N° 14 Pruebas Inmunologicas

CENTRO BIOCLINICO L.
A
PROCEDIMIENTO 014 PAGINA 1 DE 11
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PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTNDAR VERSION N 001
PRUEBAS INMUNOLOGICAS
OBJETIVO
Unificar la metodologa necesaria, en forma y contenido, para la realizacin de las pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG, Serologa, Antgeno especifico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin, segn lo establecido en los Procedimientos Operativos Estndar de uso interno en el centro Bioclinico. 2 ALCANCE
Este documento se tomar como referencia nica para la realizacin de las pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG, Serologa, Antgeno especfico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin en el centro Bioclinico. 3 RESPONSABILIDAD
Es responsabilidad del Bacterilogo encargado controlar y verificar que el Procedimiento Operativo Estndar para las pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG, Serologa, Antgeno especfico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin, se elabore con este formato nico y de los operarios encargados de seguir al pie de la letra las instrucciones para su determinacin en el centro Bioclinico. 4 FRECUENCIA
El presente documento deber tomarse como nica referencia, cada vez que se requiera realizar las pruebas inmunolgicas: Prueba cualitativa hCG, Serologa, Antgeno especifico para Streptocccus grupo A y Hemoclasificacin en el centro Bioclinico. Si el profesional a cargo esta recin llagado a la Seccin de Bacteriologa es necesario que lea este manual antes de empezar el procesamiento de las muestras. 5 DOCUMENTOS DE REFERENCIA Diagnostico y tratamiento clinicos por el laboratorio. John Bernard Henry, M.D. Novena edicin. Ediciones Cientficas y Tcnicas, S.A. 1993.
REALIZADO POR: OCT. 20 09 JOHANNA FIERRO
REVISADO POR: NOV. 26.09 GRACIELA LOZANO
APROBADO POR: DIC. 01.09 LEONOR ARIZA
REVISIN ANUAL
La informacin contenida en el presente procedimiento es propiedad del Centro Bioclinico L.A BogotaColombia. Es SECRETA Y CONFIDENCIAL. Las personas que lo reciben son responsables por su seguridad y prevencin del uso indebido.
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Manual de Pruebas Diagnosticas. Diana Nicoll. 1996. Anlisis Clnicos: Mtodos E Interpretacin. Jhon Bauer CONTENIDO PRUEBA CUALITATIVA HCG
FUNDAMENTO La Gonadotropina Corinica Humana (hCG) es una hormona glicoproteca secretada por la placenta poco despus de la fertilizacin. Habitualmente est presente en suero y orina a partir del sptimo da despus de la concepcin y la mayora de las mujeres embarazadas tiene niveles de hCG en orina iguales o superiores a 100 mUI/mL el da de la primera falta de menstruacin. La prueba rpida hCG es un inmunoensayo cromatogrfico para la determinacin cualitativa de la Gonadotropina Corinica humana en orina o suero. La prueba utiliza dos lneas para indicar los resultados. La lnea de la prueba utiliza una combinacin de anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal hCG para detectar selectivamente niveles elevados de hCG. La lnea de control est compuesta por anticuerpos policlonales de cabra y partculas coloidales de oro. Una vez depositada la muestra en el pocillo correspondiente, un anti-hCG marcado con oro coloidal se solubiliza y se une a la hCG presente en la muestra. La mezcla fluye por capilaridad a travs de la tira. El complejo hCGanticuerpo marcado se une a un anti-hCG inmovilizado en la zona de reaccin apareciendo una banda de color. El anticuerpo marcado que no se ha unido genera una banda de color en la zona control, indicando el correcto funcionamiento del ensayo. PROCEDIMIENTO 1. Centrifugue la muestra tomada en tubo rojo por 5 minutos o solicite la muestra de orina al paciente, preferiblemente que la tome en el laboratorio.
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2. Extraiga del empaque de almacenamiento el dispositivo hCG Cassette/tira a utilizar. 3. Con ayuda del gotero deposite 3 gotas de la muestra de Suero/o orina en el orificio absorbente del Cassette; si es tira introdzcala en el suero hasta donde indique esta, hasta que evidencie que la prueba ha comenzado a correr. 4. Lea el resultado a los 5 minutos. Dependiendo de la concentracin de hCG en la muestra, los resultados positivos pueden observarse incluso antes de 40 segundos. Sin embargo, para confirmar los resultados negativos, se requiere el tiempo completo de reaccin (5 Minutos).
** Los controles se montaran cada vez que se inicie un nuevo Kit de pruebas.*** INTERPRETACION DE RESULTADOS No interprete resultados despus de los 10 minutos de reaccin Negativo: Aparece nicamente una banda de color en la regin de control (C). No hay una banda visible en la regin de prueba (T). Positivo: Aparecen dos bandas de color, una en la regin control (C) y otra en la regin de prueba (T). La intensidad del color de la banda en la regin de prueba (T) puede variar debido a que las concentraciones de hCG varan en las diferentes etapas del embarazo.
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El resultado positivo indica que se ha detectado una concentracin de hCG mayor o igual a 25 mUI/ml en la muestra.( Verificar la sensibilidad con inserto de la prueba)
SEROLOGIA FUNDAMENTO Sero-Bacter USR es un reactivo utilizado en el diagnstico serolgico de sfilis. Este reactivo tiene la misma sensibilidad y especificidad que el VDRL, pero con la ventaja sobre este ltimo que la reaccin se puede realizar sobre suero no calentado. Este reactivo es el mismo VDRL, pero suspendido en un sistema tampn que estabiliza el antgeno permitiendo de tal manera tenerlo disponible para realizar la reaccin en forma inmediata; la ventaja de poder realizar la prueba sobre suero sin calentar permite ahorrar tiempo y la posibilidad de conservar la suspensin ya preparada hace un ahorro en el consumo de reactivo. La tcnica de la reaccin sigue exactamente las mismas normas que la prueba VDRL. Los sueros humanos de pacientes sospechosos de haber sufrido una infeccin por T. pallidum, contienen anticuerpos contra componentes del microorganismo que pueden investigarse utilizando un antgeno artificial conocido como USR, dando una aglutinacin microscpica en caso positivo. La prueba se supone es positiva en caso de infeccin por T. pallidum y negativa en ausencia de ella. Sin embargo existen algunas condiciones clnicas especiales en las cuales la reaccin puede ser positiva en ausencia de infeccin por T. pallidum, lo que se conoce como reacciones biolgicas falsas positivas que el mdico debe conocer y evaluar.
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PROCEDIMIENTO PRUEBA CUALITATIVA 1. Centrifugue la muestra tomada en tubo seco por 5 minutos. 2. Agregue 10 ul de reactivo y 25ul de muestra en la lamina especifica para floculacin. 3. Rotar las lminas durante 4 minutos en agitador mecnico a 180 rpm. 4. Leer las pruebas microscpicamente con un ocular 10X y un objetivo 10X, esta prueba debe leerse idealmente de forma inmediata y nunca ms all de un tiempo limite de 1-3 minutos 5. Analizar la presencia o ausencia de aglutinacin. ** Los controles se montaran diariamente. *** INTERPRETACION DE RESULTADOS LECTURA Grumos grandes y medianos Grumos pequeos No grumoso o formacin Ligeramente grumosa INFORME Reactivo (R) Reactivo dbil (RD) No reactivo (NR)
Todo suero que presente reaccin dbil reactiva o ligeramente grumosa en la prueba cualitativa debe someterse a prueba cuantitativa antes de dar el informe. PROCEDIMIENTO PRUEBA CUANTITATIVA Realizar la prueba cuantitativa a todos aquellos sueros que en la prueba cualitativa hayan sido Reactivos, Reactivos dbiles o no Reactivos (Grumosos) hasta una dilucin en que no sean reactivos. Se deben proceder a hacer diluciones dobles progresivas de cada uno de ellos utilizando la solucin salina 0.85% para hacer las diluciones en tubo o directamente en la placa con micropipeta de 25ul, procesar estas diluciones en
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para la prueba cualitativa y leer los resultados
la forma descrita microscpicamente.
INTERPRETACION DE RESULTADOS LECTURA Grumos grandes y medianos Grumos pequeos No grumoso o formacin Ligeramente grumosa INFORME Reactivo (R) Reactivo dbil (RD) No reactivo (NR)
Si la prueba da reactiva en las diluciones posteriores debe informarse como reactiva, reportando adems el ttulo de la dilucin correspondiente, informando los resultados en trminos de la mayor dilucin que produce un resultado reactivo segn los siguientes ejemplos:
Si en todas las diluciones de los sueros se produce un resultado reactivo preparar la dilucin 1:64 del suero en solucin salina 0.85%, simplemente mezclando 0.1 ml de la dilucin 1:8 en 0.7 ml de solucin salina. Mezclar bien y realizar la prueba con esta dilucin 1:64, haciendo tres diluciones progresivas en la misma forma realizada originalmente con la dilucin 1:8, esto equivaldr a diluciones 1:64,1:128,1:256.
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ANTGENO ESPECIFICO PARA STREPTOCCCUS GRUPO A FUNDAMENTO La prueba STREPTOCOCCUS GRUPO A Tira es un inmunoensayo cualitativo de flujo lateral para la deteccin del antgeno carbohidrato Strep A en frotis de garganta. En esta prueba, el anticuerpo especifico para el antgeno carbohidrato Strep A esta recubierto sobre la regin de la lnea de prueba zona T. Durante la prueba las muestras extractadas de frotis de garganta reaccionan con un anticuerpo para Strep A que est recubierto sobre partculas. La mezcla migra hacia la membrana para reaccionar con el anticuerpo del Strep A sobre la membrana y generar una lnea coloreada en la regin de la lnea de prueba. La presencia de esta lnea coloreada en la regin de la lnea de prueba indica un resultado positivo, mientras que la ausencia indica un resultado negativo. Una banda coloreada en la zona C de Control, indica que el ensayo se ha realizado correctamente. De no aparecer esta banda, los resultados del ensayo no son vlidos. PROCEDIMIENTO OBTENCION DE LA MUESTRA: Toda muestra debe ser manipulada con la suficiente precaucin como si fuera potencialmente infecciosa.
La muestra debe obtenerse utilizando el escobilln estril. Frote la faringe posterior, amgdalas y otras reas inflamadas. Evitar
tocar la lengua, la parte interna de los pmulos y los dientes con el escobilln. Preferiblemente la muestra debe ser analizada el da de su recoleccin. EXTRACCION 1. Identifique el tubo de extraccin para cada paciente y colquelo en un soporte o gradilla. 2. Agregue 4 gotas (240l Aprox) del reactivo A (de color rojo) y 4 gotas (160l Aprox) del reactivo B (incoloro) a cada tubo de extraccin.

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3. Mezcle la solucin agitando varias veces el tubo de extraccin. La
adicin del Reactivo B al Reactivo A cambia el color de la solucin de rojo a amarillo. 4. Inmediatamente introduzca el escobilln que contiene la muestra en el tubo y agite vigorosamente el escobilln 10 veces en el tubo. 5. Deje el escobilln en el tubo por 1 minuto, entonces presione el escobilln contra el lado interno del tubo para exprimir la parte inferior mientras se va retirando el escobilln, deseche el escobilln. 6. Coloque la tapa gotero a cada tubo de extraccin
REALIZACION DE LA PRUEBA 1. Extraiga la tira reactiva del empaque e identifquela de acuerdo a los procedimientos de su laboratorio. 2. Con las flechas apuntando hacia la muestra, coloque la tira verticalmente en la solucin de muestra extractada y empiece a cronometrar. 3. Si el procedimiento se sigue correctamente la solucin de extraccin no debe pasar ms de la lnea mxima (MAX) sobre la tira cuando la franja est inmersa. Deje la tira en el tubo de extraccin 4. Espere 5 minutos e intrprete los resultados. 5. No interpretar los resultados despus de los 10 minutos. INTERPRETACION DE RESULTADOS Negativo: Aparece nicamente una banda de color en la regin de control (C). No hay una banda visible en la regin de prueba (T). El resultado negativo indica que no se ha detectado la presencia del Antgeno de Streptococcus Beta- hemoltico del grupo A en la muestra.

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Positivo: Aparecen dos bandas de color, una en la regin control (C) y otra en la regin de prueba (T). La intensidad del color de la banda en la regin de prueba (T) puede variar y en algunos casos puede ser extremadamente clara (es proporcional al nivel de Antgeno presente en la muestra). El resultado positivo indica que se ha detectado la presencia de antgeno de Streptococcus Beta-hemoltico del grupo A en la muestra Prueba Invlida: No se visualiza bandas en absoluto o aparece una banda de color en la regin de prueba (T) pero ninguna banda de color en la regin de control (C). Repita de nuevo el procedimiento utilizando una nueva prueba reactiva.
HEMOCLASIFICACION SANGUINEA DIRECTA FUNDAMENTO ANTI-A MONOCLONAL Y ANTI-B MONOCLONAL Estos reactivos son basados en la aglutinacin de las clulas rojas, que tienen un antgeno especfico, en presencia del anticuerpo especfico correspondiente. Estos reactivos de grupo sanguneo contienen anticuerpos monoclonales de ratn IgM. Estos reactivos provocan aglutinacin directa de las clulas rojas que tienen el antgeno especfico.
ANTI-D MONOCLONAL Este suero esta basado en el principio de aglutinacin de las clulas rojas que poseen un antgeno D en presencia de anticuerpo IgM Anti D.
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PROCEDIMIENTO 1. Tomar una muestra de sangre total o venosa. (muestra capilar o por venopuncin) 2. Poner tres gotas de sangre en una lamina portaobjetos.
3. Adicionar a la primera gota, reactivo anti-A 4. Adicionar a la primera gota, reactivo anti-B 5. Adicionar a la primera gota, reactivo anti-D
6. Mezclar suavemente por 1 minuto e interpretar. INTERPRETACION DE RESULTADOS
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ANTI D: AGLUTINACION: POSITIVO AUSENCIA DE AGLUTINACION: NEGATIVO 7. Anexos
No Aplica: Este procedimiento no posee anexos 8. REGISTRO DE REVISIONES
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001 002
FECHA RESPONSABLE AA MM DD 09 11 26 LEONOR ARIZA 10 12 16 DRA. JOHANNA FIERRO
Motivo del Cambio 001 Elaboracin y descripcin del procedimiento en el nuevo formato
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6. Mezclar suavemente por 1 minuto e interpretar. INTERPRETACION DE RESULTADOS

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ANTI D: AGLUTINACION: POSITIVO AUSENCIA DE AGLUTINACION: NEGATIVO 7. Anexos

No Aplica: Este procedimiento no posee anexos 8. REGISTRO DE REVISIONES

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FECHA RESPONSABLE AA MM DD 09 11 26 LEONOR ARIZA 10 12 16 DRA. JOHANNA FIERRO

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