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Objetivo do curso
Objetivo do curso
Tautomerismo da glicose
Modelo experimental
Levedura (Saccharomyces cerevisiae) Tambm conhecida como levedura do po
Levedura + bactria
Levedura (5m)
Espectroscopia visvel e UV
Espectroscopia:
Log(I/Io) = -.c.L Sendo = coeficiente de absoro molar c = concentrao L = caminho percorrido (1 cm) A = - Log(I/Io) A = .c.L
COMPLEXO COLORIDO
Log(I/Io) = -.c.L
A = - Log(I/Io)
1cm= A/c
concentrao
tubos 1 2 3 4 5 6 7 8
A595
Tubo Branco
tubos branco A1 A2 A3 A4
Tabela 3 L100X H2O reagente de (L) (L) Bradford (mL) 100 1,0 100 1,0 50 50 1,0 30 70 1,0 20 80 1,0 tubos A1 A2 A3 A4 A595
tubos branco A1 A2 A3 A4
Tabela 3 L100X H2O reagente de (L) (L) Bradford (mL) 100 1,0 100 1,0 50 50 1,0 30 70 1,0 20 80 1,0 tubos A1 A2 A3 A4 A595
E+S
v = k[E].[S]
v = ~[E]
p-Nitrofenil--glicosdeo
Sem cor (no absorve no visvel)
COLORIDO
-glicosidase + H2O
p-nitrofenil--glicosdeo
glicose p-nitrofenilato
NPGlc 4 mM (mL)
0,2 0,2 0,2 0,2 ---
1 2 3 4 Branco de Enzima
Basta preparar este tubo apenas uma nica vez, mesmo quando se trabalha com diferentes diluies do lisado
tubo Branco de Substrato NPGlc 4 mM (mL) 0,2 lisado diludo (mL) --Tempo de incubao a 30C (min) 20 A420
Tabela 2
Tabela 3
tubos 1 2 3 4 Branco de Enzima Branco de Substrato
L10x A420
L50X A420
L500x A420
1 U = 1 mol de P / min
TABELA PARA O MONTAGEM DA CURVA-PADRO DE PROTENA massa de protena Abs595 (mg) ---
A1 A2 A3 A4
1 2 3 4
5 10 15 20
U/ml e U/mg
O pipetadorGilson
Errado
Ponteiras
Segurana em laboratrio
AVENTAL OBRIGATRIO SEM AVENTAL NO ENTRA NO LABORATRIO, NO FAZ A PROVA DE PROTOCOLO E NO PARTICIPA DA PRTICA
Segurana em laboratrio
Segurana em laboratrio
Bibliografia
Principles and Techniques of Practical Biochemistry, editado por Keith Wilson and John Walker.