CENTRO FEDERAL DE EDUCAO TECNOLGICA DE QUMICA UNIDADE RIO DE JANEIRO COORDENAO DE BIOTECNOLOGIA BIOQUMICA (Laboratrio 318) DOSAGEM DE PROTENAS

PELO MTODO DO BIURETO Material por grupo:

7 Tubos de Ensaio 3 Pipetas de 2 mL 1 Pipeta de 5 mL

1 Pr-pipete 1 Becker 50mL 6 Cubetas

Solues: Soluo Padro de Casena (5mg/mL) em PBS pH 7,4. Amostra de casena de concentrao desconhecida [?] em PBS pH 7,4. Reagente do Biureto CuSO4. 5 H2O 0,15% p/v Tartarato duplo de sdio e potssio 0,60% p/v KI 1,00% p/v em NaOH 1,00 mol/L PBS pH 7,4 (Tampo fosfato com salina em pH 7,4) KCl 2,680 mmol/L KH2PO4 1,470 mmol/L NaCl 0,137 mmol/L Na2HPO4. 7 H2O 8,060 mmol/L Equipamento: Espectrofotmetro Mtodo: 1. Pegue uma alquota de aproximadamente 7 mL da soluo padro de casena em um tubo de ensaio e leve para pipetar na bancada. 2. Pegue uma alquota de aproximadamente 10 mL da soluo de PBS em um becker e leve para pipetar na bancada. 3. Transfira, com auxlio de pipeta e pr-pipete, alquotas das solues de protena para tubos de ensaio devidamente rotulados segundo a tabela abaixo:
Tubo no B 1 2 3 4 5 PBS (mL) 2,0 1,5 1,0 0,5 Soluo Padro de Casena (mL) 0,5 1,0 1,5 2,0 Soluo [?] de Casena (mL) 2,0 Biureto (mL) 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 Abs (540nm)

4. Homogeneizar os tubos e incub-los a temperatura ambiente por 15 minutos.

5. Transferir o contedo de cada tubo para uma cubeta, enchendo-a acima da metade. 6. Ler as absorbncias, contra o tubo branco, no comprimento de onda de 540nm, no espectrofotmetro e anotar os valores. Relatrio: Deve ser feito seguindo-se o roteiro de confeco de relatrios vigente. O grfico da Curva Padro de Casena deve ser feito em papel milimetrado e a equao da reta calculada, permitindo assim o clculo da concentrao da soluo desconhecida de casena. No esquea de discutir a importncia do tubo branco e em que se baseia o mtodo do biureto.