TCNICAS ALTERNATIVAS PARA LA INVESTIGACIN DE ANTICUERPOS

Lic. Margarita Ayala

Banco de Sangre C.H.M. Dr.A.A.M.

Principio de la Prueba de Antiglobulina

Pacientes con deteccin de anticuerpos positivo

Resultados
Clulas C.inmediata 37o AH AC
I II 0 0 0 0 0 2+ 0

Interpretacin Tentativa
1. Aloanticuerpo 2. Especificidad IgG 3. Anticuerpo Simple

Clulas C.inmediata 37o AH AC

I II 0 0 0 2+ 3+ 3+ 0

1. Aloanticuerpo 2. Especificidad IgG 3. Mezcla de anticuerpos

Clulas C.inmediata 37o AH AC

I II 1+ 2+ 0 0 0 0 0

1. Aloanticuerpo 2. Especificidad IgM 3. Anticuerpo simple con efecto de dosis.

Panel de Rutina
1. 2. 3. Sirva los GR del panel y el suero en estudio segn el mtodo escogido. Observe cuidadosamente los grados de aglutinacin y antelos en cruces. Esto es muy importante. Excluir, como probables anticuerpos, solamente los que no reaccionan aunque los antgenos se encuentren en forma homocigota. Los sistemas Rh, Kidd, Duffy, MNSs presentan efecto de dosis.

4.

Descarte de Anticuerpos en un Panel de Rutina

Anticuerpos Probables
1. Despus de realizar el descarte (tachadito) escoga como probables anticuerpos aquellos que no descart ni una sola vez. Compare las reacciones del suero con los patrones de anticuerpos que hay en el antigrama. Si se ajusta perfectamente a un anticuerpo, es probable que esa sea su identidad; sin embargo, hay que demostrar que no es obra de la casualidad (debe cumplir con regla de tres).

2. 3.

Fenotipos
Con excepcin del D mosaico y el e mosaico, el paciente que posee un anticuerpo carece del correspondiente antgeno. El fenotipo del paciente para los probables anticuerpos podra excluir algunos de los probables anticuerpos. Si el suero reacciona con todas las clulas del panel y el paciente es Coombs directo negativo, realizar el fenotipo completo del paciente ayuda a aclarar qu anticuerpos es capaz de formar. Si el suero es reactivo con varias unidades de sangre, fenotipicamente iguales al paciente, piense en un anticuerpo contra antgeno de alta incidencia.

Pacientes recientemente transfundidos Si el paciente ha sido transfundido en los ltimos 120 das, el fenotipo de los glbulos rojos no se puede realizar.

Uso de clulas seleccionadas (minipanel)

Cuando el suero parezca mostrar una combinacin de anticuerpos, el uso de clulas seleccionadas (minipanel) sirve para excluir o confirmar los componentes de la mezcla.

Pacientes A1 o A1B que reacciona con todo el panel.

Considere la posibilidad de un anti-H y haga la prueba cruzada con GR de donador A1 con la tcnica de pre-calentado.

Paciente A2 o A2B con anti-A1 circulante

1. La deteccin de anticuerpos resultar negativa. 2. Utilice lectina anti-A1, para confirmar que el paciente es A2. 3. Haga la prueba cruzada con GR A2.

Paciente con altos ttulos de crioaglutininas

Realice el rastreo y prueba cruzada con la tcnica de pre-calentado.

Pacientes con una o muy pocas unidades incompatibles y deteccin de anticuerpos negativo
1. 2. Confirme que la unidad cruzada es Coombs directo negativo. Considere la posibilidad de un anticuerpo contra antgeno de baja incidencia. En ese caso se transfunde las unidades que resulten compatibles.

Uso de clulas qumicamente modificadas

1. 2. Compare las reacciones del panel de rutina con las reacciones del panel de clulas tratadas con enzimas. Si las reacciones han disminuido o desaparecido, piense en la probabilidad de anticuerpos que se afectan con enzimas como M, N, S, Fya y Fyb (rea rosada en el antigrama de Diamed). Si las reacciones se han potenciado sospeche de los sistemas Rh, Kidd, anti-I y anti-P1 .

3.

Efecto de la enzima sobre el antgeno S

Efecto de la enzima sobre el antgeno E

Uso de antiglobulina poliespecfica

1.

2.

3.

La AGH poliespecfica es causante de muchas reacciones positivas sin importancia clnica. Los anticuerpos fijadores de complemento como Jka, Jkb y Lea hemoltico pueden ser ms reactivos con la AGH poliespecfico. Cada laboratorio tendr que evaluar las ventajas y desventajas de utilizar la AGH poliespecfica en sus pruebas de rutina.

Uso de otros mtodos

Si la investigacin se inicio con la metodologa de gel y no se logra identificar el anticuerpo, utilice la metodologa de tubo y vare: 1. Temperatura de incubacin 2. Clase de AGH 3. Elimine los potenciadores utilizados e incube por 30 minutos antes de llegar a la fase de antihumano 4. Incremente la cantidad de suero. 5. Si tiene un rango de reacciones fuertes busque un antgeno en comn.

Observacin de rangos ms fuertes

ROULEAUX
Si observo una fuerte aglutinacin con todas las clulas, en la fase de centrifugacin inmediata y una reaccin dbil o negativa en la fase de AGH considere la posibilidad de rouleaux, lo cual puede confirmar observando los GR al microscopio. Realice todas las tcnicas con el reemplazo de salina.

Reaccin con el Caprilato de Sodio

Si en la prueba con el mtodo de tubo utiliz albmina, el caprilato de sodio utilizado como preservativo de la misma, puede causar aglutinacin. En este caso, realice las pruebas sin albmina e incube por 30 minutos a 37 C antes de llegar a la fase de AGH.

Eludir anticuerpos fros

Para eludir un anticuerpo fro, lo que en su mayora no tienen importancia clnica, puede optar por: 1. Uso de la tcnica de pre-calentado 2. Uso de AGH IgG en vez de poliespecfico 3. No usar LISS o enzimas 4. Eliminar la fase de centrifugacin inmediata en la tcnica de tubo

Probar suero diluido

Probar suero diluido puede sugerir que el anticuerpo pertenezca al grupo HTLA (alto ttulo, baja avidez). Si el anticuerpo reacciona cuatro diluciones ms de donde haba dado una cruz puede ser considerado como HTLA Otras caractersticas de los HTLA son: - reacciones dbiles en AGH - reacciones no reproducibles - generalmente no se potencian con enzimas - usualmente no tienen importancia clnica

Absorciones

En una mezcla de anticuerpos, se pueden eliminar algunos anticuerpos utilizando GR que posean los antgenos positivos para los anticuerpos que se desean eliminar, pero que carezcan de los antgenos para otros anticuerpos que sea capaz de formar el paciente.

Fenotipos del paciente que sugieren un anticuerpo contra antgeno de alta incidencia

1.Si el paciente es fenotipo S (0) s (0), un antiU puede estar presente. 2. Si carece de Jka y Jkb, un anti-Jk3 puede estar presente. 3. Si carece de C y c E y e puede haber un anticuerpo del Sistema Rh, de alta incidencia.

Uso de plasma

En pacientes con diagnstico de colitis ulcerativa, el suero reacciona con todas las clulas del panel debido a la actividad del complemento. En estos casos se sugiere trabajar con una muestra recolectada con anticoagulante.

Uso de glbulos rojos provenientes de donantes frescos

Si el suero reacciona con todas las clulas del panel de una o varias casas comerciales, y el autocontrol es negativo, pruebe el suero con GR de donadores frescos. Si el resultado es negativo, entonces se trata de una reaccin contra los preservativos del reactivo.

Cuando dar por terminado un estudio

Algunas investigaciones pueden concluir sin una completa resolucin. Hasta donde sea posible deben ser excluidos los aloanticuerpos comunes y seleccionar la mejor unidad disponible para transfusin. Realizar la prueba cruzada in vivo puede predecir el significado clnico de una especificidad desconocida.

Cuando repetir un estudio

Un estudio debe repetirse cuando las unidades con antgeno negativo para los anticuerpos previamente identificados, no resulten compatibles.

RECUERDE... Investigar anticuerpos requiere: 1. Conocimientos de inmunohematologa 2. Correcta aplicacin de las tcnicas 3. Actitudes intuitivas

GRACIAS