Universidade Federal de Alagoas - UFAL Centro de Tecnologia - CTEC Curso de Engenharia Qumica

MGDA CORREIA DOS SANTOS

EXTRAO DE DNA

DISCIPLINA: LABORATRIO DE ENGENHARIA QUMICA II PROFESSORA: ANA KARLA DE SOUZA ABUD

MACEI / 2011 0

UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS UFAL CENTRO DE TECNOLOGIA - CTEC

MGDA CORREIA DOS SANTOS

Extrao de DNA

Relatrio

descritivo

sobre

experimento:

Extrao de DNA, apresentado disciplina Laboratrio de Engenharia Qumica II. Orientadora: Ana Karla de Souza Abud

Macei, 15 de Maro de 2011

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RESUMO

O presente relatrio descreve o experimento de extrao de material gentico (DNA) da ameixa. O DNA (cido desoxirribonuclico) uma molcula orgnica que contm a informao que instrui o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos. Existem inmeras tcnicas de extrao de DNA e a escolha dessa tcnica depende da fonte, quantidade, e idade da amostra. A extrao do material gentico possui inmeras aplicaes em reas como medicina, agricultura, criminalstica, entre outras. Na prtica realizada com o objetivo de extrair o DNA da ameixa, foi realizada uma extrao com objetos e reagentes de uso cotidiano e que podem ser encontrados em qualquer cozinha, e os resultados foram satisfatrios para o objetivo proposto pelo experimento, sendo observado a formao de um emaranhado branco de filamentos de DNA da ameixa.

SUMRIO

FUNDAMENTAO TERICA...........................................................................................4 OBJETIVOS..............................................................................................................................7 MATERIAIS E MTODOS....................................................................................................8 RESULTADOS E DISCUSSES...........................................................................................9 CONCLUSO.........................................................................................................................10 BIBLIOGRAFIA.....................................................................................................................11

FUNDAMENTAO TERICA

O DNA o responsvel pelo armazenamento e transmisso da informao gentica que expressa pela produo das variadas protenas que compem um ser vivo. Esta informao copiada ou transcrita nas molculas de RNA, cujas seqncias contm o cdigo para a ordenao especfica de aminocidos de uma cadeia polipeptdica que formaro as protenas. Uma molcula de DNA constituda por duas cadeias que se organizam em uma estrutura de dupla-hlice, sendo que cada cadeia simples de DNA formada por uma molcula do acar desoxirribose, uma base que pode ser adenina, guanina, citosina ou timina e um grupo fosfato. Existem apenas esses quatro tipos de bases no DNA: adenina e guanina pertencem ao grupo das purinas, enquanto que timina e citosina so do grupo das pirimidinas. As molculas de DNA so encontradas dentro das clulas de todos os seres vivos, incluindo plantas, fungos e bactrias. Com exceo das bactrias, nas quais o DNA fica solto dentro da clula, em muitos outros seres vivos ele fica acomodado dentro de um compartimento existente, denominado ncleo. No caso de organismos eucariotos (aqueles que possuem ncleo individualizado por ser envolto por uma membrana, como, por exemplo, seres humanos, outros animais e vegetais), grande parte do DNA est justamente dentro do ncleo das clulas. Para comprovar que realmente existe DNA em todas as clulas vias, temos que tentar retir-lo e visualiz-lo. Protocolos similares so usados nas extraes de DNA de vrias fontes, como amostras de sangue, tecidos, frutas, saliva, etc., e consistem de: Ruptura (fsica e qumica) das membranas celulares para liberao do material gentico; Desmembramento dos cromossomos em seus componentes bsicos: DNA e protenas; Separao do DNA dos demais componentes celulares. Para que haja a ruptura da parede celular, expondo o material gentico das clulas, realiza-se o corte ou esmagamento do material. Para o desmembramento, as molculas de detergente desestruturam as molculas de lipdios presentes nas membranas celulares e o aquecimento favorece a reao, desnaturando as molculas de DNA. A adio de sal ajuda a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado, impedindo que elas precipitem com o DNA. Finalmente, para conseguir isol-lo dos demais componentes, utiliza-se o lcool, pois o 4

DNA insolvel nele e tem menor densidade que os outros constituintes celulares. Quanto mais gelado estiver o lcool, menos solvel o DNA vai estar. Por isso to importante que o etanol seja mantido no freezer ou em um banho de gelo at o momento do experimento. A estrutura de dupla-hlice s pode ser enxergada de modo indireto e com o auxlio de aparelhos sofisticados. Milhares de fitas emaranhadas de DNA podem ser observadas em um experimento de extrao de material gentico de plantas ou frutas.

OBJETIVOS

Verificar como acontece a extrao do DNA da ameixa e identificar a funo de cada um dos reagentes utilizados no procedimento de extrao.

MATERIAIS E MTODOS

a) MATERIAIS:

2 Copos; 2 Tubos de ensaio; 1 Colher; Estante para tubos de ensaio; Pipetador; Pipetas de 3mL; Sal; Detergente; gua filtrada; lcool gelado e lcool a temperatura ambiente; Basto de vidro; Saco plstico do tipo ziploc; Fruta (Ameixa).

b) MTODOS:

Para a extrao de DNA da ameixa: 1. Colocou-se cerca de 5 mL de gua em um copo. Adicionou-se 1/2 colher (ch) de sal e 1/2 colher (ch) de detergente neutro. Misturou-se bem com uma colher at dissolver completamente. 2. Adicionou-se ameixa picada em pedaos bem pequenos soluo anterior. 3. Transferiu-se a amostra para um saco do tipo ziploc e amassou-se a amostra, durante 5 minutos. 4. Filtrou-se a soluo obtida em outro copo, utilizando funil e gaze.

5. Colocou-se 3 mL da soluo obtida em cada um dos 2 tubos de ensaio, adicionando-se 5 mL de lcool gelado em tubo de ensaio e lcool a temperatura ambiente no outro tubo de ensaio.

RESULTADOS E DISCUSSES

O DNA da ameixa foi extrado e pde ser visualizado conforme as figuras 1 e 2.

Figura 1 - Tubo contendo DNA extrado com lcool gelado.

Figura 2 - Tubo contendo DNA extrado com lcool temperatura ambiente.

Cumpriram-se as trs etapas do mtodo para extrao de DNA de clulas de ameixa e o resultado obtido foi formao de um emaranhado branco de filamentos que, no caso do isolamento com lcool gelado, ficou mais prximo superfcie do tubo de ensaio, e, no caso do isolamento com lcool temperatura ambiente, ficou mais prximo ao fundo do tubo de ensaio. Isto evidencia que o DNA , de fato, menos solvel no lcool gelado, pois a formao do emaranhado mais prximo superfcie do tubo de ensaio indica que o DNA est mais

separado dos demais componentes celulares, os quais so mais densos e carregam o DNA para o fundo quando associados a ele. A utilidade prtica de cada um dos reagentes utilizados no experimento foi identificada. O detergente aplicado com a finalidade de desconstruir as molculas de lipdeos que constituem as membranas celulares e, desta forma, o contedo das clulas de ameixa, incluindo as protenas e o DNA, liberado. Em outras palavras, os lipdeos formam complexos com o detergente e precipitam. O sal ajuda a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado, evitando que as mesmas precipitem junto com o DNA. As molculas de DNA possuem carga negativa devido presena do grupo fosfato; logo, as molculas individuais de DNA tendem a se repelir. O sal tambm atua fornecendo ons de carga positiva que neutralizam a carga negativa das molculas de DNA, permitindo que estas se condensem quando em contato com uma soluo alcolica. O lcool, por sua vez, atua na separao do DNA, que menos denso, dos demais componentes celulares, pois o DNA praticamente insolvel no lcool. O procedimento experimental seguido relativamente simples e permite a visualizao clara do emaranhado de filamentos de DNA que se forma. Entretanto, a estrutura de dupla-hlice s pode ser visualizada de modo indireto e atravs de aparelhos sofisticados. O que se observou a olho nu foram milhares de fitas de DNA juntas.

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CONCLUSO

O resultado obtido evidenciou que o DNA das clulas de ameixa menos solvel no lcool gelado do que no lcool temperatura ambiente. O emaranhado branco de filamento de DNA que se forma fica mais prximo superfcie do tubo de ensaio no caso da extrao com lcool gelado. O lcool temperatura ambiente no separa o DNA dos outros componentes celulares mais densos to eficientemente quanto o lcool gelado. Existem diversos mtodos de extrao de DNA e pudemos realizar um desses mtodos de forma simples e satisfatria com materiais que podem ser encontrados em qualquer cozinha.

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BIBLIOGRAFIA

[1]

EDUCAR.

Extrao

do

DNA

da

cebola.

Disponvel

em:

<http://educar.sc.usp.br/licenciatura/2003/siteprojeto/2003/2_extracao_DNA_cebola_com_pl ano.pdf>. Acesso em 03 de Maro de 2011 s 21h.

[2]

CIENCIAMAO.

Extrao

do

DNA

do

morango.

Disponvel

em:

<http://educar.sc.usp.br/licenciatura/2003/siteprojeto/2003/2_extracao_DNA_cebola_com_pl ano.pdf>. Acesso em 03 de Maro de 2011 s 21h15min. Extrao de DNA de Morangos.

[3]

BIOINFO.

Disponvel

em:

<http://www.bioinfo.ufpb.br/difusao/pdf/extracaodednademorango.pdf>. Acesso em: 03 de Maro de 2010 s 21h30min. [4] ABUD, A. K. S. Notas de Aula de Laboratrio de Engenharia Qumica II. Universidade Federal de Alagoas. Macei-AL, 2011.

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