DOSAJE DE HEMOGLOBINA.

Principio La sangre se diluye en lquido de Drabkin, el cual hemoliza los hemates y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de hemiglobina). La solucin que se produce se lee por medio de un espectrofotmetro o fotocolormetro. Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre. Materiales y reactivos. Un colormetro fotoelctrico o un espectrofotmetro. Pipetas: Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mL, con tubo de goma y boquilla. Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL. Tubos de ensayo. Reactivo de Drabkin para dilucin. Este reactivo se puede adquirir en tabletas o polvos para disolver en 1 litro de agua destilada. Si se dispone de una balanza analtica la preparacin se puede hacer en el laboratorio. Esta solucin se puede conservar durante un mes en un frasco de vidrio oscuro. Deschese si se enturbia. La disposicin celular es: Parte superior, una columna de plasma. En la interfase estn los leucocitos y plaquetas. Parte inferior est la columna de eritrocitos El lquido de Drabkin no debe enfriarse demasiado, pues puede causar una decoloracin con reduccin del ferrocianuro. Referencia para cianometahemoglobina (estandarizada): Esta solucin se puede adquirir en el comercio o en un laboratorio de referencia. En las soluciones de referencia comerciales casi siempre indica la concentracin en miligramos por 100 mL (generalmente en mg%). Se preparan diluciones con reactivo de Drabkin de tal manera que los patrones contengan concentraciones de 60 mg, 40 mg, 20 mg de CNHi. Leer los tubos en absorbancia con filtro verde a 540 nm, llevando el fotmetro a cero con el reactivo de Drabkin. Para calcular la concentracin de hemoglobina en cada tubo, realizar el siguiente clculo:1000

P = Concentracin del patrn. D = Dilucin de la muestra de sangre, que es 251 veces. Para una concentracin de patrn de: 60 mg 15 g/100 mL 40 mg 10 g/100 mL 20 mg 5 g/100 mL Luego graficar una curva patrn colocando en el eje de las ordenadas las lecturas en absorbancia y en la abscisa la concentracin de hemoglobina en g/100 mL.

ALTERACIONES ERITROCITARIAS Aqu se encuentran incluidas las clulas progenitoras de la serie roja que normalmente se encuentra en la mdula sea, pero cuando stas pasan a sangre perifrica antes de su maduracin en normocitos o hemates pueden indicar alguna patologa como leucemias, anemias u otras alteraciones celulares. PRONORMOBLASTO (Fig. 1a) Es una clula primitiva (inmadura) de aproximadamente 25m a 35m de dimetro, citoplasma basfilo, presencia de 1 a 2 nucleolos, existe una condensacin ligera de la cromatina, citoplasma ligeramente excntrico. Esta clula se divide en NORMOBLASTO BASFILO Es ligeramente menor que el pronormoblasto, 12m a 18m, citoplasma igualmente basfilo, pero, se diferencia del anterior en que ya no presenta nucleolos y su cromatina nuclear es ms condensada ya que es un elemento menos inmaduro. El siguiente paso en la maduracin es: NORMOBLASTO POLICROMATFILO Es una clula que mide de 12m a 16m, aunque usualmente puede ser mayor que el normoblasto basfilo, presenta ncleo excntrico y lo que ms caracteriza a esta clula es que ya presenta pequeas cantidades de hemoglobina citoplasmtica que se traduce en un color violeta (azul y rojo). Su cromatina es ms condensada que la anterior. NORMOBLASTO ORTOCROMTICO Mide de 10m a 14m, esta clula es bien caracterstica y no debe confundirse con el linfocito ya que prcticamente es un hemate nucleado, como tambin se le conoce. Presenta su citoplasma rosado, ncleo totalmente excntrico como

RETICULOCITOS Estos todava presentan en su citoplasma restos de ARN y protoporfirina resultados de la conversin del normoblasto ortocromtico a reticulocito y solo se pueden observar con coloraciones especiales. En sangre perifrica se les puede observar como elementos macrocticos y policromatfilos.

NORMOCITOS O HEMATES Discos cuya biconcavidad hace que aparezcan con cierta palidez central al no captar el colorante en esa zona. Miden aproximadamente de 7,2m a 7,4m y puede llegar hasta ocho. Presenta un pigmento respiratorio que le da el color rosado caracterstico que es la hemoglobina que se encarga del transporte de oxgeno

Llas alteraciones ms frecuentes de estos elementos celulares. Se dividen en: Alteraciones en tamao. Alteraciones en su forma. Alteraciones de color. Inclusiones anormales. Alteraciones en el tamao ALTERACIONES EN TAMAO Llamadas tambin anisocitosis. Pueden ser de dos tipos: Macrocitos .- Hemates que presentan un tamao superior al normal (ms de 9m) y su expresin mxima es el megalocito. Suelen aparecer en la anemia megaloblstica debida a dficit de vitamina B12 o cido flico.Se suele observar cuando hay un aumento de la actividad eritropoytica, como un mecanismo de compensacin a la prdida de los hemates, sea por anemia severa o hemorragias. En la sangre perifrica se pueden observar como hemates grandes policromatfilos o reticulocitos.

Microcitos .-Hemates que presentan un tamao inferior al normal (menos de 6m) y se encuentran en pacientes con anemia ferropnica y talasemias.

ALTERACIONES EN LA FORMA Llamadas tambin poiquilocitosis. Entre stos tenemos:una bola maciza. Este normoblasto ya no se divide, sino que pierde su ncleo por un mecanismo de expulsin y se convierten en: Esferocitos : Son hemates esfricos como unas pelotas, no son bicncavos, presentan un dimetro inferior al normal pero ms grueso. Su vida media es de 14 das, producen taponamiento de los vasos sanguneos. Se encuentran en la enfermedad esferocitosis hereditaria o enfermedad de Mihkowski-Chauffard (defecto congnito de la membranaeritrocitaria). Tambin pueden ser adquiridos por factores extraeritrocitarios.

Codocitos : Llamados tambin dianocitos. En la regin central presentan un rea con mayor contenido hemoglobnico (zona densa). La interfase entre la membrana celular y el centro es transparente. Se encuentran en hemoglobinopatas, talacemias, anemia ferropnica y en algunas hepatopatas crnicas con aumento de colesterol y fosfolpidos.

Drepanocitos : Son hemates cuya membrana hemtica se altera y se hace falciforme (forma de hoz o media luna). Su apariencia es propia del estado homocigoto de la hemoglobina S. Su enfermedad se conoce como drepanocitosis hereditaria.

Eliptocito : Los hemates son alargados (ovalocitos). Se encuentran en la enfermedad llamada ovalocitosis hereditaria. Su presencia se debe a una alteracin congnita de la membrana del hemate, aunque puede ser adquirida en caso de una anemia megaloblstica, ferropnica o arregenerativa.

Crenocitos : Son aquellos que presentan membrana ondulante e irregular. Se encuentran en algunas anemias hemolticas. Este fenmeno puede ser inducido in vitro exponiendo los hemates a una solucin hipertnica.

Cuando la caracterstica es muy notable puede emplearse el trmino equinocito.

Equinocitos : Tambin llamados acantocitos. Las prominencias de la membrana eritrocitaria son ms aguzadas (alargadas) y distribuidas irregularmente. Se encuentran en la acantocitosis que se caracterizan por la ausencia de lipoprotenas plasmticas.

Dacriocitos : Son hemates en forma de lgrima. Se encuentran en la anemia ferropnica, anemia megaloblstica y talasemia.

Esquistocitos : Son fragmentos hemticos. Se encuentran en anemias hemolticas, microangiopatas, quemaduras y con ms evidencias en individuos esplenectomizados.

Estomatocitos : Son hemates que en lugar de una deplecin central clara tienen una banda plida central que les da un aspecto de boca. Se hereda como carcter autosmico dominante. Esta enfermedad es causada por anormalidad hereditaria de la membrana eritrocitaria.

Selenocitos : Son eritrocitos alterados que adoptan forma semilunar. Es un artificio de tcnica que aparece especialmente en frotices sanguneos de pacientes anmicos.

Excentrocitos: Son hemates con distribucin irregular de la hemoglobina. Su tamao es inferior al normal y se caracteriza por poseer contornos parcialmente arrugados, pero adems se observa una distribucin irregular de la hemoglobina que aparece desplegada de la parte interna hacia uno de los extremos.

Qnizocito: Son hemates que presentan un estoma o boca en la regin central completamente coloreada y lo dems incoloro. Morfolgicamente es todo lo contrario a las caractersticas del estomatocito. Se encuentran en algunas anemias como las ferropnicas. ALTERACIONES DE COLOR Aqu observamos las diferentes tonalidades de color de los hemates dependiendo del contenido hemoglobnico. Tenemos: Hipocroma : Son hemates con disminucin del contenido de la hemoglobina y dependiendo de la cantidad de este pigmento es que observamos a los hemates con diferentes caracteres de color. Aqu estn incluidos los anulocitos, que son hemates en forma de anillo en que solo la membrana eritrocitaria est coloreada y que se traduce en una hipocroma de grado severo (+++).

Hipercroma : Son hemates vidos de hemoglobina. Pueden encontrarse en caso de enfermedades como la policitemia vera o la policitemia fisiolgica y esferocitosis hereditaria.

Policromatofilia Presencia de hemates con tonalidad (azul y rojo) morada. Se le relaciona con inmadurez celular, clulas nucleadas, presencia de reticulocitos, macrocitos, etc. Esto debido a su elevada cantidad de ARN.

Anisocroma: Diferentes tonalidades de color como hemates hipocrmicos, hipercrmicos, normocrmicos y policromatfilos. Se encuentran en ciertas anemias refractarias.

INCLUSIONES ANORMALES Punteado basfilo : Son grnulos basfilos presentes en el citoplasma de los hemates. Puede tratarse de un reticulocito por su elevado contenido de ARN. Se encuentra en una intoxicacin por plomo llamada saturnismo.

Cuerpos de Heinz : Son formaciones redondeadas de hasta 3m de dimetro localizadas habitualmente en la periferia de la clula. Se observan con colorantes para reticulocitos. Estos cuerpos son abundantes en sujetos esplenectomizados.

Anillos de Cabot : Se cree que sean restos de membrana nuclear eritroblstica o restos despus de una mitosis anormal. Se observan en forma de anillo u ocho invertido. Pueden ser precipitados de ARN o protena carente de importancia diagnstica.

Cuerpos de Howel-Jolly : Son restos de cromatina nuclear, resultados de la prdida del ncleo por parte del normoblasto ortocromtico hasta la conversin del hemate. Se les considera signos de regeneracin celular.Se observan en pacientes esplenectomizados. Siderocitos (Fig. 23): Son hemates con contenido de hierro libre no hemoglobnico de color verde azulado.

Grnulos de Shuffner: Son grnulos que presentan algunos hemates en caso de parasitismo por plasmodium vivax. Grnulos de Maurer: Son grnulos de color violeta oscuro que se encuentran en pacientes con parasitismo por plasmodium falciparum. Granulacion azurfila: Son pequeas granulaciones eritrocitarias color violeta prpura y corresponden a restos de normoblastos ortocromticos producto de la cariorrexis y del paso de un elemento inmaduro a otro maduro. Se observa tanto en sndromes diseritropoyticos congnitos o adquiridos.