Graduao em Biotecnologia Disciplina de Protemica

Caroline Rizzi Doutoranda em Biotecnologia -UFPel

Propriedades dos Aminocidos

Slidos Cristalizveis Incolores Hidrossolveis PF (200 C)

cidos e Bases fortes e fracos

A fora das espcies varia conforme o grau de dissociao de H+ em soluo aquosa

cidos e Bases Fortes

HA H+ + A-

H+ + A- HA

cidos e Bases Fracos

HA H + + A-

cido
H+ + AHA

Par cido fraco/base conjugada

Base

Par base fraca/cido conjugado

Propriedades dos Aminocidos

pH neutro: ons dipolares Ionizao:
grupos carboxlicos: em pH ~2,2 (pK1) grupos amnicos em pH ~9,4 (pK2)

Podem agir como um cido ou uma base: Anfteros

COO H3N - C - H
R

cido

base

Carter Anftero dos AAS

Esta propriedade mostra que a dissociao dos grupos amino e carboxlico varia dependendo da variao do pH do meio.
HA
v1 v2

pK1

50% COOH 50% COO-

H + + A-

pK: valor de pH onde a metade dos cidos ou bases esto dissociados e a metade est associada

pK2

50% NH3 50% NH2

pK
DIFERENA DE AFINIDADE PELO H+medida da tendncia de ceder prtons

Diferena de 7 unidades logartmicas entre os pKs dos grupos -amino e -carboxila

A afinidade por prtons do -NH (pk ~9) 107 vezes maior que a do -COOH (pK ~2).

forma bsica

forma cida

forma neutra

NH3+ s se dissocia se o COOH j estiver completamente dissociado em COO-.

Curva de Titulao
Titulao: adio ou remoo gradual de H+
Com base: parte-se do pH cido at chegar ao alcalino Com cido: parte-se do pH alcalino at chegar ao cido

Representao grfica do comportamento anftero dos aas Evidenciam a ao dos aas como tampo

Dissociao dos Aminocidos

Um aminocido em soluo aquosa

pH=1

H+

COOH H- C - NH3 2 R H+ H+

H+

H+

Dissociao dos Aminocidos

Um aminocido em soluo aquosa

pH=2
OH-

pH=9

COO H gua H OHH- C - NH3 2 R H OHOH-

Dissociao dos Aminocidos

De forma geral, ao fazer a titulao de um aa com uma base, iniciando-se em pH=1 observa-se que o pH da soluo aumenta at aproximadamente pH=2 quando o grupamento COOH comea a liberar ons H+ para o meio, formando gua.

COOH H- C - NH3+ + OHpK1 R

H2O

COOH- C - NH3+ R
on dipolar

Dissociao dos Aminocidos

Continuando a adio de base o pH ir progressivamente se elevando at que o grupo NH3+ tenha condies de liberar seu on H+, o que ocorre prximo ao pH 9 .

H 2O COOCOOH-C-NH3+ + OHH-C-NH2 R R pK2

on dipolar

Carga

+1

-1

on dipolar

Ambos grupos desprotonados

Ambos grupos protonados

A carga da molcula varia na dependncia do pH do meio e do pK de cada grupo

Tampes
Soluo que resiste a mudanas de pH quando se adicionam pequenas quantidades de cido ou base.

Compostos devem ter grupos ionizveis capazes de doar e de receber prtons H+

Pode ser produzido pela mistura de um cido fraco (HA) e de sua base conjugada (A-).

Como funcionam os tampes?

Tampes
Equao de Hendersen-Hasselbalch

log pH = pK a pH = pKa + log

ApH = pKa + log HA

[A [X -]] [HX] [HA]

Aceptor de H+ (sal) Doador de H+ (cido)

A [H+] , e em decorrncia, o pH, so determinados por dois fatores: o valor de pKa e a razo das concentrao do par [A-] / [HA].
Tampes resistem mais eficazmente variao de pH em qualquer sentido quando as concentraes de [A-] / [HA] so aproximadamente as mesmas.

pK

Tampes
quando o pH do meio igual ao pK do grupo ionizvel, este est 50% dissociado

o poder tamponante mximo no pK pois h igual proporo das formas doadora e aceptora de prtons:

A - + H+
50%

HA
50%

Tampes sanguneos: bicarbonato e CO2

pH = 6,1 + log10 [HCO3-] CO2]

Para que o tampo tenha pH de 7,4, a razo [base] / [cido] deve ser igual a um valor de 20.

Qual a relao dos tampes com os aminocidos???

Curva de titulao da alanina

Aminocido monoaminonomocarboxlico
Titulao: remoo gradual de prtons

Dois estgios distintos: desprotonao do COOH e- NH3

pI: remoo do primeiro prton j cessou e h ento o incio da remoo do segundo prton Fim da titulao: forma predominante sem nenhum prton Duas regies de ao tamponante

pI: pH onde 100% das molculas possuem carga total neutra no h capacidade tamponante
Isoeltricas/isoinicas

Ponto isoeltrico
O clculo do pI baseia-se nas formas de dissociao do aminocido utilizando os pKs anterior e posterior forma isoeltrica do aminocido.

Clculo do Ponto Isoeltrico

Para a glicina os valores de pK so: pK pK pH 0 - 2
HO O Clculo do ponto isoeltrico pI = 2.34 + 9.6 = 5.97 2

NH3+

= 9.60

COOH = 2.34 pH 2,34

HO O

pH 3.0 - pH 9.0
O

pH 9.6
O

pH 10 - 14

C HC-H NH3+
-H+ +H+

50% + -H +1 CH2 NH3+

O

C
O O -H+

50%
-H+ +H+

+H+

C CH2 NH3
+

+H+

CH2 NH3+

C CH2

-1

+1

NH2

50%

Em pH < 2,34, todosCH2 os Aumentando o pH, Em pH 5,97 No pH 2,34, metade das grupos ionizveis da glicina desprotonar. ocorre o ponto NH NH3+ esto protonados. A molcula isoletrico da glicina. 100% das 2 COOH desprotonaram, gerando a molculas esto com carga zero. apresenta carga +1. glicina com carga zero.

50% Aumentando mais o Em pH > 10 CH2 -1 -COOH comea a pH, at o valor 9,6,

predomina +), forma (pK do NH3 a haver de glicina com 50% de molculas de carga carga -1. glicina com -1.

Observe os valores de pKs da tabela abaixo.

-Amino cido
Alanina Arginina Asparagina cido Asprtico Cisteina cido Glutmico Glutamina Glicina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Prolina Serina Treonina Triptofano Tirosina Valina pK1 -COOH 2.35 1.82 2.1 1.99 1.92 2.10 2.17 2.35 1.80 2.32 2.33 2.16 2.13 2.16 2.95 2.19 2.09 2.43 2.20 2.29 pK2 -NH3+ 9.87 8.99 8.84 9.90 10.78 9.47 9.13 9.78 9.33 9.76 9.74 9.18 9.28 9.18 10.65 9.21 9.10 9.44 9.11 9.74 pKR Cadeia Lateral (R) 12.48 (guanidino) 3.90 ( -COOH) 8.33 (sulfidrila) 4.07 ( - COOH)

6.04 (imidazol)

10.79 ( -NH3+)

10.13 (fenol)

Alguns aminocidos apresentam grupos ionizveis em suas cadeias laterais

Valores pK dos grupos ionizveis dos -aminocidos a 250 C

PKR
Quando o aminocido apresenta mais de um grupo ionizvel no radical, este aminocido possui mais um pK, o pKR

Aminocido diamino monocarboxlico

HO

C
H C - NH3
+

Como exemplo, veremos a pK -COOH = 2.18 ionizao da Lisina:

pK = 8.95 pK R-

(CH2)4
NH3+ pH 2 .18 pH < 2
HO O pK O -COOH O

pI = 8.85 + 10.53 = 9.69 2 (ponto isoeltrico)

pH 8.95 pH 3 - 8
O O pK O -NH3+ O

pH 10.53 pH 9.69
O O pK R- NH3+ O O

pH > 11
O O

C -NH3+ NH3
(+2)
todos os grupos protonados predomnio carga +2
+

C -NH3+
H+

C -NH3+
H+ H+

C -NH2
H+

C -NH2
H+

C
-NH2
H+

C -NH2 NH2
(-1)

NH3

NH3+
(+1)
predomnio carga +1

NH3+
50% (zero) 50% (+1)

NH3+
100% (zero)
ponto isoeltrico

NH2
50% (-1) 50% (zero)

50% (+1) 50% (+2)

todos os grupos desprotonados predomnio carga -1

Aminocido diamino monocarboxlico

Aminocido monoamino dicarboxlico

pK1 pI

pKR

pK2 pI = pK1 + pKR / 2

pK1: 2,19 pK2: 9,67 pKR: 4,25

pI = 2,19 + 4,25/ 2 pI= 3,22

Aminocidos essenciais
Lisina Treonina Triptofano Fenilalanina Leucina Valina Metionina Histidina

Figura 1: Via do Chiquimato Precursora de aminocidos aromticos

L-glutamato

Superproduo de Lglutamato por Corynebacterium glutamicum Oxidao incompleta devido ausncia de biotina (cofator da enzima cetoglutarato desidrogenase)

Produo de mutantes

Produo de mutantes ou mutantes regulatrios que superproduzem aminocidos; Alterao da ao do repressor ou atividade regulatria de enzimas alostricas, permitindo a superproduo destes aas;

L-Ornitina
Intermedirio do ciclo da Uria Superproduo por mutantes que no produzem L-citrulina a partir de L-ornitina Mutantes defectivos na ornitina transcarbamilase L-ornitina: produo de medicamentos hiperamoninemia ou nutrio parenteral

L- Prolina
Serratia marcescens: mutante que superproduz prolina a partir de glutamato Enzima alostrica (glutamato quinase) no suscetvel a inibio por feedback pela prolina

(1) Glutamato quinase, (2) semialdedo desidrogenase glutmica (3) 1- pirolina 5-carboxylato reductase

Utilizando-se enzimas
Sntese enzimtica em escala comercial Descarboxilao do L-Aspartato Descarboxilase de Pseudomonas dacunhae