Plantas Resistentes a Enfermeda des

Integrantes: Juan Ignacio Henrquez Pamela Zamorano Quintana Isolina Mardones Carreo

Profesor: Roberto Mancilla Fecha: 06 diciembre 2011

Introduccin: Las plantas tienen sus propios medios para resistir ataques microbianos y protegerse de desarrollar enfermedades. Sin embargo, con el genoma microbiano en permanente mutacin, el patgeno puede a veces superar el mecanismo de defensa de la planta, estudio desarrollado en avances tecnolgicos en transgnica.

La tecnologa de transformacin de plantas se ha convertido en una plataforma excelente para conseguir la mejora de cultivos as como para llevar a cabo el estudio de la funcin de los genes en las plantas. Este xito representa la culminacin de muchos aos de esfuerzos en mejorar las tcnicas de cultivo de tejidos, las tcnicas de transformacin y la ingeniera gentica. Los cultivos modificados genticamente se han creado con los siguientes fines:
Aumentar

la productividad de los cultivos mediante resistencia a plagas, enfermedades, herbicidas, sequas, suelos de elevada salinidad, etc. Incrementar la calidad del producto mediante la mejora de su aspecto, de su contenido nutricional o retrasando la maduracin de los frutos para conseguir dilatar el tiempo de almacenamiento Regeneracin de suelos contaminados por metales pesados con plantas transgnicas tolerantes a concentraciones elevadas de estos elementos. Produccin de medicamentos. Se ha investigado la produccin de anticuerpos monoclonales, vacunas y otras protenas teraputicas en plantas transgnicas de maz y soja. La obtencin de plantas transgnicas es posible gracias a una caracterstica propia de los vegetales: la totipotencia, segn la cual cualquier clula de un vegetal tiene el potencial de regenerar una planta completa. En 1956, se descubrieron las hormonas vegetales, las citoquininas, lo que permiti desarrollar el cultivo de tejidos vegetales in vitro. Las clulas vegetales se pueden cultivar en un medio artificial y en condiciones estriles (para evitar infecciones

de patgenos) que aporte los nutrientes necesarios para las divisiones celulares y la proliferacin vegetativa. Existen tres aproximaciones para regenerar plantas completas in vitro:
El

cultivo de embriones: Aislamiento de embriones zigticos propiciando su crecimiento como planta en un medio artificial La embriognesis somtica o asexual: Generacin de embriones a partir de tejidos somticos, como micro esporas o hojas La organognesis: Generacin de rganos como tallos o races a partir de diversos tejidos Dado que la manipulacin gentica requerida para introducir los transgenes acta a nivel celular, es necesario desarrollar una tecnologa de cultivo de tejidos in vitro adecuada para cada especie vegetal. De este modo, las clulas inicialmente transformadas regenerarn, mediante propagacin vegetativa, una planta completa donde todas las clulas contendrn el transgen. Precisamente este paso es el factor limitante en la obtencin de plantas transgnicas de determinadas especies. Sistemas de transformacin de plantas Hoy en da existen tres tcnicas que permiten obtener plantas transgnicas:
Transformacin

de protoplastos Transformacin biolstica (o bombardeo de micro proyectiles) Transformacin mediante Agrobacterium El uso de cada tcnica viene condicionado por el tipo de planta, ya que no siempre se han conseguido xitos con los tres sistemas. Cada tcnica se ha desarrollado con sistemas modelo, es decir con especies de plantas en las que las condiciones de manipulacin y regeneracin estn bien establecidas, y para cada nueva especie es necesario establecer empricamente las condiciones ms efectivas y el mejor mtodo de transformacin.

. Transformacin de protoplastos Se denominan protoplastos a las clulas vegetales desprovistas de pared celular. Su obtencin se lleva a cabo mediante procesos mecnicos y enzimticos de eliminacin de la pared celular. Por ejemplo, se pueden obtener protoplastos de tabaco o petunia a partir de hojas, mediante la retirada de la epidermis y el tratamiento con celulasas y pectinasas (enzimas que digieren los componentes de la pared celular vegetal) en medio isotnico, para evitar su rotura (al carecer de pared no son capaces de soportar cambios osmticos). Mediante este proceso se obtiene una suspensin con millones de clulas individuales susceptibles de ser transformadas. Los protoplastos se mantienen en un medio de cultivo y se adiciona el gen que se ha de transferir. Para conseguir la penetracin del transgen es necesaria la permeabilizacin de la membrana, que se lleva a cabo mediante distintos procesos:
Electroporacin:

Consiste en aplicar al protoplasto descargas elctricas de manera que la membrana se despolariza y se crean diminutos poros por los que puede penetrar el ADN Tratamiento con polietilenglicol para desestabilizar la membrana celular Fusin con la membrana de liposomas que contengan el ADN a transferir Una vez incorporado el DNA, se requiere cultivar los protoplastos para permitir su divisin, y en las condiciones que permitan conseguir la regeneracin de la planta que ha incorporado el transgen. Transformacin biolstica Se denomina biolstica o bio-balstica a la introduccin de DNA en clulas mediante la aceleracin (disparo) de proyectiles de muy pequeo tamao (microproyectiles). Generalmente los microproyectiles tienen alredededor de una micra (10-6 m) de dimetro, y son de un material inerte (oro o tungsteno). Los microproyectiles se pueden recubrir

de DNA, y se pueden acelerar mediante plvora, una descarga elctrica, o utilizando gases a presin (por ejemplo helio comprimido). De esta forma se puede introducir DNA en prcticamente cualquier tejido de cualquier especie vegetal. No obstante, el proceso tiene una desventaja, la falta de control sobre la integracin del gen en el genoma de la planta. Puede suceder que el transgen se rompa durante el proceso y por tanto se integren fragmentos del ADN de partida, o que se integren demasiados transgenes y por tanto la planta reaccione silencindolo, es decir, impidiendo que el gen se exprese. Transformacin con Agrobacterium El co-cultivo de clulas o tejidos con Agrobacterium tumefaciens es el procedimiento ms utilizado para transformar plantas dicotiledneas. Hasta hace muy poco no era posible emplearlo en monocotiledneas, grupo que abarca a las gramneas, muy importantes en la nutricin humana, pero ya se ha conseguido con arroz y maz. Las bacterias del gnero Agrobacterium son patgenos de plantas capaces de inducir una malformacin llamada tumor de agalla. Penetran en los espacios intercelulares a traves de pequeas heridas presentes en la planta, atrada por sustancias que la planta excreta en sus zonas abiertas. La formacin del tumor tiene lugar por la transferencia a los ncleos de las clulas infectadas de un segmento de ADN presente en un plsmido del Agrobacterium, el T-DNA. De esta forma, la bacteria establece con la planta una especie de "colonizacin gentica", obligndola a fabricar una sustancia de la que slo se puede nutrir el Agrobacterium y que es segregada en el tumor. El estudio del plsmido mencionado, permiti observar la existencia de genes de virulencia y de genes inductores de tumores. Estos ltimos estn flanqueados por unas secuencias de nucletidos caractersticas en el borde izquierdo y derecho. Mediante manipulacin gentica se consigui obtener cepas de Agrobacterium sin genes tumorales pero manteniendo los bordes izquierdo y

derecho. De esta forma, cualquier gen integrado dentro de estos bordes ser transferido a las clulas de la planta. Una vez introducido el transgen en el Agrobacterium, es necesario proceder a co-cultivar las clulas de la planta con la bacteria. Para ello se emplean tejidos vegetales que deben ser heridos con el fin de activar los genes de virulencia bacterianos y as inducir la introduccin del transgn. Los tejidos vegetales empleados pueden ser de hoja, de cotiledones, fragmentos de tallo o incluso semillas en germinacin. Este sistema es ms fiable que otros ya que la transformacin es ms estable y slo se introduce una copia del transgen

Seleccin de transformantes Todos los sistemas de transformacin desarrollados hasta el momento requieren seleccionar aquellas plantas que contengan el transgn introducido, eliminando el resto. El sistema ms sencillo es incorporar al transgen otro gen con resistencia a un antibitico o a un herbicida, de forma que, al realizar el cultivo in vitro en presencia del agente de seleccin (antibitico o herbicida), se garantiza que nicamente sobrevivirn aquellas que hayan sido transformadas. Este mtodo de seleccin ha provocado el rechazo por parte de ciertos sectores de la opinin con el argumento de que su uso hara proliferar la presencia en la Naturaleza de genes de resistencia a antibiticos o herbicidas. Para evitar esta crtica en los ltimos aos se han desarrollado tcnicas de seleccin que no necesitan del uso de estos genes de resistencia. Por ejemplo se han utilizado genes que confieren a los tejidos transformados la capacidad de utilizar como nutrientes fuentes de carbono diferentes a las habituales. De esta forma, si en el medio de cultivo se

incluye nicamente la fuente de carbono selectiva, slo prosperarn aquellas clulas que contengan el transgen. Ejemplos de plantas transgnicas Las plantas transgnicas tienen en potencia mltiples aplicaciones y muchas de ellas ya estn implantadas en cultivos agrcolas. Por ejemplo, los cultivos de maz, soja y algodn transgnico resistentes a insectos ocupaban 50 millones de hectreas en el 2001 (datos de la FAO) Algunos de los ejemplos ms importantes son: Resistencia a herbicidas La resistencia a herbicidas se basa en la transferencia de genes de resistencia presentes en bacterias y algunas especies vegetales como la petunia. As se ha conseguido que plantas como la soja sean resistentes al glifosato, a glufosinato en la colza y bromoxinil en algodn. La resistencia a herbicidas de estos cultivos simplifica el control de las malas hierbas para el agricultor sin perjudicar a las plantas. Resistencia a plagas y enfermedades Hace varios aos que se descubri en la bacteria Bacillus thurigiensis la presencia de una protena que resultaba txica para muchos insectos, pero no para otros organismos. La introduccin del gen que codifica esta protena en algunos cultivos aporta una serie de ventajas muy importantes para el agricultor, consumidores y medio ambiente. Se reduce el consumo de insecticidas para el control de plagas, se disminuye el empleo de envases difcilmente degradables, y se aumentan las poblaciones de insectos beneficiosos. Los casos ms avanzados de plantas resistentes a enfermedades son los de resistencias a virus en tabaco, patata, tomate, pimiento, calabacn, soja, papaya, alfalfa y albaricoquero. Existen ensayos avanzados en campo para el control del virus del enrollado de la hoja de la patata, mosaicos de la soja, etc.

Mejora de las propiedades nutritivas y organolpticas El conocimiento del metabolismo de las plantas permite mejorar e introducir mejoras en sus caractersticas, como por ejemplo en el tomate se ha logrado mejorar la textura y la consistencia impidiendo el proceso de maduracin, al incorporar un gen que inhibe la formacin de pectinasa, enzima que se activa en el curso del envejecimiento del fruto y que produce una degradacin de la pared celular y la prdida de la consistencia del fruto. Tambin se han desarrollado plantas transgnicas en las que sus propiedades alimenticias estn mejoradas, como el arroz dorado de Potrikus, que aumenta la produccin de precursores de vitamina A, o las patatas transgnicas creadas por cientficos hindes, con genes que la hacen ms rica en aminocidos esenciales

Resistencia a estrs ambiental La productividad de muchos cultivos se ve comprometida por gran variedad de presiones ambientales, como sequa, heladas, etc. A menudo la resistencia a las condiciones adversa suele venir determinada por varios genes, siendo pues difcil de conseguir, por el momento, mediante la biotecnologa. Un ejemplo de mejora de la resistencia de la planta a una condicin adversa como son las heladas se ha llevado a cabo mediante las bacterias Pseudomonas syringae y Erwinia herbicola, cuyos hbitat naturales son las plantas. Estas bacterias son en gran parte responsables de los daos de las heladas y el fro en muchos vegetales, al facilitar la produccin de cristales de hielo con una protena que acta como ncleo de cristalizacin. La separacin del gen implicado permite obtener colonias de estas bacterias que, una vez inoculadas en grandes cantidades en la planta, le confieren una mayor resistencia a las bajas temperaturas. Otras aplicaciones

La ingeniera gentica tambin se ha aplicado en horticultura para obtener variedades coloreadas imposibles de obtener mediante cruzamiento o hibridacin, como por ejemplo la rosa azul obtenida a partir de la introduccin de un gen de petunia responsable de la sntesis de delfinidinas (pigmento responsable del color azul). Otra aplicacin es la produccin de plsticos biodegradables mediante plantas en las que se les ha introducido genes codificadores del poli-b-hidroxibutirato. Por ltimo, tambin se han desarrollado plantas transgnicas capaces de producir vacunas frente enfermedades como el ttanos, malaria (en plantas de banana, lechuga o mango) etc.

Teora de plantas resistentes a enfermedades

Aunque las plantas estn continuamente expuestas a un gran nmero de microorganismos, la manifestacin de enfermedades es ms bien rara. Esto puede ser en parte atribuido a una slida pared celular pero tambin a la existencia de mecanismos de defensa. Sin embargo, cuando la enfermedad aparece es causa de prdidas considerables de cosecha principalmente en los monocultivos intensivos donde la propagacin es ms fcil. Hay muchos ejemplos en la historia cercana. En los 70 un hongo devast todo el cultivo de maz en el medio oeste americano y ms recientemente, otro hongo caus prdidas cercanas al billn de pesetas en las plantaciones de arroz del sudeste asitico. La lucha contra las enfermedades de las plantas se estableci con la obtencin por los mtodos clsicos, largos y tediosos, de variedades resistentes que antes de estar disponibles hay mucho tiempo para que ocurran episodios similares. Sin embargo, una serie de conocimientos han cambiado el panorama. Aunque parezca mentira, las plantas, a su modo, tienen un sistema inmunitario capaz de hacerlas resistentes a hongos, bacterias y virus patgenos. Los animales responden a los agentes infecciosos produciendo anticuerpos que los hacen refractarios a una posterior infeccin. En el caso de las plantas, por mecanismos completamente distintos, la puesta en contacto con un patgeno determina una respuesta defensiva frente a ese patgeno y, al contrario que en los animales, la respuesta es inespecfica, esto es, activa frente a toda clase de organismos infecciosos. Lo mismo que en ellos, la respuesta es sistmica, esto significa que toda la planta se hace resistente y el fenmeno en s se conoce como resistencia sistmica adquirida. Se puede decir que esto es en teora pues en algunos casos la respuesta es tan lenta que la patogenicidad supera la resistencia. Sin embargo, muchas veces, si no la mayora, la respuesta es tan rpida que se da lo que se conoce como respuesta de hipersensibilidad, (tambin ocurre en los animales), que se manifiesta como una necrosis de la zona adyacente a la entrada del patgeno, que queda aislado y evita su avance por tejidos sanos de la planta. Consecuente a esa respuesta hipersensible se producen una serie de seales, entre ellas el cido saliclico, constituyente de la aspirina, que determinan la sntesis de las llamadas protenas relacionadas con la patognesis que son activas contra el organismo desencadenante. Tambin esa reaccin de hipersensibilidad da lugar a la sntesis de radicales libres de oxgeno, los mismos que llevan al

envejecimiento de las clulas en animales, que provocan la muerte celular y necrosis de los tejidos vecinos al punto de ataque, as como al endurecimiento de las paredes de las clulas limtrofes. Para que ocurra esta respuesta se requiere que entre el patgeno y el hospedador se establezca un cruce de seales que se da cuando tanto el patgeno como la planta llevan los genes necesarios para ello. Genes de virulencia en el primero y genes de resistencia en la segunda. Este hecho, conocido como sistema gen a gen y descubierto hace casi 50 aos, va a permitir la construccin de plantas resistentes a patgenos haciendo innecesaria la utilizacin de productos qumicos para el tratamiento de enfermedades tan importantes como el repilo o la verticilosis del olivo y las podredumbres, royas, mosaicos o abarquillamientos de muchas plantas. Es como si se vacunaran, aunque esta vacuna sera de amplio espectro, que crea resistencia frente a todos los patgenos. El hallazgo de estos genes de resistencia en la planta ha sido considerado por algunos como el hecho ms importante en biologa vegetal desde el descubrimiento de la fotosntesis. Adems de estos genes de resistencia, se han encontrado otros que determinan la sntesis de las llamadas defensinas especialmente activas frente a hongos. La manipulacin de las plantas ya no es ciencia ficcin. Cuando se conozcan a fondo los mecanismos implicados en la resistencia, en los que compuestos tan comunes como el etileno, xido ntrico, jasmnico, el citado saliclico, etc., juegan un papel importante, ser cuestin de rutina. Se sabe que la simple aplicacin de cido saliclico hace a la planta ms resistente a ser infectada. Bastar con obtener una variedad que sintetizara por s misma el saliclico al nivel requerido para conseguir el mismo efecto. Decir esto es fcil, pero en ciencia las cosas no son tan sencillas y por eso van despacio y casi nunca los resultados provienen de una nica actuacin. Hay que conocer todos los mecanismos que entran en juego para llegar a una solucin adecuada al problema. Un hecho interesante es la implicacin de algunas de las seales que aparecen en la resistencia, como el jasmnico, en la respuesta de las plantas a heridas y picaduras de insectos. Otro dato a tener en cuenta tambin, es la sntesis de pptidos antimicrobianos del tipo de las mencionadas defensinas, como son las tioninas y las recientemente caracterizadas snakinas, adems de los compuestos de otra naturaleza, las fitoalexinas, presentes en los exudados radicales. Pero en este mundo complejo hay otra cuestin que hace todo ms complicado. A semejanza de los animales, que requieren de bacterias, como las que proporcionan vitaminas en el intestino o facilitan la asimilacin de los alimentos, las plantas no pueden vivir en un medio estril. Hay muchas

asociaciones planta-microorganismo, principalmente establecidas en las races, de las que se deriva si no su supervivencia, s un desarrollo normal. Unos microorganismos proporcionan nutrientes directamente, como nitrgeno o fsforo, otros, los ponen en condiciones de ser utilizados, los hay que producen sustancias promotoras del crecimiento (fitohormonas), etc. y entre todos crean al ambiente adecuado. La obtencin de plantas resistentes a patgenos podra determinar la incapacidad para establecer estas asociaciones, por lo que el problema se hace ms difcil si se quiere conseguir plantas que de forma selectiva sean slo resistentes a los agentes patgenos. Para los que piensan que la ciencia debera ir ms deprisa este es un ejemplo claro de complejidad que puede ocasionar desaliento. Sin embargo, poco a poco, el esfuerzo de los numerosos grupos que estn implicados en estos estudios dar su fruto: plantas capaces de resistir el ataque de patgenos pero susceptibles a la infeccin o asociacin con microorganismos beneficiosos. Con todo, esto no acaba aqu. Aunque se tenga la planta ideal con la que se evite adems de las consecuentes prdidas en cosecha, la utilizacin de productos qumicos altamente contaminantes, es necesario que la variedad transgnica sea aceptada por la sociedad patolgicamente tan sensibilizada frente a este tipo de plantas. Porque no se debe olvidar que la resistencia a una determinada enfermedad puede ser conseguida por la tediosa mejora clsica, pero que la planta sea capaz de manifestar una respuesta defensiva de amplio espectro slo es factible mediante ingeniera gentica. Segn (Plantas resistentes a las enfermedades. Diario de Sevilla, 29-06-00 Jos Olivares Pascual (olivares@eez.csic.es) Estacin Experimental del Zaidn, CSIC, Granada)

Conclusin: La conclusin a la que podemos llegar es que aun no existe la forma de que biolgicamente una planta pueda generar una defensa para el control de enfermedades. La ciencia ha podido generar distintas reacciones qumicas que puedan controlar o generar anticuerpos para el control de enfermedades que facilita la produccin de algunos cultivos, en el rea agrcola podemos llegar a la conclusin que por conveniencia econmica los productos transgnicos es la mejor alternativo por ahora y que puede que algunas plantas generen cierta defensa contra enfermedades, pero es una minora.