UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA. INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA. BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.

ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LOS PEROXISOMAS.

PRESENTAN: y DIDIER CARIN HERNANDEZ HERNANDEZ. y ARTURO DANIEL CEVADA PEREZ. y JATZIRI HERNANDEZ SALAMANCA.

PROFESORA. PROFESOR: JUVENAL JUAREZ HERNANDEZ.

TERCER CUATRIMESTRE. GRUPO: D

FECHA DE ENTREGA: 04 AGOSTO 2011

UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA. QUIMICA ANALITICA. ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LOS PEROXISOMAS.

OBJETIVO:
Que el alumno pueda apreciar y la actividad enzimtica de los peroxisomas en diferentes tipos de tejido y por lo tanto de clulas.

MATERIALES:

EQUIPO:                   12 tubos de ensaye 1 gradilla 1 bistur 2 cajas Petri 5 vasos de precipitado de 100 ml 1 pinzas de diseccin 1 vaso de precipitado de 500 ml 1 pipeta de 10 ml Pizeta Esptula 1 mechero 1 mortero con pistilo 1 bolsa de hielo por grupo 3 pipetas graduadas de 5 ml 1 propipeta 1 pinza moss 1 matraz aforado de 50 ml 6 vasos desechables para gelatina        

REACTIVOS: 1 hgado de pollo 1 papa 1 corazn de pollo 1 rin de pollo 1 rama de apio 100 ml de HCl 100 ml de alcohol etlico al 98% 10 ml de perxido de hidrgeno al 30 %  50 ml de NaOH 10 %

INTRODUCCION:
Los peroxisomas se denominas as porque contienen enzimas que utilizan el oxgeno molecular para eliminar tomos de hidrgeno de sustratos especficos, a travs de una reaccin oxidativa que produce H2O2. La reaccin global sera: RH2 + O2 R + H2O2

Siendo RH2 el substrato oxidable (aminocidos, cetocidosa, cido rico, alantona, acil-CoA, cido gliclico, cido glioxlico, enoil-CoA, etc.).

Las enzimas que catalizan est reaccin son: la oxidasa de aminocidos, oxidasa de hidroxicidos a y oxidasa de urato. El H2O2 resultado de la reaccin es un producto altamente txico que es eliminado por otra enzima del peroxisomas, la catalasa, bien directamente segn la reaccin: 2H2O2 2H2O + O2

O utilizando este H2O2 para oxidar diversas sustancias (alcoholes, fenoles, cido frmico, formaldehdo y acetaldehdo), segn la reaccin: 2H2O2 + R'H2 2H2O + R'

Siendo R'H2 una de las diversas sustancias anteriormente mencionadas. No siempre las cuatro enzimas (catalasa, oxidasa de aminocidos, oxidasa de hidroxicidos a y oxidasa de urato) aparecen en todos los peroxisomas, pero al menos la catalasa y oxidasa de hidroxicidos a estn siempre presentes. Mediante su dotacin enzimtica, variable de unos tejidos a otros, los peroxisomas pueden intervenir en diversas vas metablicas, que difieren segn los organismos y tipo de tejido.

DESARROLLO:
1. Cortar 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de papa, 6 de apio, 6 de corazn, 6 de rin, 6 de hgado. 2. Colocarlos en el cristalizador con hielo para conservar la muestra. 3. Enumerar los tubos del 1 6 y adicione 4 gotas de perxido de hidrgeno. 4. A cada tubo adicione el tejido tal como se anota en la tabla:
TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 PAPA MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. APIO MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6

CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. HIGADO MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. CORAZON MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. RION MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION.

AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

a) Cuando se requiera la muestra cocida, debe colocar un trozo de cada muestra en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada, posteriormente se decanta el lquido. b) Cuando se utilice el HCl, NaOH y ETANOL, prepare un cubo de material biolgico en un tubo de ensaye y agregue los reactivos antes mencionados (1ml) y deje reposar 2 minutos, pasado este tiempo agregar las 4 gotas de H2O2. 5. Determinar en cada tubo la presencia de O2, inmediatamente despus de agregar el tejido tapa el tubo con el dedo pulgar. 6. Anota tus resultados en la tabla.

Aqu se pueden observar algunas imgenes de cmo se realiz el procedimiento antes mencionado de la prctica.

OBSERVACIONES:
TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 TUBO 1 2 3 4 5 6 PAPA MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. APIO MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. HIGADO MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. CORAZON MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. RION MACHACADO COCIDO CON HCl CON ETANOL CON NaOH SIN NINGUNA ALTERACION. AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2) SI PRESENTA O2 NO PRESENTA O2 PRESENTA O2 (POCO) PRESENTA O2 (MINIMO) SI PRESENTA O2 AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2) PRESENTA O2 (MINIMO) NO PRESENTA O2 NO PRESENTA O2 NO PRESENTA O2 NO PRESENTA O2 AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2) PRESENTA O2 (POCO) NO PRESENTA O2 NO PRESENTA O2 SI PRESENTA O2 SI PRESENTA O2 AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2) PRESENTA O2 (POCO) PRESENTA O2 (MINIMO) NO PRESENTA O2 PRESENTA O2 (POCO) SI PRESENTA O2 AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2) PRESENTA O2 (POCO) PRESENTA O2 (MINIMO) PRESENTA O2 (POCO) SI PRESENTA O2 SI PRESENTA O2

CUAESTIONARIO:
1. Cul es la estructura y funcin de los peroxisomas? Son orgnelos que se originan en el citosol y todas sus protenas se originan por la va citoslica por medio de peroxinas, Forma ovoide y est delimitada por una sola membrana Las protenas de la matriz del peroxisoma tendrn la seal SKL en el extremo carboxilo de la protena, el cual va a ser reconocido por el pex5. Los peroxisomas contienen alrededor de 40 enzimas oxidativas. Las funciones del peroxisoma son, detoxificacin de alcohol (hgado), metabolismo de radicales libres, sntesis de colesterol y eter-lipidos, formacin de cidos biliares, catabolismo de cidos grasos de cadena larga, catabolismo de purinas y metabolismo del estradiol. El nombre de perxido se debe porque intervienen en la formacin y descomposicin de perxido de hidrogeno (h2o2). 2. Cul es la enzima y como se relaciona con las peroxisomas? Oxidasa flavinica y catalasa 3. Cul es la funcin del etanol y HCl sobre las enzimas? Evitan la produccin de oxigeno por lo que el perxido de hidrgeno no tiene reaccin en las enzimas 4. Cul es la funcin de los glioxisomas en la germinacin de las semillas de aceite de ricino? Al iniciarse la germinacin de las semillas, y cuando las clulas estn suficientemente hidratadas, se produce una activacin de la sntesis proteica y, por lo tanto, la formacin de enzimas hidrolticas que son las que promueven la movilizacin de las sustancias de reserva. 5. Al cocinar los alimentos demasiado Cmo influye en la actividad de las enzimas? Disminuye la actividad enzimtica puesto que al ser cocinados los alimentos disminuyen su oxigenacin.

CONCLUSIONES:
Se logr el objetivo porque se pudo observar la actividad enzimtica que se tiene en los diferentes rganos analizados.

BIBLIOGRAFIA: y Biologa celular y molecular, 5a edicin. Lodish, berk,matsudair,kiser, krieger,Scottzipursky y darnell