Propiedades qumicas de las protenas

Antecedentes
Las protenas son las macromolculas ms abundantes en las clulas. Son la forma en la que la informacin gentica se expresa. A pesar de que las protenas son diferentes en las diferentes especies, todas estn constituidas por los mismos 20 aminocidos slo que en diferente orden. Las protenas varan entre ellas porque tienen una secuencia de aminocidos diferente. (Lenhinger )

La estructura primaria de las protenas es la que se debe a los encales covalentes de la molcula. Esta definicin comprende la secuencia de aminocidos y puentes disulfuro. Todas las propiedades de las protenas estn determinadas por la estructura primaria. Las cadenas peptdicas forman arreglos unidos por puentes de hidrgenos. Los tomos de oxgeno carbonlicos forman puentes de hidrgeno con los hidrgenos de la amida. Puede presentarse un arreglo ordenado de puentes de hidrgeno; la hlice alfa y la hoja plegada. Algunas partes de la protena pueden estar plegadas y otras pueden estar en hlice o incluso pueden estar al azar. La estructura terciaria es una conformacin tridimensional. La estructura cuaternaria es la asociacin de dos o ms cadenas completas.(Wade 1993)

Hay muchas clases de protenas de acuerdo a la funcin que cumplen. Muchas protenas cumplen con una funcin cataltica a estas se les conoce como enzimas. Tambin hay protenas en el plasma que se unen y transportan diferentes sustancias, por ejemplo la hemoglobina que se une al oxgeno y lo transporta en el torrente sanguneo. Existen otras protenas que el organismo usa para almacenamiento de nutrientes. Hay otras protenas que tienen la capacidad de contraerse, cambiarse de forma y moverse. Algunas protenas intervienen en la defensa de los organismos como las inmunoglobulinas. Algunas protenas ayudan a regular la actividad fisiolgica y celular. (Lenhinger)

Las protenas se pueden clasificar por su forma. Las protenas globulares son cadenas polipeptdicas dobladas en forma compacta. stas son solubles en agua y se difunden fcil. Las protenas fibrosas son insolubles, largas con cadenas polipeptdicas que se extienden y no se doblan. Hay una clase de protenas filamentosas que participan en los eventos contrctiles. (Lenhinger)

Muchas protenas contienen solamente aminocidos y no contienen otros grupos qumicos. Estas son las protenas simples. Sin embargo, hay otros tipos de protenas que contienen otro componente qumico adems de los aminocidos. A estas protenas se les conoce como conjugadas. La parte que no es aminocido se llama el grupo prosttico.

Las reacciones coloreadas en las protenas se dan debido a la variedad de aminocidos que reaccionan con varios productos. Muchas de estas reacciones son importantes para la deteccin y la estimacin cuantitativa de protenas y de sus aminocidos constituyentes.

Reaccin de Biuret Los pptidos y protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la valoracin de los mismos, llamada reaccin del Biuret. Las protenas por sus uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. Se necesitan 2 ms uniones peptdicas para que se forme el complejo coloreado. Esta prueba sirve para la identificacin de tripptidos en adelante. (Wharton 1972) Un color violeta resulta cuando los iones cpricos en medio alcalino se complejan con los electrones no saturados de los tomos de nitrgeno y oxgeno de los enlaces de todas las protenas. La cantidad de color producido es proporcional a la concentracin de protenas y es medida espectrofotomtricamente a 550 nm. (Wharton 1972)

En soluciones alcalinas Cu+2 se complejan con las uniones de pptidos de protenas resultando en la formacin de un color morado. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de protenas. Este mtodo es generalmente aplicable porque el nmero de enlaces peptdicos por unidad de peso para todas las protenas es casi el mismo. Sin embargo, el mtodo es un poco insensible siendo el lmite menor de 0.25mg de protenas. Los buffers tris as como otras sustancias encontradas en extractos de tejidos crudos interfieren con esta prueba. (Wharton 1972)

Las sustancias que dan el color violeta tienen dos grupos CONH2 unidos directamente o por un carbono o nitrgeno. Los compuestos que contienen CH2NH2, -C(NH)NH2 Y CSNH2 en lugar de los grupos CONHH2. Las estructuras peptdicas se encuentran en protenas y sus derivados contienen enlaces peptdicos tambin dan positivo para la prueba de Buiret. (Stawnton, 1967)

H -CO-NH-C-CO-NHR De los aminocidos, la histidina da positivo. Los dipptidos dan pruebas negativas. Las protenas dan color morado o violeta mientras que las proteosas o peptonas dan un color rosado y los pptidos dan un color rosado claro. La gelatina da un color casi azul. La presencia de sulfato de magnesio y muchas sales de amonio interfieren con la prueba. Este efecto puede disminuirse con la adicin de base. (Stawnton, 1967)

Prueba de Molisch
La prueba de Molisch es una prueba cualitativa para la presencia de carbohidratos en una muestra de composicin desconocida. Para determinar la cantidad y naturaleza especfica de los carbohidratos se requieren otras pruebas. Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos reductores presentes en la muestra. (Clark 1964)

Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos compuestos furfricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfa-naftol). (Clark 1964)

Reaccin Xantoproteica
Esta prueba sirve para caracterizar los aminocidos bencnico. En esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos tirosina, fenilalanina y triptofano, obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin del cido pirmico o trinitrofenol) (Clark 1964) La adicin de cido ntrico concentrado a soluciones que contienen protena generalmente causa la formacin de un precipitado blanco que cambia a amarillo al calentarlo. El color se empieza a convertir en anaranjado cuando la solucin se vuelve bsica. Las protenas insolubles cambian a amarillo y anaranjado en la superficie. Las manchas amarillas en la piel se causan por el cido ntrico son el resultado de una reaccin xantoprotica. Esta reaccin se debe a la nitracin de anillos fenlicos en la tirosina, fenilalanina y triptfano para dar sustitutos nitrogenados que se colorean anaranjado con la adicin de base por la formacin de sales. La mayora de protenas dan positivo en esta reaccin. (Stawnton 1965)

Precipitacin por desnaturalizacin selectiva.

El agua es el disolvente biolgico por excelencia. En disolucin acuosa, los residuos hidrofbicos de las protenas se acumulan en el interior de la estructura, mientras que en la superficie aparecen diversos grupos con carga elctrica, en funcin del pH del medio. En torno a los grupos cargados, los dipolos del agua se orientan conforme a la carga elctrica de cada grupo, de tal manera que la protena presenta una capa de solvatacin formada por el agua de hidratacin, que es el agua retenida por las cargas elctricas de la superficie de las protenas. Los AA polares sin carga tambin se disponen en la superficie, donde interaccionan con el agua mediante puentes de hidrgeno. Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin. Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija. (Wade 1993)
Estado nativo Estado desnaturalizado

Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible. El proceso mediante el cual la protena desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalizacin. estructura primaria la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuracin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificacin de protenas, ya que no todas la protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalizacin conduce a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos impide su renaturalizacin, y hacen que el proceso sea irreversible. (Wade 1993) Todos los niveles estructurales de una protena globular, desde el secundario al cuaternario dependen de un conjunto de interacciones qumicas. La conformacin final refleja un equilibrio de estas fuerzas: interacciones hidrofbicas, enlaces de hidrgeno, interacciones inicas, fuerzas de Van de Waals y los entrecruzamientos covalentes (uniones disulfuro). Los productos de desnaturalizacin en solucin se agregan fsicamente y segn las condiciones de pH y fuerza inica, precipitan. (Wade 1993)
Tres mtodos se suelen usar: 1) temperatura, 2) pH y 3) solventes orgnicos. Si bien el fundamento de cada uno de ellos es distinto, no son independientes entre s. La desnaturalizacin por temperatura depende fuertemente del pH y viceversa. En el fraccionamiento por solventes orgnicos, pH y fuerza inica deben estar claramente definidos. (Billi 2002) Temperatura: Muchas protenas se desnaturalizan por calor, que afecta las interacciones dbiles como enlaces de hidrgeno. El cambio es abrupto, la prdida de la estructura en una parte de la protena desestabiliza el resto. (Billi 2002) pH: Los pHs extremos causan desnaturalizacin porque reas de la molcula proteica adquieren cargas, causando repulsin, otras reas pierden cargas que estaban involucradas en mantener la estructura. (Billi 2002)

Solventes orgnicos: Los solventes orgnicos miscibles con el agua como el etanol o acetona producen una variedad de efectos que, combinados, permiten la precipitacin de protenas. El principal efecto es la reduccin del poder de solvatacin del agua que puede ser explicado en trminos de una reduccin de la constante dielctrica del agua. La estructura ordenada del agua alrededor de los aminocidos hidrofbicos es desplazada por el solvente. La principales causas de agregacin de las molculas proteicas son las fuerzas electrostticas y dipolares. (Billi 2002)

La desnaturalizacin por solventes se debe a que las molculas del solventes interfieren con las interacciones hidrofbicas en el interior de las protenas. Este proceso se ve favorecido a temperaturas mayores a 0C. (Billi 2002)

Cuando las protenas se mezclan con bajas concentraciones de cido tricloroactico o ferrocianida de potasio en cido actico, se obtienen resultados de turbidez. En condiciones controladas de temperatura, concentracin y tiempo de exposicin a agentes precipitantes, la densidad ptica resultantes a 600m ofrece un mtodo rpido y semicuantitativo para la determinacin de protena. Este mtodo tiene grandes desventajas: no todas las protenas tienen precipitados parecidos y la precipitacin cida de materiales no proteicos interfiere. (Clark 1964)

Justificaciones
Al agregarle el reactivo de Biuret a las soluciones proteicas y del aminocido, se debe esperar entre 15 y 30minutos para observar los cambios de color porque hay que dar tiempo para que reaccionen. La reaccin entre el reactivo de Biuret y las protenas consiste en que los iones de cobre se complejan con los electrones si aparear del nitrgeno de dos enlaces peptdicos adyacentes. El cobre se reduce a Cu2O dando como resultado el color violeta que se observa cuando la prueba es positiva. Al agregarle cido ntrico a las soluciones proteicas y del aminocido, se nitrogenan los anillos fenlicos de los aminocidos, tirosina, fenilalanina y triptfano y se forma un precipitado blanco que al calentar la solucin cambia de color a amarillo. El hidrxido de sodio convierte el medio lo suficientemente bsico de manera que ayuda a la precipitacin y permite el cambio de color a anaranjado pueda darse.

La reaccin de Molisch sirve para identificar la presencia de grupos reductores. Al estar en un pH bajo por el H2SO4 los grupos amino y carboxlico libres de los aminocidos y de las protenas estn protonados, por lo que son buenos agentes reductores, que pueden reaccionar con el alfa naftol. Debido a que el cido sulfrico est concentrado y las protenas y el aminocido estn en solucin acuosa, es necesario agregarlo lentamente por las paredes del tubo debido a que la reaccin es muy exotrmica. Adems agregarlo lentamente puede facilitar la formacin de dos capas. El cido tricloroactico es un cido orgnico dbil que adems est en baja concentracin por lo que al cambiar en poco el pH la precipitacin por desnaturalizacin de las protenas puede darse. Sin embargo, en el caso de la adicin de cido ntrico los grupos amino libres de las protenas reaccionan con el cido ntrico liberando nitrgeno, sustituyndolo con grupos hidroxilo y dando como resultado protenas desaminadas. Con esto se destruye la estructura de la protena permitiendo que sta precipite. El cido clorhdrico es un cido fuerte y al disminuir el pH de la solucin se forman grupos protonados y por lo tanto con cargas que ocasionan repulsin entre varias partes de la protena de manera que sta pierde su estructura.

Bibliografa
Clark, J EXPERIMENTAL BIOCHEMISTRY, W.H Freeman and Company, Estados Unidos (1964) 228p.p Wharton, D. EXPERIMENTS AND METHODS IN BIOCHEMISTRY. CollerMacMIllan, Canada 349p.p Stawnton, Edward, et.al. TEXTBOOK OF BIOCHEMISTRY. 4ed. The MacMIllan Co. Estados Unidos (1967) 1595p.p. Catania, P. Teresa Damiani. se actualiz por ltima vez en el 30 de Marzo del 2000

http://www.geocities.com/laboratorio_de_quimica_2000/index.htm Billi, S. Resumen sobre precipitacin de protenas por desnaturalizacin Modificada el 7/02/2002
157.92.19.175/Temas.htm

PostLab Propiedades qumicas de las protenas

Resumen

En esta prctica se realizaron tres reacciones de coloracin con cuatro diferentes protenas la peptona, la casena, la gelatina y albmina, adems de un aminocido, la glicina, para comparar. Se hizo la prueba de Biuret para determinar ms de dos enlaces peptdicos. Se hizo la prueba de Molish que determina la presencia de carbohidratos reductores y de esa manera identificar glucoprotenas si es que alguna lo era. Tambin se realiz la prueba Xantoprotica que determina la presencia de aminocidos aromticos.

Adems se realizaron tres reacciones de precipitacin. Una de stas se realiz con un cido orgnico dbil, el cido tricloroactico. Las otras dos reacciones de precipitacin con cidos fuertes se realizaron una con cido ntrico y la otra con cido clorhdrico, que dieron los mismos resultados.

Observaciones y Resultados

El color rojo de los tubos de las protenas para la prueba de Biuret indic pruebas positivas. El color entre los diferentes tubos variaba de intensidad. Para la prueba de Molish, el anillo violeta en la interfase indicaba una prueba positiva. El color y la intensidad del mismo vari entre las protenas que dieron positivo. En la prueba Xantoprotica el color anaranjado en los tubos de las protenas indicaba la presencia de anillos bencnicos en aminocidos.

Tabla 1
Resultados de Pruebas de color

Protena 1 2 3 4 5

Albmina
Casena Gelatina Peptona Glicina

Biuret + + + -

Molish ++ + +++ -

Xantoprotica + + + + -

Tabla 2 Resultados de las pruebas de precipitacin

Protena 1 2 3 4 5 Albmina Casena Gelatina Peptona Glicina

Precipitacin por cidos dbiles + -

Precipitacin por cidos fuertes HNO3 + + -

Precipitacin por cidos fuertes HCl + + -

En la Tabla 1 y en la Tabla 2 el signo indica una prueba negativa, el signo + significa una prueba positiva (a mayor signos +, mayor intensidad de color en la Tabla 1) y el signo indica que s hubo cambio en el color pero muy poco perceptible.

Discusin de Resultados

La prueba de Biuret sirve para identificar cadenas polipeptdicas de ms de tres residuos de aminocidos. El cobre del reactivo de Biuret interacciona con los electrones libres de los tomos de nitrgeno de los aminocidos dando un compuesto de color caracterstico. De las protenas usadas, todas reaccionaron positivamente dando un color rojo. Sin embargo, la peptona aunque s cambio de color no fue tan drstico como en las otras. Esto puede deberse a que como no eran pruebas cuantitativas, sino cualitativas, no se midieron las cantidades exactas agregadas de cada reactivo y puede ser que para la peptona se haya agregado menos reactivo de Biuret que a las otras y por esto haban menos iones de cobre disponibles para reaccionar con sta. La glicina, como es un aminocido libre, no tiene enlaces peptdicos y por lo tanto no puede reaccionar con el reactivo de Biuret. De esta manera, la glicina dio una prueba negativa.

Todas las protenas estn formadas por cadenas de diferentes aminocidos. Entre los aminocidos hay algunos que en su estructura tienen anillos aromticos: la tirosina, fenilalanina y triptfano. En la reaccin xantoprotica, el cido ntrico ataca al anillo bencnico dando la nitracin del mismo y provocando la precipitacin de la protena. Al agregarle una base fuerte, el grupo nitro cambia a carboxilato dando un color anaranjado. Todas las protenas dieron positivo para esta reaccin, lo cual indica que en las secuencias de aminocidos de los pptidos que las constituyen hay aminocidos aromticos. La glicina, por ser el aminocido ms sencillo y carecer de un anillo bencnico dio negativo para esta reaccin.

La reaccin de Molish sirve para determinar grupos de carbohidratos reductores. En esta prctica se us para determinar si haban glucoprotenas. La glicina no reaccion porque no es un carbohidrato. Sin embargo, todas las protenas reaccionaron. Aunque se observ cambios en la intensidad de color y grosor del anillo como se aprecia en la Tabla 1 puede que se debiera a que en unos se agreg ms del reactivo que en los otros. Otra opcin es que de acuerdo a la intensidad del color hay ms grupos de carbohidratos en unas protenas que en otras.

Las protenas tienen un pH ptimo en el cual pueden realizar su funciones biolgicas. Fuera de los lmites de pH, las protenas pierden sus estructuras tridimensionales desnaturalizndose. Muchas protenas solubles en agua pierden esa solubilidad en pH fuera de su rango de actividad biolgica y precipitan. En cido tricloroactico, que es un cido dbil, slo la albmina precipit. Esto indica que la albmina tiene una sensibilidad mayor a los pH cidos.

Para las pruebas de precipitacin con el cido ntrico y con el cido clorhdrico, las protenas que precipitaron fueron la albmina, que ya haba precipitado en el cido tricloroactico, y la casena. Se puede decir que las otras dos protenas, la peptona y la gelatina son ms estables a pH cidos o talvez el pH en el que realizan sus funciones biolgicas es cido. La glicina, como en las reacciones anteriores, no reaccion. El cambio de pH de una solucin de la glicina lo nico que cambia es la carga neta, es decir las formas inicas de sus grupos funcionales y esto no lo hace ms o menos soluble en el agua.

Conclusiones

Las reacciones realizadas en esta prctica pueden servir para determinar la presencia de ciertos grupos en una protena, pero no son adecuados para la identificacin de aminocidos. El hecho de que todas las protenas hayan dado positivo para la reaccin de Biuret indica que todas estn conformadas por ms de tres residuos de aminocidos. La intensidad del color de una reaccin colorida y la cantidad de precipitado vari de una protena a otra no slo por la cantidad de grupos disponibles para la reaccin en la protena sino tambin por la cantidad de reactivos agregados. Los resultados de las reacciones de precipitacin con los cidos clorhdrico y ntrico fueron los mismos porque como ambos son cidos fuertes y al estar en las mismas concentraciones se disocian de igual forma, el efecto que causaron en las protenas fue el mismo. La glicina no reaccion con el reactivo de Biuret porque est en forma libre y no hay enlaces peptdicos con los que pueda reaccionar este reactivo. Adems en la reaccin xantoprotica dio negativo porque carece de grupos aromticos.

Lpidos Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas bsicamente por carbono e hidrgeno y generalmente tambin oxgeno; pero en porcentajes mucho ms bajos. Adems pueden contener tambin fsforo, nitrgeno y azufre. Es un grupo de sustancias muy heterogneas entre las que se encuentran las grasas, los aceites, las ceras y el colesterol, que slo tienen en comn estas dos caractersticas: 1.Son insolubles en agua 2.Son solubles en disolventes orgnicos, como ter, cloroformo, benceno, etc. Los lpidos dejan una mancha translcida sobre la superficie del papel, la cual no se va con la accin del calor. Tambin a los lpidos se los puede colorear con el reactivo Sudan III.

Clasificacin de los lpidos Los lpidos se clasifican en dos grupos, atendiendo a que posean en su composicin cidos grasos (Lpidos saponificables) o no lo posean (lpidos insaponificables). 1.Lpidos saponificables A.Simples 1.Acilglicridos (monoglicridos; diglicridos y triglicridos) 2.Cridos B.Complejos 1.Fosfolpidos 2.Glucolpidos 2.Lpidos insaponificables A.Terpenos B.Esteroides Los Lpidos que consideramos en este prctico son las grasas y los aceites.

Grasas: Cada molcula de grasa esta formada por cadenas de cidos grasos unidas al alcohol llamado glicerol o glicerina. Son de origen animal y a temperatura ambiente son slidas. Muchos animales las almacenan en forma de grasas en el tejido adiposo, que luego podrn ser utilizadas en la produccin de energa, cuando el organismo la necesite. Cada gramo de grasa produce ms del doble de energa que los dems nutrientes, con lo que para acumular una determinada cantidad de caloras slo es necesario la mitad de grasa de lo que sera necesario de glucgeno o protenas. Aceites: Son de origen vegetal y a temperatura ambiente se encuentran en estado liquido Los aceites forman parte de la dieta, son una mezcla de sustancias que se extraen de los frutos y las semillas de algunas plantas como el olivo, el girasol y el maz. Las plantas lo almacenan en las semillas y lo van a utilizar como fuente de energa para el futuro embrin.

Las molculas que constituyen a las grasas y los aceites se forman a partir de la unin de tres cidos grasos con una molcula del alcohol glicerol o glicerina; por eso, se los denomina triglicrido. Segn el tipo de cidos grasos que forman a estas molculas, las sustancias que resulten podrn ser slidas a temperatura ambiente, como las grasas animales; o liquidas, como los aceites vegetales. La mayor parte de los lpidos que consumimos son triglicridos. Las grasas y los aceites son ms ligeros que el agua e insolubles en ella; son poco solubles en el alcohol y se disuelven fcilmente en eter y otros disolventes orgnicos. Funcionalidad Biolgica de los Lpidos Los lpidos desempean un papel fundamental como reserva energtica en las clulas y organismos, y tambin como componentes de la estructura de las membranas y actan como detergentes biolgicos. (fosfolipidos). Otros, como las ceras, forman superficies protectoras en las hojas y en los frutos de los vegetales superiores, en la cutcula de insectos y en las formaciones epidrmicas de aves y mamferos. Por ultimo, los esteroides y terpenos dan lugar a una enorme variedad de biomoleculas activas,

como hormonas (testosterona, estrgenos) esteroles, toxinas y venenos, los primeros; y aceites esenciales que dan su olor caracterstico a muchos frutos, caucho y algunas vitaminas, los segundos. Necesidades Diarias de Lpidos: Se recomienda de un 20-30% de lpidos. De estos un 10% debe ser de grasas saturadas y un 5% de grasas insaturadas. Hay ciertos lpidos que se consideran esenciales como el cidos linoleico o el linolnico que si no estn presentes en pequeas cantidades producen enfermedades y deficiencias hormonales. Este trabajo practico se divide en cuatro partes: * Solubilidad. * Tincin con Sudan III * Manchas en el papel * Emulsin (simular la accin de la Bilis) 1ra Parte Objetivo: Comprobar la solubilidad de las grasas y los aceites en diferentes solventes orgnicos. Materiales:

Mtodo

Aceite Alcohol Bencina Cloroformo Agua

Dentro de seis tubos de ensayo, se coloco una pequea porcin de aceite. Luego a cada uno de los tubos se les coloca diferentes disolventes orgnicos para que se pueda determinar la solubilidad de los aceites con los respectivos disolventes. A medida que se realizaba esto se anotaban los resultados. Luego se realizo el mismo procedimiento del aceite, pero esta vez con manteca derretida. Una vez que se comenz a realizar se anotaban los resultados. Resultados

Aceite con Acetona: Es Soluble Aceite con Agua: No es Soluble. Aceite con Cloroformo: Es soluble Aceite con Alcohol: Muy poco Soluble.

Aceite con Benceno: Es Soluble. Aceite con Tetacloruro de Carbono: Es soluble.

Conclusiones La manteca y el aceite, son en algunos casos ms solubles o menos solubles en el Tetacloruro de Carbono, Bencina, Cloroformo, Acetona, Alcohol y Benceno, estos son todos disolventes orgnicos, y los lpidos son solubles en los mismos pero son insolubles en el agua. 2da Parte Objetivo: Reconocer Lpidos con la Coloracin de Sudan III Materiales

Mtodo

Azcar Clara de Huevo Leche Aceite

Se colocaron dos tubos de ensayo con aceite, a uno de ellos se le agrega unas gotas de tinta roja y al otro Sudan III. Esto se realizo para comprobar si es verdad que el Sudan III puede reconocer a los Lpidos, ya que la tinta roja colorea a todo tipo de sustancias, en cambio, el Sudan III solo colorea a los Lpidos. Esto mismo se hizo con el azcar, la leche, la manteca y la clara de huevo. A medida que se realizaba se anotaban los resultados en una tabla. Resultados

Reaccin xantoproteica
La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para determinar la cantidad de protena soluble en una solucin, empleando cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con unlcali, se torna color amarillo oscuro. Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, mas no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra reaccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico.

Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Esta reaccin se debe a la presenciade un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que

se realiza en el laboratorio.Para esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalin (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccion final.

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopa ultravioletavisible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).
Coagulacion de Proteinas Las protenas , debido al gran tamao de sus molculas, forman con el aguasoluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70:C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a sudesnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteina la desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria .

Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de

huevo, para conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa.
1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de

huevo. 2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.

Reacciones coloreadas

Reaccion Xantoproteica:

Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteinas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Tecnicas 1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de huevo ). 2. Aadir 1 cc. de HNO3 concentrado. 3. Calentar al bao mara a 100: C.. 4. Enfriar en agua fra 5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.

Reaccion de Biuret

La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluda, da una coloracin violeta caracterstica.

Tecnica
1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo.

2. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. 4. Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

Reaccion de los aminoacidos azufrados

Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Tecnica
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo). 2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. 3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%. 4. Calentar el tubo hasta ebullicin. 5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar proteinas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.