Sei sulla pagina 1di 17

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

UNIDAD NO. 1 INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA 1.1. Concepto y contenido de la Microbiologa

1.1.1. Concepto de Microbiologa y sus implicaciones


El vocablo Microbiologa deriva de las palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia), por lo que se puede definir, sobre la base de su etimologa, como la ciencia que trata de los seres vivos muy pequeos, concretamente de aquellos cuyo tamao se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por la metodologa apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos. Precisamente, el origen tardo de la Microbiologa con relacin a otras ciencias biolgicas, y el reconocimiento de las mltiples actividades desplegadas por los microorganismos, hay que atribuirlos a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos y tcnicas pertinentes. Con la invencin del microscopio en el siglo XVII comienza el lento despegue de una nueva rama del conocimiento, inexistente hasta entonces. Durante los siguientes 150 aos su progreso se limit casi a una mera descripcin de tipos morfolgicos microbianos, y a los primeros intentos taxonmicos, que buscaron su encuadramiento en el marco de los sistemas naturales de los Reinos Animal y Vegetal. El asentamiento de la Microbiologa como ciencia est estrechamente ligado a una serie de controversias seculares (con sus numerosas filtraciones de la filosofa e incluso de la religin de la poca), que se prolongaron hasta finales del siglo XIX. La resolucin de estas polmicas dependi del desarrollo de una serie de estrategias experimentales fiables (esterilizacin, cultivos puros, perfeccionamiento de las tcnicas microscpicas, entre otras), que a su vez dieron nacimiento a un cuerpo coherente de conocimientos que constituy el ncleo aglutinador de la ciencia microbiolgica. El reconocimiento del origen microbiano de las fermentaciones, el definitivo abandono de la idea de la generacin espontnea, y el triunfo de la teora germinal de la enfermedad (cualquier enfermedad infecciosa est causad por grmenes) propuesta por Pasteur y Koch, representan la edad de oro de la Bacteriologa y las conquistas definitivas que proporcionan la naturaleza de la Microbiologa en los albores del siglo XX. Tras la Edad de Oro de la Bacteriologa, inaugurada por las grandes figuras de Pasteur y Koch, la Microbiologa qued durante cierto tiempo como una disciplina descriptiva y aplicada, estrechamente imbricada con la Medicina, y con un desarrollo paralelo al de la Qumica, que le aportara varios avances metodolgicos fundamentales. Sin embargo, una corriente, en principio minoritaria, dedicada a los estudios bsicos centrados con ciertas bacterias del suelo poseedoras de capacidades metablicas especiales, incluyendo el descubrimiento de las que afectan a la nutricin de las plantas, logr hacer ver la ubicuidad ecolgica y la extrema diversidad fisiolgica de los microorganismos. De esta forma, se estableca una cabeza de puente entre la Microbiologa y otras ciencias biolgicas, que lleg a su momento decisivo cuando se comprob la unidad qumica de todo el mundo vivo, y se demostr, con material y tcnicas microbiolgicas que la molcula de la herencia era el ADN. Con ello se asiste a un ntimo y frtil intercambio entre la Microbiologa, la Gentica y la Bioqumica, que se plasma en el nacimiento de la Biologa Molecular, base del espectacular auge de la Biologa desde mediados del siglo XX. Por otro lado, el programa inicial de la Microbiologa (bsqueda de agentes infectivos, desentraamiento y aprovechamiento de los mecanismos de defensa del hospedador) condujeron a la creacin de ciencias subsidiarias (Virologa, Inmunologa) que finalmente adquirieron su mayora de edad y una acentuada autonoma. Por ltimo, la vertiente aplicada que estuvo en la base de la creacin de la Microbiologa, mantuvo su vigencia, enriquecida por continuos aportes de la investigacin bsica, y hoy muestra una no menos prometedora perspectiva de expansin a mltiples campos de la actividad humana, desde el control de enfermedades infecciosas (higiene, vacunacin, quimioterapia, antibioterapia) hasta el aprovechamiento econmico racional de los mltiples procesos en los que se hallan implicados los microorganismos (biotecnologas).

1 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

1.1.2. Objeto de estudio de la Microbiologa


1.1.2.1. Los microorganismos como objeto material de la Microbiologa La Microbiologa se define como la ciencia que estudia los microorganismos, esto es, aquellos organismos demasiado pequeos cuya visualizacin requiere el empleo del microscopio. Tal definicin implica que el objeto material de la Microbiologa viene delimitado por el tamao de los seres vivos que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta organismos celulares tan diferentes como las bacterias, los protozoos y parte de las algas y de los hongos. Los microorganismos son seres vivos de tamao microscpico dotados de individualidad, con una organizacin biolgica sencilla, acelular o celular, y en este ltimo, pudiendo presentarse como unicelulares, cenocticos, coloniales o pluricelulares, pero sin diferenciacin en tejidos u rganos, y que necesitan para su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. Bajo esta denominacin se engloban tanto microorganismos celulares como las entidades subcelulares. Los microorganismos celulares comprenden todos los procariotas incluidos en el Dominio Archea y Dominio Bacteria, as como los microorganismos eucariticos incluidos en el Dominio Eukarya, dentro de diferentes reinos: hongos filamentosos o verdaderos; levaduras, algas y protozoos. Los virus y partculas subvirsicas son otro tipo de objetos de estudio de la Microbiologa, aunque son entidades no celulares que no poseen ciertos rasgos atribuibles a lo que se entiende por vida, cuentan con individualidad y entidad biolgica, y caen de lleno en el dominio de esta ciencia. Los virus son entidades no celulares de muy pequeo tamao (normalmente inferior al del ms pequeo procariota), por lo que debe de recurrirse al microscopio electrnico para su visualizacin. Son agentes infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que necesitan su incorporacin al protoplasma vivo para que su material gentico sea replicado por medio de su asociacin ms o menos completa con las actividades celulares normales, y que pueden transmitirse de una clula a otra. Cada tipo de virus consta de una sola clase de cido nucleico (DNA o RNA, nunca ambos), con capacidad para codificar varias protenas, algunas de las cuales pueden tener funciones enzimticas, mientras que otras son estructurales, disponindose stas en cada partcula virsica (virin) alrededor del material gentico formando una estructura regular (cpsida); en algunos virus existe, adems, una envuelta externa de tipo membranoso, derivada en parte de la clula en la que se desarroll el virin (bicapa lipdica procedente de membranas celulares) y en parte de origen virsico (protenas) En su estado extracelular o durmiente, son totalmente inertes, al carecer de la maquinaria de biosntesis de protenas, de replicacin de su cido nucleico y de obtencin de energa. Esto les obliga a un modo de vida (sic) parasitario intracelular estricto o fase vegetativa, durante la que el virin pierde su integridad, y normalmente queda reducido a su material gentico, que al superponer su informacin a la de la clula hospedadora, logra ser expresado y replicado, producindose eventualmente la formacin de nuevos viriones que pueden reiniciar el ciclo. Los viroides son un grupo de nuevas entidades infectivas, subvirsicas, descubiertas en 1967 por T.O. Diener en plantas. Estn constituidos exclusivamente por una pequea molcula circular de ARN de una sola hebra, que adopta una peculiar estructura secundaria alargada debido a un extenso, pero no total, emparejamiento intracatenario de bases por zonas de homologa interna. Carecen de capacidad codificadora y muestran cierta semejanza con los intrones autocatalticos de clase I, por lo que podran representar secuencias intercaladas que escaparon de sus genes en el transcurso evolutivo. Se desconocen detalles de su modo de multiplicacin, aunque algunos se localizan en el nucleoplasma, existiendo pruebas de la implicacin de la RNA polimerasa II en su replicacin, por un modelo de crculo rodante que genera concatmeros lineares. Esta replicacin parece requerir secuencias conservadas hacia la porcin central del viroide. Los viroides aislados de plantas originan una gran variedad de malformaciones patolgicas. El mecanismo de patogenia no est aclarado, pero se sabe que muchos de ellos se asocian con el nucleolo, donde quiz podran interferir; sin embargo, no existen indicios de que alteren la expresin 2 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

gnica (una de las hiptesis sugeridas); cada molcula de viroide contiene uno o dos dominios conservados que modulan la virulencia. Los RNAs satlites son pequeas molculas de tamao similar al de los viroides de plantas (330-400 bases), que son empaquetados en cpsidas de determinadas cepas de virus (con cuyos genomios no muestran homologas). Se replican slo en presencia del virus colaborador especfico, modificando (aumentando o disminuyendo) los efectos patgenos de ste. Los virusoides constituyen un grupo de RNA satlites no infectivos, presentes en el interior de la cpsida de ciertos virus, con semejanzas estructurales con los viroides, replicndose exclusivamente junto a su virus colaborador. Los priones son entidades infectivas de un tipo totalmente nuevo y original, descubiertas por Stanley Prusiner en 1981, responsables de ciertas enfermedades degenerativas del sistema nervioso central de mamferos (por ejemplo, el "scrapie" o prurito de ovejas y cabras, la encefalitis espongiforme bovina), incluyendo los humanos (kuru, sndrome de Gerstmann-Strassler, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob). Se definen como pequeas partculas proteicas infectivas que resisten la inactivacin por agentes que modifican cidos nucleicos, y que contienen como componente mayoritario (si no nico) una isoforma anmala de una proteina celular. Tanto la versin celular normal C Sc (PrP ) como la patgena (PrP en el caso del "scrapie") son glicoprotenas codificadas por el mismo gen cromosmico, teniendo la misma secuencia primaria. Se desconoce si las caractersticas distintivas de ambas isoformas estriban en diferencias entre los respectivos oligosacridos que adquieren por procesamiento post-traduccional. A diferencia de los virus, los priones no contienen cido nucleico y estn codificados por un gen celular. Aunque se multiplican, los priones de nueva sntesis poseen molculas de PrP que reflejan el gen del hospedador y no necesariamente la secuencia de la molcula del PrP que caus la infeccin previa. Se desconoce su mecanismo de multiplicacin, y para discernir entre las diversas hiptesis propuestas quiz haya que dilucidar la funcin del producto normal y su posible conversin a la isoforma patgena infectiva. Recientemente se ha comprobado que, al menos algunas de la enfermedades por priones son simultneamente infectivas y genticas, una situacin inslita en la Patologa humana, habindose demostrado una relacin entre un alelo dominante del PrP y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. El gen del prin (Prn-p) est ligado genticamente a un gen autosmico (Prn-i) que condiciona en parte los largos tiempos de incubacin hasta el desarrollo del sndrome. 1.1.2.2. Los enfoques de estudio como objeto formal de la Microbiologa El objeto formal de la Microbiologa viene determinado por todos aquellos aspectos (caractersticas estructurales, fisiolgicas, bioqumicas, genticas, taxonmicas, ecolgicas, entre otras) y enfoques desde los que se puede estudiar a los microorganismos y que conforman el cuerpo bsico de conocimientos de esta ciencia. Por otro lado, la Microbiologa tambin se ocupa de las distintas actividades microbianas en relacin con los intereses humanos, tanto las que pueden acarrear consecuencias perjudiciales (y en este caso estudia los nichos ecolgicos de los correspondientes agentes, sus modos de transmisin, los diversos aspectos de la microbiota patgena en sus interacciones con el hospedador, los mecanismos de defensa de ste, as como los mtodos desarrollados para combatirlos y controlarlos), como de las que reportan beneficios (ocupndose del estudio de los procesos microbianos que suponen la obtencin de materias primas o elaboradas, y de su modificacin y mejora racional con vistas a su imbricacin en los flujos productivos de las sociedades). Finalmente, la Microbiologa ha de ocuparse de todas las tcnicas y metodologas destinadas al estudio experimental, manejo y control de los microorganismos, es decir, de todos los aspectos relacionados con el modo de trabajo de una ciencia emprica.

3 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

1.1.3. Ubicacin de los microorganismos en los sistemas de clasificacin


En la dcada de los 80, surgi una nueva visin sobre la clasificacin de los seres vivos y sus posibles relaciones evolutivas, provocando una verdadera revolucin en la Biologa moderna. Para entender esta revolucin debemos primero conocer cul era el conocimiento que haba entrado en crisis. El llamado paradigma clsico consideraba que la clasificacin natural de los seres vivos comprenda slo dos grandes clases de organismos (Figura 1): Procariontes (clulas sin ncleo) y Eucariontes (clulas con ncleo); estas dos grandes clases se diferenciaban profundamente a nivel de su estructura y organizacin subcelular, por lo que se les consider siempre como grupos excluyentes. Adems, estas clases de organismos eran agrupadas en 5 reinos (Whittaker, 1969), conformando los procariontes por si solos, el llamado reino Monera o Prokaryota (considerado primitivo o ancestral). Los 4 reinos eucariontes restantes Protozoa, Hongo, Plantae y Animalia seran reinos derivados del reino Monera (ms evolucionados)

Figura 1. Esquema de los 5 reinos clsicos de Wittaker y sus relaciones evolutivas: reino Metazoa (Animalia), reino Metafita (Plantae), reino Fungi (Hongo), reino Protista (Protozoo) y reino Procariota (Monera)

En el ao 1978 se descubre que las arquibacterias, hasta ese momento incluidas dentro del Reino Mnera, eran un nuevo tipo de seres vivos, tan distantes evolutivamente de las bacterias como de los eucariontes. En el ao 1990 Woese incorpora estos descubrimientos a un nuevo esquema sobre la evolucin y clasificacin de los seres vivos, planteando que la evolucin habra ocurrido en tres lneas o linajes filogenticos principales, y no en dos (procariontes y eucariontes), como postulaba el paradigma clsico. Esta nueva visin se caracteriza por considerar a las arquibacterias, actualmente denominadas archeas, como una tercera forma de vida, muy diferentes a los eucariontes y procariontes clsicos, el cambio propuesto por Woese resalta las diferencias, hasta ahora ocultas, entre organismos procariotas. Todos estos cambios y nuevas propuestas han sido posibles gracias al estudio y comparacin de secuencias de macromolculas conservadas en todos los seres vivos (denominadas relojes moleculares), tales como el RNA ribosomal (especialmente el RNAr 16S) y algunas protenas conservadas (como los factores traduccionales EF-G y EF-Tu). Tras una gran labor experimental, Woese se centr en un conjunto de informacin gentica en particular descubierto en el llamado 'RNA mitocondrial 16s'. Esta secuencia de cdigo gentico aparece en el genoma de todos los seres vivos. Es una secuencia perfectamente conservada, lo cual significa que ha evolucionado muy lentamente, por lo que puede ser utilizada para rastrear los cambios evolutivos sucedidos a lo largo de perodos de tiempo muy largos. El giro paradigmtico ocurrido en las dos ltimas dcadas, se ve plasmado en el nuevo rbol filogentico propuesto por Woese para la evolucin de los seres vivos. Esta nueva clasificacin se basa en una visin tricotmica (tres linajes principales) e incorpora un nuevo nivel o rango taxonmico denominado Dominio (superior a Reino). Estos tres nuevos linajes evolutivos reciben las siguientes denominaciones: dominio Bacteria, dominio Archaea y dominio Eukaya (Figura 2). 4 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

En el rbol filogentico de la vida, la distancia entre dos especies cualesquiera, trazada a lo largo de las lneas que las conectan, es proporcional a las diferencias entre su RNA mitocondrial. Las especies con secuencias prcticamente idnticas estn presumiblemente relacionadas y son representadas en el rbol, unas cerca de las otras; aquellas que estn ampliamente separadas, son parientes ms lejanos, y cuando se combina cierta cantidad de datos es posible inferir linajes. Cuando se emplea este mtodo con nuestras familiares plantas y animales, estos trazos en el rbol de la vida son muy similares a los de los rboles evolutivos deducidos de la anatoma estructural, pero la gran sorpresa lleg cuando se aplic esta tcnica al mundo microbiolgico. Dentro del Dominio Bacteria existen varios linajes bacterianos diferentes, cada uno de ellos estrictamente debera corresponder a un reino diferente, sin embargo por razones de ndole histrica, se les denomina Divisiones o Phyla. Hoy en da se describen 80 Divisiones o Phyla en el Dominio Bacteria, siendo la gran mayora de estas bacterias fotolitotrficas, quimiolitotrficas, ambientales y no patgenas para el hombre, muchas de ellas son fundamentales en varios ciclos geoqumicos del planeta (carbono, nitrgeno, fsforo, entre otros). El Dominio Archaea contiene al menos dos reinos (divisiones o Phyla) nuevos: Crenarchaeota y Euryarchaeota. El Dominio Eukarya histricamente comprendera los Reinos (Dominios o phyla) Fungi, Animalia, Plantae y Protozoa (llamados a veces Protista); pero actualmente, se conserva a los 3 primeros, mientras que el antiguo Reino Protozoa, se fragmenta en mltiples Reinos (Divisiones o Phyla) tales como: Microsporidios, Diplomonadas, Apicomplexa, Alveolados, Stramenopiles, Excavados, entre otros. As, los microorganismos se encuentran ubicados en los tres dominios: Archea, Bacteria y Eukarya, este ltimo comprende a todos los linajes microbianos constituidos por clulas eucariticas.

Figura 2. rbol filogentico de la vida, Este rbol filogentico se basa en la comparacin de secuencias del RNA ribosomal 16 S. La raz se localiz mediante el estudio de los factores traduccionales EF-Tu y EF-G (Woese, et al., 1990).

Los virus no se incorporan a esta clasificacin por el hecho de no estar conformados por clulas y constituirse en seres vivos slo en unin a una clula viva preexistente. Sus orgenes no estn claros, algunos investigadores opinan que derivaran de entidades celulares y por lo tanto no seran primitivos. Otros investigadores piensan que corresponderan a remanentes de una etapa de la evolucin pre-celular de la vida, por lo que en este caso se consideraran entes primitivos. 5 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

Recientemente se descubri una nueva familia de virus denominada Mimivirus, que se caracteriza por infectar amebas y poseer un genoma de DNA mayor que el de algunas bacterias (dos veces mayor que el genoma de la bacteria Micoplasma genitalium). Algunos investigadores piensan, en base al estudio de las secuencias de algunas enzimas de estos virus, que esta familia podra corresponder a virus arcaicos, anteriores incluso al origen de las clulas eucariontes. En todo caso, hoy en da no existe consenso entre los investigadores respecto al origen de los virus y no parece posible, al menos al corto plazo, dilucidar experimentalmente tal cuestin.

6 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

1.2. Desarrollo histrico de la Microbiologa


Aunque los microorganismos se originaron hace aproximadamente 4.000 millones de aos, la Microbiologa es relativamente una ciencia joven. Los primeros microorganismos se observaron hace 300 aos y sin embargo pasaron unos 200 aos hasta que se reconoci su importancia. La Microbiologa aparece a finales del siglo XIX como consecuencia de la confluencia de una serie de progresos metodolgicos que se haban iniciado en los siglos anteriores, y que obligaron a una revisin de ideas y prejuicios seculares sobre la dinmica del mundo vivo. De acuerdo al esquema propuesto por Collard (l976), se distinguen cuatro periodos en el desarrollo de la Microbiologa: Primer periodo. Periodo de especulacin que se extiende desde la antigedad hasta el arribo de los primeros microscopistas. Segundo periodo. Acumulacin de observaciones desde l675 con el descubrimiento de los microorganismos por Leeuwenhoek, hasta mediados del siglo XIX. Tercer periodo. Inicia con el cultivo de microorganismos, que llega hasta finales del siglo XIX, donde las investigaciones de Pasteur y Koch encabezan el establecimiento de la Microbiologa como ciencia experimental. Cuarto periodo. A partir de los albores del siglo XX con los descubrimientos de Winogradsky, Beijerinck, Kluver y van Niel, hasta nuestros das, en el que los microorganismos se estudian desde los aspectos morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos, genticos, ecolgicos, entre otros, lo que conlleva a la Microbiologa a un extraordinario crecimiento, as como tambin, al surgimiento de disciplinas microbiolgicas especializadas como la Virologa y la Inmunologa entre otras, y a la estrecha imbricacin de las ciencias microbiolgicas en el marco general de las Ciencias Biolgicas.

1.2.1. Periodo previo al descubrimiento del microscopio (periodo de especulacin)


Durante el periodo de especulacin, la humanidad tuvo conocimiento sobre las actividades de los microorganismos, aunque stos no pudieron ser observados. El ser humano produca bebidas alcohlicas, productos lcteos y pan, sin embargo, especulaban sobre la forma en que se efectuaban dichos procesos fermentativos. Por otro lado, tambin se generaron especulaciones sobre el origen de las enfermedades infecciosas. Diversas fuentes escritas de la antigedad griega y romana hablan de grmenes invisibles que transmiten enfermedades contagiosas. Lucrecio (96-55 a.C.), en su De rerum natura hace varias alusiones a semillas de enfermedad. En el Renacimiento europeo, Girolamo Frascatorius, en su libro De contagione et contagionis (1546) dice que las enfermedades contagiosas se deben a grmenes vivos que pasan de diversas maneras de un individuo a otro. Estos inicios de explicacin que renunciaban a invocar causas sobrenaturales fueron probablemente catalizados por la introduccin en Europa de la sfilis, una enfermedad en la que estaba clara la necesidad de contacto para su contagio. Pero la cosa que se transmite en la enfermedad sigui siendo objeto de conjeturas durante mucho tiempo, sin embargo, la existencia de los microorganismos no se conoci hasta finales del siglo XVII.

1.2.2. Primeros microscopistas y el descubrimiento de los microorganismos


Ya en el siglo XIV, con la invencin de las primeras lentes para corregir la visin, surgi una cierta curiosidad sobre su capacidad de aumentar el tamao aparente de los objetos. En el siglo XVI surgieron algunas ideas sobre aspectos de la fsica ptica de las lentes de aumento, pero no encontraron una aplicacin inmediata. Se dice que Galileo hizo algunas observaciones microscpicas invirtiendo su telescopio a partir de lentes montadas en un tubo, pero en cualquier caso est claro que no tuvieron ninguna repercusin. El descubrimiento de los microscopios fue obra del holands Antony van Leeuwenhoek, quien fue la primera persona en describir los microorganismos en detalle. En 1675 descubri que en una gota de agua de estanque pululaba una asombrosa variedad de pequeas criaturas a las que a los cuales denomin animculos. En 1683 descubre las bacterias, por lo que se considera el "padre de la Microbiologa". Sus dotes de observador le llevaron asimismo a describir protozoos (como Giardia, 7 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

que encontr en sus propias heces), la estructura estriada del msculo, la circulacin capilar, a descubrir los espermatozoides y los glbulos rojos (por lo que tambin se le considera el fundador de la Histologa animal), as como a detallar diversos aspectos estructurales de las semillas y embriones de plantas. Simultneamente el ingls Robert Hooke, usando microscopios compuestos, describi los hongos filamentosos en 1667, y descubri la estructura celular de las plantas en 1665, acuando el trmino clula. Sin embargo, estas observaciones no condujeron a ninguna investigacin acerca de las posibles actividades de los microorganismos, ni como agentes de fermentaciones ni de enfermedades infecciosas ya que el desarrollo de la qumica y de la medicina era demasiado primitivo. Una vez descubiertos los microorganismos por Leeuwenhoek se empez a especular sobre el origen de estos animculos, por lo que se formaron dos escuelas: la abiognesis (generacin espontnea) apoyada por los preformacionistas y la biognesis (los animculos se originaban a partir de animculos padres). La doctrina de la generacin espontnea fue puesta en entredicho por los experimentos de Redi quien acu la expresin "Omne vivum ex ovo" (1668), tras comprobar que los gusanos encontrados en la carne provenan de los huevos que previamente haban depositado en la carne las moscas. Los descubrimientos de Redi tuvieron el efecto de desacreditar la teora de la generacin espontnea para los animales y plantas, pero la reavivaron respecto de los recin descubiertos animlculos, una cosa eran los huevos de moscas y otra los microorganismos. En 1745 Needham hirvi trozos de carne para destruir los organismos preexistentes y los coloc en un recipiente abierto, posteriormente, observ colonias de microorganismos sobre la superficie y concluy que se generaban espontneamente a partir de la carne. En 1769, Spallanzani repiti el experimento pero tapando los recipientes, no apareciendo las colonias, lo que contradeca la teora de la generacin espontnea. Pero Needham argument que el aire era esencial para la vida incluida la generacin espontnea de microorganismos y este aire haba sido excluido en los experimentos de Spallanzani. En 1836 Franz Schulze pas el aire a travs de unas soluciones cidas fuertes hacia el interior de un recipiente con carne hervida. Al ao siguiente Theodor Schwann pas el aire a travs de tubos calientes. Los microorganismos no aparecan en ningn caso ya que los microorganismos presentes en el aire haban sido aniquilados. Sin embargo, los que apoyaban la generacin espontnea comentaban que el cido y el calor alteraban el aire de tal manera que impeda la generacin espontnea de los microorganismos. En 1864 Pasteur pone fin a la controversia sobre el origen de los microorganismos al utilizar matraces con cuello de cisne, el aire pasaba libremente a travs del cuello, pero los microorganismos no aparecan en la solucin ya que las partculas de polvo y microorganismos sedimentaban en el recodo del cuello. Estos experimentos de Pasteur promovieron el reconocimiento de la biognesis, de esta forma quedaba definitivamente aclarado el origen de los microorganismos, y se abra la Edad de Oro del estudio cientfico de las formas de vida no observables a simple vista. Los ltimos escpticos quedaron silenciados cuando en 1877 John Tyndall aplic su sistema de esterilizacin por calentamiento discontinuo (hoy conocida precisamente como tindalizacin), que evidenci la existencia de formas microbianas de reposo muy resistentes al calor, lo cual fue confirmado poco ms tarde por Ferdinand Cohn al descubrir las esporas bacterianas. Sin duda desde la Prehistoria los hombres utilizan con provecho las fermentaciones. Las teoras cientficas de esa poca reconocan la presencia de levaduras en la fermentacin alcohlica, pero estas levaduras eran consideradas como compuestos qumicos complejos, sin vida. Esta era la teora mecanstica liderada por los qumicos alemanes von Liebig y Whler. Luis Pasteur, qumico francs, propuso la teora vitalstica y demostr que las clulas viables de levaduras causan fermentacin en condiciones anaerbicas; durante dicha fermentacin el azcar presente en el mosto es convertido principalmente en etanol y CO2. En 1866, Pasteur public la obra titulada "Estudios sobre el vino, sus enfermedades, causas que las provocan. Nuevos procedimientos para la conservacin y envejecimiento". Entre las mejoras aconsejadas haba un mtodo para aumentar la calidad de la conservacin de los vinos consistente en calentarlos a una temperatura de 68 C durante 10 minutos y despus enfriarlos rpidamente. Esta tcnica ha venido a ser conocida como pasteurizacin y es ahora ampliamente utilizada en el tratamiento de la leche.

8 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

En 1546, Girolano Fracastoro sugiri que las enfermedades podan deberse a organismos tan pequeos que no podan verse y que eran transmitidos de una persona a otra. Sin embargo, el descubrimiento de que las bacterias pueden actuar como agentes especficos de las enfermedades infecciosas en los animales fue realizado a travs del estudio del carbunco, infeccin grave de los animales domsticos que es transmisible al hombre. La demostracin concluyente de la causa bacteriana o etiologa del carbunco la proporcion en 1876 Robert Koch, mdico alemn, seis aos despus Koch anunci al mundo que haba encontrado la bacteria del carbunco (Bacillus anthracis). Posteriormente l y sus colaboradores descubrieron las bacterias que causan la tuberculosis y el clera. El descubrimiento posterior de los virus (Dimitri Ivanovski en 1892; el virus del mosaico del tabaco pasaba los filtros que retenan a las bacterias), agentes que no crecen en medios artificiales en el laboratorio como lo hacen las bacterias, han permitido realizar algunas modificaciones en los postulados de Koch. Este trabajo sobre el carbunco condujo rpidamente a la edad de oro de la bacteriologa. En 25 aos la mayora de los agentes bacterianos de las principales enfermedades humanas haban sido descubiertos y descritos. Actualmente es difcil comprender la magnitud de la miseria y devastacin causada por los microorganismos antes de 1950. En Europa, durante el perodo de 1347-1350 ocurri una epidemia de peste bubnica, conocida como la "muerte negra" y causada por la bacteria Yersinia pestis, se estim que murieron 25 millones de personas. Con el conocimiento de que los microorganismos causaban enfermedades, los cientficos se dedicaron a investigar la prevencin y el tratamiento. Los hospitales adoptaron la antisepsia (Joseph Lister. 1860) la cual previene la diseminacin de las enfermedades infecciosas mediante la inhibicin o destruccin de los agentes causantes. Tambin se descubri la inmunizacin (Pasteur, 1880), proceso que estimula las defensas del cuerpo frente a la infeccin. Se empez a aplicar la quimioterapia (Paul Ehrlich, Gerhard Domagk, y Alexander Fleming), tratamiento de las enfermedades con una sustancia qumica. Tambin influy la sanidad pblica, sobre todo la higiene relacionada con los alimentos y aguas. Antes de 1940 el conocimiento del fenmeno gentico provena de las investigaciones sobre plantas y animales, pero no se saba si estos resultados se podan aplicar a los microorganismos. En 1944 Oswald Avery, Colin MacLeod y MacLyn McCarty descubrieron el papel del DNA en la gentica bacteriana. Encontraron que el material de DNA de un tipo de neumococos puede transferir una caracterstica hereditaria a otro tipo de neumococos. Posteriormente, en 1953 Watson, Crick y Wilkins descubrieron la estructura molecular del DNA. Estos descubrimientos, junto con otros, establecieron que la informacin gentica de todos los organismos est codificada en el DNA. Esto hizo de los microorganismos un modelo muy atractivo para la investigacin gentica. Actualmente y utilizando la tecnologa del DNA recombinante o ingeniera gentica se pueden transferir fragmentos de DNA de un organismo a otro.

1.2.3. El cultivo de los microorganismos


La doctrina del pleomorfismo, vigente durante buena parte del siglo XIX, mantena que los microorganismos adoptaban formas y funciones cambiantes dependiendo de las condiciones ambientales. A estas ideas se oponan frontalmente investigadores como Koch, Pasteur y Cohn, que estaban convencidos de la especificidad y constancia morfolgica y fisiolgica de cada tipo de microorganismo (monomorfismo). El pleomorfismo haba surgido como una explicacin a la gran variedad de formas y actividades que aparecan en un simple frasco de infusin, pero ya Pasteur, en sus estudios sobre la fermentacin, se haba percatado de que los cultivos que aparecan podan considerarse como una sucesin de distintas poblaciones de microorganismos predominantes, que, a resultas de sus actividades, condicionaban la ulterior composicin de la comunidad microbiana. La solucin definitiva a esta cuestin dependa, de nuevo, de un desarrollo tcnico, que a su vez iba a suministrar una de las herramientas caractersticas de la nueva ciencia: los mtodos de cultivo puro. Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el miclogo Brefeld, quien logr aislar esporas de hongos y cultivarlas sobre medios slidos a base de gelatina. Por su menor tamao, este mtodo se haca inviable para las bacterias, por lo que se recurri a un mtodo basado en diluciones: Lister, en 1878 realiz diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta lograr muestras en las que exista una sola clula. Pero la tcnica era larga y tediosa y, adems, normalmente slo se lograban aislar clulas 9 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

del tipo bacteriano ms abundante en el cultivo original; sin embargo, el experimento sirvi para confirmar la naturaleza particulada de los agentes de las fermentaciones. Por aquella poca Koch buscaba con ahnco mtodos ms sencillos de cultivo puro, indispensables para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero emple rodajas de patata como sustrato slido nutritivo sobre el que se podan desarrollar colonias macroscpicas de bacterias que presentaban morfologa caracterstica, que Koch interpret como resultantes del crecimiento a partir de clulas individuales. Pero enseguida recurri a compactar el tpico caldo de cultivo a base de carne (diseado por Loeffler) aadindole gelatina (1881). El medio slido as logrado era transparente, lo que permita visualizar fcilmente los rasgos coloniales, y contena los nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. stas eran inoculadas en la superficie del medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama, por la tcnica de siembra en estra. Sin embargo, la gelatina presentaba los inconvenientes de ser atacada por determinados microorganismos, y de tener un bajo punto de fusin; ambos problemas se solventaron cuando en 1882 el mdico alemn Walter Hesse, introdujo el agar (polisacrido extrado de algas rojas) como nuevo agente solidificante. El trabajo de Koch ya citado tuvo la trascendental consecuencia de derribar las ideas pleomorfistas, y supuso la primera propuesta del concepto de especie dentro del mundo bacteriano. En 1887 Petri, un ayudante de Koch, sustituy las engorrosas bandejas de vidrio cubiertas con campanas, usadas hasta entonces para los cultivos slidos, por un sistema manejable de placas de cristal planas, que se conoce como cajas de Petri. El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento fue una consecuencia de las investigaciones llevadas a cabo por Beijerinck y Winogradsky entre 1888 y los primeros aos del siglo XX, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoqumicos y poseedoras de caractersticas fisiolgicas distintivas (quimioauttrofas, fijadoras de nitrgeno, entre otras). Estos medios, donde se aplica a pequea escala el principio de seleccin natural, se disean de forma que su composicin qumica definida favorezca slo el crecimiento de ciertos tipos fisiolgicos de microorganismos, nicos capaces de usar ciertos nutrientes del medio. Otra importante aportacin a este perodo de cultivo dentro del desarrollo de la Microbiologa surgi del uso de medios diferenciales, en los que se manifiesta algn rasgo bioqumico o metablico, lo que contribuye a la identificacin microbiana. Fue Wrtz quien, en 1892, introdujo el uso de indicadores de pH, incorporados en los medios, lo cual permita revelar la produccin de acidificaciones por fermentacin en ciertas bacterias. Grandes naturalistas como Haeckel, Strassburger y Abb interaccionando con una poderosa industria ptica y qumica. Estas influencias recprocas se plasmaron en numerosos proyectos que reflejaban la efervescencia de las ciencias naturales tras la estela de Darwin (cfr. Jahn et al., 1985). Concretamente, la industria ptica de Abb y Zeiss, pudo satisfacer la necesidad de Koch de perfeccionar el microscopio compuesto, introduciendo lentes acromticas y una iluminacin inferior provista de condensador. El mismo Abb desarroll en 1878 el objetivo de inmersin en aceite. Por otro lado, la industria qumica BASF, que por aquella poca se encontraba en pleno auge de patentes de nuevos colorantes, suministr al laboratorio de Koch una serie de derivados de anilina que tean las bacterias permitiendo su fcil visualizacin al microscopio en frotis de tejidos infectados. En 1875 Carl Weigert ti bacterias con pirocarmn, un colorante que ya vena siendo usado desde haca unos aos en estudios zoolgicos. En aos sucesivos se fueron introduciendo el azul de metileno (Koch, 1877), la fuchsina, y el violeta cristal. En 1882-1883 Ziehl y Neelsen desarrollan su mtodo de cidoalcohol resistencia para teir Mycobacterium tuberculosis. En 1884 el patlogo dans Christian Gram establece una tincin de contraste que permite distinguir dos tipos bacterianos en funcin de sus reaccin diferencial de tincin y que, como se vera mucho ms tarde, reflejaba la existencia de dos grupos de bacterias con rasgos estructurales distintivos. En 1890 Loeffler logra visualizar flagelos bacterianos por medio de su tcnica de impregnacin argntica. Como veremos ms adelante, la misma industria de colorantes alemana previa a la primera guerra mundial fue decisiva tambin para los comienzos de la quimioterapia. Estas innovaciones tcnicas (mtodos de cultivo, microscopa y tinciones) fueron fundamentales (junto con los sistemas de esterilizacin abordados en el anterior apartado) para la consolidacin de la Microbiologa como ciencia, permitiendo eliminar las grandes dosis de especulacin que hasta entonces haban predominado.

10 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

1.2.4. Auge de la Microbiologa (Winogradsky, Beijerinck, Kluyver y van Niel)


Gran parte de los avances en Microbiologa descritos hasta ahora se debieron a la necesidad de resolver problemas prcticos. Pero hacia finales del siglo XIX una serie de investigadores, desarrollaron importantes estudios bsicos que fueron revelando una enorme variedad de microorganismos y sus actividades metablicas, as como su papel crucial en ciclos biogeoqumicos, sus relaciones con procesos de nutricin vegetal, entre otros. El descubrimiento de la quimioautotrofa, obra del gran microbilogo ruso Sergei Winogradsky (18561953), oblig a revisar los conceptos previos, procedentes de la Fisiologa Vegetal, de que el crecimiento autotrfico dependa de la presencia de clorofila. Winogradsky haba comenzado investigando las bacterias del hierro descubiertas por Cohn en 1875, observando que podan crecer en medios minerales, por lo que supuso que obtenan su energa de la oxidacin de sales ferrosas a frricas (1888). En 1889, combinando tcnicas de observacin secuencial de cultivos microscpicos con ensayos microqumicos sobre bacterias del azufre (Beggiatoa, Thiothrix), infiri que estos microorganismos oxidaban sulfuro de hidrgeno hasta azufre elemental (acumulando ste como grnulos), y luego hasta cido sulfrico, obteniendo de este modo su energa. Estas observaciones pueden haber sido el arranque del concepto de litotrofa. Pero el descubrimiento de la quimioautotrofa lleg cuando al ao siguiente Winogradsky y Omeliansky pasaron a estudiar las bacterias nitrificantes, demostrando de manera clara que la energa obtenida de la oxidacin del amonio o del nitrito era usada para fijar CO 2 (1889-1890). Ms tarde el mismo Winogradsky extendi la demostracin a cultivos puros en los que el agente solidificante de los medios era el gel de slice. La explicacin del proceso de oxidacin de los compuestos de azufre no lleg hasta los estudios de Dangeard (1911) y Kiel (1912). Nuevas capacidades metablicas fueron reveladas al estudiar los procesos respiratorios de las bacterias que oxidan hidrgeno o metano (Shngen, 1906). El qumico Berthelot haba sealado (1885) que los microorganismos del suelo podan incorporar nitrgeno molecular directamente del aire. Fue igualmente Winogradsky el primero en aislar una bacteria capaz de fijar nitrgeno atmosfrico (Clostridium pasteurianum) y en explicar el ciclo del nitrgeno en la naturaleza (1890), siendo el holands Martinus Beijerinck (1851-1931) el descubridor de Azotobacter como bacteria aerobia fijadora de vida libre (1901). Ms tarde Beijerinck demostr por mtodos qumicos que, en efecto, Azotobacter incorpora nitrgeno de la atmsfera mientras crece (1908). La importancia de la fijacin de nitrgeno para la nutricin vegetal lleg con los estudios sobre bacterias formadoras de ndulos en las races de las leguminosas. Ya los experimentos cuantitativos sobre plantas creciendo en recipientes, realizados por Boussingault a mediados del siglo XIX, haban indicado que las leguminosas asimilaban nitrgeno de la atmsfera. En 1866 Voronin descubri las bacterias de los ndulos radicales de esta familia de plantas. Frank, en 1879, demostr que los ndulos parecan inducirse por las mismas bacterias albergadas en ellos, y Ward (1887) us bacterias procedentes de ndulos machacados para inocular semillas, logrando la produccin de ndulos en suelo estril, y describiendo en un bello trabajo el proceso de infeccin, con su produccin de hifas (cordn de infeccin). Tras la introduccin del concepto de simbiosis por De Bary, en 1878, fue Schindler (1884) el primero en describir los ndulos radicales como resultado de una simbiosis entre planta y bacterias. Los trabajos de Hermann Hellriegel (1831-1895) y de su colaborador Hermann Willfahrt (1853-1904), que trabajaban en la Estacin Experimental de Bernburg, comunicados en primer lugar en un congreso en Berln, en 1886, y publicados en un artculo ejemplar en 1888, asociaron la fertilidad nitrogenada natural de las leguminosas con la presencia de sus ndulos radicales, sealando que estos ndulos se inducan por microorganismos especficos; de este modo lograron una brillante sntesis de las observaciones microbiolgicas y qumicas. El mismo ao de 1888 Beijerinck logr el cultivo puro in vitro de las bacterias nodulares (a las que bautiz como Bacillus radicicola), observando que no reducan nitrgeno en vida libre; ms tarde (1890) aport la prueba definitiva de que las bacterias aisladas eran capaces de nodular especficamente ciertas especies de leguminosas, adquirindose de esta forma la facultad de fijar nitrgeno en su asociacin con la raz de la planta. Irnicamente el nombre definitivo para las bacterias de los ndulos de leguminosas (Rhizobium) fue propuesto por Frank, quien durante mucho tiempo se haba negado a reconocer los resultados de 11 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

Hellriegel y Willfahrt, y que haba oscilado en sus opiniones, desde suponer que la fijacin de nitrgeno era un rasgo general de las plantas, hasta creer que las estructuras intranodulares observadas a microcopio (bacteroides) eran grnulos de reserva (incluidas las que l mismo observ en plantas no leguminosas de los gneros Alnus y Eleagnus, originadas por una bacteria bautizada en su honor -Frankia); incluso cuando se convenci de que los simbiontes eran bacterias (y no hongos o mixomicetes), pensaba que stas slo estimulaban a que las plantas fijaran nitrgeno en sus hojas; su conversin (y an as incompleta y con reticencias) no lleg hasta 1892. El aislamiento de los bacteroides intranodulares (Prazmowski, 1890), y la relacin entre su formacin y la fijacin de nitrgeno (Nobbe y Hiltner, 1893) complet esta primera oleada de investigacin sobre este tema que tanta trascendencia presentaba para la Agronoma. Estos estudios estn en la base de todos los ulteriores trabajos de Microbiologa Agrcola, de modo que esta especiliadad fue incorporada tempranamente a los laboratorios cientficos y estaciones experimentales. Las obras trascendentales de Winogradsky y Beijerinck abrieron un nuevo horizonte para el estudio de la diversidad microbiana. La escuela de Beijerinck, en la Universidad Tcnica de Delft, fue continuada por A.J. Kluyver y C.B. van Niel, siendo este ltimo el padre de la escuela norteamericana desde su establecimiento en California, ya que form a figuras tan importantes como R.Y. Stanier, R.E. Hungate o M. Doudoroff. La escuela holandesa fundada por Beijerinck tuvo asimismo otra fructfera colonia en la ciudad alemana de Konstanz, donde N. Pfennig continu el trabajo emprendido junto a van Niel en Delft. Todos estos autores, y sus colaboradores, fueron realizando contribuciones esenciales sobre una amplia diversidad de bacterias, descubriendo la variedad de las bacterias fotosintticas, los tipos de organismos litotrficos, y profundizando en multitud de aspectos estructurales y fisiolgicos de las bacterias recin descubiertas. Como dice T.D. Brock en una recensin de Kluyver (1961) los hombres de la escuela de Delft de Microbiologa General fueron pioneros en una poca en la que la mayora de los investigadores estaban demasiado fascinados por problemas aplicados en medicina, agricultura o industria, como para preocuparse por microorganismos quimiosintticos o fotosintticos, o por aquellos que muestran fermentaciones inusuales.... Pero, como en tantas otras ocasiones, este enfoque de ciencia bsica ha sido extraordinariamente frtil, y aparte de la profundizacin en la unidad y diversidad de la vida ha dado origen a penetrantes percepciones en multitud de problemas planteados, tarde o temprano, a las ciencias biolgicas.

12 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

1.3. Relaciones de la Microbiologa con otras ciencias


El auge de la microbiologa desde finales del siglo XIX se plasm, entre otras cosas, en el aislamiento de gran variedad de cepas silvestres de microorganismos, lo que suministr un enorme volumen de nuevo material biolgico sobre el que trabajar, aplicndose una serie de enfoques que eran ya habituales en las ciencias naturales ms antiguas; as, haba que crear un marco taxonmico (con sus normas de nomenclatura) para encuadrar a los organismos recin descubiertos, era factible desarrollar trabajos sobre morfologa y fisiologa comparadas, sobre variabilidad y herencia, evolucin, ecologa, etc. De este modo la joven Microbiologa fue objeto, en pocos aos, de la utilizacin, a un ritmo acelerado, de los mtodos taxonmicos y experimentales que haban ido surgiendo y madurando desde el siglo XVIII en los mbitos de la Historia Natural clsica. Los esfuerzos tempranos para lograr un clasificacin bacteriana por parte de Cohn (1875) y Migula (1894), que sustentaban su concepto de especie predominantemente sobre caracteres morfolgicos, pero hacia 1900 era evidente la arbitrariedad e insuficiencia de este tipo de clasificaciones, de modo que los intentos posteriores hicieron uso de caracteres bioqumicos (Orma Jensen, 1909), o de una mezcla de rasgos morfolgicos, bioqumicos, patognicos y de tincin (Buchanan, 1915). El sistema de taxonoma bacteriana adquiri un nuevo impulso a partir de la 1 edicin del Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (1923), y de las propuestas de Kluyver y van Niel (Prospects for a natural system of classification of bacteria, 1936). En cuanto a la nomenclatura, no fue hasta 1958 en que se gener un Cdigo Internacional de Nomenclatura Bacteriolgica, aunque ya se vena aplicando desde haca tiempo el procedimiento tipolgico para los microorganismos, con criterios similares a los de la Zoologa y la Botnica. El establecimiento de relaciones taxonmicas precis el recurso a mtodos cada vez ms amplios y afinados de anlisis gentico, estructural o fisiolgico. En un apartado anterior ya vimos las conexiones tempranas entre la Bioqumica y la Microbiologa a propsito del descubrimiento de la base enzimtica de las fermentaciones, lo cual abri el camino para dilucidar el metabolismo energtico microbiano, y para demostrar su similitud qumica con rutas metablicas de organismos superiores. Otro paso importante en la percepcin de la unidad bioqumica del mundo vivo deriva del descubrimiento de las vitaminas (trmino acuado por Funk en 1911), al establecerse que determinados factores de crecimiento requeridos por algunos microorganismos eran qumicamente similares a las vitaminas necesarias en la dieta de los animales, y que este tipo de compuestos representa precursores biosintticos de coenzimas del metabolismo celular. As pues, este tipo de investigaciones sent claramente la idea de la unidad qumica de los seres vivos, independientemente de su encuadre taxonmico, y encauz una buena parte de los trabajos bioqumicos hacia los microorganismos, dadas sus cualidades de facilidad de manejo y cultivo en laboratorio. En cuanto a las conexiones de la Microbiologa con la Gentica, ya Beijerink, en 1900, tras analizar la teora de la mutacin de De Vries, haba predicho que los microoganismos podran convertirse en objetos de investigacin ms adecuados que los sistemas animales o vegetales. Pero las primeras conexiones entre ambas ciencias arrancan de la necesidad que hubo, a principios del siglo XX, de determinar la sexualidad de los hongos con fines taxonmicos. En 1905 Maire demostr la existencia de meiosis en la formacin de ascosporas, y Claussen (1907) evidenci fusin de ncleos en Ascomicetos, mientras que Kniepp, hacia finales de los aos 30 haba recogido un gran volumen de informacin sobre procesos sexuales en Basidiomicetos. El sueco Lindegren (1936) realiza las primeras cartografas genticas en cromosomas de Neurospora, durante su estancia en el laboratorio californiano de Morgan; este ltimo, propugnador de la teora de los genes (1926), confiaba desde haca aos en ampliar sus xitos, logrados en Drosophila, hacia el estudio de la gentica microbiana. En 1941, otros dos discpulos de Morgan, Beadle y Tatum, aislan mutantes auxotrficos de Neurospora, con lo que se inicia el estudio de la base bioqumica de la herencia, y convierten a este hongo en una valiosa herramienta de trabajo en esta lnea de investigacin. Las estrategias diseadas por Beadle y Tatum fueron aplicadas por Luria y Delbrck (1943) a cultivos bacterianos, investigando la aparicin de mutaciones espontneas resitentes a fagos o estreptomicina. La conexin de estos experimentos con las observaciones previas de Griffith (1928) sobre la transformacin del neumococo, llev a Avery y colaboradores (1944) a demostrar que el principio transformante portador de la informacin gentica es el ADN. En 1949 Erwin Chargaff demuestra 13 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

bioqumicamente la transmisin gentica mediante ADN en Escherichia coli , y en 1952 Alfred Hershey y Martha Chase, en experimentos con componentes marcados de fagos, ponen un elegante colofn a la confirmacin de la funcin del ADN, con lo que se derribaba el antiguo y asentado paradigma de las protenas que hasta mediados de siglo intentaba explicar la base de la herencia. De esta forma, la Microbiologa experimental se sita en pleno centro del nacimiento de la Gentica molecular, de la mano de los avances paralelos en Bioqumica (anlisis por rayos X de la estructura del ADN debido a Maurice Wilkins y Rosalind Franklin, modelo de Watson y Crick de la doble hlice del ADN, etc.), dando origen esta confluencia a lo que se ha llamado la Edad de Oro de la Biologa Molecular.

14 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

1.4. Importancia de la Microbiologa


La Microbiologa es una de las Ciencias que tiene ms que ofrecer a los pases en desarrollo, por su trascendencia en la salud pblica, medicina, agricultura e industria, siendo las colecciones de microorganismos el epicentro que la sostiene, debido a que las exigencias de la investigacin son cada vez ms firmes en el empleo de cultivos de procedencia conocida y garantizados en pureza y conservacin. Sin cultivos microbianos sus constituyentes celulares o enzimticos no puede existir la Microbiologa aplicada y por consiguiente, la Biotecnologa que se encarga de transformar los resultados obtenidos de la ciencia bsica (Microbiologa, Biologa Molecular. Bioqumica, entre otras) en productos y procesos de valor comercial. La Microbiologa muestra una prometedora perspectiva de expansin a mltiples campos de la actividad humana, desde el control de enfermedades infecciosas (higiene, vacunacin, quimioterapia, antibioterapia) hasta el aprovechamiento econmico y racional de los mltiples procesos en los que se hallan implicados los microorganismos (biotecnologas). La industria alimentaria utiliza microorganismos en la produccin de vinagre, bebidas alcohlicas, aceitunas, mantequilla, queso, yogurt, pan, entre otros. Adems, las bacterias y otros microorganismos ahora pueden ser manipulados para producir sustancias que ellos normalmente no sintetizan; el impacto de las nuevas tecnologas est determinando notables cambios en la Microbiologa. Entre los avances de mayor trascendencia en los ltimos aos, se encuentran: la secuenciacin completa de genomas bacterianos; la identificacin de microorganismos por tcnicas genotpicas; el desarrollo de la microbiologa clnica; el reconocimiento y las posibilidades de la aplicacin de la biodiversidad microbiana. Existen cazadores de microbios modernos que en ambientes exticos, aslan bacterias nuevas, no descritas, si se considera que se desconoce ms del 95% de las bacterias, el describir bacterias nuevas parecera una actividad sin fin. En este sentido, resulta interesante investigar si existen microorganismos en extincin y cules seran las causas. Se desconoce los efectos que la actividad humana tiene sobre los microorganismos; la devastacin de selvas y bosques probablemente tienen efectos drsticos sobre los microorganismos; los fertilizantes qumicos alteran las poblaciones de bacterias fijadoras de nitrgeno, y el uso de antibiticos ha favorecido la proliferacin de las resistentes. Por otra parte, se estn realizando investigaciones sobre la obtencin de genes del ambiente, donde no importa el microorganismo del que provenga el gen, ya que la meta es expresarlo en alguna bacteria conocida y obtener un producto novedoso que pueda probarse como frmaco, insecticida o promotor del crecimiento. La secuenciacin de genomas completos ha mostrado la existencia de enormes cantidades de genes potenciales, cuya funcin se desconoce; una manera de descifrar su funcin es eliminarla de las clulas por mutacin. Se puede prever que el futuro de la investigacin en microbiologa, requerir de la generacin de un enorme nmero de mutantes en muchos genes potenciales de diferentes especies. Esta tarea parece titnica, sin embargo, es factible. Otro enfoque ingenioso con perspectivas a futuro es de la "evolucin in vitro", aqu se mezclan genes de diferentes vas inclusive de vas metablicas no relacionadas y tambin se pueden incluir genes mutados al azar o por recombinacin. El objetivo es obtener sntesis de enzimas, protenas, compuestos novedosos; esta estrategia ha sido utilizada con xito en la sntesis de nuevos carotenoides. Mediante manipulaciones genticas ms tradicionales de ingeniera gentica se han logrado microorganismos productores de diferentes compuestos, existen bacterias que producen cantidades prodigiosas de riboflavina (vitamina B2), o se ha cambiado la especificidad de una enzima en otra, la enzima lactato deshidrogenasa se convirti en la enzima malato deshidrogenasa. En Microbiologa se han seleccionado modelos de estudio y algunos de stos se han analizado con gran profundidad, ello se ve reflejado en el nmero de publicaciones por microorganismo; por ejemplo, E. coli es la bacteria en la que ms investigacin se hace y entre los hongos ms estudiados se encuentra Saccharomyces. Sin embargo, una vez que se detecta un microorganismo de inters se puede avanzar muy rpido en su conocimiento basado en lo que se sabe en otros microorganismos, este ha sido el caso del virus del SIDA y en Helicobacter pylori, de este ltimo, por su importancia mdica, se secuenciaron dos cepas, se han secuenciado las islas de patogenicidad de muchas cepas y se han implementado experimentos de citoxicidad en diferentes lneas celulares de humano. 15 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

La identificacin de los organismos causantes de brotes infecciosos es posible gracias al uso de tcnicas moleculares que permiten rastrear, a manera de detectives, la fuente de la contaminacin, as por ejemplo, muy recientemente las diarreas de unas pocas personas en ciudades alejadas en Estados Unidos, se atribuyeron a que el perejil que fue adquirido por algunos restaurantes llevaba Shigella sonnei por haber sido regado con agua contaminada; la rapidez en la deteccin evit que otras personas enfermasen, se estima que si se hubiera podido realizar este tipo de rastreo en aos anteriores, como en 1993, se hubieran podido prevenir algunos de los decesos causados por las E. coli enteropatgenas de las hamburguesas.

16 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Apuntes de Microbiologa

Montoya Araujo, BM.

FUENTES CONSULTADAS
Brooks GF, Butel JN, Ornston NL, Jawetz E. Melnick J. Adelberg E. 1992. Microbiologa Mdica. Ed. El Manual Moderno. S.A. de C.V. Mxico D.F. Bruce Alberts,Alexander Johnson,Julian Lewis,Martin Raff,Keith Roberts,Peter Walter. 2002. Molecular Biology of the Cell. 4 edition, Garland Science Publishers. Davis B, B, Dulbecco R, Eisen H, Ginsberg H. 1990. Microbiology. Fourth Ed. J.B. Lippencott Company Phyladelphia. Davis BD, Dulbecco R, Eisen HN, Ginsberg, HS. Tratado de Microbiologa. 4 edicin en Castellano. Editorial Masson . 1996. Procede de la edicin en ingls de 1991 Microbiology, editorial Lippincot, Philadelphia. 1991. Delsuc F., Brinkmann H., and Philippe H. 2005. Phylogenomics and the reconstruction of the tree of life. Nature Reviews Genetics 6:361-375. Ingraham JL, Ingraham CA. 1998. Introduccin a la microbiologa. (2 volmenes). Editorial Revert. Procede de la edicin en ingls Introduction to Microbiology. Editorial Wadswoth Publishing Co. California. 1995. Joklik WK, Willet HP, Amos DB, Wilfert CM (eds). 1997. Microbiologa. 20 edicin. Editorial mdica panamericana, Madigan, M.T., Martinko, J.M., and Parker, J. 2004. Brock: Biologa de los microorganismos. 10 edicin en espaol, Pearson Educacin S.A., Madrid, Espaa. Mc, Kane and Kandel. 2000. Microbiologa. 4. Edicin. Editorial McGraw-Hill Interamericana. Osorio, A. C. 2007. Clasificacin Microbiana. Universidad de Chile. Pelczar MJ, Chan, ECS, Krieg NR. 1993. Microbiology: Concepts and Applications. 1. Edicin. McGraw-Hill. Pelczar, M.J., Chan, E.C.S. & Krieg, N. 1996. Microbiology. Essentials and applications. 2nd ed. McGraw-Hill. Prescott, L.M., Harley, J.P., Klein, D.A. 1999. Microbiologa. 4. Edicin en castellano. McGraw-Hill/Interamericana. Prescott, et al. 1996. Microbiology. 3 edition. W.C. Brown Publishers Prescott, L.M., Harley, J.P. y Klein, D.A.. 2004. Microbiologa. 5. Edicin. Editorial McGrawHill/Interamericana. Rivera M.C. and Lake J.A. 2004. The ring of life provides evidence for a genome fusion origin of eukaryotes. Nature 431:152-155. Stanier, R.Y.; Adelberg, E.A. e Ingraham, J.L. 1996. Microbiologa. Versin espaola actualizada de la 4 de The Microbial World. Editorial Repla, S.A. Stanier RY, Ingraham JL, Wheelis ML, Painter PR. 1992. Microbiologa. Editorial Revert. Tortora, G.J; Funke, B. R. & Case, L. C. 2001. Microbiology: An Introduction. Eighth ed. Book News, Inc. USA. Tortora GJ, Funke RB, Case CL. 1993. Introduccin a la Microbiologa 3. Edicin. Editorial Acribia, S.A. Espaa. Woese, C. R., O. Kandler, and M. L. Wheelis. 1990. Towards a natural system of organisms: proposal for the domains Archaea, Bacteria, and Eukarya. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 87:4576-4579.
rd

Editorial

17 Departamento de Ingeniera Bioqumica Instituto Tecnolgico de Culiacn

Potrebbero piacerti anche