padro do cido saliclico. Para a soluo amostral de aspirina, transferiu-se 5 mL para o balo de 100 mL. Adicionou-se em todos bales 4 mL de KOH 2 M e completou-se os volumes com gua destilada. No espectrofluormetro, ajustou-se o comprimento de onda de emisso para 400 nm e o de excitao para 310 nm.

3. RESULTADOS E DISCUSSO
Parte I Determinao do teor de clcio em gua de lagoa e de torneira (mtodo da calcena) O mtodo da calcena na determinao de ons clcio na soluo, baseado na formao de um quelato fluorescente entre os ons clcio e a calcena (cido fluorescena iminodiactico) em soluo alcalina. Tabela 1 Valores mdios de Fluorescncia com os valores de concentrao da soluo ppb Ca emisso 0 40 80 120 160 200 5,300 5,736 6,598 6,610 6,742 6,555

Grfico 1: Sinal x concentrao (ppm)

O grfico acima uma regresso linear das leituras das solues padres. Neste grfico as leituras das solues foram subtradas do valor da fluorescncia do branco de preparao (0 ppb). Aqui, os pontos de

concentrao 80 ppb e 200 ppb foram suprimidos para que a regresso fosse mais linear possvel. A leitura das amostras de gua de torneira esto mostradas na tabela abaixo: Tabela 02: Leitura das amostras Fluorescncia Amostra 0,5 Ml Amostra 1 Ml 6,152 6,723

Clculo da concentrao(considerando fator de diluio) : Amostra 0,5 mL: 8302,29 ppb ou 8,302 ppm. Amostra 1,0 mL: 7432,76 ppb ou 7,432 ppm.

Parte II Determinao fluorimtrica do cido acetilsaliclico em comprimidos de aspirina. O cido acetilsaliclico um analgsico encontrado em comprimidos de aspirina que possuem tambm outros ingredientes como agentes aglutinantes e agentes tampes. Uma parte do comprimido de aspirina dissolvido em gua quente e convertida em on salicilato em meio bsico. cido acetilsaliclico + base on salicilato + acetato + gua Utilizou-se uma amostra de AAS em comprimido (marca SANOFI, lote n o 9083143) cuja especificao 500 mg de AAS em cada comprimido. Pesou-se 0,175 g ,correspondente a um comprimido, e desta amostra retirouse 0,103 g para anlise no fluormetro. Para construo da curva padro, preparou-se uma soluo de 71,0 ppm de cido saliclico padro, e com diluies apropriadas, preparou-se solues de 1,42 2,84 4,26 5,68 e 7,10 ppm de cido saliclico (AS).

Tabela 03- Valores mdios de leitura com valores de concentrao da soluo ppm AS Fluorescncia 0 1,42 2,84 4,26 5,68 7,10 amostra 0,531 14,39 29,88 41,71 55,61 66,40 22,53

Grfico 3: Sinal x concentrao (ppm)

No grfico acima realizou-se regresso linear e calculou-se a concentrao de AS j considerando o efeito de diluio (fator diluio =20x), encontrando um valor de 43,059 ppm.(mg / L) Foram pesados 103 mg do comprimido e este foi diludo em 1 L (de acordo com a apostila prtica). 103 mg 43,1 mg 100 % x

x = 41,8 % de cido Acetilsaliclico O teor de cido Acetilsaliclico encontrado na Aspirina foi de 41,8 %, e de acordo com o fabricante a especificao do teor de AAS est em torno de

4. CONCLUSO
As concentraes de Clcio encontradas foram para amostras de gua de torneira (diluda 100 vezes) so de 8,302 ppm e para a amostra diluda 50 vezes foi de 7,432 ppm. Porm os resultados podem-se apresentar duvidosos devido a preparao da amostra que no se deu de maneira satisfatria o que pode ser evidenciado pelo alto sinal do branco de preparao. Isto pode ter causa na pureza da gua utilizada para preparao das amostras. O teor de cido Acetilsaliclico encontrado na Aspirina foi em torno de 43%. Uma caracterstica importante na fluorimetria a sua sensibilidade intrnseca. Os mtodos fluorimtricos se aplicam, via de regra, a faixas de concentrao muito mais baixas do que no caso dos mtodos absorciomtricos.

5 REFERNCIAS BIBLIGRAFICAS
1. BACCAN, N. Qumica Analtica Quantitativa, 2a edio, Editora Edgard

Blucmer Ltda.
2. MENDHAM J., DENNEY R.C., BARNES J.D., THOMAS M.J.K. Vogel

Anlise Qumica Quantitativa, Rio de Janeiro RJ: LTC Editora, 2002. 3. Apostila Terica de Anlise Instrumental.
4. GIL,

E.S.

et.

al.,

Controle

Fsico-Qumico

de

Qualidade

de

Medicamentos. So Paulo-SP, Pharmabooks, 2009.

5. ATVARS, T.D.Z.; MARTELLI C.,Espectroscopia eletrnica de absoro