UNIVERSIDAD AUTONOMA COAHUILA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LABORATORIO DE ORGANICA III DRA: AID SANZ OBTENCIN DE SALICILATO DE METILO

EQUIPO: MARTINEZ CARTAGENA MANUEL EDUARDO MELNDEZ GONZLEZ PERLA CECILIA 5 SEMESTRE QUMICO

RESPONSABLE: MANUEL MARTINEZ CARTAGENA

05 DE OCTUBRE DEL 2010, SALTILLO COAHUILA

Objetivo Realizar la sntesis del frmaco salicilato de metilo, mediante la sntesis orgnica, en dos pasos, de compuestos ms simples. Introduccin (1)Una de las funciones ms importantes de la qumica, es la sntesis, consiste en obtener compuestos qumicos a partir de sustancias ms simples, de una manera ms fcil y rpida. Uno de los objetivos es desarrollar mtodos ms baratos y de buena calidad. La farmacutica tiene como labor principal la innovacin de frmacos. Un frmaco es toda sustancia qumica purificada para la utilizacin en la prevencin, diagnostico, tratamiento, nitigacion y cura de la enfermedad. La innovacin es esencial ala hora de atender problemas de salud que aun no han sido resueltos, tambin para el control o mejoramiento de otros problemas de salud. Nosotros proponemos sintetizar el Salicilato de metilo que tiene propiedades farmacolgicas y actividades analgsicas, antiinflamatorias y rubefaciente pero es de uso externo exclusivamente ya que por va oral puede ser muy toxico. Es til aplicado en pomadas y cremas, utilizndolo en dolores musculares. Se elaboraron estudios para saber la penetracin que tenia el salicilato de metilo en la sangre, usando a las ratas para los estudios y as medir la cantidad de sales de salicilato en la sangre, en los tejidos que rodeaban el sitio y en el sitio de aplicacin. Los estudios revelaron que hay una penetracin directa de los silicatos en el msculo del sitio en tratamiento. El salicilato de metilo es un ingrediente de varios medicamentos, pomadas y cremas. Entre ellos podemos destacar el Ultra bengue en gel, que es un conocido medicamento ulitilizado en aliviar los dolores e inflamaciones musculares. La preparacin de salicilato de metilo se llevar a cabo mediante una esterificacin de Fischer del cido saliclico con metanol, catalizada por cido sulfrico. En estas condiciones, la reaccin supone un proceso reversible, en el que la posicin de equilibrio no es favorable a la formacin del ster. Para desplazar el equilibrio en la direccin deseada,

un procedimiento muy habitual consiste en eliminar el agua formada por destilacin azeotrpica utilizando un Dean- Stark, llevando a cabo la reaccin en presencia de un ligero exceso de alcohol. De esta forma, pueden conseguirse elevados rendimientos partiendo de reactivos baratos y asequibles como son los cidos carboxlicos y alcoholes. A lo largo de la propuesta iremos destacando las propiedades del salicilato de metilo, as como sus contradicciones y beneficios farmacolgicos

Antecedentes (2)La palabra farmacia tiene su origen en la palabra griega pharmakon que significa "remedio". No obstante, la aplicacin de remedios para sanar o, al menos, para aliviar el sufrimiento, es tan antiguo como la humanidad. Por eso es muy difcil determinar cundo comienza la prctica farmacutica. Los medicamentos han sido utilizados desde la prehistoria. Las civilizaciones de la antigua India, China, el Mediterrneo y Oriente. Despus descubrieron y emplearon gran nmero de plantas medicinales y minerales, entre las que se cuentan algunas, como la ipecacuana, que se siguen utilizando hoy da. La primera relacin de frmacos con instrucciones para su elaboracin, apareci en la actual ciudad alemana de Nremberg en 1546. Sin embargo, el estudio de los frmacos, no cobr vigencia como profesin independiente hasta el siglo XVII. No fue hasta principios del siglo XIX los boticarios, qumicos o los propietarios de herbolarios obtenan sus materias primas (cortezas de plantas, gomas, minerales, etc.) localmente o en otros continentes, adquirindolas a travs de los especieros y comerciantes. A partir de estas materias primas elaboraban los jarabes, ungentos, tinturas, pldoras, etc. algunos profesionales confeccionaban mayor cantidad de preparados de la que necesitaban. Un frmaco, de acuerdo con la farmacologa, es cualquier sustancia que produce efectos medibles o sensibles en los organismos vivos y que se absorbe, puede transformarse, almacenarse o eliminarse. Esta definicin se acota a aquellas sustancias de inters clnico, es decir aquellas usadas para la prevencin, diagnstico, tratamiento, mitigacin y cura de enfermedades , y se prefiere el nombre de txico para aquellas sustancias no destinadas al uso clnico pero que pueden ser absorbidas accidental o intencionalmente; y droga para aquellas sustancias de uso social que se ocupan para modificar estados del nimo. Los frmacos pueden ser sustancias creadas por el hombre o producidas por otros organismos y utilizadas por el hombre. De esta forma, hormonas, anticuerpos, interleucinas y vacunas son considerados frmacos al ser administrados en forma farmacutica. En resumen, para que una sustancia biolgicamente activa se clasifique como frmaco, debe administrarse al cuerpo de manera exgena y con fines mdicos.

Los frmacos se expenden y utilizan principalmente en la forma de medicamentos, los cuales contienen el o los frmacos prescritos por un facultativo en conjunto con excipientes. El salicilato de metilo fue aislado por primera vez por extraccin de la Gaultheria procumbens, por lo que se le conoce tradicionalmente como aceite de gaulteria. Debido a sus propiedades analgsicas y antiinflamatorias, se emplea fundamentalmente en diversos linimentos y pomadas de uso tpico

 MATERIAL 1. Matraz bola de 250 ml 2. Equipo de reflujo 3. Bao maria 4. Matraz Erlenmeyer de 150 ml 5. Vaso de precipitados de 25 (2) 6. Probeta de 25 ml 7. Bomba de vaco 8. Embudo de filtracin rpida 9. Termmetro de 300 C 10. Parrilla de calentamiento 11. Soporte Universal 12. Embudo de separacin 13. Matraz Erlenmeyer de 100 ml 14. Matraz Erlenmeyer tarado 15. Vidrio de reloj 16. Pipeta 5 ml REACTIVOS 1. Acido Saliclico 2. Metanol anhidro 3. cido sulfrico 4. Bicarbonato de sodio 5. Cloruro de sodio 6. Sulfato de magnesio EQUIPOS A UTILIZAR 1. Equipo de reflujo

Propiedades fsicas y qumicas de los reactivos.

(3) ACIDO SALICLICO o o o o o o o o Estado de agregacin: Slido Apariencia: Incoloro Punto de fusin: 159 C Punto de ebullicin: 211 C Acidez (pKa): 4.19 Formula molecular: C7H6O3 Masa: 138.12 u Nombre IUPAC: Acido-2-hidroxibenzoico
O OH

OH

METANOL

o o o o o o o o o o

Estado de agregacin: Lquido Apariencia: Incoloro Densidad: .7918 g/cm3 Punto de fusin: -97.16C Punto de ebullicin: 64.7C Masa: 32.04 u Acidez (pKa): 15.5 Punto de inflamilidad: 12C Formula: CH3OH Solubilidad en agua: Totalmente miscible

H H H

H O

ACIDO SULFURICO o o o o o Estado de agregacin: Lquido Densidad: 1.8 g/cm3 Masa: 98.08 u Punto de fusin: 10C Punto de ebullicin: 337C
O H O S O O H

BICARBONATO DE SODIO o o o o o Estado de agregacin: Slido Apariencia: Blanco cristalino Masa: 84 u Punto de descomposicin: 543 K Solubilidad en agua: 10.3 g/100 g de H2O
HO Na
+

CLORURO DE SODIO o o o o o o o Estado de agregacin: Slido Apariencia: Incoloro Densidad: 2.2 g/cm3 Masa: 58.4 u Punto de fusin: 801C Punto de ebullicin: 1.465C Solubilidad en agua: 39.5 g por 100 ml de agua
Na Cl

SULFATO DE MAGNESIO ANHIDRO o Peso molecular: 120.36 g/mol (anhidroso)246.48 g/mol (Heptahidratado) o Apariencia: Slido blanco cristalino o Solubilidad en agua: 25.5 g por 100 ml (20C) o Solubilidad en etanol: algo insoluble (anhidro) o Punto de fusin: 1124C

SALICILATO DE METILO o o o o o o o o o o . Formula: C8H6O3 Peso molecular: 152.15 Aspecto: Liquido transparente e incoloro Olor: caracterstico Punto de ebullicin: 222C Punto de fusin: -8C Punto de inflamacin: 96C Temperatura de auto ignicin:450C Densidad:1.182 g/cm3 Solubilidad: inmiscible en agua
O CH3

OH

(4) PRECAUCIONES Y CONTRADICCINES o No se debe aplicar en zonas prximas a ojos, mucosas y heridas. o Est contraindicado en caso de alergia a salicilatos. o Se debe utilizar con precaucin en el embarazo y la lactancia. No se puede utilizar en neonatos y nios menores de 7 aos. o REACCIONES ADVERSAS o Pueden aparecer reacciones alrgicas, eritema y escozor en la zona de aplicacin. La absorcin sistmica en caso de aplicacin cutnea sobre reas extensas de la piel puede provocando los efectos propios de salicilatos. o CONSIDERACIONES FARMACETICAS o Se usan en pomadas en cremas en concentraciones del 10 al 25%. o Se debe conservar protegido de la luz

MEDIDAS DE SEGURIDAD o Durante toda la prctica se deben usar bata, guantes, zapatos cerrados y lentes de seguridad. DESECHOS TOXICOS Almacenamiento y manejo ACIDO SULFURICO o Evitar el contacto del cido con el agua o Almacenar separado de carburos, cloraros, fulminatos, nitratos, pricatos, metales en polvo, materiales oxidantes y combustibles. o Almacenar en lugares aislados no expuesto a la luz solar o Almacenar en envases de fierro o Los desechos del cido se neutralizan y llegar a un pH entre 6 y 9.

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SALICILATO DE METILO o Recipientes bien cerrados. En local bien ventilado. Alejado de fuentes de ignicin calor. o Cumplir con la legislacin local vigente sobre proteccin del medio ambiente. CLORURO DE SODIO o En el manejo y disposicin no hay precauciones o Los productos del residuo pueden permanecer en recicipiente vacio.

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PROCEDIMIENTO Primera sesin: En un matraz de fondo redondo se introducen 10 g de cido saliclico y 50 ml de metanol. A continuacin se aaden con cuidado 10 ml de cido sulfrico concentrado, agitando suavemente para mezclar bien los reactivos. El conjunto se calienta a reflujo durante 60 minutos. Segunda sesin: Tras dejar enfriar, se aaden al matraz 140 ml de agua y se transfiere la mezcla a un embudo de decantacin. Extraer la mezcla con dos porciones de 40 mL de CH2Cl2. Las fases orgnicas combinadas se lavan en el mismo embudo con 15 mL de una disolucin acuosa de bicarbonato sdico al 5%, agitando suavemente mientras se observe desprendimiento gaseoso. La fase acuosa se separa y se repite la extraccin de la fase orgnica con la disolucin acuosa de bicarbonato sdico al 5% hasta pH bsico de la aguas de lavado. La fase orgnica se lava con 30 mL de salmuera. (El pH de las aguas de lavado debe ser neutro, de lo contrario habr que repetir el lavado).

Tercera sesin: Se saca la fase orgnica del embudo de decantacin y se transfiere a un Erlenmeyer para su secado con cloruro clcico escoriforme. Se filtra y se evapora el disolvente en el rotavapor. Finalmente, el producto se purifica por destilacin a presin reducida.

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TIEMPOS ESTIMADOS DE REACCIN Primera Sesin: Obtencin de los reactivos y el material, adems de la preparacin de ste. 20 min Mezcla de los reactivos. 5 minutos Tiempo de reflujo. 60 minutos Tiempo de la primera sesin: 85 minutos.

Segunda Sesin: Tiempo en enfriar los productos de la reaccin. 10 minutos Separacin del ster. 15 minutos Lavado del ster. 10 minutos Tiempo de la segunda sesin: 25 minutos. Tercera Sesin: Secado del ster. 10 minutos Filtrar el ster. 10 minutos Destilar el ster 40 minutos Tiempo de la tercera sesin: 60 minutos. TIEMPO TOTAL DE LA REACCIN 180 MINUTOS = 3 HORAS

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DIAGRAMA DE FLUJO PRIMERA SESIN

5g de cido saliclico

25mL de metanol

agregar 10mL H2SO4 Agitar

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Colocar a reflujo.

SEGUNDA SESIN:

Se dejo enfriar H2O

Se aaden 140mL de

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Se extraen las mezclas con porciones de cloruro de metilo

Se hace un lavado con bicarbonato sodico. y se lava con salmuera.

Se seca con cloruro calcico.

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Se filtra. Y se pasa al rotavapor.

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MECANISMO DE REACCIN

Primera Sesin. 1.- Al acido saliclico se le agrego metanol, al mezclarse hay formacin de puentes hidrogeno.
O OH H3C H O OH
+

OH O O
+

H3C

OH

O H OH

2.- Ala mezcla anterior se le agrega cido sulfrico. En esta parte que es la ms importante, es la formacin del intermediario Carbo catinico por la protonacin de la funcin carboxilo.
OH O OH OH O S H O O O H C
+

OH OH

1 HO HO O CH3 OH H HO H3C OH

H3C

OH

H3C

OH OH

3.-La consideracin general es que tenemos un exceso de metanol presente dado que por mol d se requieren dos moles de metanol para realizar la formacin del intermediario hidrato.

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Segunda Seccin. Las fases fueron lavadas con bicarbonato de sodio que desprendi un gas de dixido de carbono, se lavaron con salmuera y se le agrego cloruro de metilo para separar las fases. Para eliminar excesos de agua se uso como desecador cloruro calcico.
PASO 4
OH HO O OH H O CH3 OH HO O
+

CH3

H
+

O H H

HO CH3

CH3

PASO 5
OH O CH3 CH3 OH O O
+

OH

HO

O
+

CH3

OH

O H H H2O

PASO 6
OH CH3 OH O O
+

CH3

HO

CH3

O H H3C O
+

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RENDIMIENTO DE LA REACCION
O OH O O H3C OH OH CH3

metanol 25 ml

+
OH

H2O

ACIDO SALICILICO 5g

0.03610 moles (5.49g) obtenidas de salicilato de metilo (teorico)

experimentalmente las moles obtenidas: 0.01558 moles (2.37g)

RENDIMIENTO DE REACCIN %R= (Moles experimentales/ moles teoricas) * 100

%R=(0.01558/0.03610)*100 =43.16% de rendimiento

NOTA: EL SALICILATO DE METILO es un un producto liquido de densidad 1,1879 g/ml. Para calcular la masa unicamente se realizo una conversion entre el volumen obtenido (2ml) a la masa equivalente.

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Costos. REACTIVOS Acido Saliclico cido Sulfrico Bicarbonato de sodio Cloruro de sodio Cloruro de metilo Cloruro calcico Metanol COSTO 1g 1 UTLIZADO ml $0.51 5g $0.61 10 ml $0.06 $0.768 $0.726 $0.35 $0.03 5g 6g 5g 5g 25ml TOTAL COSTO TOTAL $2.55 $6.1 $0.3 $27.64 $18.15 $1.75 $0.75 $57.24

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Observaciones Primera sesin: El cido saliclico es de color blanco, al mezclarlo con metanol que es incoloro se disolvi, quedando una mezcla incolora. Le agregamos cido sulfrico, al agregarlo sabemos que se forman puentes de hidrogeno en la mezcla, se mezclaron bien los reactivos. Transferimos la mezcla a un equipo de reflujo durante 60 minutos, hubo un error, confiamos en que el material estaba limpio, y no tuvimos la precaucin de lavar el agitador magntico, y este le dio una coloracin amarilla a la mezcla. En este equipo los lquidos con menor punto de ebullicin se convierten en vapor, y los vapores de sustancias con mayor punto de ebullicin pasan al estado lquido.

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Segunda sesin: La mezcla se almaceno durante una semana, se aaden al matraz 140 ml de agua que diluyen la muestra despus lo transferimos a un embudo de decantacin. Lavamos la mezcla con cloruro de metilo y la mezcla se separo en dos fases, volvimos a lavar las dos fases con bicarbonato, la cual produjo un desprendimiento de gas, por un tiempo. Hicimos otro lavado con salmuera y dejamos reposar las dos fases para que se separaran.

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Tercera sesin: Se dejo reposar durante dos semanas la mezcla, al chocarla pudimos observar la formacin de dos fases, mas definida que anteriormente, sacamos la fase orgnica y le agregamos unos gramos de cloruro calcico, que usamos como desecador, para absorber algunas molculas de agua. Despus filtramos la base para obtener ya el salicilato de metilo pero aun con residuos lquidos, lo pasamos al rotavapor y obtuvimos el salicilato de metilo.

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Caracterizacin del salicilato de metilo

Cromatografa en capa delgada: OBJETIVO: DETERMINAR SI LA SUSTANCIA SINTETIZADA DIFIERE DEL COMPUESTO DE PARTIDA RESEA TEORICA: (5) Constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posicin de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un componente. Se define como: RF = distanciadelcompuestodesdeelorigen distanciadelamuestradesdeelorigen /

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7. Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo. Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separacin mnima. En este caso no se pueden usar reveladores qumicos, ya que alteraran los compuestos, sino indicador ultravioleta. Tambin se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto (X), que tenga una posicin de desarrollo conveniente; todos los dems compuestos sobre la placa se relacionan con ste. De esta manera se tiene el, RX , ya que: Rx = Distanciarecorridaporelcompuesto / distanciarecorridaporelcompuestodereferencia(X)
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ANALISIS MATEMATICO RF1= 2.4/5.7=0.42 RF2=1.5/5.7=0.26 RF3=5.7/5.7=1 RFAC.SALICILICO=2.6/5.7=0.456

ESTOS RESULTADOS DEMUESTRAN LA PRESCENCIA DE TRES COMPUESTOS DIFERENTES Y QUE LA SUSTANCIA PRECURSORA ES MUY PARECIDA A UNO DE LOS COMPUESTOS OBTENIDOS LO CUAL NOS HACE PENSAR EN REACOMODOS Y SUSTITUCIONES QUE NO SOLO DIERON LUGAR AL SALICILATO DE METILO SINO A PRODUCTOS DIFERENTES CUYOS RF PRESENTAN UNA SEPARACION CONSIDERABL POR UN LADO UN RF=1 Y POR OTRO RF=0.26 (LOS CUALES PRESENTAN FLUORESCENCIAS).

PRUEBAS DE SOLUBILIDAD Aclaracin: el salicilato de metilo es un compuesto lquido con lo que tambin podra ser considerado disolvente en ciertas proporciones Solubilidad en agua: presenta pobre solubilidad en agua a diferentes porciones teniendo mejor disociacin en la proporcin 2:10 Solubilidad en etanol: se disuelve a cualquier proporcin en etanol Solubilidad en metanol: se disuelve a cualquier proporcin Solubilidad en hexano: en proporcin 1:2 Solubilidad en cido sulfrico: en cualquier proporcin Solubilidad en bases inorgnicas: presenta solubilidad que mejora con el aumento de basicidad

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Esta propiedad del salicilato de metilo de poder disolverse en una variada cantidad de sustancias reside en su disfuncionalidad por un lado un carbonilo y en posicin orto un hidroxilo. Una molcula no muy grande por lo cual su efecto estrico es moderado y

Ensayo del salicilato Tcnica. A una mezcla de 1 ml. de alcohol metlico puro y unos 0.25 gr. de cido saliclico se aade 1 ml. de cido sulfrico concentrado. Se calienta suavemente durante unos minutos, despus se enfra y se hecha la mezcla sobre 10 ml. de agua fra contenidos en un pequeo vaso de precipitados. Obsrvese el olor del salicilato de metilo. Observacin. Se obtuvo un precipitado blanco gelatinoso de olor a ungento, agradable

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Conclusiones:
El salicilato de metilo obtenido en la sntesis presenta compuestos de reacciones colaterales, es decir que en la caracterizacin se apreciaron dos sustancias presentes junto con el frmaco final. Esto se debe a las condiciones de reaccin en las cuales se trabajo, por un lado un error contamino la muestra en una etapa del mecanismo donde las sustancias precursoras comenzaban a formar el salicilato, esto por tanto es una consecuencia que genera la presencia de sustancias desconocidas en el medio de reaccin inicial formando dos subproductos. Otra explicacin factible reside en pensar que no todo el acido saliclico formo el ester metlico y una parte se hidrolizo a quedar en forma de hidrato y otra pequea cantidad regreso a acido saliclico, esto se corrobora en la semejanza del Rf encontrado para el acido saliclico y el Rf del compuesto desconocido. La sntesis del salicilato de metilo por va de esterificacin de Fischer es un mecanismo sencillo que permite obtener buenos rendimientos en las condiciones de reaccin adecuadas por tratarse de una reaccin en la cual los intermediarios son fciles de manipular y no requieren de catalizadores costosos ni tiempos muy largos en obtencin. Otro criterio importante fue la prueba del olor a salicilato la cual se utiliza como mtodo cualitativo en determinacin de alcoholes y que nos da la certeza de que la presencia del salicilato era mayoritaria en el producto final debido a esta caracterstica organolptica.

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Artculos cientficos sobre farmacologa

Journal of the Mexican Chemical Society
Sociedad Qumica de Mxico
editor@jmcs.org.mx

ISSN (Versin impresa): 1870-249X ISSN (Versin en lnea): 1665-9686 MXICO

2004 Hctor Luna APLICACIN DE LA BIOCATLISIS A LA PREPARACIN DE INTERMEDIARIOS PARA LA SNTESIS DE FRMACOS Journal of the Mexican Chemical Society, ao/vol. 48, nmero 003 Sociedad Qumica de Mxico Mexico, Mxico pp. 211-219

Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina y el Caribe, Espaa y Portugal Universidad Autnoma del Estado de Mxico
http://redalyc.uaemex.mx

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Rev. Soc. Qum. Mx. 2004, 48, 211-219

Revisin

Aplicacin de la biocatlisis a la preparacin de para la sntesis intermediarios de frmacos

Hctor Luna
Departamento Sistemas Biolgicos, Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Xochimilco. Calzada del Hueso Quietud, Mxico, D.F. CP 04960. Tel (55) 5483-7255, Fax: (55) 5483-7237, e-mail: Col. Villa 1100, lchm1964@correo.xoc.uam.mx Recibido el 5 de julio del 2004; aceptado el 28 de agosto del 2004
Resumen. La utilidad de las biotransformaciones para la preparacin de compuestos orgnicos est bien establecida; debido no solo a las caractersticas de regio-, quimio- y enantioselectividad que las reacciones enzimticas presentan, sino tambin por la bondad de las condiciones de reaccin bajo las que se llevan a cabo. Actualmente la aplicacin de la biocatlisis ha atravesado la frontera acadmica encontrando un campo frtil de accin en la industria farmoqumica, especialmente para la manufactura de compuestos enantiopuros. En este artculo se describen algunos problemas sintticos resueltos a travs del uso de biotransformaciones en la preparacin de intermediarios para la sntesis de frmacos. Palabras clave: Biocatlisis, frmacos, biotransformaciones, intermediarios Abstract. The utility of biotransformations for organic compounds preparation is well established; due not only to their regio-, chemoand enantioselective characteristics, but also to the softness of the reaction conditions under which they are carried out. Nowadays biocatalysis has crossed the academic boundary, founding a special field of action in the pharmochemical industry, particularly in the manufacture of enantiopure compounds. Among the used enzymes are oxidoreductases, lyases, and specially lipases; they are used as isolated or immobilized enzymes as alive microorganisms. In this article some examples of how synthetic problems were solved through the use of biotransformations in the preparation of drugs intermediates are described. Key words: Biocatalysis, drugs, biotransformations, intermediates.

Introduccin
La quiralidad es un factor determinante en la eficacia de muchos frmacos, agroqumicos y aditivos para alimentos, ya que de ello depende su actividad biolgica, por ello la produccin de un solo enantimero de estos compuestos quirales es muy importante en la industria agroqumica, de alimentos y especialmente farmacutica [1]. Los compuestos enantiopuros pueden producirse por mtodos qumicos o qumico-enzimticos, siendo los procedimientos catalticos de ambas metodologas los preferidos. Las ventajas que los procedimientos biocatalticos tienen sobre los qumicos se basan en que las reacciones catalizadas por enzimas son frecuentemente ms regio-, quimio- y estereoselectivas. Aqu sera pertinente definir que las biotransformaciones involucradas en los procesos biocatalticos, son conversiones de sustratos no naturales catalizadas por enzimas, ya sean aisladas o presentes en los microorganismos que las contienen. Aunque la principal aplicacin de las biotransformaciones en sntesis orgnica est en la preparacin de compuestos enantiopuros, estas tambin se usan para efectuar transformaciones de grupos funcionales aquirales; ya que las biotransformaciones se llevan a cabo generalmente a temperatura ambiente y presin atmosfrica, evitndose con ello el uso de condiciones de reaccin extremas, las cuales pudieran causar isomerizaciones, racemizaciones, epimerizaciones o transposiciones. Las biotransformaciones tambin encuentran aplicacin en la preparacin de algunos compuestos en los que la transformacin qumica es, hasta ahora, imposible.

Adicionalmente, cuando el biocatalizador, microorganismos o enzimas aisladas, estn inmovilizados se pueden reciclar varias veces sin prdida significativa de sus propiedades catalticas. Las enzimas para la biocatlisis pueden usarse de varias maneras, pueden ser del tipo salvaje, recombinadas, o genticamente modificadas para incrementar su actividad o especificidad. Una o ms enzimas que llevan a cabo los pasos sintticos requeridos pueden estar presentes en las clulas completas de un microorganismo y actuar simultneamente sin interferencias. El microorganismo involucrado puede estar en pleno crecimiento, en fase estacionaria o inmovilizado. Alternativamente, las enzimas libres pueden estar en solucin, en un reactor de membrana, como suspensin, cross-linked o inmovilizadas. El medio de reaccin puede ser acuoso, orgnico o en dos fases [2-9]. Por otro lado, con los avances en la ingeniera gentica, las enzimas pueden sobreexpresarse haciendo los procesos biocatalticos ms econmicos y eficientes; adems los avances en la modificacin estructural de las enzimas permite la creacin de nuevas molculas proticas con actividades catalticas hechas a la medida de las necesidades, por ejemplo la preparacin de enzimas termoestables o estables a cierto pH, por medio de la mutagnesis aleatoria o dirigida. Numerosos artculos de revisin han sido publicados sobre el uso de enzimas en sntesis orgnica [10-24], en este artculo se describen algunos ejemplos de la aplicacin de la biocatlisis en la preparacin de intermediarios importantes en la sntesis de frmacos. Cabe aclarar que en ningn momento se pretende que

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esta revisin sea exhaustiva, solo se muestran algunos ejemplos interesantes de la aplicacin de las biotransformaciones, especialmente en la preparacin industrial de frmacos.

Aplicaciones
El Omapatrilat (1), es un frmaco antihipertensivo que acta como inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina [25]. Para su sntesis se sigui una estrategia convergente para la cual se requirieron dos intermediarios (2 y 5), los cuales se prepararon por rutas biocatalticas independientes; despus de su condensacin, seguida de una reaccin de ciclizacin se produjo el compuesto 10, el cual ya contiene la estructura bicclica bsica de 1. El primer intermediario es la (S)-6-hidroxinorleucina, 2, para la cual se han reportado las rutas biocatalticas mostradas en el Esquema 1. En la Ruta A se efectu una aminacin reductiva usando la glutamato deshidrogenasa de hgado bovino [26], a escala preparativa y con una concentracin de substrato de 100 g/L, se tuvo un rendimiento del 92% y un exceso enantiomrico (ee) mayor al 99%. El procedimiento anterior present el inconveniente de que el cido 2-oxo-6-hidroxihexanoico, 3, requiere de varios pasos para su preparacin. Por lo anterior, se desarroll la Ruta B (Esquema 1); en esta alternativa el tratamiento de la 6-hidroxinorleucina racmica, rac2, con una D-aminocido oxidasa de rin porcino y catalasa

de hgado de bovino o con clulas de T. variabilis (conteniendo ambas enzimas) produjo una mezcla de (S)-2, con un >99% ee, y el cetocido 3; dicha mezcla de reaccin se someti a la aminacin reductiva de la Ruta A, llegando a obtenerse un 97% de rendimiento de (S)-2 con un 98% ee, a partir de la norleucina racmica. El segundo intermediario, el cido (S)-2-amino-5-(1,3dioxolan-2-il)-pentanoico, 5, para cuya preparacin se requieren 8 pasos qumicos, fue preparado a travs de la aminacin reductiva mostrada en el Esquema 2, utilizando para el proceso clulas de Escherechia coli, secadas con calor y clonadas con la fenilalanindeshidrogenasa (PDH) de Thermoactinomyces intermedius y clulas igualmente secadas de Candida boidinii [27]. El proceso optimizado produjo 197 Kg de 5, en tres lotes de 1600 L, a una concentracin de sustrato del 5%, con un rendimiento promedio de 91% y un ee del 98%. Con la misma finalidad se gener un biocatalizador por medio del desarrollo de una cepa recombinante de Pichia pastoris conteniendo la fenilalanindeshidrogenasa (PDH) de T. intermedius y una formatodeshidrogenasa (FDH) endgena, ambas inducibles con metanol. El proceso result con la produccin de 15.5 Kg de 5 con 97% de rendimiento y un ee >98%, en un lote de solo 180 L, usando una concentracin de 10% del substrato 4 (Esquema 2). El cetal cclico 5 fue posteriormente transformado al dimetilacetal 6, el cual posteriormente se utiliz para la preparacin del cido [4S( 4 a, 7 a, 1 0 ab ) ] -1 -o c ta hid r o -5 -o xo -4 - {[ ( fe n il me to x i)

Esquema 1

Esquema 2

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carbonil]amino}-7H-piridino-[2,1-b][1,3]-tiazepin-7-carboxlico, 10, como se muestra en el Esquema 3. En otra ruta alternativa para preparar al compuesto bicclico 10, se utiliz la fcilmente disponible L-lisina, para generar al intermediario 11 (Esquema 4), equivalente sinttico -aminotransde 8; cuya ciclizacin promovida por la L-lisina ferasa (LAT) de Sphingonomas paucimobilis SC16113 sobrexpresada en E. coli [28], seguida de la reaccin insitu con tributilfosfina produjo el intermediario 11a, la posterior ciclizacin con cido trifluoroactico (TCA) produjo 10, con un rendimiento del 70% M. En un estudio para la preparacin de compuestos antagonistas del tromboxano A 2 (TxA2), el cual es un vasoconstrictor con actividad antiagregatoria de plaquetas, se encontr que la lactona 14 y el lactol 15 son intermediarios verstiles para la preparacin de una serie de derivados que condujeron

al cido {1S-[1 ,2 (Z),3 ,4 ]}-7-{3-[(2-heptanoilaminoacetilamino)metil]-7-oxabiciclo[2,2,1]hepta-2-il}-hepta-5-enoico, 12, como un nuevo agente cardiovascular, til para el tratamiento de enfermedades trombticas (Esquema 5) [29]. Una de las estrategias utilizadas para la preparacin del lactol 15 y lactona 14, fue la oxidacin biocataltica del diol meso, (exo,exo)-7-oxabiciclo[2,2,1]heptan-2,3-dimetanol, 13. Aunque esta bioxidacin ya haba sido reportada anteriormente [30], un estudio ms profundo encontr que una suspensin (10% P/V, de clulas hmedas) de Nocardia globerula ATCC21505 produjo un 70% de rendimiento molar de la lactona 14 con 96% ee, a una concentracin del sustrato del 5 g/L [31]. Por otro lado, una suspensin de clulas de Rhodococcus sp. ATCC15592, a la misma concentracin de sustrato produjo un rendimiento global de 46% M de una mezcla del lactol 15, y la lactona 14, con 96.7 y 98.4% ee respectivamente.

Esquema 3

Esquema 4

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En una segunda aproximacin, partiendo del mismo diol meso 13, se emple una reaccin de asimetrizacin enzimtica de su dister 16. Para ello se prepar el diacetato 16, el cual sometido a hidrlisis con la lipasa inmovilizada PS-30 produjo el monoacetato de configuracin S en un rendimiento del 75% M y >99% ee, en sistema de reaccin bifsico y a una concentracin de substrato de 5g/L. La enzima inmovilizada se reutiliz por cinco ciclos sin prdida de eficiencia ni esteroselectividad. El monoacetato fue entonces convertido al lactol 15 va hidrlisis y oxidacin qumicas [32]. Desde la introduccin en la teraputica para la hipertensin del Diltiazem, 18, este ha presentado el inconveniente de su corta duracin de efecto por ello se han buscado modificaciones estructurales que promuevan una mayor duracin del efecto. En esa direccin se ha encontrado que el (cis)-3-

(acetoxi)-1-[2-(dimetilamino)etil]-1,3,4,5-tetrahidro-4-(4metoxifenil)-6-trifluorometil)-2H-1-benzazepin-2-ona, 19, presenta un efecto ms prolongado y que adems es ms potente. El intermediario clave en la sntesis de 19 fue la (3R-cis)1,3,4,5-tetrahidro-3-hidroxi-4-(4-metoxifenil)-6-(trifluorometil)-2H-1-benzazepin-2-ona, 20; la cual fue preparada va una reduccin microbiana estereoselectiva del compuesto 21, el cual se encuentra como una mezcla de enantimeros a travs de un tautomerismo ceto-enol. En dicho equilibrio la forma cetnica, racmica (21a y 21c), es la preferida (Esquema 6). Una evaluacin de microorganismos condujo a encontrar que Nocardia salmonicolor SC6310 es capaz de biocatalizar la trasformacin selectiva de 21c a 20 en 96% de rendimiento y 99.8% ee, a una concentracin de 2 g/L de sustrato [33].

Esquema 5

Esquema 6

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El grupo funcional feniletanolamino est presente en muchos compuestos con actividad biolgica, entre ellos esta el -bloqueador. Se ha determinado que el (R)-Sotalol, 24, un enantimero R es 50 veces ms activo que el enantimero S [34] y por ello se ha propuesto a la clorhidrina 23 como un precursor adecuado para la preparacin enantioselectiva del (R)-Sotalol (Esquema 7). Despus de probar una serie de microorganismos se encontr que Hansenula polymorpha ATCC26012 cataliza la reduccin enantioselectiva del carbonilo en el 4-[(2-cloroacetil)-fenil]-metansulfonato, 22, produciendo el intermediario deseado, (R)-23, en un 95% de rendimiento y con >99% ee [35]. En otro ejemplo de reduccin enantioselectiva de un grupo carbonilo, el 4-cloro acetoacetato de metilo, 25, es biotransformado al cido (S)-4-cloro-3-hidroxibutanico, 26, por una suspensin de clulas de Geotrichum candidum SC5469

[36], en 95% de rendimiento y 96% ee (Esquema 8). El hidroxister quiral ha sido utilizado para sintetizar al compuesto 27, el cual es un inhibidor de la hidroximetilglutaril-CoA reductasa. El aislamiento, purificacin e inmovilizacin de la oxidoreductasa de G. candidum involucrada condujo al mejoramiento de la biotransformacin, llegandose a obtener (S)-26 en un rendimiento del 90% y un exceso enantiomrico de 98% ee. Las epxido-hidrolasas catalizan la hidrlisis enantioselectiva de epxidos racmicos a los correspondientes diol y epxido remanente, quirales. Se ha reportado que el (S)-1(2,3-dihidrobenzo[b]furan-4-il)-1,2-oxirano, 29, es un intermediario importante para la preparacin de numerosos prospectos de frmacos. Aunque se han encontrado varios microorganismos capaces de efectuar la transformacin deseada (Esquema 9), existe un problema de estereoselectividad debido a que la hidrlisis espontnea del epxido en el medio de

Esquema 7

Esquema 8

Esquema 9

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reaccin puede ocurrir, aunque sta puede ser reducida al efectuar la reaccin a pH >8. Por ello fue necesario encontrar microorganismos capaces de catalizar la hidrlisis del epxido racmico ms rpido que lo que ocurre la reaccin qumica. Despus de una amplia bsqueda de microorganismos se encontr que dos cepas de Aspergillus nger (SC16310 y SC16311) y Rhodotorula glutinis SC16293 hidrolizan selectivamente el epxido 28, de configuracin R dejando al epxido, (S)-29, en un 45% de rendimiento (del 50% terico) y >95% ee (Esquema 9). La enantioselectividad se incremento al 99.9% al adicionar al medio de la reaccin ter t-butilmetlico [37]. Para la sntesis del cido 5-metilpirazin-2-carboxlico (MPCA), 34, el cual es un intermediario para la produccin de Acipimox, 31, un antilipoltico y de Glipicida, 32, un agente antidiabtico, se someti la 2,5-dimetilpirazina, 33, a oxidacin con Pseudomona putida crecida en xileno (Esquema 10). El producto, MPCA, se precipita por simple acidificacin del medio de reaccin libre de clulas; el proceso soporta hasta 2 g/L de sustrato, con un rendimiento del 95%; la produccin de MPCA, 34, est en la escala de 15 m3[38].

Para la sntesis de Befloxaton, 37, un antidepresor, se utiliza al (R)-4,4,4-trifluoro-3-hidroxibutanoato de etilo, 35 [39], el cual se prepara por una reduccin enantioselectiva utilizando clulas de E. coli que contiene dos plsmidos. Uno de ellos lleva el gen de una aldehdo-reductasa de la levadura Sporobolomices salmonicolor, la cual reduce el carbonilo de 35; y el segundo lleva el gen de una glucosa deshidrogenasa de Bacillus megaterium para la regeneracin del NADPH necesario para la reduccin [40]. La productividad del procedimiento llega hasta los 300 g/L con valores de hasta 92% ee. El cido (S)-pipeclico, 41, es intermediario en la sntesis de varios frmacos, entre ellos el Incel, usado para el tratamiento del cncer y los anestsicos locales Ropivacaina, 42a y Levobupivacaina. 42b. Lonza combina eficientemente la qumica y la biotenologa para producirlo con ee mayores a 99% [41]. En el primer paso biocataltico, clulas de un microorganismo, que contiene una nitrilohidrolasa, efectan la hidrlisis de la 2-cianopiridina, 38, produciendo la piridin-2-carboxamida, 39, la cual por reduccin qumica produce la amida racmica 40. En el segundo paso biocataltico, clulas de

Esquema 10

Esquema 11

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Pseudomonas fluorescens DSM9924 efectan la hidrlisis enantioselectiva del grupo amido de 40, produciendo el cido (S)-Pipeclico, 41, y la amida (R)-40. Siguiendo una estrategia similar, se ha preparado la (S)2,2-dimetilciclopropancarboxamida, 44, la cual es un intermediario para la sntesis de Cilastatina, 46, un inhibidor de la dehidropeptidasa renal. Aunque se desarrollaron paralelamente procesos qumicos y biotecnolgicos, el bioproceso demostr ser superior ya que present menos operaciones unitarias y una mejor calidad en el producto. Nuevamente el primer paso consisti en una hidrlisis no estereoespecfica de un grupo nitrilo, utilizando una nitrilohidrolasa para producir cuantitativamente la ciclopropancarboxamida rcemica, rac-

44. Posteriormente una bsqueda de microorganismos condujo al aislamiento de la cepa Comomonas acidovorans A:18 [42], la cual fue particularmente efectiva para llevar a cabo la resolucin de la mencionada amida. El proceso fue mejorado a travs de la clonacin del gen de la amidasa en E. coli. Esta amidasa hidroliza especficamente al enantimero R, produciendo la amida S en un 35% de rendimiento y un ee >98%. El reciclado del cido (R)-45, involucrando una racemizacin, conduce a aumentar la eficiencia del proceso, y a reducir desechos. Un ejemplo impactante de lo que pueden hacer los procesos biocatalticos es la produccin de L-carnitina o vitamina Bt , 51, utilizando clulas de un microorganismo, el cual utiliza

Esquema 12

Esquema 13

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Esquema 14

una ruta natural que involucra cuatro enzimas en el proceso (Esquema 14) [43]. En este proceso la 4-butirobetaina, 47, es transformada a L-carnitina, 51, la cual es excretada por las clulas al medio, facilitando su aislamiento. En este proceso se utiliz un microorganismo nuevo, relacionado a los gneros Agrobacterium y Rhizobium, en su fase de crecimiento estacionaria [43]. Como se observa en el Esquema 14, las cuatro enzimas tienen una funcin particular, es de mencionar la introduccin de la quiralidad por la liasa, crotonobetainil-CoA hidrolasa. Bajo este procedimiento se produce L-carnitina a una escala de 50 m , 3 con un rendimiento volumtrico de 80 g/L, con una conversin analtica del 99.5 % y un ee del 100%.

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2002 Mara Cecilia Torrent INTERACCIONES ENTRE NUTRIENTES Y FRMACOS Invenio, noviembre, ao/vol. 5, nmero 009 Universidad del Centro Educativo Latinoamericano Rosario, Argentina pp. 115-123

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